4
Flow Detection of UV Radiation-Induced DNA Damage at a Polypyrrole-Modi®ed Electrode Joseph Wang,* Mian Jiang, and Abdel-Nasser Kawde Department of Chemistry and Biochemistry, New Mexico State University, Las Cruces, NM 88003, USA; e-mail: [email protected] Received: July 31, 2000 Final version: September 5, 2000 Abstract A new electrochemical protocol for the detection of radiation-induced DNA damage, based on the coupling of a conducting-polymer detector and a ¯ow injection system, is described. Changes in the interaction of DNA molecules with polypyrrole (PPy) ®lms, after exposure to ultraviolet radiation, are exploited for generating the damage-sensitive current signals. Factors in¯uencing the response of the ¯ow detector, including the irradiation time or distance, are discussed. Injection rates of 30±60 per hour are obtainable in connection to 20 mL sample volumes and nanogram quantities of plasmid and chromosomal DNA. The new modi®ed-electrode=¯ow-injection protocol offers great promise for detecting DNA damage in a faster and simpler manner compared to the common use of ordinary electrodes in batch systems. It also adds a new dimension of information based on the interfacial properties of damaged DNA at conducting-polymer=solution interfaces. The PPy-coated glassy-carbon electrode thus represents a useful addition to the arsenal of electrochemical tools for detecting DNA damage. Keywords: DNA damage, Polypyrrole, UV radiation, Flow injection analysis, Conducting polymer, Flow detector 1. Introduction Damage to DNA in the cells may result in a serious distur- bance to cell life, including apoptosis or malignant cell trans- formation [1]. As a result, various techniques have been developed for detecting minor DNA damage, and for elucidating various aspects of DNA structure [2, 3]. Electrochemical methods are advantageous due to their high sensitivity to small changes in the DNA double helix [4]. Palecek and co-workers [5, 6] have shown that pulse-polarographic and adsorptive-stripping analysis at mercury drop electrodes can detect small damage to DNA induced by various chemical agents, enzymatic digestion, or ionizing radiation. Rusling's group demonstrated the applica- tion of square-wave voltammetry for detecting chemically induced DNA damage [7], while we exploited changes in the chronopotentiometric signal at carbon electrodes for detecting DNA radiation damage [8]. Combining the high sensitivity of electroanalytical techniques to the DNA structure, with their miniaturized, low-power instrumentation, may thus result in rapid tools for decentralized detection of DNA damage. Yet, to make electrochemistry more useful for such screening applications, it would be desired to develop new fast-responding `mercury-free' detectors for DNA damage. The present article describes the utility of conducting-polymer amperometric detectors for rapid ¯ow-injection measurements of radiation-induced DNA damage. We have demonstrated recently that nucleic acids can be detected at polypyrrole (PPy)-modi®ed amperometric ¯ow detectors [9]. The response of the new modi®ed electrode was attributed to changes in the capacitance and ion partitioning accrued from adsorption=desorption of the DNA analyte on the PPy surface. In the present study we exploited changes in the adsorbability of damaged DNA mole- cules at PPy-coated electrodes for their rapid amperometric measurements. The operation of the conducting-polymer damage sensor has been combined with a ¯ow-injection protocol. Due to its speed, simplicity, automation, and small sample requirements, ¯ow injection analysis has been useful in many ®elds [10], but not for the electrochemical detection of DNA damage. The new ¯ow-injection=modi®ed-electrode amperometric protocol thus offers great promise for detecting DNA damage in a faster and simpler manner compared to commonly used batch voltammetric procedures. The attractive performance characteristics of the new conducting-polymer damage sensor are reported in the following sections. 2. Experimental 2.1. Materials All reagents were of AR grade and used as supplied without further puri®cation, unless otherwise stated. All vials, pipettes and glassware were sterilized by autoclaving for 60min at 120 C. Double stranded (ds) calf thymus DNA (Cat. No. D4522) and pUC19 plasmid DNA (from Escherichia coli strain RRI, Cat. No. D3404) were provided from Sigma and used as received. Concentrated stock solutions of DNA (around 1000 mg=mL) were prepared with sterilized water and were stored at 4 C. More diluted solutions were prepared prior to use with the carrier-blank solution. The concentrations of the nucleic acid solutions were veri®ed by UV measurements at 260 nm. Pyrrole (Aldrich) was distilled and was stored at 4 C under nitrogen. A sodium-chloride solution (0.1 M) served as the ¯ow-injection carrier solution. 2.2. Apparatus The surface-modi®cation and ¯ow-injection experiments were carried out with the LC-4C amperometric detector (BAS). Voltammetric measurements were performed in a cell with the three-electrode con®guration, including the working electrode (2 mm diameter bare or modi®ed glassy carbon disk electrodes, BAS), a platinum counter electrode and a Ag=AgCl (3 M NaCl) reference electrode (BAS). These electrodes were introduced to the large-volume wall-jet ¯ow cell through the holes in its Te¯on cover. All reported potentials were measured with respect to the Ag=AgCl reference electrode. The ¯ow-injection system consisted of a carrier reservoir, a Rainin Model 501 injection 537 Electroanalysis 2001, 13, No. 7 # WILEY-VCH Verlag GmbH, D-69469 Weinheim, 2001 1040-0397/01/0705±0537 $17.50.50=0

