ELISA

Enzyme Linked Immunosorbent

Assay

المرتبطة المناعية التحاليل

عامة تعريفات

المضادة األجسام هي Antibodyما

المناعي الجهاز ضمن موجودة مركبات هيالجسم تعرض عند خاص بشكل وتصنع للجسم

غريبة ألجسام

عامة- تعريفات تابع

Antigen

للجسم المناعي الجهاز إثارة عن مسؤول جسم هوالمضادة . األجسام إثارة وبالتحديد

المناعية Immunoassayالتحاليل

معينة مادة مستوى لقياس بيوكيميائية اختبارات هي ) , , , ( دموع لعاب بول سيرم الحيوي السائل في

ارتباط المخصص Antibodyمع Antigenبواسطةله.

عامة- تعريفات تابع

Analyte

وفي قياسها يتم التي الحيوكيميائية المادة هييكون المناعية Antibodyإما Analyteالتحاليل

antigenأو

Antigenحاالت

:إما Antigenيكون . الهرمونات مثل طبيعي بشكل الجسم في موجود

: مثال مرضية حاالت في الجسم في تصنيعه يتمالمشيمة HCGهرمون خاليا من يفرز الذي

, في إفرازه يمكن كما الحمل أثناء طبيعي بشكل. الرجال عند حتى السرطانات أنواع بعض

. المخدرات مثل العادية األحوال في موجود غير

مقدمة

المضادة األجسام تصنيع حال Antibodiesيتم فيغريبة ألجسام هذه Antigens التعرض وتكون

والفة تخصصية ذات المضادة SpecificاألجسامAffinity. تصنيعها أثارت التي الغريبة لألجسام

الجزء على المضادة األجسام antigenicتتعرفdeterminant .

Shortcut to image004.lnk

األجسام تصنيع طرقالخاصة المضادة

المناعية بالتحاليل

و المضادة األجسام لتصنيع طريقة من أكثر هناكلتصنيع شيوعا الطرق هذه أكثر Antibodyأحد

ما لجسم هذا (Antigen)مخصص حقن هواستخالص يتم ذلك وبعد لحيوان الجسم

Antibody . الحيوان هذا سيرم من المطلوب

هذا ناتج polyclonal يسمى Antibodyولكن ألنه. خاليا عدة تصنيع

تصنيع- طرق تابعالخاصة المضادة األجسام

المناعية بالتحاليل

لتصنيع طريقة تخصصا Antibodyهناك أكثرmonoclonal Antibody تصنيع ناتج وهو

تماما متماثلة خاليا ونحصل cell lineمجموعةللجسم مصنعة خلية بدمج الخاليا هذه علىعلى القدرة لها سرطانية خلية مع المضاد

. نهاية ماال إلى االنقسام

تقنية هي ELISA ما

جزيئية مادة تركيز لقياس تستخدم التقنية هذهالحيوي السائل في والعقاقير الهرمونات مثل

عن . تقاس الجزيئية المادة هذه كالسيرمالمضادة األجسام كمية معرفة Antibodyطريق

ب ارتبطت .Antigenالتي

ELISA تقنية

إلى :تنقسم

تنافسية- 1 مناعية Competitive ELISA قياسات

تنافسية- 2 غير مناعية Sandwich ELISAقياسات

مباشرة مناعية قياسات أيضا Direct ELISAوتسمى

مباشرة- 3 غير مناعية Indirect ELISAقياسات

Competitive ELISA

يتنافس الحالة هذه المطلوب Antigenفيمع العينة في لالرتباط Labeled Antigenقياسه

العالقة تكون الحالة هذه وفي المضاد بالجسمكمية بين مع Antigenعكسية قياسه المطلوبlabeled Antigen.

Sandwich ELISA

عن الكشف المطلوب وقياس Antigenيكونمغطى االليزا طبق فيكون العينة في تركيزه

المضاد .Antibodyبالجسم

Sandwich ELISA- Cont

المضاد .Antigenيرتبط - 1 الجسم مع العينة في

غير- 2 المضادة األجسام إلزالة الطبق غسل يتمالمرتبطة .

