Uf~~VERS~DAD DE GUADALAJARA

fACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y Z001~NIA

Determinación de Niveles de Inmunoglobulinas en Suero Sanguíneo de Becerros a Diferentes Horas Después del

Nacimiento

TES~S PROFESiONAL OUE PARA OBTENER EL TITULO DE

MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA

R E S E N T

Fernando Eduardo Hidalgo Vega

&M~WAlAJA~A. JALISCO. 1911

O E O I C A T O R I A S

A MIS PADRES

EDUARDO Y EMMA.

CUYO AMOR,ASISTENCIA,DEVOCION,ESTIMULO Y CONFIANZA SON TALES QUE NO TENGO PA LABRAS PARA EXPRESARLES LO MUCHO QUE

LOS QUIERO.

A MIS HERMANOS ROCIO BERNAL GRETHEL

LEONARDO

CON INMENSO CARIÑO.

Y CON ELLOS A MI FAMILIA.

Al M,V.Z, JAVIER RIVERA HERNANDEZ

CATEDRATICO QUE BRINDO SU APOYO DECIDIDO EN LA ASESORIA· DE ESTA TESIS PROFESIONAL, POR SU GRAN CALIDAD HUMANA, CON INFINITA AQ.. MIRACION Y AFECTO.

A LA Q.F.B. ·ROSA ELENA VALDEZ MIRAMONTES,

POR SU VALIOSA ~ DESINTERESADA COLABORACION.

CON RESPETO AL H. JURADO:

M.V.Z. AQUILES MERLOS CASTAÑEDA. M.V.Z. ALFONSO ORTIZ PEREZ. M.V.Z. CARLOS B. FIGUEROA-DURAN. M.V.Z. LEOPOLOO BASULTO RVIZ. M.V.Z. V. MANUEL GOMEZ LLANOS M.

A LA UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA •

. 1

A MtS PROfESORES:

CON SENTIMIENTO ETERNO POR SUS CUIDADOSAS ENSEÑANZAS Y ORIENTACIONES PARA LA LUCHA POR LA SUPERACION DE MI EXISTENCIA.

A NUESTRO PADRINO

M.V.Z. Msc. ABEL BUENROSTRO SILVA. VIII GENERACION 1971 - 19í'6.

A MIS COMPAREROS, AMIGOS Y AMIGAS

" Si a la orilla del Mar Encuentras Alguien

con Hambre, No le Regales un Pez; e~ senale a Pescar".

C O N T E N I D O

Página

DEDICATORIAS

CONTENIDO

INTRODUCCION

MATERIAL Y METODOS 4

RESULTADOS 'f 1

DISCUSION 14

CONCLUSIONES 18

RESUMEN 19

APENO ICES 20 ~

BIBLIOGRAFIA 24 'T

T

1 N T 'R 'O 'D 1fJ 'C 'C I '0 -'N

I N T R O D U C C I O N

En vista de la gran cru1tídad de becerros que mueren

por infecciones neonatales cada año en nuestro pa!s,espec!­

ficamente por diarreas infecciosas,y que segdn reportajes -

del Laboratorio de Patología Animal de Tlaquepaque,Jal.,~s­

tos están entre los 10 padecimientos de mayor incidencia en

los bovinos.(20),(39).

Tomando en consideración estos datos nacionales y -

teniendo en cuenta que el principal problema en naonatos es

la diarrea infecciosa,se cree que deficientes niveles de i~

munoglobulinas s~ricas en estos animales,sean la causa priB

cipal.

Dadas las actuales circunstancias por las que atra­

vieza.n las explotaciones ganaderas,no es posible,salvo gr~

des desembolsos monetarios,hacer las importaciones masivas

de reposiciones. Debe ahora ponerse cnfasis a las infeccio..

nes neonatales y tocante a prevención,ésto puede ser real--.

!Lente logrado.

