1

Dépistage sélectif des erreurs innées du métabolisme

Olivier BOULAT, Médecin adjoint, MER2 Laboratoire Chimie Clinique

2

Case report

Male, 24 years old

Before hospitalization:

–Healthy, at a football camp for 1 week

–48 hours before hospitalization:

headache, vomiting & progressive

confusion

Case report

• Day 1, 4 a.m.: Check in, in the emergency unit

• Quickly transferred into the Intensive Care Unit:

1. Suspicion of acute encephalitis

(Clinical status: Hyperleucoytosis 30 G/l; Procalcitonin 62 mg/l)

2. Sudden pulseless electrical activity , with wide QRS at ECG, necessitating prolonged cardiopulmonary resuscitation and repeated glucose administration

3. Return to sinusal tachycardia

3

Case report

He then developed:

1. Rhabdomyolysis (CK 161’000 U/l)

2. Elevated liver enzymes (ASAT 2800 U/l, ALAT 500 U/l) with a CT Scan consistent with steatosic hepatomegaly

3. Acute anuric renal failure (P-Creatinin 500 µmol/l) requiring renal replacement therapy

Screening for intoxicationEthanol

Digoxine

Salicylate

Negative

??? Hypoglycemia, hyperammonemia, encephalopathy,

QRS widening, rhabdomyolysis, metabolic acidosis ???

-Could this be an

internal intoxication

(IEM) ?

⇒ Question adressed

to the IEM network

on Day 2 of

hospitalization

4

Analyzing the results with the IEM networkGazometry:

Urine Stix:

Blood ammonium:

Parameter Normal range Day 1, 10h30 Day 1, 14h00Color Yellow RedProt. Neg - traces g/l 0.3 1.0Ketones Traces Traces

Parameter Normal range Day 1, 13h45 Day 2, 9h30NH4 <50 umol/l 284 40

Parameter Normal range Day 1, 9h19 Day 1, 9h42 Day 1, 9 h51Arterial Glc 4.2 - 6.1 mM 2.9 2.2 8.9pH 7.35 - 7.45 7.275 7.185 7.244pCO2 35 - 45 mmHg 43.3 54 42.6Bic 22 - 26 mmHg 19.5 19.6 17.8Lactate 0.63 - 2.44 mM 5.7 6.2 5.7K 3.5 - 4.6 mM 6.9 6.5 6.5

Lipolyse

Corps cétoniques

Hypoglycémie

Système carnitine

Acétyl-CoA

Corps cétoniques

ß ß -- o x y d a t i o no x y d a t i o n

MitochondrieMitochondrie

Glucose Acyl-carnitinesSangSang

AcidesOrganiques

CorpsCétoniques

UrineUrine

CO-CarnitinesAcyl-Carnitines

CO-SCoAAcyl-CoA

CH3CO-SCoA

CarnitineCoA

Acides gras libresCOOH

ß-oxydation defects

Carnitine libre

Acyl-carnitines

AcidesOrganiques

5

Cycle de l’urée; Ammoniaque

Selective screening in emergency

•Organic Acids in urine (GC-MS)

•Acylcarnitines in plasma (TMS)

•Amino acids in plasma (HPLC)

IEM laboratory

6

Acylcarn. Norm. 15.03 17.03C0 5.6-20.9 20.36 2.47C6 0.02-0.16 3.35 0.11C8 0.02-0.8 44.66 0.54C10:1 0.03-0.46 3.30 0.19C10 0.03-0.9 3.13 0.09

Day 1, during metabolic crisis Day 3, after hemodialysis

Case report: Acylcarnitine profile in plasma

Case report:

•Diagnosis, day 3 : Medium Chain Acyl-CoA Dehydrogenase Deficiency (MCADD)

•Genetic confirmation: Homozygous for the most common mutation (A985G)

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MCADD

• Most frequent inborn error of fatty acidoxidation metabolism (1:10.000 live births)

