CoralHue - Select your region | MBLライフサイエンスruo.mbl.co.jp/catalog/images/pdf/140023Amalgaam.pdf · Fluorescent Proteins （株）医学生物学研究所学術部

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研究用試薬

株式会社医学生物学研究所

Fluorescent ProteinsFluorescent Proteins

CoralHue®

蛍光タンパクシリーズ

蛍光タンパクによるタンパク質間相互作用の検出

光変換蛍光タンパクシリーズ

ベーシック蛍光タンパクシリーズ

蛍光タンパク関連製品シリーズ

an MBL Company

マルチカラーイメージングmonomeric Keima-Red ( ミトコンドリア、青 )monomeric Kusabira-Orange ( 細胞膜、赤 )monomeric Azami-Green ( 小胞体、緑 )

資料提供：独立行政法人理化学研究所脳科学総合研究センター　　　　　細胞機能探索技術開発チーム宮脇敦史先生

表紙写真説明

CoralHue®ブランドについて

CoralHue＜コーラルヒュー＞はCoral (サンゴ)とHue (色)を合わせた造語です。Amalgaamの蛍光タンパクはサンゴからクローニングされています。

株式会社医学生物学研究所と独立行政法人理化学研究所脳科学総合研究センター先端技術開発センター (現、先端技術開発グループ) 細胞機能探索技術開発チーム (チームリーダー宮脇敦史先生) は2001年4月より共同研究を開始しました。その共同研究の一環として刺胞動物からの新規蛍光(色素)タンパク質遺伝子の単離を行い、Kaedeを含む15種類以上の新規遺伝子の単離に成功しました。これらの蛍光タンパク質の新たな産業利用を目指し、Amalgaam (アマルガム) 有限会社は、宮脇敦史先生の協力を得て2003年1月に設立されました。

Amalgaam (アマルガム) 有限会社

目次

CoralHue® 蛍光タンパクによる蛋白質間相互作用の検出・・・・・　 4 Protein Fragment Complementation Method ( ) FRET FCCS

CoralHue® 光変換蛍光タンパクシリーズ・・・・・　 6 Kaede Kikume Green-Red Dronpa-Green

CoralHue® ベーシック蛍光タンパクシリーズ・・・・・　 8 Azami-Green Kusabira-Orange Midoriishi-Cyan Keima-Red

CoralHue® 関連製品・・・・・　10

CoralHue® リンカー付蛍光タンパク細胞小器官(オルガネラ)標識用プラスミド Apoptosis検出試薬抗体ラインナップ

複数箇所同時点変異導入キット・・・・・　12 AMAP™ Multi Site-directed Mutagenesis Kit

(折り込み)CoralHue® 蛍光タンパクシリーズチャートAmalgaam社製品一覧

参考文献・・・・・　17

Fluorescent Proteins

（株）医学生物学研究所学術部基礎試薬グループ TEL: 052-238-1904 FAX: 052-238-1441 研究用試薬Web Site: https://ruo.mbl.co.jp/

mKG_NとmKG_Cの塩基数と分子量

mKG_N

mKG_C

Open readingframe (bp)

507

156

Molecularweight (kDa)

19.0

5.7

Protein Fragment Complementation Method

CoralHue®

CoralHue® 蛍光タンパクによるタンパク質間相互作用の検出

CoralHue® は、タンパク質断片コンプリメンテーション法 (Protein fragment complementation method)を基にした、新規蛍光タンパクを用いた、タンパク質間相互作用解析ツールです。monomeric Kusabira-Green(mKG)の4種類の遺伝子断片ベクターに加え、チェック用シークエンシングプライマー、そしてコントロールプラスミドが入ったキットです。

mKG_N

mKG_N

mKG_C

mKG_C

BA

mKG_N断片とmKG_C断片にタンパクAとBを融合させて発現させたイメージ図

タンパクAとBが相互作用することによって近接したmKG_N断片とmKG_C断片が結合、mKGとなり明るい緑色蛍光を発します。形成されたｍKGは再び断片に分かれることがないとされているため、目的タンパク質の相互作用が短い場合や、弱い場合でも、シグナルは増強され、高感度な解析が行えます。

mKG

相互作用A B

相互作用A B

pKa=6.1mKG 494/506 64,200 (494 nm) 0.57

pH感受性励起最大波長/蛍光最大波長

モル吸光係数(M-1cm-1) 量子収率

蛍光特性

4

NF-κB構成分子p50の部分配列とp65の部分配列の相互作用をFluo-chase Kitを用いて可視化しました。(HEK 293T細胞)

FRET ＜Fluorescence resonance energy transfer＞

FCCS＜Fluorescence Cross Correlation Spectroscopy＞

Donor (Midoriishi-Cyan) と Acceptor (Kusabira-Orange) の蛍光スペクトルにほとんど重なりがないため、両者の蛍光シグナルを効率よく分離することができます。また、両者の励起ピークが離れているため、Donorのみを効率よく励起することができます。