La estimación del status inmunológico se puede uti­

lizar en la profiláxis de posibles afecciones neonatales.A­

demás se obtendrian datos suficientes a fin de lograr una -

mayor eficiencia en los procedimientos de mrulejo,que dadas

las actuales circunstancias zootécnicas,ayudarán sobremane­

ra-También se espera que cada estimación sirva como un de -

los métodos en la selección,de pies de cr!a.

Hoy d!a,la necesidad existente a todos los niveles

del campo pecuario obliga a obtener cr!as sanas hasta edad

productiva y de animales de producción comprobada.

2.

El trabajo aqu! presentado se enfoca a una serie de

tl5picos referentes al status inmunogénico de becerros recién

nacidos raza Holstein-Friesian,mediante el empleo de un mé­

todo nefelo:nétrico,a fin de determinar a partir del suero -

sanguineo,los niveles de gammaglobulinas existentes en las

primeras horas de vida.

Existe un per!odp crítico en el becerro recién nac1

do durante el cual, los mecanismos de defensa son hipoplás­

ticos. La ingestión deficiente o desordenada de calostro du

rante este p~r!odo contribuye hasta cierto punto a la altR

incidencia de infecciones,concurriendo en las cifras eleva­

das de morbilidad y mortalidad en los mismos;favorecido és­

to t&~bién por la delicadeza del epitelio intestinal y a la

incompleta actividad de las glándulas gástricas. (6)

Una marcada variabilidad en el nivel de Ig. pasiva.-.

mente adquiridas ha sido demostrada por Smith y otros (19b7)

y ~sto se presume sea el resultado de una variación en la­

ingestión de calostro.

Ha sido reportado por varios autores,que una gran­

proporción de becerros reciben poco o nada de calostro,y é~

to es una consecuencia de m~or suceptibilidad a las infec­

ciones post-natales. { 19), { 30), ( 35).,

l'ara hacer m:!ni.na la incidencia de hipogammaglobul1

nemia en becerros,se ha calculado que un becerro de 35 Kgs.

debe recibir como minimo 2 Kgs. de calostro entre las prim!

ras 5 horas después del nacimiento. ( 36) •

. Hace alrededor de 50 anos que el efecto protectivo

del calostro en becerros neonatales fue establecido.(l5)·

Muchos investigadores han demostrado la relA.cidn eB

tre la supervivencia de becerros y la ~ngestión de globuli­

nas. { 15).

Los resultados presentados en algunos trabajos mue~

tren un panorama de la importancia que juega la ingestión -

del calostro en el papel del desarrollo de la maduración i~

munol6gica de jóvenes animales y algunos puntos sobre el -­

tiempo óptimo y condiciones para la inmunización de los mi!

mos.(33).

Las inmunoglobulinas representan la historia ru1tig~

nica del animal.

Las proteinas inmunes son llamadas:IgG, IgA, e IgM.

Las G~~a-G globulinas contienen la mayoria de anti

cuerpos antibacteriales,antivirales y ant:ílt6xicos.Estlfu di­

vididas en dos sube las es, IgGl e IgGz •· La primera es la priB

cipal par.a la inmunización pasiva del becerro recién nacido,

la principal-en la secresidn láctea y la más abundante en~

la vaca. Klaus {1969) demostró que por lo menos el 85-90 % de las Ig. del suero sanguíneo y del suero calostral son de

esta clase.{l),(33),(43).

Las Gamma-A globulinas·contienen rutticuerpos antit~

xicos,aglutininas antibacteriales,isoaglutininas,ahtinucle~

res y sensibilizadores de piel.

Las Gamma..M globulinas contienen anticuerpos "natu­

rales" para bacterias Gram-negativa.s, isoanticuerpos grupo-­

sauguineo,factores reumatoides,antinucleares y otros.(l),-­

(31), (40).