•Usually symptomatic in early life - knowncause of sudden infant death syndrome

Test included in the newborn screening (in CH) since 2005 only

∼ 80’000 live births/year in CH

⇒ 4 – 90 y: > 600 unscreened in CH

Catamnesis

Month 1 - hospitalization:

renal replacement therapy

Month 2: discharged from hospital

Month 3: back to work (50%)

Month 4: normal cardiac, hepatic and renal functions

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Leçons de ce cas pour les EIM:• EIM, Héréditaire et non toujours congénital.• Maladies individuellement rares: y penser.• Bilan biologique de base comprenant

notamment:Glucose, Gazométrie, Lactate, Ammoniaque, Corps cétoniques urinaires.

• Prélèvements concomitants, durant la crise.• Conserver un prélèvement de plasma et d’urine

du moment de la crise (-20°C).

Erreur innée du métabolisme

Garrod en 1909(Alcaptonurie), crée le terme de EIM:« inaptitude à dégrader le cycle benzène de l’acide homogentisique du fait d’un déficit enzymatique »

Homogentisate

Maleylacétoacétate

Homogemtisic acid oxydase (1958)

Benzoquinone acétate

Polymérisation

Pigment ochronotique de l’alcaptonurie

9

Le « pas » d’homéostasie

Phe

Tyr

Enzyme (PAH)& cofacteur (BH4)

Hydroxylation de la phénylalanineEnzyme (hépatique) la phénylalanine hydroxylase catalyse l’hydroxylation de la Phe en Tyr en utilisant un cofacteur, le BH4.

Le « pas » d’homéostasie II

http://www.bh4.org/biodefimages/Fig_bh4biox.gif

Phe

Tyr

Enzyme (PAH)

& cofacteur BH4)

10

Métabolisme intermédiaire

Ensemble de réactions couplées par un intermédiaire, produit d’une réaction et substrat d’une autre.

Acides AminésGlucidesLipidesPurines/PyrimidinesHème,…

X

Y

Z

Individualité Chimique; Métabolisme et Homéostasie

Peau

Poumon

Rein

IntestinsLIC

LEC

11

Individualité Chimique; Métabolisme et Homéostasie; Avant et après la vie foetale

Peau

Poumon

Rein

IntestinsLIC

LEC

Phe

Tyr

Enzyme (PAH)& cofacteur BH4)

Phénylcétonurie:Autosomale récessive caractérisée par un déficit de l’enzyme (hépatique) phénylalanine hydroxylase qui catalyse l’hydroxylation de la Phe en Tyr en utilisant un cofacteur, le BH4.Plus de 490 différentes mutations du gène codant pour la PAH sont actuellement rapportées. Les mutations conduisent à une variété de phénotypes cliniques et biochimiques avec différents degrés de gravité.Certaineas mutations de la PAH répondent bien à un apport de BH4Certains déficit de la biosynthèse ou de la régénération du BH4 sont également décrits.

Kim SW et al. Clin Chem Acta 365 (2006) 279-287

Gènes – Enzymes – Cofacteurs -Métabolites

Mise en évidence biologique de la lésion biochimique

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Maladies métaboliques héréditaires

Fréquence des maladies métaboliques: 1:4’000 naissances

Maladies du cycle de l’urée (6 gènes): 1 : 8’000Phénylcétonurie 1 : 12’000Porphyrie aiguë intermittente 1: 15’000MCAD (Medium Chain acylCoA dh def.) 1: 10 à 20’000Déficience en transporteur de créatine 1 : 14’000 => 1 : 50’000Maladie de Fabry 1: 40’000Galactosémie 1 : 47’000Tyrosinémie hépatorénale <1: 100’000 Déficit en mévalonate kinase <1 : 100’000H yperglycinémie non-cétotique 1 : 200’000MSUD 1 : 200’000Tyrosinémie type 1 1 : 200’000Homocystinurie classique 1 : 344’000

Nombre de naissances approx. en suisse par année: 80’000

13

Maladies métaboliques héréditaires

> 500 maladies.