Keima-RedとMidoriishi-Cyan、Keima-RedとAzami-Greenの組み合わせで、一波長励起のFCCSが実践できます。

Caspase3の基質ペプチド配列(DEVD)でつながれたMiCy-DEVD-mKOは、活性化Caspase3によって切断されることで目視できるほど蛍光特性が変化します。

資料提供

独立行政法人理化学研究所脳科学総合研究センター細胞機能探索技術開発チーム宮脇敦史先生

MiCy-DEVD-mKOタンパク質溶液(励起440 nm)

+－

MiCy mK0

450 500 550 600 650

+

-Fluo

.Int.

wavelength (nm)

励起 440 nm

ーDEVDー

Caspase 3

カスパーゼ３の認識配列をMidoriishi-Cyan(MiCy)と単量体Kusabira-Orange(ｍKO)ではさんだタンパク質をHeLa細胞に発現させました。アポトーシス誘導によりカスパーゼ3が活性化され、認識配列が切断されることによりFRET効率が低下し、Caspase3が活性化したことが観察できます。(3CCDカメラ　ASHURA(浜松ホトニクス)を使用）

650

1.0

0.5

0.0

600550500450400

EXEM

mKO1

Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

550500450400

EXEM

MiCy1

MiCyとmKOの蛍光スペクトル

1.0

0.5

0.0

Fluo

.Int.

700600500400Wavelength (nm)

EM EX

EM EX

440 n

m45

8 nm

mKeima-Red

MiCy

A

A

B

B

I II III

蛍光相互相関分光法(Fluorescence Cross Correlation Spectroscopy, FCCS)：2色の蛍光色素の揺らぎを同時に計測し、揺らぎの間の相互相関から分子間の相互作用を解析する方法。図I ：別々の蛍光タンパク質でラベルされたタンパク質Aとタンパク質Bが励起光領域(破線の円筒部分)を拡散により通過している。図II ：検出される2種の蛍光値の増減が同期していない。タンパク質Aとタンパク質Bは励起光領域を結合(相互作用)せずに通過している。図III ：検出される2種の蛍光値の増減が同期している。タンパク質Aとタンパク質Bが結合(相互作用)し励起光領域を同時に通過している。

Fluo

. Int

.

Time

Fluo

. Int

.

Time


研究用試薬Web Site にて、データシート、塩基配列、スペクトルデータの取得が可能です。ぜひご利用下さい。

CoralHue® Azami-Green、CoralHue® Midoriishi-Cyan、CoralHue® Keima-Red

CoralHue® Midoriishi-Cyan、CoralHue® Kusabira-Orange

5



Kaede

Kikume Green-Red

CoralHue® 光変換蛍光タンパクシリーズ

Kaedeは、ヒユサンゴ (Trachyphyllia geoffroyi) よりクローニングされた蛍光タンパク質です。紫(外)光 (350-410 nm)照射により緑色から赤色に蛍光特性が変化します。細胞の一部を紫(外)光照射すると、細胞全体に赤色化したKaedeがすみやかに拡散し、細胞全体がラベルできるので、標的細胞のマーキングや、マーキングした目的タンパク質の時間経過による動態観察に有用なツールです。Kikume Green-Redに比べ、線虫、ゼブラフィッシュなどの比較的成育温度の低い生物に向いています。

Kikume Green-Redは、キクメイシ (Favia favas) よりクローニングされた蛍光タンパク質に変異を導入し、得られた光変換可能な4量体蛍光タンパク質です。紫(外)光 (350-410 nm)を照射することにより、緑色から赤色に蛍光特性を変化させることができます。哺乳動物細胞を培養するような37℃の条件下でKaedeよりも明るい蛍光特性を示します。

1.0

0.5

0.0

700600500400300Wavelength(nm)

ExEmKaede_Green

Fluo

.Int.

1.0

0.5

0.0

700600500400Wavelength(nm)

ExEmKaede_Red

Fluo

.Int.

Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

1.0

0.5

0.0700600500400

ExEmKikGR_Red

Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

1.0

0.5

0.0700600500400

ExEmKikGR_Green

HeLa細胞Green : EX 475AF20 EM 530DF35Red : EX 550DF35 EM 575ALPDM : 420DCLP露光時間: Green 400 ms, Red 50 ms紫外光照射時間：1s

350～410nm 照射

CoralHue® KikGR1

CoralHue® Kaede

蛍光スペクトル


資料提供独立行政法人理化学研究所脳科学総合研究センター細胞機能探索技術開発チーム筒井秀和先生宮脇敦史先生

508/518572/580

pKa=5.6pKa=5.6

98,80060,400

0.880.33



蛍光特性

507/517583/593

色変換前(緑)変換後(赤)