Flow Detection of UV Radiation-Induced DNA Damage at a Polypyrrole-Modified Electrode

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Flow Detection of UV Radiation-Induced DNA Damage at a Polypyrrole-Modified Electrode

���� ������� �� � ������������� ��� ������ �� ������������������� ���������

������ ���� �� ���� ��� ������������ �����

��������� � � ������ ��� ��� ������� ��� ����� ����� ����������� ��� ������� �� ������ �� ! �"��#$ %����&'���(���

)�������$ *�#� �+� ,���

-���# ������$ �����.�� /� ,���

�� �����

��� �#����� ����# ����# �� � � �������� � ��������"������� �� ���&�� .���� � � � ���#��& � � ��������&"�#���������� ��� � 0� ��%����� ������ �� ������.��( � ��&�� �� � � ���������� � �� #���#�� ��� �#�����#� 122�3 4#�� ������������ � �#�����#�� ��������� ��� ���#���� �� &��������& � � ���&�"��������� ������� ��&��#�( -����� ��0������& � � ������� � � �0� �������� ���#����& � � ���������� ��� � ��������� ��� ���������( 5�%����� ����� � ��67� ��� �� ��� .�����.#� �� �������� �,��� ���#� �#��� ��� ���&�� 8��������� � �#���� ��� � ���# �� ( 9 � ��� ��4��"�#�������0�"��%����� ����#����� &���� ����� �� ��������& �� ���&� �� � ������ ��� ���#�� ����� ������ � � � �� ��� � ������� �#������� �� .��� ������( 5� �#� ���� � ��� ������� � �������� .���� � � � ����������# ��������� � ���&�� �� �� ��������&"�#�����#��������������( 9 � 22�"����� &#����"���.� �#������ � �� ���������� � �����# ������� � � � ������# � �#����� ����# �#� �� ��������&�� ���&�(

!������ " �� ���&�� 2#�����#�� �: ��������� -#� ��%����� ���#����� ��������& �#���� -#� �������

#$ ���������

���&� � �� �� � � ��##� �� ����#� �� � ������ ������".���� � ��## #���� ���#����& ������� � �#�&���� ��## �����"������ ;+<( � � ����#�� ������ ��� ��8��� ��� .�������#��� �� ��������& ��� �� ���&�� ��� �� �#��������&������ ������� � �� ��������� ;,� �<( =#����� ����#�� �� ��� �������&��� ��� � � ��� �& ����������� � ��##� ��&�� �� � � �� ��.#� �#�� ;><( 2�#���? ��� �"��?��� ;/�7< ��� � �� � �� ��#��"�#��&��� �� ��� ���������"��������&���#���� �� ������ ��� �#������� ��� ������ ��## ���&� ��� ������� .� ������ � ����# �&����� ��@����� ��&������� ���@��& ��������( )��#��&A� &��� ���������� � � ���#���"��� � �8����"���� �#������ �� ��������& � ����##�������� �� ���&� ;B<� � �#� �� ���#���� � ��&�� �� � �� ������������� ��&��# �� ���.� �#������� �� ��������&�� �������� ���&� ;�<( �.����& � � �& ����������� ��#�������#�����# ��� ��8��� � � � �� ���������� ��� � �����������@��� #�"���� �������������� �� � �� ����#� �� ������#� �� ��������#�@�� �������� � �� ���&�( C��� � �?��#����� ������ �� �����# �� ��� ��������& ���#�������� ����#� .� ������� � ����#� ��� ����"��������& D������"����A�������� �� �� ���&�(9 � ������� �����#� ������.�� � � ���#��� � ��������&"�#���

