Upload
le-minh-duy
View
218
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Chondrogenic Differentiation of Human ADSC in TGF-beta3 in Pellet Culture System
Citation preview
������������������� ����������������� ������������������������������������������ ��!�"�#�$����%������&�'����#��!�����(����������
������������� ���������������������������������
�
��������������� ��������� ���������������
���������� ���������������������� ��!���������� ��"����
�������������������������� �!� �"���#$������$�%�� ��&������� �'��������������� ���� �����
(�������������%������
�#�� ���$#%������
) *��� ����� ����� +��� ���� ��"� � %���� %%������ ���*���� +��� ����� *�,*�� ������� ��� ���%-����+� �� �
%%��������� ���� "���*�� ������&���� ��"�� ���� ��������� %��� ���� ������&� �� � ���*�� ����������� �*����
� ����� ���*�� �� ��� ����������� ��*��� �%�������&���� ����� �����+���+ �� %%���������� ��������� %���
���*������������������������������* &������� �����������%�����*�����*�*�����*��� ��������*��+����
�"������� � %��� ��� ������ ��������� �%� � ����- ��"� � ����� ����� .)/�0�1� �� ������� *��*��� �&�����
������ �+�������%���������+���%����-�2(�.345-2(1��
&��� �������&������
�*���� )/�0�� +���� ������ � %���� �*�*�����*�� � ����� ���*�� �� � ����� � +��� ����������� �&��� ���
���*��&�������� ����� � %��� ���� �*�%��� �������� +��� ���� �� �� ��� ��� ������� �� ���� ������ 3���
������ ������+���������� �+������ �������� *����*��������� �+���345-2(����������*��*����&�����
�� ����"���� ��%������� �&��������������������+���*�� � ����"��*���� �������������%���������&����+���
����� ��*��� ���*������������ ����� � ���%���� � %��� ���� ����������� �%� �������6���%� �&��� ���
���������� ����������)��������� ��������%����*�����*�����+�������� �!3-70!�����,*���
'�������
0��� ��������� �%� )/�0�� �� ������� *��*���� � *� � �&� 345-2(� ���+��� %������ ���������� �� �
��*������������ ����� �� ���+� � �������� �%� �&���� �������� �8������*���� ����8� ���������� ��
���������!3-70!�����&����%�������������8���������*����� �&���������������� ������������������%��� �
����� *�����%�������� ��&��������&��������- ����&�*��*���*�������*������+���345-2(����
����������
345-2(�������� ���� ����������%�)/�0����������*��*����&������9���*������������*�����*�*�����*��
� ����������������*� �����8��������� �����%������������������*������������
(�"�� ��)) ������0��� ��������������������3��*�������������345-�2(�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
������������ ���������������������� ���������������� ��������������������� �����������)���� ���������#(��!��*�!�+,��-����,���%�.&�/�0!�+,��-����,���1��&��2��!� ��������32���2��������
������������ ��������������������������������� ������� ���� ���������������� ��������������������� �����������
!�������� ��"�#�� ��$$�����%���������� ���������������� ��������������������� ������������
��
��������������� ��������� ������������������ ��!�������
������������� ������������������������������ ���
��� ��������0�������� ���*�� ������ ���� �������+��� + ��
���������%����&�������� .�1��:���������������
�� ���*��� �%� ������� �� ���� ���*���� �������� ��
���� ����� ������ �*��� �%� �����&�� �%����
���*������ ��������"��;���� ���������
0�������� ���*�� �� ��� �"��*����� ���*����
���*��+������� �����&�%������%-�������.�1��
0*������ ��������������� �� %����������� ���*��
�;*������* ����� �������"�����*���� ����
������� ���*�� ��� ������� ���%���*��� �%�
���� �*���� ���� ������ ��������������� �%�
�*������*���� � ��������� �������� ����
���%���� 3��� ����� ������ ����� ����������
%��� ��� ���*���� �������� ������ �� ��� ������
���� ������%���*���+���������*���� ����
����� �� ��� �������� ��� ���*����� ��������
������������ .(1�� 9���� ����� �%� ������
���������� ���+� �������� ���&� ��� � ���
%�������� �%� %���*�� ���*��� ���������� �� �
%*������ �������� ����������� .<-=1�� ���
� ���� ���� ������ � ���*�� �� ������
�*�������� ��>�� ���� ����������
�����������%�����������*���������������� ���
�����������������-������*������.?1���
!�����&����&��%%�������"�������*� ����>���
��� ������ ���*���� �������� ������� �&�
����������������%��*������*����� ��&�����)�
��;��� �������� �%� �*���� ��� ��&���� ��
*��*���������������������%� � %%�����������
��� � ����� �*������*�� ��� ��&���
��������������� ���� ����� ������� � +���
���%���� ����-���� ���� �&� �� � ����
��������%�������������������� �� ���� ;����
.�1�� 3�*��� ��� ��������"�� ���� ��*��� ��
�������&�%��������������%�����������
������&���� ����� ����� .��0�1����" �� ��
��*���%���%���������� �����%� %%����������
.@�� ��1�� ���������"�� �� ��� .��1� �� � ����
������&�.��1��3������������������������������
��0�� ��� ��� ������ � %���� "���*�� � *���
������&���� ���*��� �*�� ��� ����� �����+�
.�(1���������*��.�<1���&��"*��.�A1���>�������
�*���� .�=1�� � ����� ���*�� .�?1�� ����� .��1��
���� �.�@1��� ������*���������.��1��
������&��������������+������ ������
��������� ���� �������� �� ���&� ���*��� �%� ����
�� &��3������%������ ��������*����������*����
�������� ���*���� �*� � ��� ���"���� ����&� ��
������ ,*������� +��� ������ �������&� �%�
���� �&� �� � ���%����� �����&� .��1�� ���
� ����� ���� *�������� � �� &��-���� �
�������� ���� *���� ��>�� � ����� ���*�� ���
������"����*���%���������������� �������
�%������&������� �����*������ �����.��1��
3���� *�����%���� ����������%�)/�0��
�������� ��� ��,*��� �� ��*� � � ���� ������
����*��� ������� *��*��� ��� �� (-/��������� .(-
/1� �& ������ .�(1�� 7������ *��*��� �&����� �����
+��� �������&� ����� � ��� �� ����� � %���
���"������ ���� ������&�� �� *������ �%�
��� ��&���� ��� ������ .�<1� ����+�� ���-� ����
����������� �������*�� ��� ������ ����� �*�� ��
����������� �� �������� *���� ����&���
�"���������.�A1��
��+�"���� ���� ���� ��%�*������ �� ����
�*%%����%�������� *�����%���� ����������
3��� ��� ������ %%���������� �%� ����
)/�0�� ��,*�� � ���� ������ ����"�� %�������
���&���* �����"�����+�������"���*�����+���
%������ �*�� ��� ����������������� ������-��
�� �-(�.�=���?1����+������������%���������+���
%����-B�� �� � B�� .���� �@1� ��� � *��
������&���� ����� ����� ��� %%��������� ����
��� ��&����*� ���������*��*����� ������
3��� �����%������ ���+��� %����-B(� �� ����
��������� ���+��� %����� %��� ���������
��� ��������� ��� ����� .(�1�� 3��� ���+���
%����� ���� ���%����&� ������ � ��8-@�
�8�������C� ��+�"���� 345-� B(� ������ ������
� *��� �*���� ����� �����+- ��"� � �����
����� ���� ������� � ��� ��&��� .(�1�� 3���
�%%��� �%� 345-� 2(� ��� ��� ��������� �%�
)/�0�� �� ������� *��*��� �&����� ���� ���� &���
����� ���� � �� 3����%����� �� ���� ��* &� +��
� � ������������� �*��*��������*�*�����*��
� ����� ��"� � ����� ����� �� � �"��*����
��� ������ %%���������� ��������� �%�
)/�0�����������*��*����&������*����345-�2(��
&��� �������&������������������ ��
�*���� �*�*�����*�� � ����� ���*�� +���
������ � %���� ������&� ������ .�D��C� ���E� �<-
A�1�*� ����������������*����&���) ��������*��+������ ����������������
.�-�� ��(1�� +���� � +��� ���������-�*%%��� �
������ .7��1� �� � ����� � +��� ��A� ��� �%������������ �&��� ����������%� %��� ���*�� %���=����� ��� (?