---M A T E R I A l Y

ME TODOS

MATERIAL

Agua destilada.(3 litros)

10 Agujas hipodérmicas Nos.16 y 18.

16 Becerros,raza Holstein-Friesian .•

10 Bolsas plásticas.

Centrifuga. International Equipmente Co. M o de lo : H • N •

Espectrofotómetro. Coleman -Junior 11-A. Modelo 6 20/A.

20 Frascos tapón de hule,capacidad 10 ml.

lO ,Goteros.

Hielo refrigerante.

il1aquiuilla de razurar sencilla.

Matraz aforado a 1000 ml.

i'.1erckotest: Tris ( hidroximetil) aminometano Timol. Patrón de enturbiamiento de forraazalina

(Laboratorios Merck de México, S.A.)

mezcla Cróraica.(l litro).H2S04 + K2cr2D.r + Cr02.

10 Pipetas,capacidad 1 y lO ml.

Solución salina fisiológica.(3 litros).

Termo portát,íl

10 Tubos de ensaye,capacidad 5 y.lO ml.

10 Tubos de ensaye tapón baquelita,capacidad 10 ml.

M E T O D O 1 O G I A

Fue elegida para la investigación una explotacidn -

vacuna lechera que presentd caracteristicas generales com~

nes en este tipo de ganaderias,y localizada en el municipio

de Zapopffil.

Las cr:!as utilizadas,de la raza Holstein-~iesian -

se identificaron para efectos del horario de toma de las -­

muestras s a."lgu:!ne as, que fue el siguiente: 6 - 12 - 18 - 24

30 - 36 - 42 - 48 - 60 y 168 horas después de su nacimiento

Las muestras sanguineas se obtuvieron por puncidn -

yugular con agujas hipodérmicas calibre 16 6 18.Colectándo­

se 10 ml. cada vez en un frasco seco y mantenidas en un te.!:

mo con hielo. Al formarse el co.águlo,con un, gote:I'o,fue sep!!:

rado el suero y depositado en un tubo de ensaye tapón de b!!:

quelita,debidamente identificado.

Bn las muestras no se utilizó sustancia qu:!mica al­

guna,para su preservación.

Fue centrifu~o<riého suero a 5000 r.p.m. por 5 m!

nutos,y del sobremadante,con pipeta est~ril,fue tomada una

décima de mililitro para colocarla en un tubo de ensaye es­

téril al que se le agregaron 6 ml. de solución amortiguado­

ra de timol.

NUTA . ~La preparac~6n de la solución

tamponada de timol,se encuen­tra detallada en el Apéndice ~.

6.

ANALISIS DE LAS MUESTRAS.

Se dejaron reposar por 30 minutos,habiéndolas homo­

genisado antes y después de ese lápso.

Se vació el contenido de la mezcla (suero - sol.s-­

mortiguadora de timol) a un tubo especial para espectrofot~

metro y se procedió a ajust~x el mismo.

NOTA. La calibración y ajuste del espec­trofotómetro se detalla en el Apén

dice B.

Se dá el nombre de Transmitancia de una solución a

su .capacidad para transmitir la luz. La transmitancia de -­

una solución para la luz se determina usando un instrumento

llamado:Fotómetro.

El fundamento del método empleado es la ley de Beer

- Lambert, la cual afirma que la. cantidad de luz que fJtravie­

za un medio ·es inversamente proporcional a su concentración.

Una curva patrón fue trazada para el aparato corre~

pondiente mediante el empleo de Wl patrón de enturbiamiento

de formazalina y anotadas sus equiva,lencias a Unl.dades !llac-

1agan,segdn varias diluciones.hechas.

NúTA.1 --- os detalles de la elaboración de la Curva Patrón y sus Equivalencias co­rrespondiE!ntes a Unidades macLagan - , se encuentran en el Apéndice c.

Calibrado el espectrofot6metro,se procedió a inser­

tar el tubo especial con la solución problema en el portac~

betas para hacer la lectura de Transmitancia.