��������� �������� �� ����� 0�"��%����� ���������� ���������"������� �� ���&�( E� ��� ���������� ������#�� �� ���#��� ����� ��� .� �������� �� �#�����#� 122�3"��4����������� 0� �������� ;F<( 9 � ������� � � � �����4�� �#������ ��� �����.���� � � ��&�� �� � � �������������� �� ����������& ������� �� ����������������� � � ��� ���#��� � � � 22� �������( 5� � � ������� ����� �����#���� � ��&�� �� � � ����.�.�#��� � ���&�� �� #�"��#�� �� 22�"����� �#������� �� � ��� ����� �������������������( 9 � ������� � � � ��������&"�#��� ���&������ �� .��� �.���� ��� � 0�"��%����� ����#( ��� ���� ������ ���#������ �������� ��� ��## ���#� ��8���������0� ��%����� ���#���� �� .��� �����# �� ��� 4�#�� ;+�<� .���� �� � � �#����� ����# �������� � �� ���&�( 9 � ���0�"��%��������4��"�#������ ��������� ����# � ��

����� &���� ����� �� ��������& �� ���&� �� � ������ ������#�� ����� ������ � ��#� ���� .��� �#����������������( 9 � ���������� ��������� � ������������� � � � �����������&"�#��� ���&� ����� ��� ������� �� � � �##���&�������(

%$ �&��������

%$#$ �������

## ���&���� ���� � ) &���� ��� ���� �� ����#��� ��� ������ �� ����4������ ��#��� � ������ ������( ## ���#�� ����������� &#������� ���� �����#�@�� .� ����#����& �� 7��� ��+,� ��( ��.#� �������� 1��3 ��#� � ��� �� 1���( �( �>/,,3��� ���+F �#���� �� 1�� ����������� ���� ������ ))5� ���(�( ��>�>3 ���� ������� �� ��&� ��� ���� �� ��������(����������� ���? �#����� � �� 1����� +����&��3

���� �������� ��� �����#�@�� ����� ��� ���� ����� �� �> ��(��� ��#���� �#����� ���� �������� ���� � ��� ��� � ��������".#��? �#����( 9 � ������������ � � � ���#��� �����#����� ���� ����4�� .� �: ���������� �� ,7� �( 2���#�1 #���� 3 ��� �����##�� ��� ��� ����� �� > �� ����� ����&��( ����"� #���� �#���� 1�(+�3 ������ �� � � 0�"��%������������ �#����(

%$%$ ��������

9 � �������"��4����� ��� 0�"��%����� ���������� ����������� �� ��� � � ��">� ��������� ������� 1� �3(:#������� ���������� ���� ������� �� � ��## ��� � �� ���"�#������ ��4&������� ���#����& � � ��?��& �#������1, ������� .��� � ��4�� &#���� ���.� ���? �#��������� �3� � �#����� ������ �#������ ��� � &� &�# 1�� ���#3��������� �#������ 1� �3( 9 ��� �#������� ���� ��������� �� � #��&�"�#�� ��##"%�� 0� ��## � ��& � � #�� �� ��� 9�0�����( ## ������� �������#� ���� ������� ��� ������� � � � &� &�# ��������� �#������( 9 � 0�"��%����� ������������� � � ������� ��������� � )����� ���# /�+ ��%�����

/�B

=#�������#���� %''#� +�� �( B � E5�=C":�G :��#�& H.G� �"7F>7F E��� ��� ,��+ +�>�"��FBI�+I�B�/6�/�B J+B(/��(/���

Page 2: Flow Detection of UV Radiation-Induced DNA Damage at a Polypyrrole-Modified Electrode

��#�� ��� ,� �� ���#� #�� �������������& 9�0� ��.��&� ��#���� ��#����� ����� � � ��# 2�"�� 1�� � ���3� ��� � ���� #��&�"�#�� ��##"%�� �������( 9 � �#���� ��#�� ���?��� + ���� �� � � ������ � � � ��?��& �#������( � �#�����#�� #�� 1���# �:��(,/� �#���"��#�� 2�������

5��(� ��� H�.���#� � 3 ��� ��#��� �� �## �: ������������������( 9 � #�� ����� ��� ������� ����& � ������� �������� ������� 1���# 5� +B��� 5����������# ��& � 5��(����.������� � 3� �������� � �� �=� ,>� �������( )���"����� ���������� ��#��� � +, ��� +,/�E��, ���� � ��.������ �� � � ,/> � ����� ����& ���#�"�: #�� ���������� �� ��� �� ����������#�( 9 ��� ��#��� �������� � �:���� � +(FB/�+�/ ��� +(FB/�+�7 *�, ��� � � ����������( 9 � ����������# ����� �� � � ���������� ��������� ���������.�� ���#��� ;�<(

