Control de microorganismos
Los microorganismos ofrecen diversos beneficios a la sociedad en
diferentes formas. En otro aspecto son tambin los microorganismos
un vehculo para la produccin de enfermedades, por la produccin de
toxinas propiamente dichas o metabolitos txicos. Adems de daos en
cultivos, descomposicin de alimentos y enfermedades en animales. Es
por esto que el ser humano ha buscado los procedimientos necesarios
para destruir o controlar el crecimiento de los microorganismos
perjudiciales.
Por qu debemos controlar la extensin y proliferacin de los
microorganismos?
Podramos argumentar que se trata de un tema de Salud Pblica,
puesto que el objetivo fundamental es prevenir la transmisin de la
infeccin, as como impedir que los materiales utilizados en los
procedimientos mdicos (y en general, todos los materiales) estn
contaminados y puedan propagar una posible infeccin.Sin embargo, el
control microbiolgico es tambin importante en otros mbitos. Por
ejemplo, en los laboratorios de Microbiologa, donde una simple
contaminacin de una muestra puede alterar pruebas, tanto en el
mbito diagnstico como el de la investigacin; o a nivel econmico
(contaminacin del agua, de cultivos, de ganados, etc. que supone
una importante prdida de materiales.
DEFINICIONES IMPORTANTES: Muerte microbiana: Prdida irreversible
de la capacidad de reproducirse.
Esterilizacin: Proveniente del latn sterilis incapaz de
reproducirse. Proceso por el cual las clulas vivas, esporas
viables, virus y viroides destruidos o eliminados de un objeto o
hbitat.
Desinfeccin: Destruccin, eliminacin o inhibicin de los
microorganismos que pueden producir enfermedad de una superficie u
objeto. Se mantienen viables las esporas
Germicida: Terminacin _cida del latn que significa destruir. Es
un agente que puede destruir microorganismos patgenos y muchos no
patgenos pero no necesariamente esporas. (Bactericida, fungicida,
viricida)
Terminacin _statico: proveniente del griego statikos que causa
detencin, agente con capacidad de inhibir el crecimiento
microbiano, pero sin matarlos. (Bacteriosttico,
fungisttico)Condiciones que influyen en la eficacia de un
antimicrobiano:La destruccin de los microorganismos y la inhibicin
del crecimiento no es un proceso simple, debido a que la eficacia
de un agente antimicrobiano es afectada por 6 factores:1. Tamao de
la poblacin: Debido a que la muerte es exponencial, una poblacin
muy grande requiere de mayor tiempo.2. Composicin de la poblacin:
la eficiencia del antimicrobiano vara considerablemente con
respecto a la naturaleza de los organismos que son tratados porque
su susceptibilidad es distinta. Por ejemplo: las endosporas
bacterianas son ms resistentes que las clulas vegetativas, las
clulas jvenes mueren con mayor facilidad y algunas especies
soportan mejor condiciones adversas.3. Concentracin o intensidad
del agente antimicrobiano: A menudo, pero no siempre, entre mayor
sea la concentracin del agente qumico o ms intenso agente fsico, ms
rpidamente se destruyen los microorganismos. Pero generalmente la
eficiencia no est relacionada con la concentracin o intensidad.
(Alcohol)4. Tiempo de exposicin: cuanto ms tiempo se exponga una
poblacin a un determinado agente, ms organismos se destruirn5.
Temperatura: A menudo, un aumento en la temperatura aumenta la
actividad de un agente qumico.
6. Entorno: la poblacin que se quiere destruir no se encuentra
aislada, est rodeada de diversos factores ambientales que pueden
protegerla o facilitar su destruccin. Por ejemplo: el calor es ms
efectivo en un medio cido, la materia orgnica les da proteccin
contra el calor y los desinfectantes qumicos.