أخرى- 3 مضادة أجسام إضافة تتم ذلك وبعدبإنزيم . مرتبطة المضادة األجسام هذه وتكون

Sandwich ELISA- Cont

المضادة- 4 األجسام إلزالة أيضا الطبق غسل يتم. المرتبطة غير

حساب- 5 ويتم لإلنزيم األساس المادة تضاف ثمناتج Antigenكمية كمية قياس طريق عن

التفاعل.

Indirect ELISA

عن الكشف المطلوب يكون وقياس Antibodyعندما: الحالة هذه ففي العينة في تركيزه

ويترك Antigenيضاف- 1 االليزا لطبق المخصوص. يلتصق حتى فترة

من- 2 مختلفة أنواع على المحتوى السيرم يضافAntibody تسمىprimary Antibody.

Indirect ELISA- Cont

مع Antibodyيرتبط - 3 السيرم الموجود Antigenفيالطبق . في

إلزالة- 4 الطبق غسل . Antibodyيتم المرتبط غير

بإنزيم Antibodyيضاف- 5 مرتبط Secondary آخرAntibody ارتباط حال في فقط اإلرتباط يمكنه وهذا

Primary Antibody. الطبق في الموجودة بالعينة

Indirect ELISA- Cont

إلزالة- 6 الطبق غسل غير Antibodyيتمالمرتبط.

كمية- 7 حساب ويتم لإلنزيم األساس المادة تضافAntibody . التفاعل ناتج كمية قياس طريق عن

عمل طريقة على مثالELISA

قراءة يجب العمل في الشروع قبلخطأ أي ألن شديدة بدقة التعليماتوخسارة التجربة فساد الى يؤدي قد

جدا Kitقيمة مكلفة وهي

في ) Kitنستخدم المستخدمة المحاليل مجموعةمطلوب ( جسم لكل أن حيث المناعية التحاليل

عنه .Kit الكشف مخصوص

طريقة- على مثال تابع ELISA عمل

من -1 المكون الخاص الطبق ترقيم خانة 96يتم(wells ) الخانات وتستخدم األولى wellsبدقة

القياسي المنحنى .Standard curve لرسم

طريقة- على مثال تابع ELISA عمل

الطبق - 2 في فحصها المراد العينة وضع يتم ثممرات ثالث أو مرتين عينة كل تكرار ويفضل

Duplicate or Triplicate النتائج ظهور وبعد. المتوسط يؤخذ

ضابطة- 3 عينة Quality control sampleتستخدممع تأتي العينة المحاليل ) ( Kit وهذه مجموعة

الشركة قبل من محدد تركيز ذات وهي. المفحوصة العينة مثل تماما وتعامل المصنعة

النتائج

االليزا قارئ جهاز في اإلمتصاص نتائج قراءة بعدالرسم ورق على القياسي المنحنى برسم نقوم

السيني المحور نستخدم بحيث -x البيانيaxis للتركيزconcentration الصادي والمحور

y-axis لإلمتصاص Absorption .Absorption

nm

Concentration ng/ml

النتائج- تابع

القياسية المحاليل تركيزات بتحديد نقومstandards السيني المنحنى ثم x-axis على

المنحنى على قياسي محلول كل قراءة نحدد. y-axisالصادي القياسي المنحنى ونرسم

النتائج- تابع

بحيث عينة كل تركيز لقياس المنحنى هذا يستخدمالصادي المحور على اإلمتصاص قراءة عند نأتيوبعد المنحنى على لها المقابلة النقطة ونحدد

. السيني المنحنى على التركيز نحدد ذلك

Absorption nm

Concentration ng/ml

النتائج- تابع

وإذا المنحنى من الضابطة العينة تركيز نحسبالشركة من المحددة الطبيعية الحدود في كانويمكن ناجحة التجربة أن يعني فهذا المصنعة

. النتائج اعتماد

http://www.edumedia-sciences.com/en/a543-direct-enzyme-linked-immunosorbent-assay-elisa

ELISA http://www.sumanasinc.com/webcontent/ani

mations/content/ELISA.html http://www.biology.ualberta.ca/facilities/multi

media/uploads/procedures/elisa-sound.swf