DIAGNOSTICO DE DIAGNOSTICO DE INFECCIONES INFECCIONES BACTERIANASBACTERIANAS

Seminario 17 y 18 de febrero Seminario 17 y 18 de febrero 20112011

Dra María Eugenia TorresDra María Eugenia TorresDepartamento de Laboratorio Departamento de Laboratorio

ClínicoClínico

Etapa pre analiticaEtapa pre analitica Solicitud medica Solicitud medica Datos del paciente y ubicaciónDatos del paciente y ubicación Datos clinicosDatos clinicos Antimicrobianos previosAntimicrobianos previos Forma de obtención de la muestraForma de obtención de la muestra Estudios solicitados (germenes Estudios solicitados (germenes

específicos)específicos) Profesional responsableProfesional responsable

Consideraciones preanaliticasConsideraciones preanaliticas Muestra Muestra ContenedorContenedor

NONO

NoNo

SI: tubo estéril, seco, tapa de SI: tubo estéril, seco, tapa de rosca, transparente, cerrado, rosca, transparente, cerrado,

rotulado.rotulado.

Volumen: 1 mL, concentración Volumen: 1 mL, concentración DirectoDirecto (Gram, Azul de metileno) (Gram, Azul de metileno) Cultivo en atmósfera con CO2Cultivo en atmósfera con CO2: : Medios sólidos (agar sangre ovina Medios sólidos (agar sangre ovina

5%, A.Chocolate, medios líquidos 5%, A.Chocolate, medios líquidos (caldos) (caldos)

Detección de antígenos Detección de antígenos capsulares capsulares

Estudios de sensiblidad a Estudios de sensiblidad a antimicrobianosantimicrobianos

Etapa preanaliticaEtapa preanalitica Tiempo de procesamiento inicialTiempo de procesamiento inicialPreferentemente coordinado con el Preferentemente coordinado con el

LaboratorioLaboratorio Temperatura de conservación: Temperatura de conservación:

Temperatura ambiente (h 2 horas)Temperatura ambiente (h 2 horas) Medios de transporte (p.ej agar Medios de transporte (p.ej agar

chocolate en tubo)chocolate en tubo) Aseguramiento de la calidad: se Aseguramiento de la calidad: se

aplican criterios mínimos de rechazo aplican criterios mínimos de rechazo que aseguran la calidad del estudio, que aseguran la calidad del estudio, de acuerdo a manuales de de acuerdo a manuales de procedimientos del Laboratorio.procedimientos del Laboratorio.

Registro de no conformidades y Registro de no conformidades y contacto con el profesional contacto con el profesional responsable .responsable .

Examen microscópico Examen microscópico Necesidad de profesional entrenado y Necesidad de profesional entrenado y

disponible!disponible! Buena técnica y colorantes de calidadBuena técnica y colorantes de calidad Barato y rápido, no es confirmatorioBarato y rápido, no es confirmatorio

Sensibilidad 88% en infeccion Sensibilidad 88% en infeccion bacteriana y fungicabacteriana y fungica

81% infecciones 81% infecciones asociadas a shuntsasociadas a shunts

Especificidad > 90%Especificidad > 90% Relacionados con ATB previos, el Relacionados con ATB previos, el

volumen examinado, concentracion y volumen examinado, concentracion y tipo de microorganismos en el LCRtipo de microorganismos en el LCR

Dunbar S, J Dunbar S, J

Clin Microbiol, 1998Clin Microbiol, 1998 Gray L, Clin Gray L, Clin

Microbiol Rev, 1992Microbiol Rev, 1992

Detección de antígenos capsulares Detección de antígenos capsulares solublessolubles

CIECIE : En desuso, sensiblidad 10 : En desuso, sensiblidad 10 veces menorveces menor

Látex o Co ALátex o Co A: Disponible para : Disponible para S.pneumoniaeS.pneumoniae, , H.influenzaeH.influenzae tipo b, tipo b, N.meningitidisN.meningitidis (A,B,C, ), EBHB, E.coli (A,B,C, ), EBHB, E.coli K1, dependiendo de marca comercialK1, dependiendo de marca comercial

InmunocromatograficaInmunocromatografica para para S.pneumoniaeS.pneumoniae, en LCR u orina. , en LCR u orina. (Binax Now MR)(Binax Now MR)

Se desaconseja uso en LCR normalesSe desaconseja uso en LCR normales Se cuestiona el impacto, excepto en Se cuestiona el impacto, excepto en

pacientes tratados previamente con pacientes tratados previamente con antibióticos.antibióticos.

