Flow Cytometry Ppt Sarly

7/26/2019 Flow Cytometry Ppt Sarly

1/27

FLOW CYTOMETRY


2/27

PENDAHULUAN Flow cytometry adalah : suatu alat yang

dapat mengukur jumlah sel, mengindentifkasipermukaan setiap sel dengan kemampuanmemisahkan sel-sel menjadi partikel-partikelkecil menurut karakteristik masing-masingsecara automatis melalui suatu celah yangditembus oleh seberkas sinar laser.


3/27

PRINSIP DASAR FLOW

CYTOMETRYBila suatu sample dalam larutan diinjeksikan

kedalam ow cytometer, partikel-partikel inisecara acak akan didistribusikan ke dalamruang tiga dimensi dan melewati suatu prosesyang disebut fuidics system

Fluidic System ini terdiri dari : central

channelcore through tempat sampledimasukkan !injected", dikelilingi oleh penutupluar !outer sheath" yang berisi cairan yangbergerak cepat.


4/27

SampleCore


5/27

HYDRODYNAMIC FOCUSING

#etika sheath fuid bergerak, akan menghasilkane$ek berupa gerakan yang cepat !massi%e drag"pada bagian yang sempit dari central chamberyang mengubah kecepatan gerak dari central

uid membentuk seperti parabola dengankecepatan gerak yang lebih besar dibagian

tengah !center" dan kecepatan nol !&ero$elocity" pada dindingnya !seperti pada gbr '".(roses inilah yang disebut denganHydrodynamic ocusing


6/27

OPTIC AND DETECTION

Setelah proses hydrodynamic $ocusing, setiap partikel inimelewati satu atau lebih berkas cahaya !beams o$ light". Sinarlaser merupakan sumber cahaya yang paling sering digunakan

dalam ow cytometry. #etika terkena sinar laser,partikelseluorochrome ini akan menyerap energi laser danmenghamburkannya kembali sebagai cahaya berupa :

'. Forward scatter channel !FS)", cahaya hamburan yangditeruskan ke depan !searah paralel dengan sinar laser"

*. Side scatter channel !SS)", cahaya hamburan yang arahnyategak lurus dengan sinar laser.

+. Fluoresence channel !F", cahaya uoresensi yang dihasilkanoleh uorochrome !&at uoresen" yang dilabelkan dengan suatuantibodi monoklonal dan berikatan dengan partikelsel spesifk


7/27


8/27

ntensitas dari FS) digunakan untuk melihatukuran dari partikel dan membedakan antarasel-sel debris dan sel yang hidup

SS) memberikan in$ormasi kandungangranular dalam partikel.

FS) dan SS) ini akan berbeda dan unik untuk

setiap partikel, dan kombinasi dari keduanyadigunakan untuk di$erensiasi dari cell types.


9/27


10/27


11/27

SIGNAL PROCESSING

#etika cahaya mengenai suatu photodetektor suatu aruskecil akan dihasilkan !beberapa mikro ampere" dan akan

dibaca sebagai peningkatan %oltase. Saat berada tepatditengah-tengah area sinar laser, %oltase dibaca sebagaiharga maimum. Selanjutnya nilai %oltase ini akanmenurun saat partikelsel mulai bergerak keluar dariarea pancaran sinar laser. Sehingga terbentuk suatu

%oltase pulse yang akan dikon%ersi oleh suatu con%ertermenjadi angka-angka digital atau grafk histogram yangdapat dianalisis untuk memperoleh in$ormasi tentangkarakteristik dari sel yang bersangkutan.


12/27


13/27

ELECTROSTATIC CELL SORTING

/plikasi utama dari ow cytometry untuk

memisahkan sel menurut subtype atauepitope epression untuk studi biological lebihlanjut, yang sering disebut dengan cell sortingatau F/)S analysis !Fluorescence /cti%ated)ell Sorter".

#ecepatan dari ow sorting tergantung daribeberapa $aktor termasuk ukuran partikel danlaju dari droplet $ormation.


14/27

FLOW CYTOMETRY IN HEMATOLOGY/plikasi dari ow cytometry banyak digunakan dalam bidang

hematologi, antara lain yaitu :

Sample (reparation

mmunophenotyping pada normal hematopoiesis , mis : ympositB, 0 di1erensiasi , 2rythroid di1erensiasi , myeloid di$erensiasi.

mmunophenotyping pada hematologi malignansi, mis : /cuteymphocytyc eukemia type B-cell dan 0-cell, )34 5 leukemia,ymphoproli$erati%e 3isorder.