色変換前(緑)変換後(赤)

pKa=7.8pKa=5.5

53,70035,100

0.700.65



蛍光特性

6



Dronpa-Greenは、キッカサンゴ (Echinophyllia sp.) よりクローニングされ、緑色の蛍光を発しフォトクロミズム現象を示す単量体蛍光タンパク質です。吸収極大 (503 nm)付近の強い光をあてると蛍光が消え(OFF)、390 nm付近の光をあてると瞬時に蛍光が回復 (ON)します (Photoactivation)。蛍光の ON / OFF を自在に操ることにより、FRAP (Fluorescence Recovery after Photobleaching) や FLIP (Fluorescence Loss in Photobleaching) を繰り返し行なうことが可能です。

Dronpa-Green

405 nmレーザー照射

CoralHue® DG1

HeLa細胞EX : 490DF20EM : 535DF25DM : 505DRLPXR


顕微鏡下におけるDronpa-Green1の消光と蛍光回復

pRS316-Arf1p-Dronpa-Green1発現酵母

1.0

0.5

0.0

600550500450400

ExEmDG1

Fl

uo.In

t.

Wavelength (nm)

600500 550400 450

ExEmDG3

1.0

0.5

0.0

Fl

uo.In

t.

Wavelength (nm)

490 nmの光を照射すると緑色の蛍光が減少し、400 nmの光を照射すると緑色の蛍光が回復します。

Arf1p-Dronpa-Green1をYPH499aに発現させました。細胞全体を488 nmで消光後、405 nmのレーザーを照射し、2 秒おきにデータ取得しました。その結果、蛍光が回復し、速やかに細胞全体のドットに局在するようになります (写真右)。(Scale bar, 2 μm)

光刺激なし

顕微鏡：Olympus FV1000対物レンズ：UPLAPO 60xW　NA1.20データ取得：multi Ar レーザー 488 nm検出波長：500-600 nm刺激用レーザー：405 nm

資料提供：理化学研究所中央研究所生体膜研究室　　　　　黒川量雄先生・中野明彦先生

pKa=5.0pKa=5.0

DG1DG3

503/518491/514

95,000 (503 nm)58,000 (487 nm)

0.850.28



蛍光特性

7



CoralHue® ベーシック蛍光タンパク質シリーズ

Bright OrangeKusabira-Orange

Azami-Green Bright Green

600

AG

1.0

0.5

0.0

600550500450400

ExEm

Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

mAG1

1.0

0.5

0.0

550500450400

ExEm

Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

Azami-Greenは、アザミサンゴ (Gelaxea fascicularis) よりクローニングされた緑色蛍光タンパク質であり、4量体(AG)と単量体(mAG1)があります。迅速に強い蛍光を発し、pH安定性を示します。単量体であるmAG1は膜やミトコンドリアなどの細胞内小器官を鮮明に標識したり、タンパク質を追跡したりすることに向いています。

CoralHue® mAG1

HeLa細胞U-MGFPHQ (OLYMPUS)EX : BA460-480HQEM : BA495-540HQDM : DM485


KO1mKO1

548/561548/559

73,700 (548 nm)51,600 (548 nm)

0.450.60

1.0

0.5

0.0

650600550500450400

ExEm

Wavelength(nm)

KO1

Fluo

.Int.

650

1.0

0.5

0.0

600550500450400

ExEm

mKO

Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

Kusabira-Orangeは、ヒラタクサビライシ (Fungia concinna) よりクローニングされたオレンジ色の蛍光タンパク質であり、2量体(KO1)と単量体(mKO1、mKO2)があります。強い蛍光とpH安定性を示し、mKO1は褪色しにくい、mKO2は素早く光る、という特徴を持ちます。また、Midoriishi-Cyanと組合わせて蛍光エネルギー共鳴移動法(FRET)に最適です。

HeLa細胞FSET-KOHQ(OLYMPUS)EX : 25BP520-540HQEM : 25BP555-600HQDM : DM545HQ


Ex

mKO1

mKO2

Em

pKa<5.0pKa=5.0

mKO2 551/565 63,800 (551 nm) 0.62 pKa=5.5



蛍光特性

pKa<5.0pKa=5.8

AGmAG1

492/505492/505

72,300 (492 nm)55,500 (492 nm)

0.670.74



蛍光特性

CoralHue® mKO1

8



Keima-Red Large Stokes Shift

Midoriishi-Cyan Bright Cyan

1.0

0.5

0.0

1.0

0.5

0.0

600 600550500 500 550450400350 400 450350

ExEm

ExEmMiCy1 mMiCy1

Wavelength(nm) Wavelength(nm)

Fluo

.Int.

Fluo

.Int.

