乳腺上皮細胞研究の為の最適製品

PRODUCTS FOR MAMMARY STEM CELLS

APPLICATION CATALOG

・乳腺上皮細胞培養・Mammary - CFC Assays・Mammospheres

2015~2016

乳腺上皮細胞研究

現在、乳腺前駆細胞は、液体培地下、組織培養プラスチック皿または BD 社の MatrigelTM のような３次元ゲル内でMammary colony-forming cells (Ma-CFCs) と呼ばれるコロニーで検出することができます。ヒトにおいて、３つの異なる Ma-CFCs 筋上皮および管腔への二分化能を有するものが検出可能です。二分化能を有する細胞および筋上皮前駆細胞は、基底細胞のフェノタイプを持ち、管腔前駆細胞は、管腔のフェノタイプを持ちます。また、乳腺上皮細胞中の未分化の細胞を検出するための代替法としてmammosphere assayがあります。この方法は、基層への接着を防ぐ培養系において低密度で細胞を播種するものです。

図１：異なる乳腺細胞の培養系の例

EpiCult®-B および MammoCultTMMedia が選ばれる理由

すべての血清および培地サプリメントは、細胞培養およびコロニーアッセイにおいて、再現性よくご使用頂くために厳密なクオリティーコントロールがされております。

プライマリーのヒトおよびマウスの乳腺上皮細胞の培養、性質および分化のすべてをサポートする総合的な製品を提供しています。

STEMCELL Technologies 社は、製品に関する質問や、すべての製品の使い方に答える High quality technical support を提供しています。

ヒトおよびマウスの乳腺上皮細胞の培養、性質決定および分化をサポートするためのプロトコールは、pre-test され、最適化されております。

Quality Controlled

Comprehensive

Technical Support

Pre-tested

ヒ ト 前 駆 細 胞 を 検 出 す る た め の EpiCult-B medium-(human) における Ma-CFU colony。

EpiCult-B medium(mouse) および BD 社MatrigelTM で培養したマウス乳腺構造の断面。

MammoCultTMmedium で培養したヒトmammospheres。

乳腺幹細胞研究の為の製品

固形組織の解離

酸素による固形組織の解離固形乳腺組織の為に最適化された解離酵素についてはページ 6 をご覧ください。

上皮細胞の分離

カラムフリーの上皮細胞分離ヒトまたはマウスの乳腺上皮幹細胞を濃縮するための様々な細胞分離キットから選択いただけます。処理数または純度についてはページ 7-8 をご覧下さい。

ヒト二分化能を有するmammary colony

二分化能を有する（mixed)なヒトMa-CFC colonyは、Wright-Geimasa で染色。Ma-CFC assays の実施および培養についての詳細はページ 3 をご覧ください。

ヒト mammospheresMammosphere として成長したヒト乳腺前駆細胞。ヒト mammospheres の short-ter culture および維持培養についての詳細はページ 4 をご覧ください。

マウス乳腺上皮コロニーマ ウ ス 乳 腺 上 皮 細 胞 由 来 の コ ロ ニ ー、Wright-Geimsa で染色。マウス Ma-CFC assays の実施および培養についての情報はページ 5 をご覧ください。

Differentiate

culture

Differentiate

ヒト乳腺上皮細胞の培養および EpiCult®-B(ST-05601) を使った Ma-CFC assaysEpiCult®-B Medium Kit (Human) が選ばれる理由

• Ma-CFC assay でクローン性の増殖を促進します。• 乳腺上皮細胞の２つのサブタイプをバランスよく成長させます。• ３Ｄ MatrigelTM-based assay で乳腺前駆細胞が分化します。• プライマリーの乳腺上皮細胞の単層培養（short-term culture) ができます。

乳腺前駆細胞

管腔コロニー

筋上皮コロニー

EpiCult®-B(human:ST-05601) 培 地 で 7 日 間 培 養 し、Wright-Geimsa で染色したヒト二分化能を有する前駆細胞由来のコロニーの２つの例。

EpiCult®-B(human:ST-05601) 培 地 で 7 日 間 培 養 し、Wright-Geimsa で染色したヒト管腔前駆細胞由来のコロニーの２つの例。