Maladies d’origine génétique (autosomal récessif).

Mutations touchent des gènes codant pour des enzymes impliquées dans le métabolisme cellulaire.

Héréditairen’est pas obligatoirement congénital;âge de présentation va de la naissance à l’âge adulte.

Très grande variabilité clinique dans la sévérité des symptômes et âge de présentation (substrat génétique, activité enzymatique résiduelle, facteurs environnementaux, …)

Erreurs innées du métabolisme I

Altération Synthèse ou catabolisme des molécules complexes

LysosomesPeroxisomesGlycosylationCholestérol (synthèse)

Ac. Billiairesa1-antitrypsine, …

Glycoformes des protéines Mucopolysaccharides / Oligosaccharides / …

VLCFAbiosynthèse Plasmalogènes, isoprénoïdes, cholestérol, ac. Billiaires…

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Erreurs innées du métabolisme IIIntoxication aiguë ou chronique par des petites molécules

AminoacidopathiesAciduries organiquesCycle de l’uréePorphyrines…

Intolérances Fructose / Galactose…

Erreurs innées du métabolisme III

Déficit production ou utilisation de l’énergie

Gluconéogénèse;ß-oxydation;Acidoses lactiques

Créatine…

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Erreurs innées du métabolismeTableaux cliniques

Altération Synthèse ou catabolisme des molécules complexes

LysosomesPeroxisomesCholestérol (synthèse) Ac. Billiairesa1-antitrypsine, CdT,…

Tableaux cliniques Symptômes permanents, progressifs, indépendants d’évènements intercurrents et non liés à l’alimentation

Intoxication aiguë ou chronique par petites molécules

AminoacidopathiesAciduries organiquesCycle de l’uréeIntolérances Fructose / Galactose

Intervalle libre

Perturbations récurrentes (intox aiguë) ou chroniques

Déficit production ou utilisation de l’énergie

Gluconéogénèse;ß-oxydation;Acidoses lactiques

Symptômes larges allant de l’intoxication au déficit énergétique.Hypoglycémie; HyperlactacidémieHypotonie; Myopathie / CardiomyopathieTroubles de la croissance, Retard mental…

Stratégie diagnostique CH

•Dépistage systématique

•Dépistage sélectif

•Réseaux: Accès aux spécialistes méd. et à un labo. expert

16

Dépistage systématique:

Dépistage néonatal;1 centre suisse.Kinderspital Zürich

Dépistage systématique, CH

Maladies et analyse Dépistés 2008 (Sur 79’736)

Dépistés 1965 -2008

Phénylcétonurie et autres hyperPhenylalaninémies(Phe, TMS)

15 401

Galactosémie: (Gal-1-uridyltransféàrase (GALT); galactose; Enzymatique)

1 79

Déficit en biotinidase (Biotinidase, Wolf) 0 21

Déficit en MCAD (depuis 2005), Acylcarnitines(TMS)

9 31

Hypothyréose primaire (TSH, DELFIA) 21 687

Hyperplasie congénitale des surrénales (17-OH-progestérone) 8 151

17

Dépistage systématique: confirmation

Phe Répéter ou dosage quantitatifs d’acides aminés (en urgence si > 400 µmol/l).Urine + sang pour dosage ptérines (pour BH4).Selon taux Phe: test de sensibilité à la BH4

Galactosémie Contact médical; selon clinique, stop galactose; dosage enzymatique sanguin (buvard) et Gal-1-P (1 ml sang hépariné); recherche de sucres réducteurs dans l’urine (Clinitest®)

Déficit en biotinidase

Répéter screening; acides organiques dans l’urine.Si positif: dosage enzymatique spécifique (3 ml sang hépariné)

Déficit en MCAD

Confirmation du diagnostic par analyse indépendante acylcarnitines ; analyse des mutations génétiques;