Modo de accin de los antimicrobianos:
Alteracin de la permeabilidad de la membrana citoplasmtica Dao a
la pared celular o inhibicin de la sntesis de sus componentes
Alteracin del estado fsico qumico de las protenas y cidos
nucleicos, o inhiben su sntesis Inhibicin enzimtica
Condiciones que afectan la efectividad de agentes
antimicrobianos Tamao de la poblacin Composicin Concentracin del
agente antimicrobiano Tiempo de exposicin Temperatura Condiciones
ambientales locales
Control de agentes Fsicos
Por Calor:La temperatura, junto con la humedad, es uno de los
mtodos ms efectivos para acabar con los microorganismos. Por eso
distinguimos dos tipos de calor, en funcin de la presencia o no de
humedad en el ambiente. El calor hmedo, al favorecer la evaporacin
del agua la transmisin de calor, tiene una mayor efectividad por la
coagulacin de las protenas y su inactivacin.
Calor Seco: Incineracin: destruccin de los microorganismos por
exposicin a una llama. Es un mtodo que asegura esterilidad, y es
usado rutinariamente en los laboratorios de Microbiologa (mecheros
Bunsen) y en la eliminacin de residuos hospitalarios. Horno Pasteur
(Aire Caliente): un horno con un ventilador que se mantiene a una
temperatura entre 160 y 170 C. Se utiliza para esterilizar material
de vidrio de laboratorio y aceites varios.Calor Hmedo: Autoclave:
es una cmara metlica que se cierra hermticamente, donde, aumentando
la presin a 2 atmsferas, la temperatura de ebullicin es de 121 C, a
partir de la cual es capaz de eliminar las esporas bacterianas. Es
posible tambin dejar abierta la llamada "llave de purga" del
autoclave, con lo cual la desinfeccin se producir a presin
atmosfrica. Sin embargo, las esporas no seran eliminadas en este
caso.
Pasteurizacin: mecanismo para eliminar microorganismos de
ciertas bebidas (leche, vino, cerveza...). No elimina la totalidad
de los microorganismos, sino que busca acabar con la Brucella y las
micobacterias, sometiendo las bebidas a temperaturas de 70 C.
Existe tambin el mtodo UHT (Ultra-High Temperature), mediante el
cual se somete a la leche a 148 C durante dos segundos, suficiente
para esterilizarla sin desnaturalizar las protenas de la leche).Por
Filtracin
Filtros HEPA (Aire Particulado de Alta Eficiencia) que retienen
partculas y microorganismos del aire de una campana de flujo
laminar.
Filtros de membrana: se usan en la esterilizacin de lquidos y en
el anlisis microbiolgico de los mismos.
Por Radiacin:
Radiaciones ionizantes: utilizados para esterilizar (despus de
embalados, en las fbricas) los materiales quirrgicos, frmacos, etc.
a temperatura ambiente. Radiaciones no ionizantes: se utilizan para
reducir la poblacin bacteriana en los quirfanos, cuartos de
almacenaje de material sanitario y superficies contaminadas en la
industria alimentaria. A diferencia de la radiacin ionizante,
solamente ataca a los microorganismos en la superficie
Mtodos fsicos de control microbiano
Calor:TDP, termal death point (T ms baja necesaria para destruir
una suspensin microbiana en 10 minutos)TDT, termal death time,
(tiempo mpas corto necesario para destruir una suspensin microbiana
a una T y condiciones especficas)D, decimal reduction time (tiempo
requerido para matar el 90% de microorganismos y esporas de una
muestra a una T especfica)
Autoclave 15 min a 121oC por 15 min (usualmente) Pasteurizacin
(63oC por 30 min) Otras variantes:Flash, (72oC por 15 seg)
Ultrahigh (150oC por 1-3 seg) Esterilizacin seca (160-170oC por 2-3
hrs) Filtracin: filtros (HEPA, high-efficiency particulate air
filters) Radiacin: UV
Principios de diagnstico en microbiologa mdica
Comunicacin entre el mdico y el laboratorio. No existe un solo
mtodo que permita aislar todos los microorganismos patgenos. El
mdico debe proporcionar informacin clnica al laboratorio a fin de
que pueda realizarse la tcnica ms adecuada para aislar determinado
microorganismo. Los procedimientos microbiolgicos de laboratorio
son lentos, ya que se manipulan organismos vivos y no simplemente
productos qumicos. Teniendo en cuenta que a menudo no es posible
retardar el tratamiento en espera de los resultados, es por tanto
esencial la obtencin de las muestras de productos patolgicos antes
de iniciarse el tratamiento.Condiciones generalesLas condiciones
generales que debe reunir una muestra de productos patolgicos para
el examen microbiolgico son los siguientes:Obtener suficiente
cantidad de la muestra.La muestra debe ser representativa del
proceso infeccioso.Emplear equipo estril y medidas de
asepsia.Transportar inmediatamente la muestra al laboratorio o en
su defecto conservarla adecuadamente.Obtener las muestras antes del
empleo de drogas antimicrobianas.Rotular adecuadamente la muestra y
acompaarla de la informacin que se desea as como de los
antecedentes clnicos necesarios.Demostracin de un agente
infecciosoLos exmenes de laboratorio generalmente incluyen el
estudio microcsmico de materiales frescos teidos y sin teir, y la
preparacin de cultivos bajo condiciones ambientales que sean
adecuadas para el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismo, incluyendo el tipo de organismo que ms se sospecha
de acuerdo con los datos clnicos. Si el microorganismo es observado
o aislado se notifica al mdico un informe preliminar.