EpiCult®-B(human:ST-05601) 培 地 で 7 日 間 培 養 し、Wright-Geimsa で染色したヒト筋上皮前駆細胞由来のコロニーの２つの例。

EpiCult®-B(ST-05601)による培養

商品コード 商品名 梱包単位 希望小売価格ST-05601 EpiCult-B Medium ( Human ) 100mL Kit ￥38,000

*EpiCult-B Basal Medium ( Human ) ( 100mL ) と EpiCult®-B Supplement ( Human ) ( 1mL) のキット製品です

EpiCult®-B MEDIUM KIT

※上記価格は 2015 年 4 月 1 日からの価格（税抜き）です。価格は予告なく変更されることがございます。ご了承下さい。

MammoCultTM(ST-05620) を使ったヒト乳腺前駆細胞の Mammospheres での培養MammoCultTMMedium(Human) が選ばれる理由• 多くの強固な mammospheres が得られます。• 乳腺上皮細胞の生存（short-term culture) をサポートできます。• Defined な培地。• 無血清の組成。

乳腺組織

解離

細胞懸濁液

7 日間 MammoCultTM(ST-05620)培養

接着非依存性ヒト mammospheres の浮遊培養。7 日間以上 MammoCultTMmedium(ST-05620) で中空の mammospheres を培養した例。

中空のヒト Mammosphere

固形ヒト Mammosphere

7 日 間 MammoCultTMmedium(ST-05620) で 固 形mammosphere を培養した例。長期培養では、固形形態の mammospheres が中空形態の spheres になります。

大小様々な Mammosphere

Mammospheres の大（＞ 60µm:　　　　) および小（＜ 60µm:　　　　) の例。大きい mammospheresは管由来の培養物と高い頻度で関連性があり、小さいspheres は小葉由来の培養物と高い頻度で関連性があるとの報告があります。

商品コード 商品名 梱包単位 希望小売価格ST-05620 MammoCult Medium ( Human ) 500mL Kit ￥56,000

*MammoCult Basal Medium (Human)(450mL) と MammoCultTMProliferation Supplement (Human)(50mL) のキット製品です

MammoCultTM MEDIUM KIT

※上記価格は 2015 年 4 月 1 日からの価格（税抜き）です。価格は予告なく変更されることがございます。ご了承下さい。

マウス乳腺上皮細胞の培養および EpiCult®-B(ST-05610) を使ったマウス Ma-CFC assay の実施

EpiCult®-B Medium Kit (Mouse) が選ばれる理由• 上皮間葉転換（EMT) の発生が遅れ、減少します。• 乳腺コロニー形成細胞を高頻度で検出可能です。• ３D MatrigelTM-based assay で乳腺前駆細胞の成長を促進します。• プライマリーの乳腺上皮細胞の単層培養（short-term culture) が可能です。

従来の組成と比較して EpiCult®-B(mouse:ST-05610)の組成では一般的な培地と比較して 43％多いコロニーを形成します。

従来の組成 (B) と比較して EpiCult®-B medium (ST-05610)(A) で培養した乳腺上皮細胞では上皮間葉転換

（EMT) の明らかな遅れおよび減少があります。EMT は、線維芽細胞様形態の出現により定義されます。

EpiCult®-B medium(mouse) において、成長したマウス Ma-CFC コロニー２つの例。ヒト Ma-CFC コロニーと異なって、マウス乳腺上皮細胞のサブタイプは簡単には同定されません。

EpiCult®-B (mouse) 従来の組成

商品コード 商品名 梱包単位 希望小売価格ST-05610 EpiCult-B Medium ( Mouse ) 500mL Kit ￥46,000

*EpiCult-B Basal Medium (Mouse)(450mL) と EpiCult®-B Proliferation Supplement (Mouse)(50mL) のキット製品です