Midoriishi-Cyanは、ミドリイシ (Acropara sp.) の触手よりクローニングされた青緑色の蛍光タンパク質であり、2量体(MiCy1)と単量体(mMiCy1)があります。量子収率が高く、FRETのDonorに適しています。Kusabira-Orangeと組合わせて蛍光エネルギー共鳴移動法(FRET)に使用できます。

CoralHue® mMiCy1(ミトコンドリア標識)

HeLa細胞EX　: 440AF21EM : 510WB40DM : 455DRLP


pKa=6.5dKeima-Red 440/616 24,600 (440 nm)14,000 (440 nm)

0.310.15



pKa=6.5pKa=6.5

dKeima570mKeima-Red

440/570440/620 14,400 (440 nm) 0.24

Keima-Redは、コモンサンゴ (Montipora sp.) よりクローニングされたタンパク質に変異を導入して作製された赤色蛍光タンパク質であり、2量体(dKeima-Red、dKeima570)と単量体(mKeima-Red)があります。大きなストークスシフト(励起ピーク波長と蛍光ピーク波長の差)が最大の特長です。細胞などの自家蛍光の影響を受けにくく、また、他の蛍光タンパクと組み合わせてマルチカラーイメージングにも利用できます。さらに、AGやMiCyと組み合わせることによって、シングルレーザーによるFCCS(Fluorescence Cross Correlation Spectroscopy)が可能となります。

CoralHue® PM-mKeima-Red(形質膜標識mKeima-Red)

HeLa細胞EX : 440AF21EM : 610ALPDM : 590DRLP


蛍光特性

1.0

0.5

0.0

700600500400

ExEm

Fluo

. Int

.

Wavelength (nm)

mKeima-Red1.0

0.5

0.0

700600500400

ExEm

Ex

dKeima-Red

dKeima570

Em

Fluo

. Int

.

Wavelength (nm)

dKeima

pKa=6.6pKa=7.0

MiCy1mMiCy1

472/495470/496

27,250 (472 nm)22,150 (470 nm)

0.900.70



蛍光特性

9



細胞小器官(オルガネラ)標識用プラスミド

CoralHue® リンカー付蛍光タンパク

humanized Kikume Green-Red1(hKikGR1)を用いたリンカー領域の長短の比較

24残基の側鎖の小さいアミノ酸からなるフレキシブルな「ペプチドリンカー」を CoralHue® 蛍光タンパクAzami-Green、Kusabira-Orange、Kikume Green-Redに付加しました。蛍光タンパクと目的のタンパクがお互いに構造形成、または、機能が干渉し合うという可能性を低減します(ミスターゲッティング、蛍光輝度低下等)。

hKikGR1-MC1(AM-V0085)とhKikGR1-MCLinker(AM-V0089)にβ-actinを融合してHeLa細胞に発現させました。MC1ではhKikGR1とβ-actinの間に2アミノ酸挿入され、アクチンファイバーをはっきり確認することはできませんでした(写真左)。MCLinkerではhKikGR1とβ-actinの間に2アミノ酸とペプチドリンカーが挿入され、アクチンファイバーをはっきり確認することができるようになるとともに、蛍光輝度も大幅に上昇しました(写真中央、右)。

hKikGR1/MC1

hKikGR1/MCLinker TGNSADGGGGSGGSGGSGGGSTQG GShKikGR1 β-actin

BamHI Not I

GShKikGR1 β-actin

BamHI Not I

緑蛍光 : BP460-480HQ(励起) : BA495-540HQ(蛍光) : DM485(DM)

赤蛍光 : 546DF20(励起) : FF01-624/40-25(蛍光) : FF593-Di02-25x36(DM)

UV : BP330-385 : 505DRLPXR(DM) CoralHue® hKikGR1-MC1を用いて

β-actin特異的に標識させたHeLa細胞CoralHue® hKikGR1-MCLinkerを用いてβ-actin特異的に標識させたHeLa細胞

CoralHue® hKikGR1-MCLinkerを用いてβ-actin特異的に標識させたHeLa細胞

CoralHue® 関連製品

各プラスミドのターゲットサイト

細胞膜pPM-mAG1pPM-mKO1pPM-mKeima-Red

ミトコンドリアpMT-mAG1pMT-mKO1pMT-mKeima-Red

小胞体pER-mAG1pER-mKO1

核質pNP-AG

pNP-KO1

CoralHue® pPM-mAG1 CoralHue® pPM-mKO1 CoralHue® pPM-mKeima-Red

CoralHue® pMT-mAG1 CoralHue® pMT-mKO1 CoralHue® pMT-mKeima-Red

CoralHue® pER-mAG1 CoralHue® pER-mKO1

核質の標識

CoralHue® pNP-AG CoralHue® pNP-KO1

＊紫(外)光を照射された細胞は赤くなります。

細胞膜の標識

ミトコンドリアの標識

小胞体の標識

10



抗体ラインナップ

Apoptosis検出試薬

mKGは　において使用されている蛍光タンパクです。mKG-N断片とmKG-C断片をそれぞれ検出することができます。

すべての蛍光タンパクに対して、ウェスタンブロッティングや免疫沈降に利用できる抗体を取り揃えております。蛍光タンパクによるライブイメージングとともに、発現確認等にご利用ください。