Prise en charge des résultats positifs dans centres spécialisés. Réseau métabolique de la suisse occidentale et italienne (RMSOI); Head : Dr L. Bonafé, Pédiatrie Moléculaire, CHUV

Acides Aminés libres

Dépistage sélectifs des amino-acidopathies, -aciduriesPlasma et Urine, rarement LCR*, *Si LCR, plasma concomitant

Suivi du traitement (Plasma)

18

Acides Aminés libres

Phosphosérine; Taurine; Phosphoéthanolamine; Ac.Aspartique; Hydroxyproline; Thréonine; Sérine; Asparagine; Ac.Glutamique; Glutamine; Sarcosine; Ac.α-aminoadipique; Proline; Glycine; Citrulline; Ac.-α-Aminobutyrique; Valine; Cystine; Methionine; Cystathionine; Isoleucine; Leucine; Tyrosine; Phénylalanine; β-Alanine; Ac. β-Aminoisobutyrique; Ac.γ -Aminobutyrique; Homocystine; Ethanolamine; DL-Hydroxylysine; Ornithine; Lysine; 1-CH3-Histidine; Histidine; 3-CH3-Histidine; Ansérine; Carnosine; Arginine; Cystéine-Homocystéine-disulfide; S-Sulfocystéine ; Homocarnosine, S-Sulfocystéine; Cystine; Saccharopine; Ac.pipécolique; Homocitrulline; Allo-Isoleucine; Cystéine-Homocystéine-disulfide; Homocystine; Tryptophane;

Méthode AA, plasmaAnalyseur AA; Colonne échange d’ions; Réaction post colonne avec ninhydrine; CV < 3 à 4 %

19

Ac. OrganiquesR C

H

H

COO-

Acides Organiques

Acides Aminés

Acides gras

Neurotransmetteurs

Micro-organismesXénobiotiques

Cholestérol

Purines / Pyrimidines

Hydrates de carbone

Dépistage sélectif

Ac. OrganiquesR C

H

H

COO-

Les AOs accumulés dans le plasma sont excrétésen grande quantité dans les urines, car la plupart sont très peu réabsorbés au niveau tubulaire.

Le système de sécrétion rénal des anions organiques est capable d’éliminer une vaste gamme de composants dont la seule caractéristique moléculaire est d’avoir un squelette carboné et une charge appropriée.

20

Acides Organiques200 à 250 AO urinairesmétabolites principaux d’environ toutes les voies métaboliques. Comprend les classes de composés suivants: Acides gras; dicarboyliques; phénoliques; tricarboxyliques polyhydroxylés; conjugués aux AA; AA acétylés, …Lactate; 2-Hydroxyisobutyrate; Glycolate, 2-Hydroxybutyrate; 3-Hydroxypropionate; Pyruvate; 3-Hydroxybutyrate; 3-Hydroxyisobutyrate; 2-Hydroxyisovalérate; 3-Hydroxyisovalérate; Méthylmalonate; 4-Hydroxybutyrate; Glycérol; Ethylmalonate; Succinate; Méthylsuccinate; Glycérate; Uracile; Fumarate; Propionylglycine; Isobutyrylglycine; Glutarate; 3-Méthylglutarate; 2-Méthylbutyrylglycine, Malate; Adipate; Erythronate; Tiglylglycine; Threonate; 2-Hydroxyglutarate; 3-Hydroxyglutarate; Pimélate; 3-Hydroxy-3-Méthylglutarate; p-Hydroxyphénylacétate; N-Acétylaspartate; Furoylglycine; 2-Hydroxyadipate; Octènedioate I; 3-Hydroxyadipate; Subérate; Tricarballylate; Quinolinate; cis-Aconitate; Homovanillate; Azélate; Citrate; Isocitrate; 3-Hydroxyphénylhydracrylate, Vanillylmandelate, p-Hydroxy-phényllactate, p-Hydroxyphénylpyruvate, 4-Crésol; MéthylglutaconateI+II; 2-Oxoglutarate I+II; Méthylcitrate I+II; 3-Hydroxy2Méthylbutyrate I+II; …