EpiCult®-B MEDIUM KIT

※上記価格は 2015 年 4 月 1 日からの価格（税抜き）です。価格は予告なく変更されることがございます。ご了承下さい。

固形乳腺組織の解離

STEMCELL Technologies 社は、乳腺組織の解離のための製品を提供しています。乳腺細胞の細胞懸濁液は、collagenase/hyaluronidase のカクテルでの乳腺オルガノイド中の固形組織の酵素的処理で得られます。オルガノイドは、その後 Trypsin-EDTA、DNAse I および Dispase を使い細胞懸濁液に解離させ、凝集塊を除去するために 40µm cell strainer (ST-27305)でフィルターを通して細胞懸濁液にします。

細胞懸濁液への酵素的解離の為に抽出されたマウス乳腺

商品コード 商品名 梱包単位 希望小売価格ST-07912 Collagenase/Hyaluronidase 10mL ￥42,000ST-07900 DNAse (1mg/mL) 1mL ￥16,000ST-07913 Dispase (5U/mL) 100mL ￥42,000ST-07901 Trypsin EDTA 500mL ￥14,000

DIssoCIaTIon EnzyMEs

良質の解離酵素を使い、また最適な解離プロトコールに従うことで、細胞数の回収および細胞のバイアビリティーが向上します。固形乳腺組織の解離の為に最適化されたプロトコールをご用意しておりますので、ベリタスまでお問合せ下さい。

マウスおよびヒトの固形乳腺組織の解離には異なる技術が必要になります。解離の技術は、細胞の回収およびバイアビリティーに顕著に影響します。

お役立ちヒント

ご存じですか？

※上記価格は 2015 年 4 月 1 日からの価格（税抜き）です。価格は予告なく変更されることがございます。ご了承下さい。

ヒト乳腺上皮細胞の分離：EasySep

STEMCELL Technologies 社は、ヒトおよびマウスの乳腺上皮細胞の分離キットを提供しています。

ヒトおよびマウスの上皮細胞のポジティブおよびネガティブセレクションの為の EasySep® 免疫磁性細胞分離方法の図

新鮮または凍結ヒトまたはマウスの乳腺上皮細胞を調整してスタートします。

EasySep®Human CD10 Positive Selection Kit (ST-18358) は、CD10+ 細胞の分離に最適化されております。CD10+ 細胞のフラクションは、二分化能（筋上皮、管腔）を有する細胞および筋上皮前駆細胞、非クローン性の筋上皮細胞を含みます。

EasySep®Human EpCAM Positive Selection Kit (ST-18356) は、EpCAM+ 細胞の分離に最適化されています。EpCAM+ フラクションは、二分化能（筋上皮、管腔）を有する細胞および管腔前駆細胞、管腔細胞を含みます。

培養した乳腺組織でスタートし、分離したフラクションの典型的純度は 93 ± 1％です。純度は、EpCAM と同一の分布を持つモノクローナル抗体（5E11-FITC（ST-10110））で評価されました。

分離後のフラクションのおよそ 83.8-98.1% が CD10+ 細胞になります。CD10+ 細胞の純度は、magnetic nanoparticle上の dextran を認識する FITC-labeled anti-dextran で評価されました。

ヒト CD10 ポジティブ分離

ヒト EpCAM ポジティブ分離

EasySep®Human MUC1 Positive Selection Kit は、MUC1+

細胞の分離に最適化されています。MUC1+ フラクションは、管腔前駆細胞、非クローン性の管腔上皮細胞を含みます。

培養した乳腺組織でスタートし、選択されたフラクションの純度は 96 ± 1％です。純度は、magnetic nanoparticle 上のdextran を認識する FITC-labeled anti-dextran で評価されました。

ヒト MUC1 ポジティブ分離

細胞懸濁液にEasySep selection cocktailを加える

EasySep magnetic particlesを加える

磁石にチューブをセット

①

②

③

反応

反応

デカンテーションで細胞回収

マウス乳腺上皮細胞の分離：EasySep

マウス乳腺幹細胞の分離

EasySep®Mouse Mammary Stem Cell Enrichment Kit (ST-19757) は、CD31-CD45-TER119-CD24+CD49fhi ポピュレーションの分離に最適化されています。CD24+CD49fhi のサブポピュレーションは、乳腺上皮幹細胞に分離され、蛍光励起セルソーターで分離されます。