%$($ ���������

2��� � ���� � � &#���� ���.� �#������ ��� �#�� �� ��� �(+� ��� �(�/ � �#���� ������ ��� � ��& #� ������ ��� �����( 9 � ���������� � � � �#�����#� 122�3 0� ������� ���������� �#��� ��� ;F<( 9 � 22� 4# ��� �������� .� �������&� � �������# � � � &#���� ���.� �#������ �� � /�������������� �#���� ��������& �(�/� ����#� ��� +� ����"��� ������� .������ �(� ��� �(B: 1��( &� &�#3 �� � ���� �/�:�� �� ��� ���#��( -##���& � � �#�����#����@����� � ���4�� �#������ ��� ������ ��� �����(-#� ��%����� ���������� ���� �������� ����& � ����

� #���� ������� �#���� 10���& �� �(/����3( 9 � ��������#���� ��� �������� �� ,��� � ���� &�� .�..#�� ��� � �#����( �������� � ���# ��� ���&�� �� ���#���� ������� ����� ���#���& � � ��?��& �������# 1����##���(+/:3 ��� �##���& � � ��������� .��?&���� ������� � ������ � ���.#� ��#��( ## ���������� ���� ������� �� �����������(

($ �� ��� �� � �� �

��������&"�#��� ��4�� �#������� ��� �� ����������� � ���������� �� �#�������#���� � ���#��� ������������ � � � �� ��� � ���������# ���.�� ������ ������ �#�������( E �#� � � ������� � ����4�� �#���������#��� � ���� �������� � � � ���#�.���� � � � ��&�� .��?".��� � � ��&��#� .������ �� ��������&"�#��� #���#������������ ��� �����.���� ������#� � ������������������������ ;F<( � ��&�� �� � � ���������� � �� #���#�� ��� 22� 4#�� ����� ������� � �#�����#�� ��������� ��� .������#���� �� � � ������� ��? �� &��������& � � ���&�"���������������� ��&��#�(-�&��� + � �� ������# 0�"��%����� �������6��� ��4#�� ��

� � 22���K�� ��4�� �#����� ����# ������� �� �#�����

� ���+F �#���� �� 1 3 ��� ���� 1�3 .���� 1�3 �������� 1.3 ������� � ,/> � ��������( -� .� ���#��� ������� � �������� ����#��� �� ��( /�L �������� � � � ���?�������( 9 � ���������� ������ ��� �� ��0����� � � ���?� ���( � �����"������� ������� ��� .������ �� �#���������%������ � �������� ��� �:"������ ���#�� 1� ��( .3( 9 ������ �#������ �� �.��� � ����� �������� ��� �������� � � ��������� ��� ���? ���� � � ����� /� 1 3 ��� ,/ � 1�3( ������ ������ � � ��������� �������6��� ��4#�� .������ �� � ��#���� ��� � ���# �� ! ��� ����������� ��0��� � �

����������� � � � ��������&"�#��� ����# � � � �� ��������� 1��� ��������� .�#�3( � �������� ;F<� � ��������� .������ �� ���#&�� ���������� � ���� �� � � .���1����4��3 �#������ 0� ������� 1�3( ���#��#�� � ��&��#���� .������ �� ��� �� ����# ���������� ���#���& � ���%������ � � � �:"������ .#��? ����"� #���� �#����1 � �1�33( 5� �������� � ��&��# ����������& � +�L � � ��� ������� ��� .������ �� � .#��? �#���� ��������&�#� � � ��� .����� ������ �� � � ���#��� ���� ���#� 1��� ��3( ����#��� ���#��� ����� � �#� .� ���� � ��##� �#�"����� ��� �����.�����( � � �� ���&� �� � �� ��##� ���������� � � ��&��# &��������

�� ����( 9 � ��#�� ������ � � � ���������� � �� ��� 22� �� .��� ������.�� ���#��� ;++<( 9 � 0� ��%�������������� ������� � ���#��� ����� �� ��������&"�#����������� ��0���� � � ����������������� ������ �����& � ������&� � � � ���#� �#�& ��� ��.��8���� ������# � � � ��������#���� ;F<( ��� ����������� ��� ��0����� .� � � ������������ � � 4# ��� � � ����������& 1����&3 � � � �#����#��� ��� ���� &��������& � � ��4��� ������� ���?� ;F� +,<( 5��������� ��� ��� �������� ��� ����#� �� ������ ����� � �� ���&�����#����& ������ .���?� ��� � � ������ � ������ ������� ;,�>� +�<( ��� ��������"������� ���������# � ��&�� �� ������ � ������&� � ��������� ��� ?������� � ��� 22���� �����"������� ��� ��� � �� #��� � ��&��4���� � ��&�� �� � � �������������� ������ � �������� �� ( =��� #��# � ��&�� ������ �� #��� � � ��&�� �� ������� ��������� ��� �����&�(

-�&( +( -#� ��%����� ��������� ���?� �� � � 22���K�� ����� 1 �

�3 ��� .��� 1�3 &#���� ���.� �#�������( 3 ��%������ � �������� 1�3��� �:"������ 1.3 ���+F �#���� �� 1+��&�� ��� ! � ����"������3� ��� � � � �:"������ 1� 3 .#��? �#���� 1�3( �3 ��%������ ��������� ���� 1/��&�� ��� 3 1�3! ��%������ � �:"���������� 1� ����������� /��&�� ��� 3 1.3! ��%������ � �:"������.#��? �#���� 1�(+� ���#� � 3 1�3! �3 ��� �� 1�3 ������ � ����& .����#������( -#� ����� �(/����! �������� �(+� ���� � #����!���#��� �������#� ��(+/:! ���#� �#��� ,���! ���������� ���������(� �(

/�� �� �� �� ���

=#�������#���� %''#� +�� �( B

Page 3: Flow Detection of UV Radiation-Induced DNA Damage at a Polypyrrole-Modified Electrode

5� �������� � � ��������& �#��� ����� �� �� �������� ������� ���&� ���#���& � ����# ��4����� � � � .����(-�&��� , ���������� � � ������ � � � ���������� ��� � � �

0� ��%����� ������� � � � ��������& �#��� 0� �������(9 � #�&�� � � ���������� ���� � � #��&�� � � �������� � � ���������� �������( -� ����#�� ������� ��������� � �,��� >FL ��� .������ �##���& 7 ��� +, ����������� ������"����#� 1� ��� � ��( �3( 5�%������ � � � �������� ���#�� �� � ���� � � �� ������� ������� � � ������� ��&��# � � � ��&���# ��#��1�� ��( �3( 9 � ���� � -�&���� + ��� , �������� �#� � �� ��������#���� � ����� +�� �& ���&�� �� ��� .� �� ����� ���������� � ,� �� ���#� �#��� ��� ��%����� ����� ������ ��67� ��� ��(9 � ��0����� � � � ���#�"#�� �������� � � � ������� �

� � �#���"����� �#������ �� ����#���� �� -�&��� �( ���������� � � �#��� � � #�� � � � ���#�� � � �& �� � ��������� ���� ��� � � ��##�� � � 0� ��%����� �������( -�����#�� � � ������� ��������� .� +B ��� >�L ��� ���������&� � �������� � >(� ��� �(� �� ����������#� 1� ��� � ��( �3( ��� ��������� �������� � � � �������� ����������� � +(�B�+�� ���7(�7�+�� �E��,� ����������#� 1�(�(� � ���� � �(F>/�+�/

��� +(FB/�+�7 *�, ��� � � � ����������3( 9 � ���������������# �� ��� �� �������� ��0������& � � �������( 9 � ���?

������� ����� �����#� ��� � ��&��& � � ���#��� �������# .������� ��� �+(�: ��� #���#�� �� �� �� ��&����� �������#�1��������� �� �� -�&( +�� .3( ��� ����� ������� � ��0��� � ������� � � � �������# ��� � � �������� ��� �������� �� � �������� �� ��## �� � � �� ����������& ��� � � 4#( 9 ������������ � � � 22� ��� ��� ��#���� � � � ����������������� ���� ������.�� ���#��� ;F<(9 � 0� ��%����� ������� ����#�� �� �& #� ��������.#�

��&��#� �� � � ���&�� �� ( -� ����#�� � ������ � 7 �����"����� ��%������ � � /� �&�� ���&�� ���� �#���� ����#����� � ��� ���? ������� � ��� � ��� ��#����� �������� ��������� >(/L 1��������� �� �� -�&( +�� .3(