P I

AG標識Annexin VAnnexin VはCa2+存在下でPSと高親和性を示します。

Propidium Iodide(PI)膜構造が壊れると細胞内に入り込みDNAと結合します。

Phosphatidylserine(PS)細胞膜構成リン脂質の一種で、通常膜内層に存在します。Apoptosisが起こると膜構造は保たれたままで、膜外層に露出します。

正常細胞アポトーシス初期細胞アポトーシス後期細胞

Annexin V

AG

・正常細胞では、PSは膜内層に存在　するためAnnexin Vは細胞膜に結合　できません。・PIは膜透過できません。

75

25

kDa

5037

anti-monomeric Kusabira-Green C-terminal fragment(M149-3)

75

25

kDa

5037

anti-monomeric Kusabira-Green N-terminal fragment(M148-3)

・細胞膜構造を保ったままPSが膜　表面に露出し、Annexin Vが結合　します。・PIは膜透過できません。

・Annexin VはPSに結合します。・PIが細胞内に入りDNAと結合します。

Annexin VAGPI

PI

PI

PI

PI

PIPI

PI

AG

AG

AGAG

Annexin VAnnexin V

Annexin V Annexin V

Ca2+

Ca2+Ca2+

Ca2+

Ca2+

Ca2+

Annexin V は、Ca2+存在下でphosphatidylserine (PS) に対して強い親和性をもつため、アポトーシスによってひきおこされる細胞膜の変化を検出するプローブとして利用されています。Annexin V は、PS が細胞表層に露出したアポトーシス細胞のみに結合できるため、これを利用することによってアポトーシス細胞を検出することが可能となります。APOPCYTO™ Annexin V-Azami-Green Apoptosis Detection Kitは、Azami-Green (AG)標識したAnnexin V と PIを利用することによって、早期のアポトーシスと後期のアポトーシスを区別することも可能です。

Western blotting染色例1 Western blotting染色例2CoralHue®

Kikume Green-Red was immunoprecipitated with each antibody(M129-3)

Immunoprecipitation染色例1

Anti-Keima-Red(M126-3)

1 2 3 4 5 6 7

Lane 1: Azami-GreenLane 2: Dronpa-GreenLane 3: KaedeLane 4: Keima-Red

Lane 5: Kikme Green-RedLane 6: Kusabira-OrangeLane 7: Midoriishi-Cyan

Immunoprecipitation染色例2Anti-Midoriishi-Cyan(M116-3)

1 2 3 4 5 6 7

Lane 1: Azami-Green(3D10)Lane 2: Dronpa-Green(2F6)Lane 3: Kaede(2F4)Lane 4: Keima-Red(3C9)

Lane 5: Kikme Green-Red(2D3)Lane 6: Kusabira-Orange(2G9)Lane 7: Midoriishi-Cyan(2C1)

20

25

37kDa

Lane 1: Midoriishi-Cyan expressed E. coli cells + mouse IgG2bLane 2: Midoriishi-Cyan expressed E. coli cells + anti-Midoriishi-Cyan

1 2

Midoriishi-Cyan

Immunoblotted with PM002 (Anti-His-Tag).

11

AMAP™ Multi Site-directed Mutagenesis Kit

PCR法に基づく点変異導入法は、多くの場合1回に1箇所の変異しか導入出来ません。そのため、複数の箇所に導入するには多大な作業時間が必要となります。AMAP™ Multi Site-directed Mutagenesis Kit ではプラスミドDNAに、同時に複数箇所への任意の点変異導入が可能であり、作業時間を飛躍的に短縮します。

Day1

Day2

ポリメラーゼ、リガーゼ反応 (5hs)

酵素処理 (37℃ 1h～2hs)

Transformation (37℃ Overnight)