EasySep®Mouse Epithelia Cell Enrichment Kit (ST-19758)は、造血系および内皮細胞のコンタミを除去します。CD31、CD45およびTER119の細胞表面抗原を発現する細胞を除去し、ラベルされていない上皮細胞を回収します。

新鮮に解離したマウス乳腺上皮細胞のフローサイト解析の結果を CD49f および CD24 発現パターンで示している。Mammary repopulating unit (MRU) リ ッ チ な フ ラク シ ョ ン は、CD49f++CD24+ サ ブ セ ッ ト 中 に 観 察 さ れま す。Mammary colony-forming cells (Ma-CFCs) はCD49f+CD24+ サブセット中に観察されます。

純度は、CD45、TER119 および CD31 を発現するターゲット細胞以外の細胞に結合した抗体を認識する goat anti-rat IgG FITC 抗体で評価しています。

商品コード 商品名 CoMponEnTs 梱包単位 希望小売価格ST-18358 EasySep　Human CD10

Positive KitEasySep　 Human CD10 Positive Selection Cocktail EasySep　Magnetic Nanoparticles 1 x 109 cells ￥107,000

ST-18356 EasySep　Human EpCAMPositive Kit

EasySep　Human EpCAM Positive Selection Cocktail EasySep　Magnetic Nanoparticles 1 x 109 cells ￥107,000

ST-18359 EasySep　Human MUC1Positive Kit

EasySep　 Human MUC1 Positive Selection Cocktail EasySep　Magnetic Nanoparticles 1 x 109 cells ￥107,000

ST-19757 EasySep　Mouse MammaryStem Cell Enrichment Kit

EasySep　Mouse Mammary Epithelial Cell Enrichment CocktailEasySep　Biotin Selection CocktailEasySep　Magnetic NanoparticlesAnti-CD24-PE、Anti-CD49f-FITC

1 x 109 cells ￥211,000

ST-19758 EasySep®Mouse Epithelial Cell Enrichment Kit

EasySep　Mouse Epithelial Cell Enrichment CocktailEasySep　Biotin Selection CocktailEasySep　Magnetic Nanoparticles

1 x 109 cells ￥103,000

※上記価格は 2015 年 4 月 1 日からの価格（税抜き）です。価格は予告なく変更されることがございます。ご了承下さい。

上皮細胞研究のサポート製品

商品コード anTIgEn ClonE ExprEssIon IsoTypE forMaT applICaTIons qUanTITy 希望小売価格

ST-01431CD10 (CALLA)See FIGURE 7c below

FR4D11 Basal-positioned cells Mouse IgG1 Purified CS, IH 100µg ￥36,000

ST-01434

CD24 32D12 Luminal cells

Mouse IgG1, k Purified CS 100µg ￥36,000

ST-10231 Mouse IgG1, k Biotin CS 100 tests ￥44,000

ST-10424 Mouse IgG1, k FITC CS 100 tests ￥37,000

ST-10111 CD49f( α 6 Integrin) GoH3

Basal-positioned cells,human and mouse progenitors and mouse stem cells

Rat IgG2a FITC FC 100 tests ￥66,000

ST-01420

EpCAM See FIGURE 7a, 7b below

VU-1D9 Bioitent and luminal-restricted progenitors and luminal cells

Mouse IgG1 Purified CS, IH 100µg ￥39,000ST-10109 Mouse IgG1 FITC FC, IF 100 tests ￥43,000

ST-01421 323/A3Same as VU-1D9 but 323/A3 has a slightl broader distribution in basal compartment

Mouse IgG1 Purified CS, IH 100µg ￥39,000

ST-01422 Epithelial Cell Surface 5E11

Stains luminal cells.Variable staining of malignant breast epithelium

Mouse IgG1 Purified CS, IH 100µg ￥39,000ST-10110 Mouse IgG1 FITC FC 100 tests ￥43,000ST-01425 Keratin 18 DC-10 Luminal cells Mouse IgG1 Purified IH 100µg ￥33,000