Artéfacts:

Nutrition (adipate, furoate, tartarate, N-Acétyltyrosine, N-Acétaltyrosine, MCT :Sebacate – subérate –adipate – 7-OH-octanoate, Nutramigen: 5-oxoproline)

Médicaments: Valproate, Ethosuximide, Primidone (nbrx métabolites); salicylate (2-hydroxyhippurate), … Ethylène glycole

Contamination bactérienne: 3-Ohpropionate; 4-OH-phénylacétate; D-Lactate; 2-oxoglutarate; Phénylpropionylglycine; Succinate; Uracile…

Ac. Organiques, Analytique

R C

H

H

COO-

•Par GC-MS

•Préparation échantillon +++

•Coeff. Variation suffisant si < 20%

•Profils urinaires (pattern)

21

Carnitine / Acyl-Carnitines

R= H: carnitine libreR = CH3CO : acetylcarnitine (C2)

R = CH3 – CH2CO: propionylcarnitine (C3)… C4, …C16, C18, C18OH,…

CH3

CH3

CH3

N+ CH2-CH-CH2-COO-

R-OCarnitine totale – Carnitine

libre – Acyl-Carnitine

LibreAcyl

Profil des acylcarnitines

AC_060405_08 #19-127 RT: 0.17-1.13 AV: 109 NL: 1.37E6T: + c sid=-10.00 Full pr 85.10@-30.00[ 200.00-550.00]

200 250 300 350 400 450 500 550m/z

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

26

28

30

32

34

36

38

40

42

44

46

48

50

52

Rel

ativ

e A

bund

ance

260.18 426.31218.20

227.27

428.33263.19

459.36

311.26 456.41237.11375.27 454.35319.15 403.28

437.36 482.37347.26291.15

487.34400.27350.05

277.15 398.28320.90372.22

480.30338.27 370.22 414.23388 .11 514.36 542.35

C0 C2

C3 C4

C14:1

C14

C18:1C16:1

*

*

**

* **

* * *

*

*

C14:2

VLCAD

22

Méthode Acylcarnitines, SCAD

Méthode Acylcarnitines, GA I

23

Conclusions

Présentation spécifique

Présentation non spécifique

Dépistage systématique

Contrôles

Dépistage sélectif

Tests sélectifs: Métabolites; Enzymes; Gènes

Crise métabolique

Symptômes (neurologiques)progressifs

Investigations initiales

ConclusionsAnalyses: crise métabolique

FSC, Glucose, Electrolytes, Gazométrie, Créatinine, Urée, Urate, Prot. Tot., Bilirubine tot., ASAT, ALAT, g-GT, PAL, (Cholestérol, Triglycérides)

Lactate, Ammoniaque, Carnitines, Acides Aminés, Profil des Acylcarnitines

Urines: Couleur / Odeur; Bandelettes urinaires (corps cétoniques), Acides Aminés, Acides Organiques.

Conserver prélèvement plasma / sérum pour (hormones) Acides Aminés, acylcarnitines et carte « Guthrie».Conserver urines pour Acides organiques ou autres investigations.Conserver LCR si ponction lombaire effectuée.

24

Service de pédiatrie Laboratoire Central de Chimie Clinique

Division de Pédiatrie Moléculaire

Kit hypoglycémies Ces kits se trouvent aux urgences de l’HEL, aux SIPI, aux SC et étage de pédiatrie. Des kits en réserve sont prêts au LCC (BH18) L'investigation biochimique d'une hypoglycémie devrait comprendre, lors d'un épisode aigu, les analyses suivantes sur prélèvements concomitants:

Analyses Prélèvements Vol Min. de Sang

SANG Gazométrie

A faire sur place

Na, K, Cl Acides aminés Corps cétoniques semi-quantitatif (3-hydroxybutyrate) Acyl carnitines

1 monovette Orange (Hép. de Li) de 2.7 ml pleine.

