Efeitos locais e sistêmicos de lesões associadas ao HPV sobre o sistema imune:possibilidades terapêuticas?

Ana Paula LepiqueDepartamento de Imunologia

Instituto de Ciências BiomédicasUniversidade de São Paulo

alepique@icb.usp.br

Família: Papillomaviridae

Gênero: , ...Papillomavirus

Partícula 50nm

8Kb, ds DNA

epiteliotrópcio (pele e mucosa)

Potencial oncogêncico alto ou baixo

Fator etiológico para verrugas,

papilomas e câncer orofaríngeos e

anogenitais.

PAPILOMAVÍRUS HUMANO E CÂNCER

GENOMA E PRINCIPAIS EFEITOS BIOLÓGICOS

E6 - liga a E6AP e leva à degradação de p53;- ativa o promotor de hTERT;

E7 – liga-se a pRb hipofosforilado, liberandoE2F e promovendo proliferação celular

Imortalização

Neoplasia intraepitelial cervical

Grau: I II III

Degradação de pRb and p53, expressão de hTERT, integração do genoma viral no

genoma do hospedeiro, imortalização, alterações genéticas, transformação celular

…......... mecanismos de evasão do sistema imune

Boccardo et al, 2010. Carcinogenesis

Endométrio

Vagina

Vulva

Cérvice

Útero

Ovário

Trompa de Falópio

trat

osu

per

ior

trat

oin

feri

or

MICROAMBIENTE

Epitélio estratificado escamoso

Epitélio colunar

SISTEMA IMUNE E REAÇÕES LOCAIS

Tempo e grau de lesão

DC

DC

IL-10

TGFCD8CTL

Treg

Treg

Treg

M2MØ

M2MØ

Alvarez, et al, 2017. Sci. Rep.

Estudo prospectivo140 pacientes

Cervicite, NIC1, 2, 3, câncerPacientes sexualmenteativas, imunocompetentes,não grávidas;

Hospital das ClínicasDra. Maricy Tacla

CD8CTL

TregTreg

Treg

CD8CTL

TregTreg

Treg

CD8CTL

TregTreg

TregCD8CTL

TregTreg

Treg

CD8CTL

TregTreg

Treg

CITOCINAS METABÓLITOS

MEDULA ÓSSEA

ORGÃOS LINFÓIDES 2ARIOS

EFEITOS SISTÊMICOS

MEDIADORESLIPÍDICOS

FATORES DECRESCIMENTO

CÉLULAS

CÉLULAS

LEUCOCITOSE TOLERÂNCIA

C’ÉLULASTUMORAIS

INFILTRADOINFLAMATÓRIO

MØ

MØ

CITOCINASFATORES SOLÚVIES

MEDULAÓSSEA

BAÇO

Treg Th1CTL

CÉLULAS

HIPÓTESE DE TRABALHO

0

50

100

150

200

1 2 3 4 5 6

G-C

SF p

g/m

l pla

sma

cont. CC CIN1 CIN2 CIN3 ICC

*

*

*

0

1

2

3

control CC highgrade

invCa

% o

f C

D6

6b

+CD

11

b-

cont. CC HG ICC

p=0.01

0

20

40

60

80

100

120

0 10 20

0

20

40

60

80

100

120

0 20 40 60

0

20

40

60

80

100

120

0 10 20 30% of circulating CD66b cells

pg/

ml p

lasm

a G

-CSF

CC HG ICC

0

20

40

60

80

100

120

0 10 20 30 40 50

R=0.02

control

R=0.28 R=0.12 R=0.54

EM PACIENTES COM CA COLO UTERINO HÁ AUMENTO DA CONCENTRAÇÃO

PLASMÁTICA DE G-CSF E AUMENTO DE NEUTRÓFILOS

IMATUROS CIRCULANTES

Alvarez, et al. 2017. Sci. Rep.