Desde la toma de la muestra sanguinea hasta su est~

dio nefelométrico ~o transcurrieron ocho horas. ,

QliiCJNA\ UE OlnUSJQN, tlJENT!F.I@i

1 R E S U l T A O O S

1

R E S U 1 T A D O S

La concentración de gammaglobulinás fue determinada

por método nefelométrico segrln Reinhold, y los resultados a

obtenidos en Unidades í1JacLagan en relación a porcentaje de

transmitancia.Se incluye cuadro de equ.ivalencia.s en la Ta­

bla No.l.

TABLA No.l

Equivalencias de las Unidades MacLagan a Ga.mmag1obulinas en mg/ml.y a Porcen­

taje de Transmitancia.

UNIDADES MACLAGAN GA1.'!1MG10BULINAS TRANS!iliTANCIA (mg/ml) ( % )

1 3.7 96 2 5·4

~' 92 -3 7.1 88 4 8.8 C.4 5 10.6 80 6 12.3 76 7 14.0 72 8 15.7 68 9 17-5 64

10 19.2 60 11 20.9 56

La curva de transmitencia del total de las muestras

en relación a la.edad de los becerros se encuentra en la-­

Gráfica No.l. Observamos que no hay diferencias significa­

tivas a cada tiempo de muestreo y en todos los becerros.

-< H u

1~

~ tJI E-,_ ::.. ({;

z ~ E-<

¡:.:; o

U) r::: :¿ E­z ~ u t:t. o a.

98

91

96

95'

G HRS. /~ lfi(.S.

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. 18NJrS. t'l N~S. :)D NRS. )4 HR!.. i'..t #Á'S. i "/8 H-'eS . . .

~

IS ::LO 25 Ji)

NUm:R.O DE MUESTRAS.

GRAFICA No.l.- Curva de Transmitancia de las Muestras en Realación con edad

de los Becer:r:os.

M .yo ~S

co

La escala de gammaglobulinas séricas fue menor a -­

los 3.72 mg/ml. durante todo el período de estudio.

En detalle y por grupos de edad-becerros,se encuen­

tran las transmitancias por cada observación,el promedio -­

por grupos y el promedio del total de las muestras séricas,

en la Gráfica No.2.

En la explotación utilizada se mantenía al momento

del estudio,un porcentaje de supervivencia en la becerrada,

escaso.Jiluriendo un 50 % de ellos durante la primera semana

de vida.

En la Tabla No.2, se anotan las transmitancias en­

porcentaje y por grupos de edad-becerro ,de todas las mues -

tras.

En la Gráfica No.3. se detallan las concentraciones

de gammaglob~linas,obtenidas a partir de Unidades MacLagan

contra porcentajes de transmitancia. Se anexan al mismo gr!

fico dos lineas q~e indican: 1)-. Linea punteada,el prome-­

dio de las muestras estudiadas y 2 )-. Linea rayado interm:i-. tente,lo que estiman los autores como cifras adecuadas para -

becerros de 24 hrs •. de edad que han ingerido buen calostro

en cantidades adecuadas.

En la Gráfica No 1 4,se proporcionan el ndmero de --­

muestras,su rango de transmitancia y el porcentaje del to -

tal que representa cada grupo. Todas ellas indican que pro­

ceden de animales con el síndrome de deficiencia de antiDu~

pos.

ro 'M tJ ¡:; ro

IDO

t¡g

:: 98 E <ll ¡:; ro l.¡

E-o

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'O 9J <ll ¡¡¡ 'M ro +J ¡:; Q) u

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.21( 30 3<0 ?'~ "18 60 .A&8.

HORAS DE EDAD-BECERROS

GRAFIC.1\ No. 2.- Porcentajes de Transmi tancia del suero sanguíneo de becerros tipo lechero hasta 168 hrs. de edad-Cada Estimación la representa un Punto,el Prome­dio por Grupos se representa por x, la Línea intermi­-tente es el promedio del Total de Muestras.