Plasmid 抽出

Sequence による確認

変異導入DNAの増幅

鋳型DNAの消化

Time course

１) アミノ酸の置換 a. 翻訳後修飾部位の解析

例リン酸化、アセチル化、ユビキチン化、糖鎖付加、ジスルフィド結合などの

アミノ酸置換(導入または消去)による部位特定など

b. プロテアーゼ切断配列の解析

例 Caspase認識配列の導入、消去または部位特定など

c. 化学修飾のためのシステイン残基導入など

２) 塩基配列の置換 a. 制限酵素認識配列の導入または消去

b. ノンコーディング部分の解析

例プロモーターへの変異導入

c. ストップコドンの導入または消去

例デリーションミュータントの作製

AMAP Multi Site-directed Mutagenesis Kit の実用例

ポリメラーゼ、リガーゼ反応

Multi Mutagenesis 法の原理

酵素処理

変異導入Primer

ss変異DNA

ポリメラーゼ、リガーゼ反応による増幅

★ 二本鎖を形成する鋳型由来のDNAは酵素により消化されてしまう。

ss鋳型由来DNA Temp.DNA 変異DNAと鋳型由来DNAのdsDNA

Temp. DNA pfu DNA polymerase

Taq DNA Ligase　　　（熱耐性）



CoralHue® 蛍光タンパクシリーズを生んだ遺伝子変異導入遺伝子変異導入キットです。

複数箇所同時点変異導入キット

12



ベーシック蛍光タンパク

色変換蛍光タンパク

蛍光タンパクベクターマップ

リンカー付蛍光タンパクベクターマップ

　　　CoralHue® 略称

ベクターの種類

細胞小器官構造

励起最大波長蛍光最大波長

モル吸光係数*5

量子収率*6 蛍光強度*7 pH 感受性抗体

S1*1 MC1*2 MN1*2 ヒト化*3 リンカー*4 標識ベクター (nm) (nm) (M-1cm-1) WB IP

Midoriishi-Cyan MiCy1 ○ 2量体 472 495 27250 0.9 24.5 pKa=6.6 ○ ○

mMiCy1 ○ 単量体 470 496 22150 0.7 15.5 pKa=7.0

Azami-Green AG ○ ○ 4量体 492 505 72300 0.67 48.4 pKa<5.0

○ ○

mAG1 ○ ○ ○ ○ ○ ○ 単量体 492 505 55000 0.74 40.7 pKa=5.8 ○ ○

Kusabira-Orange KO1 ○ ○ 2量体 548 561 73700 0.45 33.2 pKa<5.0 ○ ○

mKO1 ○ ○ ○ ○ ○ ○ 単量体 548 559 51600 0.6 31.0 pKa=5.0 ○ ○

mKO2 ○ ○ ○ 単量体 551 565 63800 0.62 39.6 pKa=5.5 ○ ○

Keima-Red dKeima-Red ○ ○ ○ 2量体 440 616 24600 0.31 7.6 pKa=6.5 ○ ○

dKeima570 ○ 2量体 440 570 14000 0.15 2.1 pKa=6.5 ○ ○

mKeima-Red ○ ○ ○ ○ ○ 単量体 440 620 14400 0.24 3.5 pKa=6.5 ○ ○


ベクターの種類構造

光変換波長励起最大波長蛍光最大波長

モル吸光係数*5

量子収率*6 蛍光強度*7 pH 感受性抗体

S1*1 MC1*2 MN1*2 ヒト化*3 リンカー*4 (nm) (nm) (nm) (M-1cm-1) WB IP

Dronpa-Green DG1 ○ ○ ○ 単量体 around 400 503 518 95000 0.85 80.8 pKa=5.0 ○ ○

DG3 ○ 単量体 around 400 491 514 58000 0.28 16.2 pKa=5.0 ○ ○

Kaede Kaede ○ ○ ○ 4量体 350～410 508 / 572 518 / 580 98800 / 60400 0.88 / 0.33 86.9 / 19.9 pKa=5.6 ○ ○

Kikume Green-Red KikGR1 ○ ○ ○ ○ ○ 4量体 350～410 507 / 583 517 / 593 53700 / 35100 0.7 / 0.65 37.6 / 22.8 pKa=7.8 ○ ○

/pKa=5.5

*1: サブクローニングベクター

*2: 発現ベクター

*3: 蛍光タンパク質の塩基配列を哺乳類のコドンに最適化した発現ベクター

*4: 蛍光タンパク質とMCSの間に側鎖の小さなアミノ酸の繰り返し配列で構成される24残基のフレキシブルリンカーを付加した発現ベクター

（リンカーのアミノ酸配列：TGNSADGGGGSGGSGGSGGGSTQG）

*5: モル吸光係数－蛍光タンパク質が、ある波長でどれだけ励起光を吸収できるか示す値

*6: 量子収率－蛍光の光量子数 / 吸収された光量子数

*7: 蛍光強度－モル吸光係数×量子収率 /1000

MNLinker

BamHIKpnIPstIEcoRIXhoIHindIIINotI

Kan/Neo

Pcmv

f1 ori

peptide linker

SV40 polyA

pUC ori

SV40 ori

CoralHue®

蛍光タンパク

MCLinker

pUC ori peptidelinker

SV40polyA

Pcmv

Kan/Neo

f1 ori

SV40 ori

CoralHue®

蛍光タンパク

BamHIKpnIPstIEcoRI

XhoIHindIII

NotI

peptide linkerMCS 蛍光タンパクpeptide linker MCS蛍光タンパク

S1 MN1MC1

S1 is not an expression vector.