Estudo prospectivo140 pacientes

Cervicite, NIC1, 2, 3, câncerPacientes sexualmenteativas, imunocompetentes,não grávidas;

Hospital das ClínicasDra. Maricy Tacla

Karla Alvarez

EM MODELO EXPERIMENTAL OBSERVA-SE QUE CÉLULAS TUMORAIS PRODUZEM G-CSF E IL-6 ENTRE OUTRAS CITOCINAS

0

2

4

6

8

10

12

0,5 1,5 2,5 3,5 4,5

exp

ress

ion

ra

ot

arge

t/p

M

IL-1a

IL-1b

IL-1ra

IL-2

IL-4

IL-5

IL-6

IL-7

IL-10

IL-12p70

IL-13

IL-16

IL-17

IL-23

IL-27

IFNg

TNFa

IL-5

IL-10

IL-5IL-10

IL-6

IL-1

IL-1ra

0

5

10

15

20

25

0,5 1,5 2,5 3,5 4,5

exp

ress

ion

ra

ot

arg

et/

pM

CCL1

CCL2

CCL3

CCL4

CCL5

CCL11

CCL12

CCL17

CXCL1

CXCL2

CXCL9

CXCL10

CXCL11

CXCL12

CXCL13

CCL2CCL2

CCL2

CCL2

CCL3

CCL12

CCL12

CXCL13CCL5CXCL2CXCL9 CXCL9

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

0,5 1,5 2,5 3,5 4,5

exp

ress

ion

ra

ot

arg

et/

pM

C5a

sICAM-1

TIMP-1

TREM-1

11bGr1 TAMTC-1

CD45+SiHa

C5a

C5a

C5a

TIMP1

C5a

TREM1

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0,5 1,5 2,5 3,5 4,5

exp

ress

ion

ra

ot

arg

et/

pM

G-CSF

GM-CSF

M-CSF

IL-3

TC-1 11bGr1 TAMTC-1

CD45+SiHa

G-CSF

IL-3

exp

ress

ãore

lati

vap

op

ula

ção

alvo

/pM

Stone, et al. J Leukoc Biol. 2014 Oct;96(4):619-31.

Dissociadofrações CD45+e CD45-

separadas

Simone Stone

TC-1

p65 NFkBSTAT3

IL-6 G-CSF IL-10

TLR

CD40L

TCR

IL-1

IL-6R G-CSFR IL-10R CD40 IL-1R

TLRL Ag

Sobrevivência, proliferação, inflamaçãoTEM, tolerância

Sobrevivência, proliferação, inflamação,apresentação de antígenos,

resposta de linfócitos T

SINALIZAÇÃO EM CÂNCER E SISTEMA IMUNE

CARACTERIZAÇÃO DO STATUS DE ATIVAÇÃO DE STAT3 E P65 NFKB EM

PACIENTES COM CA DO COLO UTERINOEstudo prospectivoCohorte de 96 pacientes, ICESP, SPPacientes com lesão de alto grau (NIC3) ou câncer invasivoSexualmente ativas, imunocompetentes, não grávidas