..... o .

11. '1'1\rlLJ\ No. 2 •

DETERMINACIONES NEFELOMETRICAS DE LAS MUESTRAS SANGUINEAS EN PORCENTAJES DE

TRANSMITANCIA.

Muestras edad-becerro: 6 hrs.

1-. 99 .ooo 2-. 98.7oo 3-. 98.5oo 4-. 98.9oo 5-. 98.4oo Promedio: 98.700

Muestras edad-becerro:12 hrs.

6-. 98 .loo 7-. 98.3oo 8-. 97.9oo 9-. 98.8oo

10-. 98.4oo Promedio: 98.300

Muestras edad-becerro:18 hrs. 1

11-. 99 .ooo 12-. 99.5oo 13-. 98. 7oo 14-. 99.ooo

Promedio: 99.050

Muestras edad-becerro:24 hrs.

15-. 98.9oo 16-. 99.ooo 17-. 98."5oo 18-. 99.4oo Promedio: 98.950

Muestras edad-becerro:30 hrs.

19-: 98 .ooo 20-. 99.8oo 21-. 98.3oo 22-. 99.ooo 23-. 99.loo Promedio: 98.840

Muestras edad-becerro:36 hrs.

24-. 99.5oo 25-. 99 .ooo 26-. 99.1oo 27-. 98.900

' Promedio: 99 .125

Muestras edad-becerro:42 hrs.

28-. 99.2oo 29-. 98.8oo 30-·. 99 .loo 31-. 98.5oo

Promedio: 98.900

Muestras edad-becerro:48 hrs.

32-. 97.2oo 33-. 99.6oo 34-. 99.ooo 35-. 99.ooo 36-. 97.1oo Promedio: 98.380

Muestras edad-becerro:60 hrs. 37-.100.000 38-. 98.2oo 39-. 96. Sao' 40-. 97.6oo Promedio: 98.075

Muestras edad-becerro:l68.hrs.

41-. 98.Soo 42-. 99 .loo 43-. 97.000 44-. 98.100 45-. 98.300 46-. 99.2oo 47-. 99.ooo Promedio: 98.457

PROMEDIO GENERAL= 98.700.

100

< H u JD z < E-< H 80 ~ U) z ~

1{)

E-<

~ 60 Q

U) !:.: so IJ < E-< z 'lO ~ u 0:: o )C p.,

~{)

10

10., 1-Aj/ML.

1'\.f> ...g}IAI-.

------------ .... ----.. -- -·-----------t--. -----.------ -- - -- ------- ----- . ---------------- - ----------- ----

:t .z "' i' S ~ 7 8 , "'

UNIDADES MACLAGAN.

GRAFICA No.3.- Concentraciones Promedio de Gammaglobulinas (mg/ml) de las Muestras Expresado por la Línea Punteada.Ex presado por la Línea Intermitente el Promedio Normal e~ Be cerros de 24 hrs.-edad que han ingerido buen Calostro y eñ

Cantidad Adecuada.

:/.0.1 A<f/ML.

H

~ l\) .

IS

/0

13

..---Yt.ll~ ,.

TOTAL DE MUESTRAS = 47.

•

-~5~1 \ "

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"' .

- ...;__

- &.3~ 6 . ..18

" "' ~~~ y.

m . r1 %. - %.5 %.6 - 91 ni - U;5 '11.' • <J8 98.1- '.18.5 98.6- !J.! !li.l -~1.5 99.r. ~100

PORCENTAJES DE TRANSMITANCIA.

GRAFICA No. 4. - Porcentajes del Total de Muestras Colocadas por Rango de Transmitancia.

O I.S C U S ION

D I S C U S I O N

El tema que llevó a la elaboración de este trabajo

fue:"Determinaci&n de Niveles de Inmunoglobulinas en Suero

Sangu!neo de Becerros a Diferentes Horas despuds del Naci-­

miento.