Staging dari B-cell lymphoma

(letelet $unction 67)-(eptide 0etramer

)ell cycle analysis

7/ cross match, dll.


15/27

FLUORESCENCE ACTIATED CELL

SORTING !FACS"

/plikasi dari F/)S banyak sekali digunakandiantaranya yaitu :

'. /nalisis dan pemisahan sub populasi limpositdengan menggunakan antibodi monoklonalterhadap antigen permukaan !)3" yang dilabeldengan &at warna uorochrome

*. (emisahan lim$osit yang memproduksi berbagaikelas imunoglobulin dengan menggunakanantibody monoklonal terhadap kelas dansubkelas g spesifk dan type -chain


16/27

+. 6emisahkan sel hidup dari sel mati

8. /nalysis kinetik atau siklus sel dankandungan 39/ dan 9/

;. /nalysis $ungsi atau akti%asi sel denganmengukur produk yang disintesis oleh selsetelah distimulasi


17/27

DATA ANALYSIS

(rinsip penting dari analisis data suatu ow cytometry adalahuntuk mem%isualisasikan secara selekti$ karakteristik dari

masing-masing sel sebagai hasil eliminasi dari partikel yangtidak diinginkan, mis : sel mati dan debris

(roses inilah yang disebut dengan gating

Sebenarnya sel sudah secara tradisi terpisah menurutkarakteristik fsik. ysed whole blood cell analysis adalah

aplikasi paling sering dari gating, seperti yang terlihat padagambar berikut, menggambarkan typical graphs untuk SS)dan FS). (erbedaan properti fsik dari granulosit, monosit,dan lim$osit membedakannya masing-masing dan juga darisel-sel kontaminan lainnya.


18/27

3ensity plot )ontour

diagram


19/27

U#$ F%&'($ S$&te($( S$to)$& De&'a&

FACS

dentifkasi sitokin intraselular dapat dilakukan secaralangsung!direk" dengan membubuhkan anti sitokin

yang dikonjugasikan dengan uorokrom atau secaratidak langsung !indirek" menggunakan anti sitokinkemudian membubuhkan anti g yang berlabeluorokrom. ntensitas uorokrom yang terdapatintrasel dideteksi dan diukur dengan ow cytometer,

dan merupakan ukuran untuk kadar sitokin intraselatau kemampuan sel untuk mensintesis sitokin.


20/27

U#$ F%&'($ Ne%tro*l De&'a& FACS

(rinsip uji ini untuk menganalisis jumlah neutrofl yang

mengandung bakteri berlabel yang dibubuhkan.

ang diukur ow cytometerdalam hal ini adalah proporsi sel yangberisi bakteri yangberuoresensi hijau dan intesitas uoresensi merah yang

dihasilkan oleh ethidium bromide !2B" dalam sel (69yang bersangkutan.


21/27

(ilihan uorokrom yang digunakan adabermacam-macam, mis: propidium iodide

yang beruoresensi merah untuk melabelstaflokokus, dan dihidrorhodamin '*+yang akan berubah menjadi rhodamin '*+yang beruoresensi hijau setelah

dioksidasi


22/27

Pe&'%)%ra& +$&et$) Sel De&'a&

FACS/danya siklus sel memungkinkan kita mengukur

kinetik pertumbuhan sel yang diperlukan untukprognosis suatu kanker, dinamika sel 0 pada

7?, dll.

#inetik sel dapat dipelajari dengan berbagai cara,mis: dengan mengukur aktiftas proli$erasi sel.Salah satu metode untuk mengukur aktiftas

ini dengan menentukan proporsi atau $raksi seldalam $ase- S dan mengukur kandungan 39/dengan metode ow cytometry.


23/27

7al ini dapat dilakukan karenaditemukannya substansi&at warna

uorochrom !propidium iodide danethidium bromide" yang dapat mengikat39/ sehingga dapat memberikan in$ormasiyang cepat, akurat dan praktis tentang

kandungan 39/ total dan $raksi sel yangberada dalam setiap siklus sel


24/27


25/27


26/27


27/27

026/#/S

7

Documents

Flow Cytometry Ppt Sarly