Hospital Universitário, USP, Dra. Noely LorenziICESP, Dr. Jesus Carvalho

Sangue periférico

FSC-A

SSC

-A

FSC-W

FSC

-H

CD3

HLA

HLA

SSC

-A

biopsia

FSC-A

SSC

-A

FSC-W

FSC

-H

CD45

SSC

-AH

LA

CD3

HLA

CD3

Renata Rossetti

0

1000

2000

3000

4000

1 2 3 4

NF P

0

5000

10000

15000

20000

25000

30000

1 2 3 4

STAT T

0

500

1000

1500

1 2 3 4

STAT P

0

10000

20000

30000

40000

50000

1 2 3 4

CD3 NF T

0

1000

2000

3000

4000

1 2 3 4

CD3 NF P

0

500

1000

1500

1 2 3 4

STAT P

0

10000

20000

30000

40000

1 2 3 4

APC NF Total

0

2000

4000

6000

8000

1 2 3 4

APC NF P

0

5000

10000

15000

20000

25000

30000

35000

1 2 3 4

APC STAT T

0

500

1000

1500

2000

2500

1 2 3 4

APC STAT P

0

5000

10000

15000

20000

25000

30000

1 2 3 4

CD3 STAT T

0

10000

20000

30000

40000

50000

1 2 3 4

NF total

p65 NFkB p65 NFkB Ser536-P STAT3 STAT3 Tyr705

PBMC

CD3+

CD3-HLA+

MFI

-b

k

R² = 0.8917

R² = 0.9004

0

500

1000

1500

2000

2500

0 1 2 3 4

R² = 0.8944

R² = 0.9935

0

500

1000

1500

2000

0 1 2 3 4

R² = 0.7092

R² = 0.942

0

1000

2000

3000

4000

0 1 2 3 4

CÂNCER CERVICAL CONTROLA A SINALIZAÇÃO DE STAT3 E P65 NFKB

EM LEUCÓCITOS CIRCULANTES

EXPRESSÃO DE STAT3 E P65 PODEM SER MARCADORES DE PROGRESSÃO DE CA COCOLO UTERINO?

É POSSÍVEL UTILIZAR ESSA INFORMAÇÃO PARA DESENHO DE FERRAMENTAS TERAPÊUTICAS?

EM MODELO EXPERIMENTAL, NEUTRALIZAÇÃO DE IL-6 E G-CSF INIBE O CRESCIMENTO TUMORAL

Citometria de fluxo

Western blotting

ab-IL-6N T T

ab-irr ab-G-CSFab-comb.N

P- p65

p65

P- STAT3

STAT3

-Tubulin

MFI

ph

osp

ho

-p6

5sp

len

ocy

tes

MFI

ph

osp

ho

-p6

5M

yelo

id A

PC

s

MFI

ph

osp

ho

-p6

5T

cells

Rel

ativ

e ex

n.

P-S

TAT3

/tu

b

Rel

ativ

e ex

n.

STA

T3/t

ub

Rel

ativ

e ex

n.

P-p

65

/tu

b

Rel

ativ

e ex

np

65

/tu

b

TRATAMENTO COM INIBIDOR FARMACOLÓGICO DE STAT3 INIBE O CRESCIMENTO TUMORAL

Days post tumor cells inoculation

Tum

or

volu

me

(mm

3)

A

B

Gretel Rodriguez

TRATAMENTO COM INIBIDOR DE STAT3 LEVA AO AUMENTO DA EXPRESSÃODE P65 NFKB

MFI

ph

osp

ho

-p6

5sp

len

ocy

tes

MFI

ph

osp

ho

-p6

5m

yelo

id c

ells

MFI

ph

osp

ho

-p6

5T

cells

N T N T NSC

P-STAT3

STAT3

P-p65

p65

-Tubulin

TRATAMENTO COM INIBIDOR DE STAT3 LEVA AO AUMENTO DA PROLIFERAÇÃOANTÍGENO ESPECÍFICA DE LINFÓCITOS T

CD

4 T

cel

l pro

lifer

atio

nre

lati

ve v

alu

esC

D8

T c

ell p

rolif

erat

ion

rela

tive

val

ues

control HPV pep PMA/iono

N Tv Tin N Tv Tin N Tv Tin

N Tv Tin N Tv Tin N Tv Tin

CONCLUSÕES E NOVAS HIPÓTESES DE TRABALHO

LEUCOCITOSETOLERÂNCIA

STAT3P65 NFkB

STAT3P65 NFkB

MØ

MØ

NEUTRALIZAÇÃO

IL-6G-CSF

MEDULAÓSSEA

BAÇO

SUPRESSÃO IMUNOMODULAÇÃO

INIBIÇÃO DE STAT3Treg Th1

CTL

STAT3P65 NFkB

AGRADECIMENTOS

Lepique Lab

Renata RossettiGretel RodriguezKarla Lucia AlvarezSimone StoneCaio Farina SilveiraMarcella CipelliSandra AlvesFlavia SardelaVictor Yamada

ICESP/FM-USP

Luisa VillaLara TerminiGiana MotaBarbara MelloRoger Chammas

FM-USP/ Ginecologia

Edmund BaracatMaricy TaclaNoely LorenziAdhemar Longatto Filho

USP – HU

Paulo MargaridoNoely LorenziKaori Yokochi

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