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sebastienne-lejeune
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Comment obtenir une tomate résistante à
l’écrasement?
Avant de répondre à la question, sache que l’enzyme polygalacturonase (PG) joue un rôle dans la sensibilité des tomates à l’écrasement.
Si on diminue la quantité de cette enzyme dans les cellules de tomates, celles-ci seraient plus résistantes.
Mais comment faire?
Nous allons voir plus loin toutes les étapes qui mènent à la production des tomates résistantes à l’écrasement.
Il faut diminuer la quantité de PG dans les cellules en inhibant son gène par son ARN anti-sens. =
ARN PG
anti-sens
Étape 1Cloner l’ARN anti-sens de la PG dans le MSC.
Vecteur binaire
Sais-tu comment transférer le vecteur binaire dans les cellules de tomates?
L’introduire directement dans Agrobacterium?
En fait, non! Il faut passer par la bactérie E.coli qui nous sert d’intermédiaire.
Sais-tu comment s’appelle la technique utilisée pour ça?
???
???
Étape 2On transfert le vecteur binaire dans la bactérie E.coli par trans- formation.
Transformation
Bactérie E.coli
Sais-tu comment on fait la sélection des bactéries E.coli transformées?
Pousser les bactéries sur un milieu avec un antibiotique?
Et oui! Le vecteur binaire possède un gène de résistance à un antibiotique et seulement les bactéries transformées seront résistantes.
Sélectionner
le gène par
PCR?
Étape 3Transfert du vecteur binaire de E.coli vers Agrobacterium par la conjugaison entre les deux bactéries.
Et c’est la bactérie Agrobacterium qui transfert le vecteur dans les cellules de plantes…
Étape 4Découper une feuille d’un plant de tomate et déposer les morceaux dans un pétri d’agar nutritif.
Étape 5
Ensuite, on infecte ces
cellules avec une
solution contenant
Agrobacterium.
Les cellules brisées par le découpage se
dédifférencient et redeviennent des cellules
embryonnaires.Merci!!!
Mais comment fonctionne le
gène anti-sens?
Gène PG anti-sens
Gène PG normal
ARN PG anti-sens
ARN PG normal
L’ARN PG anti-sens
s’hybride avec l’ARN PG
naturel pour ainsi
bloquer la traduction et
donc empêcher la
synthèse des protéines
PG.
Et comme il n’y a plus de protéine PG, les tomates transgéniques sont maintenant résistante à l’écrasement!
???
???
Malheureusement, les tomates transgéniques ne sont pas plus résistantes à
l’écrasement.
Et vous, savez vous pourquoi???
Sais-tu pourquoi?
???
??????
???
Toutefois, les cellules expriment bien l’ARN anti-sens et il y a moins de protéines PG
formées.
Mais la PG n’est sans
doute pas la seule
enzyme impliquée dans
le processus de
mûrissement.
Vous saviez qu’Agrobacterium est grandement utilisée en biotechnologie?
Résistance
aux
insectes
Résistance aux virus
Manipulation génétique
des pigments
Résistance aux herbicides
Autres…
Stéphanie Roy
Cours EDU 7492
UQAM18 octobre 2003