Cultivos en medios solidosCultivos en medios solidos Se priorizan cuando el volumen de la Se priorizan cuando el volumen de la

muestra es reducidomuestra es reducido Se debe contactar al profesional a Se debe contactar al profesional a

cargo de la atención del paciente en cargo de la atención del paciente en caso de que se soliciten multiples caso de que se soliciten multiples investigacionesinvestigaciones

Medios de cultivo liquidosMedios de cultivo liquidos Uso controversialUso controversial Se desaconseja en MEAS Se desaconseja en MEAS

comunitarias, aumentan costos y no comunitarias, aumentan costos y no mejoran el rendimiento diagnósticomejoran el rendimiento diagnóstico

Utilidad en pacientes portadores de Utilidad en pacientes portadores de derivaciones ventricularesderivaciones ventriculares

Cultivos de respaldoCultivos de respaldo Conservacion del LCR restante en Conservacion del LCR restante en

incubadora.incubadora.

Empleada para diversos agentes Empleada para diversos agentes (N.meningitidis)(N.meningitidis)

Requiere cierta concentracion de Requiere cierta concentracion de bacterias en LCR y se ve afectada bacterias en LCR y se ve afectada por ATB previospor ATB previos

Util para determinar la carga Util para determinar la carga microbiana (pronóstico) y microbiana (pronóstico) y epidemiología molecularepidemiología molecular

Posibilidad de contaminacion intra Posibilidad de contaminacion intra laboratorial, se prefiere extraccion laboratorial, se prefiere extraccion automatizada de AANN y PCR tiempo automatizada de AANN y PCR tiempo realreal

Biologia Molecular: Biologia Molecular: Amplificacion AANNAmplificacion AANN

Mycobacterium tuberculosisMycobacterium tuberculosis Directo con tecnica de Zhiel Neelsen Directo con tecnica de Zhiel Neelsen

o fluorescencia: o fluorescencia: Sensiblidad 10%Sensiblidad 10% Cultivos en medios sólidosCultivos en medios sólidos Se prefieren cultivos en Se prefieren cultivos en medios medios

líquidoslíquidos, más rápidos . (S = 25 , más rápidos . (S = 25 -79%) y -79%) y concentraciónconcentración de la de la muestramuestra

Técnicas moleculares, de uso no Técnicas moleculares, de uso no validado para infecciones del SNC, validado para infecciones del SNC, potencialmente útiles para el estudio potencialmente útiles para el estudio de la resistencia a fármacos y de la resistencia a fármacos y epidemiologia molecularepidemiologia molecular

Contaminación accidental de técnicas Contaminación accidental de técnicas caseras.caseras.

Listeria monocytogenesListeria monocytogenes Poblaciones de riesgoPoblaciones de riesgo Bacilo Gram positivo aerobio, no Bacilo Gram positivo aerobio, no

exigente, resistente a condiciones exigente, resistente a condiciones adversas (refrigeración), sobrevida adversas (refrigeración), sobrevida intracelularintracelular

Zoonosis, trasmitida por alimentos o Zoonosis, trasmitida por alimentos o verticalvertical

Resistencia natural a cefalosporinas.Resistencia natural a cefalosporinas. En pacientes con encefalitis perisitiría En pacientes con encefalitis perisitiría

en focos infecciosos, no accesibles en focos infecciosos, no accesibles mediante LCRmediante LCR

Hof H, Management of Listeriosis Clin Microb Hof H, Management of Listeriosis Clin Microb Rev 1997Rev 1997

Streptococcus suisStreptococcus suis Grupo viridans Grupo viridans Patógeno de cerdos, zoonosis que Patógeno de cerdos, zoonosis que

afecta a personas en contacto con afecta a personas en contacto con los mismoslos mismos

Brotes en paises asiáticos, afecta Brotes en paises asiáticos, afecta sobre todo a hombressobre todo a hombres

Necesidad de reconocer el germen , Necesidad de reconocer el germen , puede ser erróneamente considerado puede ser erróneamente considerado contaminantecontaminante

Casos reportados en nuestro medioCasos reportados en nuestro medio

Sensibilidad a antimicrobianosSensibilidad a antimicrobianos