1st MEDAN INTERNATIONAL PROSTHODONTIC SCIENTIFIC MEETING
2012Medan, August 30th September 1th, 2012
PENDAHULUAN
Dalam bidang kedokteran gigi sering dilakukan tindakan
pembedahan, misalnya bedah preprostetik, operasi periodontal,
pencabutan gigi, odontektomi, dan perawatan di bidang endodonsia
yang memerlukan perawatan prosedur bedah. Pada dasarnya setiap
prosedur bedah selalu melibatkan proses insisi untuk pembuatan
flap.1,2 Pembuatan insisi ini akan menyebabkan rusaknya jaringan
tubuh yang selanjutnya akan pulih kembali melalui proses
penyembuhan luka. Penyembuhan luka merupakan proses dinamis yang
meliputi fase inflamasi, fase proliferasi dan fase remodeling
jaringan.3Dalam proses penyembuhan luka, sel utama yang terlibat
adalah fibroblas.4 Fibroblas merupakan elemen selular yang banyak
ditemukan pada jaringan ikat gingiva yang berproliferasi dan aktif
mensintesis komponen matriks pada proses penyembuhan luka dan
perbaikan jaringan yang rusak.5 Pada saat jaringan mengalami
keradangan, maka fibroblas akan segera bermigrasi ke arah luka,
berproliferasi dan memproduksi matriks kolagen untuk memperbaiki
jaringan yang rusak.6Propolis adalah substansi lengket yang
dihasilkan lebah dengan cara mengumpulkan resin-resin dari berbagai
macam tumbuhan dari tunas daun dan kulit batang yang dibawa ke
sarang lebah yang menghasilkan sejenis lem yang digunakan untuk
menutupi keretakan sarang dan pelindung terhadap gangguan dari
luar.7 Propolis dapat langsung dimanfaatkan atau dilakukan
pemurnian terlebih dahulu dengan ekstraksi dan penyaringan.8
Di bidang kesehatan, propolis merupakan bahan alami yang
memiliki banyak manfaatnya bagi tubuh. Salah satunya adalah sebagai
bahan yang dapat mempercepat regenerasi jaringan pada proses
penyembuhan luka.8 Di antara komponen propolis yang telah
teridentifikasi, flavonoid merupakan komponen utama yang memiliki
aktivitas biologis pada propolis.9 Flavonoid dapat meningkatkan
proses mitogenesis, interaksi sel dan adhesi molekul.10 Proses ini
sangat berperan pada fase proliferasi sel dalam mempercepat proses
penyembuhan jaringan luka.11 Bertitik tolak dari uraian di atas,
maka peneliti tertarik untuk mengkaji lebih dalam mengenai manfaat
ekstrak flavonoid propolis dalam mempercepat proses penyembuhan
luka, terutama pada fibroplasia dalam proses penyembuhan luka
insisi flap gingiva.BAHAN DAN METODEBahan Penelitian
Propolis lebah yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari
peternakan lebah di daerah Selekta, Malang-Jawa Timur. Bahan
penelitian yang digunakan antara lain : etanol 95%, toluena 500 ml,
aquadest steril, air, ketamin, eter, larutan formalin buffer 10%,
xylol (MERCK), paraffin, larutan hematoxylin eosin, alkohol (70%,
80%, 95% dan 96%), egg albumin, dan entelan (MERCK), sonde lambung,
scalpel, gunting bedah, ekskavator, benang jahit bedah, jarum jahit
bedah, mikrotom (Leica), mikroskop binokuler (Leica ATC 2000) dan
kamera digital (Canon). Hewan Coba Tikus putih galur Wistar (Rattus
norvegiccus), jenis kelamin jantan, bobot badan 200 gram, usia
tikus 2-3 bulan dan dalam kondisi sehat. Hewan coba diperoleh dari
Pusat Veterinaria Farma (Pusvetma) Surabaya, Jawa Timur.Prosedur
Penelitian Pembuatan Ekstrak Flavonoid Propolis Propolis kering
dibersihkan dan diblender hingga halus selanjutnya ditimbang
terlebih dahulu sebanyak 1 kg, kemudian dimasukkan ke dalam beaker
glass.12 Proses maserasi dilakukan dengan menambahkan 5 liter
etanol 95% sebagai pelarut selama 7 hari.13,14 Hasilnya selanjutnya
disaring menggunakan kertas saring dan corong Buchner yang
menghasilkan filtrat sebanyak 2,5 liter. Hasil filtrasi dievaporasi
dengan rotary evaporator, sehingga diperoleh ekstrak propolis yang
konsistensinya kental.12 Ekstrak propolis selanjutnya dituang ke
dalam labu Elrenmeyer dan ditambahkan 500 m larutan toluena, lalu
diaduk sehingga semua ekstrak larut. Larutan air : etanol = 2:1
(v/v) sebanyak 1,5 liter ditambahkan ke labu erlenmeyer yang berisi
larutan ekstrak dalam toluena, kemudian diaduk hingga homogen dan
didiamkan selama 24 jam. Selanjutnya, larutan dipindahkan ke dalam
corong pemisah dan didiamkan selama 15 menit hingga terbentuk 2
lapisan. Melalui corong pemisah, larutan bagian bawah ( 1,5 liter)
dipisahkan dan diuapkan selama 24 jam sehingga diperoleh ekstrak
kental yang merupakan fraksi flavonoid polar ( 17 g).12
Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Analisis kimia senyawa flavonoid menggunakan teknik kromatografi
lapis tipis (KLT) dengan fase diam lempeng silika gel GF254 dan
fase gerak gerak larutan n-butanol : asam asetat : air = 3:1:1
(v/v).12,15 Ekstrak flavonoid yang telah dilarutkan dengan alkohol,
diteteskan dengan pipet kapiler pada lempeng silika berukuran 10 cm
x 2 cm dan dimasukkan ke bejana pengembang yang berisi fase gerak.