pUC ori

SV40polyA

SV40 ori

Pcmv

Kan/Neo f1 ori

BamHIKpnIPstIEcoRIXhoIHindIIINotI

CoralHue®

蛍光タンパクpUC ori

SV40 polyA

SV40 ori

Pcmv

Kan/Neo f1 ori

CoralHue® 蛍光タンパク

PvuIIEcoRISacI

KpnISmaI

BamHINcoI

PstISphIHindIII

PvuII

NdeI

ColE1 ori

AmpCoralHue®

蛍光タンパク

KpnIPstIEcoRIXhoIHindIIINotI

BamHI

CoralHue® 蛍光タンパクシリーズチャート




蛍光タンパクベクター

*1) S1 : サブクローニングベクター*2) MC1, MN1 : 発現ベクター*3) MCLinker, MNLinker : フレキシブルリンカーを付加した発現ベクター

抗体

ベクターセットベクター種包装コードNo. セット価格

photoconvertibleセット

S1 2本 AM-VS0001 ¥ 78,000Kaede + Kikume Green-Redセット MC1 2本 AM-VS0002 ¥ 78,000 MN1 2本 AM-VS0003 ¥ 78,000

photoswitchableセット

S1 3本 AM-VS0101 ¥ 98,000Kaede + Kikume Green-Red + Dronpa-Greenセット MC1 3本 AM-VS0102 ¥ 98,000 MN1 3本 AM-VS0103 ¥ 98,000

融合蛋白質発現最適化セット

Kaedeセット MC1+MN1 2本 AM-VS0201 ¥ 78,000monomeric Azami-Greenセット MC1+MN1 2本 AM-VS0202 ¥ 40,000humanized monomeric Azami-Greenセット MC1+MN1 2本 AM-VS0203 ¥ 78,000humanized Kusabira-Orangeセット MC1+MN1 2本 AM-VS0204 ¥ 78,000monomeric Kusabira-Orangeセット MC1+MN1 2本 AM-VS0205 ¥ 78,000humanized monomeric Kusabira-Orangeセット MC1+MN1 2本 AM-VS0206 ¥ 78,000Dronpa-Greenセット MC1+MN1 2本 AM-VS0207 ¥ 78,000Kikume Green-Redセット MC1+MN1 2本 AM-VS0208 ¥ 78,000humanized Kikume Green-Redセット MC1+MN1 2本 AM-VS0209 ¥ 78,000

Azami-Greenセット MC1+MN1+MNLinker+MCLinker 4本 AM-VS0210 ¥120,000Kusabira-Orangeセット MC1+MN1+MNLinker+MCLinker 4本 AM-VS0211 ¥120,000Kikume Green-Redセット MC1+MN1+MNLinker+MCLinker 4本 AM-VS0212 ¥120,000

Amalgaam社製品一覧


ベクターの種類

細胞小器官標識ベクター

S1*1 MC1*2 MN1*2 MCLinker*3 MNLinker*3 ミトコンドリア小胞体細胞膜核質

Midoriishi-Cyan MiCy1 AM-V0061 mMiCy1 AM-V0111

Azami-Green AG AM-V0021 AM-V0214 mAG1 AM-V0031 AM-V0032 AM-V0033 AM-V0201 AM-V0202 AM-V0203 hmAG1 AM-V0034 AM-V0035 AM-V0036 AM-V0039 AM-V0030

Kusabira-Orange KO1 AM-V0041 AM-V0234 mKO1 AM-V0051 AM-V0052 AM-V0053 AM-V0221 AM-V0222 AM-V0223 mKO2 AM-V0141 hKO1 AM-V0044 AM-V0045 AM-V0046 hmKO1 AM-V0054 AM-V0055 AM-V0056 AM-V0059 AM-V0050 hmKO2 AM-V0145 AM-V0146 AM-V0149 AM-V0140

Keima-Red dKeima-Red AM-V0101 dKeima570 AM-V0121 mKeima-Red AM-V0091 AM-V0093 AM-V0251 AM-V0253 hdKeima-Red AM-V0104 AM-V0109 AM-V0100 hdKeima570 AM-V0124 hmKeima-Red AM-V0094 AM-V0099 AM-V0090

Dronpa-Green DG1 AM-V0071 AM-V0072 AM-V0073 DG3 AM-V0131

Kaede Kaede AM-V0011 AM-V0012 AM-V0013

Kikume Green-Red KikGR1 AM-V0081 AM-V0082 AM-V0083 hKikGR1 AM-V0084 AM-V0085 AM-V0086 AM-V0089 AM-V0080

コードNo. 製　品　名容量価格 (税別)

AM-1100 CoralHue® 1 system ¥ 128,0004690 APOPCYTO™ Annexine V-Azami-Green 100 assays ¥ 50,000AM-1001 AMAP™ Multi Site-directed Mutagenesis Kit 20 tests ¥ 88,000