Apporter immédiatement le prélèvement au laboratoire

2.7 ml

Ammoniac 1 tube EDTA-K ("tube à formule") Prélever sans garrot.

Apporter au laboratoire dans de la glace

0.5 ml

Glucose, Lactate 1 microvette fluorure de sodium

0.3 ml

Acides Gras Libres (NEFA) Dosage de GH, cortisol et insuline. Réserve de sérum pour dosages ultérieurs éventuels (peptide C, glucagon)

Au minimum 1 monovette Blanche (Sérum) 2.7 ml. Apporter au laboratoire dans de la glace. Après le dosage des acides gras libres, le sérum restant sera envoyé au labo d’ endocrinologie pour les analyses hormonales

2.7 ml

URINE (portion) Acides Organiques Spot Urinaire (min 2 ml)

Apporter au laboratoire dans de la glace

Après utilisation du kit, renvoyer cette feuille à C. Roux (LCC - CHUV, BH 18) pour demande de remplacement du kit. Pour un remplacement du Kit en urgence, appeler le bip 744172 durant les heures ouvrables. Veuillez me faire parvenir un Kit pour Hypoglycémies: Nom:................................................. Adresse:..................................................... Le 16.02.2010 PD Dr L. Bonafé, Pédiatrie Moléculaire (43483)

Dr O. Boulat, LCC (44150), C. Roux, LCC (44137)

LCR pour maladies neuro-métaboliquesAprès analyses de base, dépistage métabolique, tests de charges…

Anaylses usuelles LCR: Glu (et rapport au plasma), Prt, …

Lactate/Pyruvate chez tous.

Acides Aminés

Neurotransmetteurs

Acides Organiques (sont exceptionnellement élevés dans LCR sans l’être dans les urines).

Hoffmann GF et coll, Neuropediatrics 29 ,1998

25

Erreurs innées du métabolisme; Liste des analyses Utilisée parPMO – LCC - CHUV

Examen Indication Quantité Conditions pré-analytiquesAcides amines (sang)

Aminoacidopathies, aciduries organiques

Sang héparinémin. 0.9 ml.

À jeun. Pour les nouveau-nés: juste avant un repas. Si AEDC: arrêter 3h avant ou spécifier “pendant AEDC sur le bon

Acides aminés spécifiques (sang)

Contrôle dans Phénylcétonurie, Tyrosinémie (spécifier Phe/Tyr sur le bon)

Min. 0.3 ml, sang hépariné.

Comme pour les acides aminés complets

Acides aminés (urines)

Aminoacidopathies, aciduries organiques, tubulopathie

Min. 1 ml d’urine En même temps que les acides aminés sanguins. Si dépistage seulement urinaire : urines du matin à jeun préférées

Acides gras libres (sang)

Bilan d’hypoglycémie, trouble de l’oxydation des acides gras

Min. 0.3 ml de sang natif .

À jeun, spécifier la durée du jeûne. Lors d’hypoglycémie, même si pas à jeun.Congeler sérum, -20°C.

Acides gras à très longue chaîne (VLCFA) (sang)

Dépistage maladies peroxisomales

Sang hépariné , min. 1 ml

Préférable à jeun (doit être centrifugé dans l’heure qui suit le prélèvement).Congeler sérum, -20°C.

26

Examen Indication Quantité Conditions pré-analytiques

Acides organiques (urines)

Aciduries organiques, troubles de l’oxydation des acides gras, mitochondriopathies

10 ml d’urine, min. 3 ml

Préférable 1ère ou 2ème miction du matin. Si « crises » métaboliques : prélever pendant phase aiguë.Congeler Urine: -20°C

Acylcarnitines (sang)

Aciduries organiques, troubles de l’oxydation des acides gras,

0.3 ml sang héparinée (veineux ou capillaire) ; possible aussi sur sang complet (carte Guthrie).

