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Étude pratique des vaisseaux lymphatiques
F. BAZIN ( Maître de Conférence en Biologie)
M.A. BESLIER (technicienne de laboratoire de Biologie)
Ce document a pour but d’apporter les indications nécessaires à cette étude et de donner un aperçu des observations qui peuvent être faites par des étudiants en premier cycle d’études universitaires.
Il ne s’agit pas d’une publication de résultats originaux, mais de la mise à la disposition d’étudiants et d’enseignants d’un document susceptible de leur permettre de faire des observations personnelles ; la confrontation au réel étant le moyen le plus efficace pour s’approprier des connaissances
Les manipulations sur les animaux de laboratoire ont été effectuées à l’occasion de séances de travaux pratiques au Département de Génie Biologique de l’I.U.T. de CAEN. Ces travaux ont été réalisés par des personnes agréées et dans le respect des règles de bonnes pratiques de laboratoire.
A) Injection de ganglions lymphatiques chez la souris :mise en évidence de vaisseaux lymphatiques et de la circulation
de la lymphe
• 1°) Préparation du matérielLa technique utilisée est celle de l’injection de « Bleu de Prusse gélatiné » selon GABE (in « Techniques Histologiques » p.864-865, Masson et Cie édit. 1968).L’injection se fait sous un faible grossissement de la loupe binoculaire. Utiliser une seringue type seringue à insuline avec une aiguille fine au biseau neuf.La solution de colorant est visqueuse et peut boucher l’aiguille. Maintenir seringue et aiguille tièdes dans un bain marie jusqu’au moment de l’injection et vérifier l’écoulement du liquide au moment de procéder à la piqûre.
• 2°) Préparation de la sourisLa souris de préférence mâle, doit être choisie la moins grasse possible. Les femelles multipares ayant beaucoup de tissu adipeux sous-cutané ne doivent pas être utilisées.Les souris de race blanche permettent une meilleure observation de la coloration des vaisseaux se détachant sur le derme clair.La manipulation se fait sur un animal mort, mais encore chaud et souple. La souris est euthanasiées par asphyxie et immédiatement fixée par les pattes sur une plaquette de liège.
3°) Incisions de la peau et préparation des volets cutanés
11
22
3
4
1, 2, 3 : incisions de la peau
4 : décoller la peau en déchirant le tissu conjonctif sous-cutané.
Ne décoller qu’un seul côté à la fois.
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5 : étaler le volet cutanéet l’épingler sur le liège.
Attention! La face interne de la peau se dessèche rapidement et le tissu conjonctif sous cutané est collant ; ne pas le toucher avec les doigts
Emplacement du ganglion lymphatique inguinal
cage thoracique
abdomen
Repérage d’un ganglion lymphatique inguinal et injection de colorant dans ce ganglion
cuisse
abdomenVolet cutané
veinule
Ganglion lymphatique
inguinal
aiguille
serin
gue
ganglion injecté
Colorant progressant dans un vaisseau
lymphatique
Repérage du ganglion Injection du ganglion
Observation d’un vaisseau lymphatique coloré après injection du ganglion inguinal droit
Ganglion injecté Ganglion non injecté
Veine et veinules confluentes
Vaisseau lymphatique principal et ramifications
Partie de vaisseau non injectée. L’injection se poursuit grâce à une ramification.
sens de migration du colorant au cours de l’injection
Ouverture de la cavité abdominale, observation des organes et repérage de la chaîne des ganglions
mésentériques
1
2
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foie (masquant l’estomac)
pancréas
rate
coecum
gros intestin
ganglions lymphatiques mésentériques
anse de l’intestin grêle
Veines mésentériques le mésentère est transparent.1, 2 : sections de la paroi abdominale
3 : écarter les deux volets de muscles et les épingler sur les volets cutanés
Injection des ganglions lymphatiques mésentériques et des ganglions lombaires
Le colorant est injecté dans toute la chaîne ganglionnaire mésentérique
rectum
ganglion lombaires
vessie
vésicules séminales
veine cave postérieure
rein gauche
Le rein est déplacépour montrer un ganglion lymphatique rénal coloré
Un ganglion lymphatique rénal est en relation avec un ganglion lombaire par un vaisseau lymphatique
Ganglions lombaires injectés
1
2
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1, 2 : découper la cage thoracique, retirer tout le plastron et le diaphragme
3, 4 : fendre la peau et étaler les deux volets cutanés.