キット

ベクター種包装コードNo. セット価格

多量体and単量体セット

四量体 + 単量体 Azami-Greenセット S1 2本 AM-VS0301 ¥ 40,000二量体 + 単量体 Kusabira-Orangeセット S1 2本 AM-VS0302 ¥ 78,000二量体 + 単量体 humanized Kusabira-Orangeセット S1 2本 AM-VS0303 ¥ 78,000二量体 + 単量体 Keima-Redセット S1 2本 AM-VS0304 ¥ 78,000

FRETセット

Kusabira-Orange + Midoriishi-Cyanセット S1 2本 AM-VS0401 ¥ 78,000monomeric Kusabira-Orange+monomeric Midoriishi-Cyanセット S1 2本 AM-VS0402 ¥ 78,000

コドン検討セット（オリジナル + ヒト化セット）

S1 2本 AM-VS0501 ¥ 55,000monomeric Azami-Greenセット MC1 2本 AM-VS0502 ¥ 55,000 MN1 2本 AM-VS0503 ¥ 55,000

Kusabira-Orangeセット S1 2本 AM-VS0504 ¥ 78,000

S1 2本 AM-VS0505 ¥ 78,000monomeric Kusabira-Orangeセット MC1 2本 AM-VS0506 ¥ 78,000 MN1 2本 AM-VS0507 ¥ 78,000

S1 2本 AM-VS0508 ¥ 78,000Kikume Green-Redセット MC1 2本 AM-VS0509 ¥ 78,000 MN1 2本 AM-VS0510 ¥ 78,000

WB : Western blottingIP : Immunoprecipitation

製品名使用法コードNo.

Anti-Azami-Green WB M102-3Anti-Azami-Green IP M103-3Anti-Azami-Green WB PM011Anti-Kikume Green-Red WB M128-3Anti-Kikume Green-Red IP M129-3Anti-Kusabira-Orange WB M104-3Anti-Kusabira-Orange IP M105-3Anti-monomeric Kusabira-GreenN-terminal fragment

WB M148-3

Anti-monomeric Kusabira-GreenC-terminal fragment

WB M149-3

Anti-Dronpa-Green WB M117-3Anti-Dronpa-Green IP M118-3Anti-Kaede IP M106-3Anti-Kaede WB M125-3Anti-Kaede WB PM012Anti-Keima-Red WB M126-3Anti-Keima-Red IP M127-3Anti-Midoriishi-Cyan IP M116-3Anti-Midoriishi-Cyan WB M130-3

容量 : 20 μg価格(税別) : AG, mAG(アンダーライン) ¥ 28,000 他 ¥ 49,000

容量 : PM011,12 (Polyclonal) 100 μL 他 (Monoclonal) 100 μg価格(税別) : ¥ 48,000

記載されている価格は、非営利団体のお客様向けです。営利団体に所属されるお客様につきまして別途契約が必要となりますので下記連絡先までお問い合せください。学術部基礎試薬グループ　TEL: 052-238-1904 　　E-mail: [email protected]

®　　　　　蛍光タンパクシリーズは独立行政法人　理化学研究所　脳科学総合研究センター　細胞機能探索技術開発チーム（宮脇敦史チームリーダー）との共同研究で開発されたものであり、MBLが実施権を有しＡmalgaamにライセンスされています。

参考文献

Kaede

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Azami-Green

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2) Shaner N.C. et al., Nat. Methods 2, 905-909 (2005)

3) Karasawa S. et al., J. Biol. Chem. 278, 34167-34171 (2003)

Kusabira-Orange

1) Sakaue-Sawano A. et al., Cell 132, 487-498 (2008)

2) Livet J. et al., Nature 450, 56-62 (2007)

3) Goedhart J. et al., PLoS ONE 2, e1011 (2007)

4) Niwa H. et al., Cell 123, 917-929 (2005)


6) Karasawa S. et al., Biochem. J. 381, 307-312 (2004)

Midoriishi-Cyan

1) Kogure T. et al., Nat. Biotechnol. 24, 577-581 (2006)


3) Karasawa S. et al., Biochem. J. 381, 307-312 (2004)

Keima-Red

1) Kogure T. et al., Nat. Biotechnol. 24, 577-581 (2006)

AMAP

1) Sawano A, Miyawaki A. Nucleic Acids Res. 28(16) E78 (2000)

17

製造・発売元

〒173-0004 東京都板橋区板橋2-9-3埼京ビル4階

TEL (03)5943-2311

140023-8041030S

販売元

◎学術部基礎試薬グループ〒460-0008　名古屋市中区栄4丁目5番3号 KDX名古屋栄ビル10階TEL :（052）238-1904　FAX :（052）238-1441E-mail : [email protected]

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CoralHue® Midoriishi-Cyan

CoralHue® Kusabira-Orange

CoralHue® Kaede

CoralHue® Keima-Red

CoralHue® Kusabira-Green

CoralHue® Kikume Green-Red

CoralHue® Azami-Green

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Bright Orange

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