Posteriormente se llevar a cabo la identificacin completa mediante
pruebas bioqumicas o sexolgicas. Finalmente puede probarse la
susceptibilidad del microorganismo aislado a las drogas
antimicrobianas.SangreEn el paciente febril, con o sin sntomas o
signos de localizacin, el hemocultivo es la prueba ms til para
demostrar la presencia de infeccin sistmica. En las personas sanas,
los cultivos de sangre obtenidos correctamente permanecen estriles.
Aunque ocasionalmente pueden ingresar en la sangre microorganismos
de la flora microbiana normal, son eliminados rpidamente por el
sistema reticuloendotelial el aislamiento de un microorganismo en
un hemocultivo es un hecho de gran valor clnico, siempre y cuando
se haya descartado la posibilidad de un error tcnico. Los
siguientes criterios pueden ayudar a determinar la significacin de
los microorganismos diferentes:Desarrollo del mismo tipo de
microorganismo en cultivos repetidos: bacteriana.Pequeo nmero de
varios microorganismos diferentes: sugestivo de
contaminacin.Aparicin en un solo de varios hemocultivos, de grmenes
de la flora normal de la piel (estafilococos, corinebacterias)
:sugestivo de contaminacin.Los microorganismos relacionados con
determinado cuadro clnico son muy factibles de tener significacin
etiolgica (por ejemplo,estreptococos viridans y endocarditis).Para
el examen adecuado de la sangre se debern seguir los siguientes
pasos:Recoleccin apropiada de la muestra.Cultivo.Recoleccin
apropiada de la muestraExtraccin de 10 ml de sangre con jeringuilla
estril y seca, previa limpieza y desinfectacin de la piel.
Desinfeccin con yodo y flameado de la superficie de la tapa
perforable de un frasco con 100 ml de caldo infusin de corazn. El
objetivo es obtener una relacin sangre medio de cultivo de 1:10 a
fin de diluir las sustancias con actividad antimicrobiana presentes
normal o artificialmente en la sangre. Introducir la sangre extrada
en el frasco con caldo y mezclar suavemente. Cuando no pueda
llevarse el frasco inoculado inmediatamente al laboratorio o
dejarse a temperatura ambiente.CultivoEl frasco se colocar en una
incubadora a 37 oC. Se har observacin macroscpica diaria y
resiembra inmediata a placa de agar sangre cuando se observe
turbidez, resiembra al tercer y dcimo da an en ausencia de signos
macroscpicos de positividad. Se identifican los crecimientos que se
obtengan en las placas de medios de cultivo y se realiza
antibiograma a los grmenes patgenos. En casos especiales, como
cuando se sospecha brucelosis, se utilizan medios de cultivos
especficos (Ruiz - Castaeda) y la incubacin puede prolongarse hasta
30 das.
Lquido cefalorraqudeoEl diagnstico rpido y preciso de meningitis
tiene gran importancia por sus implicaciones en el tratamiento y
pronstico de la enfermedad. Es muy urgente la diferenciacin entre
la meningitis bacteriana purulenta y la meningitis no bacteriana.