thymus
oreillette droite
ventricule droit
lobes droits du poumon retournés
canal thoracique = vaisseau conduisant la lymphe collectée dans toute la partie postérieure du corps (organes contenus dans l’abdomen, membres postérieurs), vers le sinus veineux.
aorte dorsale
vaisseau lymphatique issu des ganglions mésentériques
rein droit
La lymphe conduite par le canal thoracique retourne dans le sang
Glandes salivaires
veines jugulaires externes
ganglion axillaire coloré après injection du ganglion inguinal gauche
thymus
Ganglions et vaisseaux lymphatiques mis en évidence par les injections de Bleu de Prusse
sinus veineux –oreillette droite
ganglion axillaire canal thoracique
ganglions mésentériques
ganglion rénal
ganglion lombaire
ganglion inguinal
Autres ganglions observables au cours de la dissection (d’après : www. eulep.org/Necropsy_of_the_Mouse)
ganglion caudal
Ganglions pyloriques ou pancréatiques
ganglion brachial
ganglion cervical (plusieurs ganglions collés contre les glandes salivaires )
B) Structure histologique des vaisseaux lymphatiquesLa paroi des vaisseaux lymphatiques est généralement fine, mis à part le cas du canal thoracique ou des gros
vaisseaux des grands Mammifères.
On peut rechercher sur des préparations histologiques les sections de ces vaisseaux. Leur reconnaissance est difficile pour un observateur débutant.
La lumière des vaisseaux lymphatiques est limitée comme dans le cas des vaisseaux sanguins par une couche de cellules étroitement imbriquées. Ces cellules forment un endothélium.
La lymphe s’écoule dans ces vaisseaux suivant une direction imposée par la présence de valvules.
Mésentère de souris traité par une solution de nitrate d’argent : les limites cellulaires sont marquées par un dépôt brun.
Segment de vaisseau lymphatique
tissu adipeux
2 valvules en position de fermeture du vaisseau
Une cellule de l’endothelium
C) Des vaisseaux lymphatiques spécialisés, les vaisseaux chylifèresconduisent les lipides absorbés par l’intestin
Ces vaisseaux sont les premiers vaisseaux lymphatiques découverts (Gaspare Aselli 1581-1626) car ils peuvent être remplis d’une lymphe laiteuse : le chyle. Cet aspect ne s’observe qu’après un repas riche en lipides.
Anse de l’intestin grêle sous-tendue par le mésentère d’après le dessin original de G. ASELLI
Intestin grêle (chien)
mésentère
Veine mésentérique (les artères ne sont pas figurées)
Vaisseaux lymphatiques
Les documents présentés ont été réalisés en faisant absorber de la crème par des anses intestinales de rat. Après lavage de la lumière de l’intestin, des portions de parois ont été conservées dans du formol salé. Des coupes à congélation réalisées dans ces prélèvements ont été colorées par le Noir Soudan (colorant lysochrome, c’est-à-dire : se dissolvant dans les lipides).
Absorption des lipides et formation du chyle
Coupe à congélation d’un segment d’intestin grêle de rat après absorption de crème de lait
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1 = lumière de l’intestin
2 = pôles apicaux des entérocytes de l’épithélium absorbant : accumulation de lipides
3 = région des cryptes de Lieberkhun
4 = emplacement des chylifères. Les portions de chylifère emplies de chyle sont colorées en noir.
5 = tissu conjonctif de la sous-muqueuse
6 = vaisseau lymphatique collectant le chyle des chylifères
7 = vaisseau sanguin de la sous-muqueuse
8 = muscle lisse circulaire
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2
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Schéma d’interprétation
1
Formation du chyle et son acheminement par les chylifères et les vaisseaux lymphatiques de l’intestin
Pôles apicaux des entérocytes en coupe transversale
monoglycérides, acides gras, cholestérol
RELG
chyle
Microvillosités du plateau strié
Pôles apicaux emplis de chylomicrons agglomérés
noyau
chylifèreEpithélium absorbant formépar les entérocytes
Synthèse des chylomicrons par les entérocytes. REL = réticulum endoplasmique lisse, G appareil de Golgi
Vaisseau capillaire sanguin contenant des hématies
Chylifère contenant le chyle (chylomicrons agglutinés)
Les chylifères conduisent le chyle aux vaisseaux lymphatiques situés dans la
sous-muqueuse
artériole
Vaisseau lymphatique
Muscle lisse circulaire
Tissu conjonctif
Villo
sité
inte
stin
ale