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Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II
11 Juillet 2006
Stéphanie COCHAUD
Curriculum Vitae
2005-2006 : Master 2 Recherche Biologie, Santé et Agronomie. Mention B
2004-2005 : Master 1 Biologie, Santé et Agronomie.
Parcours : Biologie Moléculaire et Génétique. Mention B
2003-2004 : Licence Physiologie, Biologie Cellulaire et Moléculaire. Mention B
2001-2003 : DEUG Sciences de la Vie. Mention B
Stages réalisés :
Master 1: Laboratoire des Biomembranes et signalisation (CNRS-UMR 6187)
Pôle Biologie Santé, POITIERS
Master 2 : Laboratoire Interactions et communications cellulaires (CNRS-UMR
6187) Pôle Biologie Santé, POITIERS
Stages Master 1et Master 2
Sujet de Master 1 : Régulation de l’expression de gènes de facteurs transcriptionnels lors de la différenciation des cellules
de neuroblastomes SH-SY5Y induite par le VIP.
Sujet de Master 2 : Modification de l’expression génique dans la lignée cellulaire tumorale pulmonaire NCI-H157 après réexpression de la sémaphorine SEMA3F
Formation : - Culture cellulaire
- RT-PCR classique et quantitative
- Séquençage
- Immunofluorescence
- Dosage ELISA
- Western blot
Projet de recherche
Fonction anti-métastasique de KAI1/ CD82, une protéine de la famille des tétraspanines
Les tétraspanines
Forment une superfamille de protéines
Impliquées dans de nombreuses fonctions
Levy et Shoham, Physiology (2005).
La tétraspanine KAI1/CD82
Identifiée au cours de l’étude de l’activation des cellules T
Protéine ubiquitaire
Impliquée dans la cancérogénèse
Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82
Intégrine α6β1
KAI1/CD82
Intégrines β1
Baisse de la dégradation de la matrice extracellulaire
MMP9
Jee et al., BBRC (2006)
Baisse de l’adhérence cellulaire
He et al., J. Biol. Chem. (2005)
Src
CAS
FAK
Inhibition de la migration cellulaire
Sridhar et Miranti, Oncogene (2006)
P
P
P
Problématique
Quels sont les mécanismes intervenant dans l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ?
Les objectifs
1. Etudier in vivo l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82.
2. Déterminer les mécanismes moléculaires mis en jeu
Approche in vivo
Réexpression de KAI1/CD82
Cellules parentales : PC3
Clones contrôle
Clones réexprimant KAI1
pCDNA3.1-KAI1
pCDNA3.1-KAI1
(vecteur vide)
Sélection des clones par G418
Expression de KAI1 par Western blot et par FACS
Etude in vivo de la réexpreesion de KAI1
Clones réexprimant KAI1
Clones contrôle
Injection sous cutanée
Etude de la formation des métastases
Etude du volume de la tumeur
Etude de la vascularisation de la tumeur
Souris nude BALB/c
Résultats attendus
- Absence de métastases après réexpression de KAI1/CD82
- Volume tumoral inchangé après réexpression de KAI1/CD82
- Vascularisation tumorale inchangée après réexpression de KAI1/CD82
L’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ne serait pas du :
- à une activité anti-proliférative
- à une activité anti-angiogénique
Mais, en empêchant la migration et l’invasion cellulaire.
Approche in vitro
Etude de la migration cellulaire
KAI1/CD82
Intégrines β1
Src CAS
FAK
Réorganisation de l’actine (migration cellulaire)
? Perte de l’adhérence :(- test d’adhérence)(- test de migration)
P
P
P
DOCK180 CrkCAS
P
Rac-GDPRac-GTP
(Immunofluorescence)
Anticorps P5D2
Anticorps 8A2
(Immunoprécipitation)
(Pull-Down)
?
Résultats attendus
- Perte d’adhérence et perte de la migration cellulaire
- Inhibition de la voie Src/FAK/CAS/Dock 180
- Diminution de l’activité des petites protéines G
- Modifications de la morphologie cellulaire
Mise en évidence de KAI1 dans l’inactivation d’une voie de signalisation impliquée dans la migration cellulaire.
Conclusion
Utilisation de 2 approches (in vivo et in vitro)
Activité anti-métastasique de KAI1
Meilleure compréhension de KAI1
Perspectives :
Quelles sont les parties structurales nécessaires à la fonction de KAI1?
Quels sont les facteurs entraînant la perte d’expression de KAI1?
Merci de votre attention
KAI1/CD82 : un supresseur de métastases
Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82
Liu et Zhang, Cancer Letters (2006)