En los resultados se anotan datos referentes a con­

centraciones de Gammaglobulinao ya que el reactivo utiliza.

do precipita en exclusiva estasr frscciones de las prote!nas

inmunes séricas. En años anteriores,lF-s proteinas del suero

responsables de la actividad anticuerpo,eran definidas como

"grunmaglobulínas"(en relación al desplazamiento electroforé . -tico).Estudios recientes aclararon que los anticuerpos es--

tán constituidos no solo de globulinas tipo Gamma,sino tam­

bién de algunos tipo Beta y de tipo Alpha. Por lo tanto se

prefirió denominarlas globalmente como: "Inmunoglobulinas".

En la Gráfica No.l. observamos que los porcentajes

de tr~ancia mayores se encuentran comprendidos dentro de

las primeras 42 horas edad-bece~ros,y que los porcentajes ~

menores aparecen luego de este tiempo. Asimismo en la Gráfi

ca No.2. se proporcionan esos mismos porcentaJes de trans­

mitancia por grupos de edad,el promedio de cada grupo y el

promedio del total de las muestras examinadas.

En el Gráfico No.3. se observa que la concentracidn

promedio de ga~~aglobulinas en el suero sanguineo de los b~

cerros estudiados se encuentra abajo de los niveles estipu­

.lados en el Veterinary Hematology de Achalm,Jain and Carroll

(1975) como normales en animales de 24 hrs.de edad y que--

14.

15.

h~ ingerido calostro de buena calidad en cantidad adecua-

da.

La f6rmula empleada para obtener mg/ml.de gammagla­

bulinas a partir de Unidades Mac Lagan fue: ( 29 ( 42).

U .u1acLngan 0 2

,.,.; 1 5.8 + • = m~m •

Notamos que los resultados obtenidos concuerdan con

trabajos hechos por Travis c. il'lcGuire,et al.,l976.; fenhale

W.J.,et al.,l970 y l!'isher E.w.,et a1.,1975., en donde estu­

dios realizados en becerros en condiciones similares a las

del presente trabaJo, arrojaron baJos niveles de gammaglob~

linas st!ricas.

Entre el nacimiento y las 24 horas de edad,la san-­

gre circulente de un becerrito debe incrementarse el conte1

nido de Ig. de cero a óO grs.(l.5 grs/100 ml.). Despu~s de

~sto, poco o nada de incremento es notado.(l5),(24).

Existen algunas dudas acerca de la eficiencia de la

concentración de inmunoglobulinas en el suero sanguíneo de

becerros y la. protección contra agentes infecciosos.La efi­

ciente transferencia de inmunoglobulinas maternales es dudo

sa.(l).

La transmición de la inmunidad pasiva materna tiene

efectos profundos y diversos con el comportamiento inmunol~

gico,biofisiológico o patológico del reci~n nacido.La cons~

cuencia más evidente desde un punto de vista general y más

importante,es la protección contra la acción general de ~os

antígenos y en particular de los agentes infecciosos.

En casos de dierrea existe una fuga intraluminul de

globulinas sérices.

16.

En la Gráfica No.4. observamos que tod.as las mues-­

tras proceden de animales con síndrome de deficiencia. de an

ticuerpos,encontrándose minimos porcentajes del total de

las muestras que tienden a superar a la mayor!a.

En becerros recién nacidos,la absorción de Ig. ca-­

lostrales ocurre principalmente en el yeyuno,~ltima porción

del duodeno y principio del ileon,entrando a circulación v4 a vasos linf11ticos ( El-Nageh. 1 1967-B).

Sin embargo el mismo El-Nageh., 19o7-A., estim6 que

la absorción de Ig. en los terneros cesa porgue la aptitud

de las células para pinnocitar se pierde después de una o -

dos reposiciones del epitelio intestinal.(l).