La decisin inmediata se basa en el examen citoqumico del LCR (nmero
y tipo de clulas, contenido en glucosa) y en la bsqueda microscpica
de microorganismos. Las bacterias que ms frecuentemente causan
meningitis son el neumococo, el meningococo y el Haemophilus
influenzae, esta ltima sobre todo en nio.Recoleccin de la muestraSe
recoger el LCR mediante puncin lumbar practicada con precauciones
de asepsia. Se recoger un tubo estril, teniendo cuidado de evitar
el humedecimiento de los tapones si son de algodn. La muestra deber
procesarse de inmediato, las que sean tomadas fuera del horario de
trabajo del laboratorio sern conservadas a 37 oC. todas las
muestras sern centrifugadas y decantadas.Examen microscpicoLuego
que la muestra es centrifugada y decantada con el sedimento se
procede a realizar el examen que donde se hacen frotis que se tien
por la coloracin de Gram y ocasionalmente por la de ZIL Neelsen,
esta ltima tincin est particularmente indicada si se forma una
pelcula en la superficie del LCR, que atrapa los microorganismo
acidorresistentes. Los criptococos son hongos levaduriformes
encapsulados que reobservan mejor en preparaciones de tinta
china.CultivoEl sedimiento se siembra en una placa de agar
chocolate que se incuba a 37 oC en una atmsfera de 10 % de CO2. Se
identifican los crecimientos obtenidos y se realiza antibiograma a
los grmenes patgenos.OrinaEl examen bacteriolgico de orina se hace
cuando hay signos o sntomas de infeccin de vas urinarias,
insuficiencia renal o hipertensin de vas urinarias. La orina
excrementada por el rin y la de la vejiga son estriles. Sin
embargo, la uretra contiene una flora microbiana normal que
contamina la orina a su paso, de tal manera que la orina por miccin
espontnea contiene un pequeo nmero de bacterias. Debido a que es
necesario distinguir los contaminantes de los organismos
etiolgicamente importantes, slo el examen cuantitativo de orina
puede dar resultados significativos.Recoleccin de la muestraDebido
al peligro de introducir microorganismos en el interior de la
vejiga, la caracterizacin debe evitarse siempre que sea posible. Se
pueden obtener muestras satisfactorias por miccin natural,
limpiando los genitales con agua y jabn, y colectando la orina a la
mitad de la miccin en un recipiente estril. Debe preocuparse
recoger la primera orina de la maana, a fin de que los
microorganismos hayan tenido tiempo de multiplicarse en la vejiga.
Si la muestra no se puede enviarse de inmediato al laboratorio o su
transporte va a demorarse, se deber conservar la orina en
refrigeracin.Urocultivo cuantitativoSe siembra una cantidad medida
de orina en la superficie de una placa de agar sangre y el nmero de
colonias que aparezcan se cuentan para obtener el nmero de
bacterias por ml, despus de multiplicarse por el factor de dilucin.
Se acepta que la presencia de ms de 100 000 microorganismos por ml
a partir de una muestra de orina colectada correctamente,
constituye una fuerte evidencia de menos bacterias, se considera
dudoso el examen y est indicado repetirlo. Cuando se encuentran
menos de 10 000 bacterias, ya que se considera que proviene de la
flora normal o son contaminantes.Demostracin de anticuerpos
especficosEn el curso de muchas infecciones se adquieren
anticuerpos sricos en forma relativamente precoz, a medida que se
multiplican los microorganismos, que pueden persistir por meses o
aos. La demostracin sexolgica de un anticuerpo indica exposicin
efectiva (por infeccin o vacunacin) en alguna poca del pasado, pero
puede no tener relacin con la enfermedad actual. Para el diagnstico
de una infeccin es frecuentemente necesario demostrar un aumento
significativo en la concentracin de anticuerpos, es decir, una
elevacin en el ttulo de anticuerpos en la segunda de dos muestras
de sangre obtenidas con un intervalo de 15 20 das.Fuente
