Ivan Belir M1 13579

ELISA je enzimska proba sa vrstom fazom koja se bazira na primeni antitela ili antigena obeleenih enzimom (peroksidaza ,alkalna fosfataza).

Enzim moe biti vezan za :Specifino antivirusno antitelo Antihumano imunoglobulinsko antitelo Antigen, koji se nalaze nerastvorni, adsorbovani za zidove epruveta, odnosno u vrstoj fazi.

Sastoji se od dve faze:Imunska faza - dolazi do formiranja kompleksa antigen-antitelo obeleeno enzimom.Hemijska faza - dodaje se odgovarajui supstrat ,pri emu dolazi do hemijske reakcije enzim-supstrat.Koliinu vezanog enzima odreujemo kolorimetrijski,merenjem koliine produkta nastalog razgradnjom supstrata.

Koriste se u dijagnostici virusnih infekcija,od posebnog su znaaja u dijagnostici oboljenja izazvanih virusima koji se ne mogu kultivisati (HBV,rotavirus)ELISA metodom mogu se odrediti pojedine klase imunoglobulina (IgM,IgG) ,to nam koristi za brzo postavljanje seroloke dijagnoze akutnih virusnih infekcija iz jednog uzorka seruma.

Elisa testovi su automatizovani, visoko specifini i osetljivi i iskljuuju subjektivnost pri oitavanju rezultata (za razliku od IF metode). Dve osnovne varijante ELISA tehnike su:Kada se poznati antigen nalazi u vrstoj fazi (indirektna ELISA, inhibiciona ELISA )Kada se poznato antitelo nalazi u vrstoj fazi (direktna sendvi ELISA, kompetitivna ELISA, viestepena sendvi ELISA).

INDIREKTNA ELISAKoristi se za detekciju antivirusnih antitela. Poznati virusni antigen se nalazi u vrstoj fazi. U bazeni unosimo ispitivani serum. Ukoliko su prisutna antitela iz seruma e se vezati za antigen u vrstoj fazi i formirati kompleks antigen-antitelo. Vrimo ispiranje preparata.Zatim dodajemo antihumani imunoglobulin obeleen enzimom (konjugat). On se vezuje za specifino antitelo iz prethodno formiranog kompleksa. Dodavanjem supstrata dolazi do reakcije enzim-supstrat I degradacije supstrata.

INHIBICIONA ELISAKoristi se za detekciju virusnih antigena iz bolesnikog materijala. Poznati virusni antigen se nalazi u vrstoj fazi. Uzorku dodajemo specifino antitelo obeleeno enzimom, za koje se vezuje virusni antigen iz ispitivanog uzorka (zbog veeg afiniteta za vezivanje od antigena u vrstoj fazi).

DIREKTNA SENDVI ELISAVirusni antigen, koji se detektuje u ispitivanom uzorku se nalazi u sendviu izmeu poznatog specifinog antitela u vrstoj fazi i specifinog antitela obeleenog enzimom.Dodavanjem supstrata dolazi do njegove enzimske degradacije i promene boje.

KOMPETITIVNA ELISAKoristi se za detekciju virusnih antigena u ispitivanom uzorku koja se vezuje za poznato specifino antivirusno antitelo koje se nalazi u vrstoj fazi .Dodaje se antigen obeleen enzimom, i on se ispiranjem odstrani zbog ega je izostanak boje pozitivna reakcija.

VIESTEPENA SENDVI ELISAKoristi se za detekciju IgM antitela u ispitivanom serumu.Ona se vezuju u kompleks sa antihumanim IgM antitelom u vrstoj fazi.

Dodaje se poznati virusni antigen i specifino antitelo obeleeno enzimom ,koji se pridruuju kompleksu.

Dodavanjem supstrata dolazi do njegove degradacije.

HVALA NA PANjI !

*