En los rumiantes,las Ig. son derivadas del calostro

el cual es rápidamente absorbido por el intestino del ani­

mal recién nacido. En los becerros la capacidad de absorber

macromolécuias de prote!na del intestino se pierde después

de unas 36 horas de nacidos.

Se acepta generalmente que la transferencia de Ig.

no ocurre en los bovinos a través de la placentá.(4),(23).

Sin emb~rgo una se~ie de reportes de Ig.en suero f~tal de

becerros (F.C.S.) ha sido hecho.(23). Jl.ero datos personales

estiman que estas Ig. fetales son de muY corta vida y exis­

ten ~urante cierto per!od9 de la vida fetal,desap~eciendo

de .la circulación sanguinea-fetal en tie,npos a~ no determi ' -

nades. ( 10) •

Los factores que pueden ser ln ca~sa de deficiente

absorción de inmunoglobulinas son variados.La edad del bece ' -

rro es una da los factores más significativos en la aosor--

17.

ción de Ig. en el recién nacido;la razón para el"cierre" de

la mucosa intestinal a proteínas no ha sido finalmente est~

blecida. (44).

En la mayor!a de las situaciones,la calidad del ca­

lostro maternal es probablemente el más importante de todos

los factores que influyen en la absorción.(43)(44).

La succión demorada parece ser otra de las causas

más comunes de hipogammaglobulinemia,aunque algunos invest_!

gadores au~entan la posibilidad de un defecto actual en el

mecanismo de absorción.(43).

Ltros factores que est~n relacionados con la absor­

ción de Ig. son: grandes cantidades de flu:!do amniótico en

el abomasum del ternero recién nacido, animales débiles al

nacer,infecciones tempranas en el animal, masj;itis de la va

ca, herencia, variabilidad indiviiual, sistemas enzimáticos

del intestino del becerro, hormonas, edad de la vaca, dieta

de la vaca, co~centracidn de Ig.en la madre, concentración

de globulinas en el calostro, e infinidad de factores adn­

no conocidos, pudiendo-ser-tl& la madre, del becerro, del ca

lostro o del medio ambiente.

e O N e L U S I O N E S

C O N C L U S I O N E S

1-. Que el panorama general en el efectivo estudiado deja

mucho que desear respecto a su status inmunog~nico. \ ~·

2-. Independientemente de la edad de los becerros, la con--

centración de gammaglobulinas no oscila marcadrunente.

3-. Que el promedio de las muestras estudiadas no sobrepa-­

sa los 3.72 mg!ml.de gammaglobulinns séricas,considera..

da esta cifre como representativa de animales hipoga!lll1l!!

globulinémicos.

4-. Lo observado en la Gráfica No.). indica en forma clara

la diferencia de gru~aglobul!nas séricas de los becerr~

estudiados respecto a lo considerado como nivel normal

en becerros de 24 horas-edad que ingirieron buen calos­

tro en cantidad adecuada.

5-· El 14.891% de las muestras estaban cercanos a los ni­

veles de 3.72 mg/ml. de g~~aglobulinas séricas.

ó-. El 85.103 % de las muestras _las encontrarnos en niveles

inferiores marcadamente a3.72 mg/ml. de gammaglobuli-

nas sé ricas.

18.

RESUMEN

RESUMEN

En el presente trabajo fueron realizadas determina..

cienes de niveles séricos de inmunoglobulinas,especificamen

te gammaglobulinas, en becerros recién nacidos.

Se estudiaron estos niveles séri~os en ló becerros

Holstein-Friesian, a diferentes horas después de nacidos, y

que fueron las siguientes: 6 - 12 - 18 - 24 - 30 - 36 - 42

48 - 60 - y 168 horas.