ST-01432 Keratin 19 A53-B/A2 Subpopulation of luminal cells Mouse IgG2a,

k Purified IH 100µg ￥36,000

ST-01423 MUC1 Glycoprotein 214D4 Luminal-restricted progenitors

and luminal cells Mouse IgG1 Purified CS, IH 200µg ￥144,000

＊ Applications: CS-Cell Separation; FC-Flow Cytometry; IH-Immunochemistry Format: FITC-Fluorescein Isothiocyanate; PE-Phycoerythrin

乳腺上皮細胞特異的抗体での乳腺上皮細胞の染色

EpiCult-B medium (human:ST-05601) で培養したヒト乳腺上皮細胞の免疫蛍光染色。FITC-labeled anti-EpCAM antibody (ST-10109) および DAPI counterstained (blue) での同定。

正常乳腺組織のアルカリホスファターゼ検出は anti-EpCAM antibody (ST-01420) での同定。EpiCult-B medium (human:ST-05601) で培養したヒト乳腺上皮細胞の免疫蛍光染色。Anti-CD10 antibody (ST-01431) と Texas Red-conjugated anti-mouse 二次抗体での同定。

A

C

B

商品コード 商品名 梱包単位 梱包単位ST-27305 40µm Cell Strainer 50 個 ￥36,000ST-04902 Collagen Solution 35 mL ￥72,000ST-37150 HBSS with 10mM HEPES, w/o Phenol Red 500 mL ￥11,000ST-27300 Tissue Dissociation Flask 1 flask ￥23,000ST-27114 35 mm Treated Tissue Culture Dishes 20 枚 ￥8,000ST-27145 6-Well Ultra-Low Adherent Plates For Suspension Cultures 6 枚 ￥36,000

※上記価格は 2015 年 4 月 1 日からの価格（税抜き）です。価格は予告なく変更されることがございます。ご了承下さい。

Affymetrix / Panomics 社 の QuantiGene®ViewRNA は、 こ れ ま で の 方 法 と は 全 く 異 な る、 新 し い In situ Hybridization 法です。非常に短いプローブを使用し、ハイブリ効率や膜透過性を高めることで、これまで検出が難しかった mRNA についても短時間で特異的に検出することが可能になりました。

特長

• 1 コピーの mRNA を 1 ドットで表示• 複数の mRNA を同時検出 ( 細胞のみ )• ノイズが低く、高感度• 簡便かつ自動化に適した実験方法• スライドガラス・プレートに対応• 顕微鏡・イメージアナライザーによる検出• 3 時間でターゲットプローブのハイブリ終了

ViewRNA により１copy のターゲットを検出

Genomic の Her-2 と IL-6 に 特 異 的 に ハ イ ブ リ す る QunatiGene ViewRNA のターゲットプローブを設計し、Genomic Her-2 と IL-6 の検出を行った。その結果、２つの蛍光ドットが検出された。このことより、一つの蛍光ドットが、1copy の Genomic DNA を表し、QuantiGene　ViewRNA により 1copy の核酸を検出が可能である。

MultiColor ViewRNA ( FITC, Cy3, Cy5, Cy7 )

Her-2/IL-6

サンプルをカバーグラスやplate 上に固定し、膜透過処理などの前処理を行う。

目的の mRNA に特異的なプローブをハイブリダイゼーシ ョ ン さ せ る。1 種 類 のmRNA に 対 し て、10 種 類以上のプローブを使用する。

Pre-Amplifier(PreAMP)、Amplifier(AMP)、Label Probe の順に、ハイブリダイゼーションを行い、シグナルを増幅させ、蛍光 ( 細胞 )または FastRed 色素 ( 組織 ) で検出する。

顕微鏡や自動蛍光イメージアナライザーなどによりシグナルを検出する。

Step1 : サンプル前処理 Step2 : プローブのハイブリ Step3 : シグナルの増幅 Step4 : 検出

実験の流れ

4 color 染色試薬　発売中！！

迅速・簡便・高感度QuantiGene® ViewRNAIn situ mRNA 検出試薬

RSTF-3019

販売代理店