Si patient substitué en carnitine, prélever avant la prise du médicament.Congeler plasma; -20°C.

CDG (sang) Congenital disorders of glycosylation

Min. 0.3 ml de sang natif ou hépariné .

Pas d’influence du jeûne.

Clinitest (urine) fournisseur :

Max Baldinger AG

Bruggacherstrasse 8

8117 Fällanden

Tel : 044.806.80.80

Fax : 044.806.80.85

Galactosémie, fructosémie (substances réductrices)

4 gouttes d’urine Test rapide;Faire sur urine fraîche.

Examen Indication Quantité Conditions pré-analytiques

Corps cétoniques (sang) : béta-hydroxybutyrate et acétoacétate

Mitochondriopathies. Suivi régime cétogène

Tube spécial contenant 1 ml de PCA 0.6N ; Y introduire 1 ml précis de sang.

Agiter le tube après avoir ajoute le ml de sang au réactif dans le tube. Mettre immédiatement dans la glace et amener au labo dans les 15 minutes.

Corps cétoniques (sang) : béta-hydroxybutyrate

Bilan d’hypoglycémie, trouble de l’oxydation des acides gras et de la cétogénèse/cétolyse. Suivi régime cétogène

0.5 ml sang hépariné À jeun ou post-prandial, selon indication clinique.Congeler plasma.

Créatine (sang) Guanidinoacétate (sang)

Déficit de synthèse de la créatine

1 monovette héparinée (orange), min. 0.5 ml

Pas d’influence du jeûne.Congeler plasma; -20 C

Créatine (urine) Guanidinoacétate (urine)Rapport créatine/créatinine (urine)

Déficit de synthèse et de transport de la créatine

5 ml d’urine, min. 0.5 ml.

Pas d’influence du jeûne. (Apport de créatine ?).Congeler urine; -20°C.

27

Examen Indication Quantité Conditions pré-analytiques

7-déhydrocholestérol et 8-déhydrocholestérol (sang)

Syndrome de Smith-Lemli-Opitz ; autres troubles de la synthèse du cholestérol

1 monovette de sérum (blanche) ou héparinée (orange), min. 0.6 ml (2 microvettes blanches ou oranges)

Amener au labo dans les 15 minutes (doit être centrifugé et congelé rapidement).Congeler sérum ou plasma; -20°C.

Galactose-1-phosphate (sang)

Galactosémie 1 monovette héparinée (orange)

À jeun. Pour les nouveau-nés: juste avant un repas. Si AEDC: arrêter 3h avant ou spécifier “pendant AEDC sur le bon.Envoyer l’échantillon à t° ambiante.

Glycosaminoglycanes (GAGs ou mucopolysaccharides) (urine)

Mucopolysaccharidoses

Min 5 ml d’urine Pas d’influence du jeûne.Congeler uriner; -20°C.

Homocystéine totale (sang)

Homocystinurie. Déficit en vitamine B12, troubles du métabolisme de la B12. Bilan lors de thrombose

1 monovette EDTA (rouge), min. 1 ml

À jeun. Mettre dans la glace et amener au labo dans les 15 minutes pour séparation plasma et éléments figurés.Une fois plasma séparé, stable à t°ambiante.

Examen Indication Quantité Conditions pré-analytiques

L-Lactate (sang) Tout trouble du métabolisme intermédiaire, mitochondriopathies

1 monovette jaune, min. 0.3 ml (1 microvette jaune)

À jeun et/ou post-prandiale selon indication clinique

Lactate, pyruvate (sang)

Mitochondriopathies, troubles du cycle de Krebs et de la néoglucogenèse. Bilan d’hypoglycémie

Tube spécial « lactate/pyruvate », 1 ml précis de sang*

Agiter le tube après avoir ajoute le ml de sang au réactif dans le tube. Mettre immédiatement dans la glace et amener au labo dans les 15 minutes.