)$ *���� �

9 � ���������� ������.�� �.�� ��� ���������� � �� � ����#��& � 0�"��%����� ���#���� ��� � �#�����#�"�������������� ������� ��� .� ���� �� ����� ���������� ���������"������� �� ���&�( 9 � ��� 0�"��%��������4��"�#������ ����# � �� ���������� � �����# ������� �� � ������# � �#����� ����# �#� �� ��������& �� ���&�( 5������ &���� ����� �� ��������& �� ���&� �� � ������ ������#�� ����� ������ � � � ��� � ������� �#������� ��.��� ������( 5� �#� ���� � ��� ������� � �������� .����� � � ����������# ��������� � ���&�� �� �� ��������&"�#�����#���� ����������( 5� � �#� .� ������ �� � �����������"��������& �#������� ���������� � �� ��"�&� ;/� 7< ��� �#� ��0������ .� � � �������� ��������� � � ����#��� ���� ��� ��� .� ������� ��� ���#���� ���#��#���( -��� �� ��? �� ��8����� � ����� � � ������������&� � � ��&��# &�������� �� ����� ��� �� �������#�� � ����#���� � � ��&�� �� � � ��������� ������� ��� � � ��������"������� ���������# ��� ���������# � ��&��( E �#� � � ��������� �� .��� ���������� ��� �� � � ������ � ��.��&�������� ���&�� � � ��������&"�#��� �������� �� ����#� .� �����# �� ��������& � ����##� ������� ���&� � ��������& ��@����� ��&������( G�& "����� ��������& � �� ���&��& �&���� ��� �#� .� ���������( ���#��& � � ��4��"�#������ ������� ��� �#����� ����� ���������� �� ���� ���� ���� � � ���� � � � ��� �� ���&� �������� ������ (

+$ ��,����������

9 �� ��? ��� �������� .� � � ������# 5��������� � G��#� 1H���� �( )�+ +>/>F"�,3 ��� � � �� �� ������# )������ 1 ���� �( � ��+B"��"+"��773(

-$ ��������

;+< ��� ������ ������� � ��� ��� �� �� �� !����� "�������1=��$ �(�( E�##���� �( ��� G���� C( M�3� 9 � ��� C�? ����� � ��������� ��� C�? #..)(

;,< *( ������ �( E�����#�� ���� #���� #..(� $%� 7B/ (;�< M( )&���� ( ���#� �( ������� �( �������� ���� #���� #...�

&'� >>,�(;>< =( 2�#���?� �( -%��� �( 9�� �?� *( E��&� (������ (����������

#../� ')� 7,+(;/< =( 2�#���?� ����������*��� #..-� +� B(;7< �( -%��� =( 2�#���?� ���� #���� ���� #..0� ),-� +(

-�&( ,( =����� � ���#�"�: ���������� ��� � � � ������� ��&��# � � ��#����"� ��� ���� ( 5��������� ���� � 1�� ��3� � 1.3� 7 1�3� F 1�3� +,1�3 ��� +/ 1� 3 ���! ���� ������������ /� �&��! � �� ����������� �� -�&��� +(

-�&( �( =����� � ���#�"�: #�� �������� � � � ������� ��&��# � � ��#����"� ��� ���� ( ��������� �(� 1�3� ,(� 1.3� >(� 1�3� �(� � 1�3!1�3 ���������� � � �������� �� ( 5��������� ��� � ! ���� ��"��������� /��&��! � �� ��������� �� �� -�&��� +(

�� "���&� �� � 2#�����#�"���4�� =#������ /�F

=#�������#���� %''#� +�� �( B

Page 4: Flow Detection of UV Radiation-Induced DNA Damage at a Polypyrrole-Modified Electrode

;B< *( �.����� �( N �� N( N ��&� *( ������� *(-( )��#��&� ���� #����%'''� &-� ,�/F(

;�< *( E��&� H( )����� �( K@�@� �( H����� O( ���� �( 2������ ����#���� #..0� $.� +>/B(

;F< *( E��&� �( *���&� �( ��? ��%��� ���� #���� #...� &'� >�F/(;+�< *( )�@��?�� =( G������ /��� 01����� ���*���� E�#��� ��� C�?

#./#(

;++< )( 2����� H( )�.��� *( M�� �( 9����� �� M( ����� (�����������#../� '.� +7/B(

;+,< E( ��� 9( �&����� H(H( E�##���� ����������*��� #../� '2� ++�+(;+�< 2( ����� � 9( N�������� ( ������� �( ��@���&#�� (����������*

#..+� ),� B�B(

/>� �� �� �� ���

=#�������#���� %''#� +�� �( B