Flávia Aleixo VasconcellosDoutoranda em Biotecnologia

eualevas@yahoo.com.br

Universidade Federal de PelotasUniversidade Federal de Pelotas

Centro de BiotecnologiaCentro de Biotecnologia

OBJETIVO DA AULA

CONHECER E DESCREVER

OS PRINCIPAIS MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO

APLICADOS EM LABORATÓRIO

ESTERILIZAÇÃO

Processo que DESTRÓI ou ELIMINA

agentes transmissíveis das superfícies e equipamentos.

FUNGOS, BACTÉRIAS, VÍRUS e ESPOROS

DESINFECÇÃO X ANTISSEPSIA

DESINFECÇÃO

“Limpar” um OBJETO ou INSTRUMENTOS

de organismos patogênicosDESINFETANTESDESINFETANTES

São agentes antimicrobianos aplicados à OBJETOS e INSTRUMENTOS

para destruir microorganismos.

ANTISSEPSIA

“Limpar” um TECIDO VIVO

de organismos patogênicos

ANTISSÉPTICOSANTISSÉPTICOS

São substâncias antimicrobianas aplicadas a TECIDOS VIVOS

para reduzir a possibilidade de infecção.

OBS: Álcool 70% - maior difusão e menor evaporação

ASSEPSIA

ASSEPSIA

Métodos físicos

CALOR SECOFORNO PASTEUR ou ESTUFA

Provoca a OXIDAÇÃO dos constituintes celulares,

DESNATURAÇÃO e a COAGULAÇÃO das proteínas

Indicação - Metais, Vidros, Pós

Contra-indicação - Tecidos, Borrachas e Líquidos

Tempo e Temperatura:

2h à 170°C

ou

12h à 120°C

Métodos físicos

CALOR ÚMIDO

AUTOCLAVE

TERMOCOAGULAÇÃO das proteínas bacterianas.

Elimina bactérias, vírus, fungos, esporos (exceção: prions)

Indicação - Metais, Vidros, Tecidos, Borrachas

Contra-indicação - (alguns) Tecidos, Borrachas e Líquidos

Tempo e Temperatura

15-20 min à 121°CAvaliação da eficácia:

– Fita adesiva

– Tubos com suspensão de esporos de Bacillus stearothermophylus

(12 min a 121°C)

PRÁTICAPRÁTICA

Métodos físicos

RADIAÇÃO por RAIOS GAMA COBALTO

altera a COMPOSIÇÃO MOLECULAR das células,

sofrem IONIZAÇÃO,

ficando carregadas negativa ou positivamente, modificando o DNA (Processo a frio, por isso não danifica embalagens e invólucros)

Indicação: Plásticos descartáveis

por ULTRAVIOLETA 15min – Somente superfícies

Métodos físicos

FILTRAÇÃO

A técnica é considerada esterilizante conforme o diâmetro dos POROS.

diâmetro igual ou inferior a 0.2 μm

( embora não retenham VÍRUS)

Os FILTROS podem ser de vários tipos :

ex: velas porosas, discos de amianto, filtros de vidro poroso, de celulose, e filtros “millipore” (membranas de acetato de celulose ou de policarbonato

Indicação: Líquidos

Métodos químicos

Gases e Líquidos

Formaldeído

180 min a temp. 50-60°C

Utilizado em processos fechados, (autoclave especial)

A esterilização é eficiente, depende

de umidade local controlada.

Desvantagens

Requer equipamento específico

Controle rigoroso

Glutaraldeído

Vantagem

Facilidade de uso

Desvantagens

É tempo dependente

Necessário a imersão total do material.

Alergênico, tóxico e irritante.

Mycobacterias podem ser resistentes, bem como esporos.

DESINFECÇÃO: ....considerações sobre SOLUÇÕES GERMICIDAS

DESINFECÇÃO DE BAIXO NÍVEL(tempo de exposição< ou= a 10 minutos)

São destruídas as bactérias em forma vegetativa, alguns vírus e alguns fungos. O Mycobacterium tuberculosis, os esporos bacterianos ,o vírus da Hepatite B (HBV) e os vírus lentos sobrevivem.

Ex:Álcool etílico e isopropílico, Hipoclorito de Sódio Fenólicos, Iodóforos*, Quaternário de amônia,

DESINFECÇÃO DE MÉDIO NÍVEL (depende da concentração e/ou período de exposição)

Além…são atingidos o Mycobacterium tuberculosis, a maioria dos vírus (inclusive o HBV) e a maioria dos fungos.

Ainda sobrevivem os Mycobacterium intracelulares, os esporos bacterianos e os vírus lentos.

Ex:Álcool etílico e isopropílico (70 a 90%), Fenólicos, Iodóforos, Hipoclorito de Sódio(100ppm) Pasteurização 75o C a 30 minutos.

DESINFECÇÃO DE ALTO NÍVEL (Tempo de exposição >ou= 20 minutos )

Resistem apenas alguns tipos de esporos bacterianos mais resistentes e os vírus lentos

Ex: Glutaraldeído, Solução de Peróxido de Hidrogênio, Hipoclorito de sódio (1000ppm), Cloro e compostos clorados

Mais resistentes Príons

Esporos bacterianos

Micobactéria

Cistos de protozoários

Protozoários vegetativos

Bactéria Gram-negativa

Fungo e maioria de esporos de fungos

Vírus não envelopados

Bactérias Gram-positivo

Menos Resistentes Vírus sem envelope lipídico

Método IDEAL de Esterilização

• Rápido• Eficaz contra todos microrganismos

• Não tóxico• De fácil penetração

• Estável• Aplicável a vários materiais e tecido humano

• Sem odor e cor• Custo reduzido

OBRIGADA!

ANTES e DEPOIS.......

“ENCARE A TÉCNICA ÉSTERIL NÃO APENAS COMO UMA MANEIRA DE ABRIR E

MANIPULAR AS CULTURAS EM AMBIENTE ESTÉRIL, MAS COMO UMA MANEIRA DE PENSAR E DE AGIR

SEMPRE NO LABORATÓRIO.”