Méthylmalonate (sang)

Acidémie méthylmalonique. Déficit en vitamine B12, troubles du métabolisme de la B12.

Sang hépariné , min. 1 ml.

Pas d’influence du jeûne.Congeler plasma, -20°C.

Oligosaccharides (urine)

Oligosaccharidoses Min 5 ml d’urine Pas d’influence du jeûne.

28

Examen Indication Quantité Conditions pré-analytiques

Porphyrines (urines) et précurseurs (ALA et PBG)

Porphyries Min 5 ml d’urine Urine à l’abris de la lumière ! Si « crises » métaboliques : prélever pendant phase aiguë. Selon indication clinique une récolte urine de 24h peut être indiquée.Congeler urine; -20°C.

Porphyrines (selles)

Porphyries 1 échantillon de selles

Conserver à l’abri de la lumière !Conserver à 4°C.

Ptérines (urines) Dépistage des déficits en BH4 (formes atypiques de phénylcétonurie)

Min 3 ml d’urine Urine à l’abri de la lumière !Congeler; -20°C.

Purines et pyrimidines (urines)

Maladies des purines et pyrimidines

Min 1 ml d’urine Pas d’influence du jeûne. Bien homogénéiser l’ensemble de la récolte d’urine avant de prélever l’échantillon dans la monovette.Congeler -80°C avant envoi sur glace sèche.

Sulfites (urine) Déficit en sulfite oxidase ou Molibdenum cofactor (convulsions néonatales)

Quelques gouttes d’urine

Test rapide; faire sur urine fraîche

Examen (LCR) Indication Quantité Conditions pré-analyt iques

Lactate, glucose Mitochondriopathies, troubles du transport cérébral du glucose

1-2 microvettes jaunes (fluorure de sodium)

À jeun. Prise de sang pour glucose en même temps si indiqué.

Acides aminés Aminoacidopathies, aciduries organiques cérébrales

1-2 microvettes héparinée (orange)

Préférable à jeun ; prélèvement de sang pour acides aminés concomitant.

Acides organiques Aciduries organiques cérébrales, mitochondriopathies

1-2 microvettes blanches

--

Neurotransmetteurs Déficits des monoamines et folates

Prélever le 2ème ml de LCR dans cryotubes

Prélèvement entre 9h et 11h (rytme circadien) ; congeler immédiatement l’échantillon dans l’azote liquide*

Créatine, guanidinoacétate

Déficits de synthèse de la créatine

1 microvette blanche --

Protéines Toutes inflammations cérébrales ; maladie de Krabbe

1-2 microvettes blanches

--

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Clinitest; substances réductrices

Max Baldinger AG

Bruggacherstrasse 8

8117 Fällanden

Composé Pathologie / source

Galactose Galactosémie; Déf. En galactokinase; Fanconi-Bickel; Maladie de Wilson

Fructose Intolérance au fructose; Frustosurie essentielle

P-hydroxyphénylpyruvate

Tyrosinémies type I et II

Acide Homogentisique Alcaptonurie

Xylose Pentosurie

Glucose Diabète; Syndorme de Fanconi

Oxalate Hyperoxalurie

Xénobiotiques Salicylates; Ascorbate

Urate Hyeruricosurie

Indication:

Confirmation présence de Galactose suite à test de dépistage positif pour la galacotsémie

Test Sulfites

Indications: suspicion de déficit en sulfite oxydase vs Déficit du cofacteur Molybdène

Stix urinaire: Merckoquant® 10013

Urine fraîche , car sulfite rapidement détruit par oxydation à t° ambiante.

Faux négatifs: Dépistage seulement. Confirmation par S-Sulfocystéine (AA)

Faux positifs:

2-mercaptoethanesulfonate; Cystéine; Homocystéine; ß-mercaptoéthylamine; N-Acétyl-L-Cystéine