Las muestras sanguineas se obtuvieron por punción -

yugular y mantenidas en un termo con hielo, a la. formación­

d'el coágulo,fue separado el suero para hacer la pruebe. de­

enturbi&~iento de timol según Reinhold, antes de pasadas 8

horas después de la punción yugular. No fue utilizada sus -

tancia quimica alguna para la preservación de las muestras

sanguina as •

Los r·esultados obtenidos se dieron en Unidades r.iac­

Lagan contra porcentajes de transmi tancia en el espectrofO­

tdmetro.Las equivalencias de las Unidades macLagan a mg¡'ml.

de gammaglobulinas séricas se especifican en la Tabla No.l.

Los resultados indican que los becerros estudiados

presentan el sindrome de deficiencia de ~~ticuerpos durante

todo el período de estudio.

Además que estos niveles séricos est<m abaJO de --­

).72 mg/ml.de gaillffiaglobulinas,considerado este nivel como -

.lo estipulado por los autores como el que presentan los be­

cerros neonatales antes de ingerir calostro.

19.

A P E N O I C E S

A P E N D I C E A.

PREPARACiúN DE LA SvLUCION Tru.WONADA DE TIMOL.

Especificación T~cnica de la Solución:

Timol 7.32 mN Tris)hidroximetil)arninometano 10 roN Acido maleico 3.66 mN, pH 7·55

Ha de prepararse en un matraz aforado bien limpio ••

Se recomienda dejar el matraz lleno de una mezcla crdmtca,­

vaciarlo antes de preparar la solución y enjuagarlo bien -­

con agua destilada.

El contenido del frasco con Tris(hidroximetil)amin.2.

metano lO mN. 6 solución madre tampón de Tris, se diluye con

aproximadamente 900 ml. de agua destilada en un matraz afo­

rado a 1000 ml. bien l!mpio y se añade el contenido del·--­

frasco con la solución alcohólica de timol, evit~do que se

formen cristales de timol por la evaporación del alcohol.

Se agita hasta que en el cuello del matráz no quede

adheridas gotas, se completa con agua destilada hasta 1000

ml. y se mezcla bien.

En un frasco de vidrio bien cerrado y a temperatura

entre 20 y 25 grados centígrados se conserva aproximadamen­

te medio año. ( Lab. Merck)

20.

A P E N D I C E B.

CALIBRADO Y AJUSTE DEL ESFECTROFOTOMETRO

f'ARA LAS DBTBRMINACIONES NEFELOMETRICAS.

El espectrofotómetro se calibró a ó20 nm. y fue a-­

justado a "cero" transmitancia con el portacubetas en posi­

ción "negativa". Luego ajustado a 100 %~e transmitancia -­

con la solución tamponada de timol en el tubo especial y co

locado en el portacubetas en posició~ de "positivo".

Seguidamente se colocó dentro del portacubetas el -

tubo especial con la solución problema (0,1 ml.suero + 6.0

ml.sol.tamponada de timol) y se procedió a tomar la lectura

de transmitancia.

------

21.

A P E N D I C E C.

ELABüRACIUN DE LA CURVA PATRON EN UNIDADES MAC1AGAN.

La curva Patrón para el aparato correspondiente se t

traza sólo una vez cada 6 meses aproximadamente. En el fra.!!

co que contiene un patrón de turbidez de formazalina segdn

Walther. Este patrón de turbidez corresponde ampliamente al

patrón de suero-ácido sulfosalicilico según Kingsbury,inter

nacionalmente conocido.

Antes de su empleo,la mezcla debe agitar~e bien;sin

diluir equivale a 10 Unidades IlíacLagan. Partiendo de este -

patrón de turbidez,se puede preparar la siguiente serie de

diluciones:

Patrón de Turbidez Agua Destilada Unidades MacLagan de Formazalina. (ml.)

10,0 m l. --- lO 7,0 ml. 3,0-' 7 5,0 ml. 5;0 5 2,0 ml. 8,0 . 2 1,0 m l. 9,0 1

Las transmitancias de las diluciones se miden con-­

tra agua destilada. Las transmi tancias (ordenadas) se regi§.

tran frente a las Unidades MacLagan (abscisas).

22.

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