Setelah daya kapiler dari ekstrak maksimal (bercak noda tidak
bergerak lagi), lempeng dikeringkan, kemudian dilihat di bawah
lampu ultraviolet sebelum dan setelah diuapi dengan amoniak.12
Adanya flavonoid ditunjukkan dengan noda berwarna kuning kecoklatan
yang akan hilang perlahan ketika amoniaknya menguap dan
meninggalkan noda pada tes uji warna (Tabel 1).16 Tabel 1.
Pencirian senyawa flavonoid pada kromatografi lapis tipis
berdasarkan perubahan warna pada bercak noda hasil totolan pada
lempeng silica setelah diuapi amonia Golongan flavonoidPerubahan
pigmen
Antosianinlembayung-biru
Flavon, flavonolKuning
Flavanonkuning muda
Kalkon, auronlembayung-merah
Flavanonolcoklat-jingga
Sumber: Robinson, 1995:209-212 16Pembuatan Insisi FlapHewan coba
dianastesi injeksi intramuskular pada paha kaki belakang sebelah
kiri dengan 24 ml/g ketamin dan dilakukan insisi pada gingiva pada
hari ke-0. Insisi flap dilakukan pada gingiva anterior pada insisif
sentralis mandibula tikus hingga mencapai mukoperiosteum. Untuk
memfiksasi luka, maka dilakukan penjahitan pada sudut insisi.
Perlakuan pada Hewan Coba Setelah prosedur insisi gingiva, hewan
coba dibagi menjadi dua kelompok dengan masing-masing kelompok ini
terdiri dari 10 ekor hewan coba, yaitu; (a) kelompok I : sebagai
kelompok kontrol yang diberi 1 mL aquadest per oral dan (b)
kelompok II : sebagai kelompok perlakuan yang diberi ekstrak
flavonoid propolis 0,09 g/kg BB/hari dalam 1 mL aquadest per
oral.
Perlakuan per oral menggunakan sonde lambung pada hewan coba
dilakukan hingga hari dekapitasi tikus. Dekapitasi tikus dilakukan
pada hari ke-3 dan ke-7 menggunakan anastesi eter, kemudian
dilakukan pengambilan jaringan gingiva rahang bawah dan difiksasi
menggunakan larutan buffer formalin 10%. Pembuatan Preparat
HistologisPembuatan preparat histologis dengan mengunakan teknik
rutin (progressive) melalui tahapan proses fiksasi, dehidrasi,
clearing, impregnasi dan embedding serta pengecatan jaringan
menggunakan hematoxylin eosin.Pengamatan Proliferasi Fibroblas
Gingiva (Fibroplasia)Pengamatan secara histotologis proliferasi
fibroblas (fibroplasia) menggunakan parameter kuantitatif dengan
menghitung jumlah sel fibroblas gingiva. Penghitungan jumlah sel
fibroblas gingiva menggunakan lensa obyektif pada mikroskop
binokuler menggunakan gratikule dengan pembesarannya 400x.
Penghitungan sel fibroblas gingiva dilakukan pada 3 lapang pandang
dan hasil rata-ratanya ditabulasi.Analisis Statistik Data
ditabulasi dan dianalisis dengan uji independent t-test. Uji
independent t-test dengan tingkat kemaknaan 95% (p