� F0�� +��� ����*�*�� ���>���� 3���
��
*������������#�������
������������� ���������������������������������
%�������� ��&������������ �%��������������������� %������� �&��*������ ����%*������� �� �+�������������!� ����� ������+��������"� ��*���� �&��� �*%%���� �������� ����� �*��� � �&�����&���������� ������ �+���(��������G�
��
�� ���*�� *��*��� %���>�� �������� /�$�����H� 5���� �H� 7�����-��������&�� �� ��*���� ����(?�
F0��AH�0:�� �� ������)%����
�<�����+�����������%��� *������� ������������ ��� � ���
0*��*����� �� ������ ��"��&��-(� �&���� �����*��*��������+� �����������H���%�*�������%������&��� ������� �����������
�������������� � ���� ������ ���������������������������)����*���� ���� �������� �%� )/�0��+��� ���� ���� ���� � ������� ��� ������ �*�%���� �*�� ���� ��� ��� ������� �� ������ ����� %*���������*��&����������* &�*�� �%��� ��������%������*�%������������
0�������>�����%������������ ������������0/(<�� 0/<A�� �� �������&���� �������>����0/<<�� 0/��A�� ��������� �%� �&��*������� �� �345-2(�+�����"������� �������"��&�
0������%�������������<������ �����"���������� ����+��*�����������������%�*�����3��&�+���� +���� � ����� +��� 7��� �+�� ����� �� �%8� �+���<H�7����%����� ��& ��%����������3�������&�+���� �+���7������ ��*���� ���������� �� � ����� ���*�� %��� (�� ��� ��� �������������*���� 7����&� ����� ��� %��� 0/(<��0/<<�� 0/<A� �� � 0/��A� ���>���� ./)':�0&��������� /�����>1� +���� ����� � %�����������=�� ��� ��� (?
� F0� �� � ����� +���� � +��� 7����
3����!7-������� ����� ��&������ &������ �%��� �� ���� ��� (?�
F0�� %����+� � �&�+������+���
7����/������� ��+���*�� � %�����������0�*����������� �%� ����� +��� ���� *����������8&���.���>��4�����&1��
�������������������������)/�0�� %���� ���� �������� <�� ���"���� � +�����&���-$/3)��� ��I��
A�����G�������%*�� ����
�<��� ���� %��� ����� �� �� �A���� ���&����&���������� �*���� 3���� ����� +���� ���*���� � � ����� ������ �� *�� .0�1�� �������� �%�/�$�-���� 4�*���� .4��1�� �H� ��*��-�����%�����-�����*�� .����1�� ���A� ��G�����"������*�����*���.����1��A���G���������� � .����1�� A�� ��G��� ��������-�-����������.����1�� �H� ������-��������&�� .4��1��
�� � ��� ��G��� �����%������ ���+��� %����-2(�.����1��)%�����������������%*����������<�������%�����������������+����*��"��� ����(?
�F0��
AH� 0:��%��� ��� �&��� 3��� �� *�� ����� �
�"��&� (� �&��� �� � ���� ����� �� *�� +���*��345-�2(�*�� ����������������
������������� ��� ���������������������������)%���� ��� �&�� �%� *��*����� �������� +�������"���� �� %8� � �� ��� H� %������� %��� �� ����� ��& ���� � +��� ��������� ����� � +��� 8&������ � %����&� ���� � � �� ����%%��� 3����� ���&������� � ��� A� J�� ��>����� %��� ������8&����� � ����� .�-$1� �������� �*�%��� ���&��������&���� .4)41�+���� ������� � �&��������*�����������
���*������������ ����� � %��� �"��*�����
�%��&���������������� ���������+������%���� ��
���%�&�� ���� ���*�� ������� +���� �����%%� � ��
������ � +��� ��&���� %��� (�� ��� ��� %�������
����� &�������3�����(H��& ����������8 ����
�������� %��� (�� ��� +��� � � � ��� �*������� ����
�� �����*�� ����8 ���� ��"�&�� ����������
����� ���������� �&��������������.������1��� �
�������� .������1�+���� ����� � �� � ����+� � ���
����� %��� �"������� ��� <�F0�� ������� �*���� �
+��� ���� ���� ��&� ����� &�� ������ ���-��*���
��*������*���./)':�0&����������/�����>1�
%���=������� � �����8�������%����������&������
��*�� �������� �� ���� �8������*���� ����8� +���
��"���� ��
�
��������������
3����� ���*���� !�)� ������ � �&� !�K-��*��
���*���� .0���4��� ��� ����1�� 5���� ����� �
�����������&� /�)� ./�)1� �&����� � �
%���� �� J�� ������ !�)� *���� ����. �1� ��� ��
�������� �!�"����) �3��5���-����� �/�)�
�&������� >�� .5���������1�� ��� ��� ��� ����
���*%��*���L�� ����*������ �*���,*���� 70!�
���%���� ���� %����+�E���A�J�� /�)���K�70!�
�*%%��������J�� �37�����J���%�����������
����.3������1���� ���*���G��A�����������3�,�
/�)� 7��&������� .5��������1�� )���%�����
�� �����+���E������ ����*���������@A�F0�%���A�
���� %����+� � �&� (�� &���� �%� ����*������ �������
@A�F0�%���(������������������A=�
F0�%���<A������ �
�8������� ��� ?��F0� %��� <A� ���� 3��� ��� *���
����& � � ��� �H� �������� ���� �� � "�*�� � � �&�
��� *������ ����������
��
��������������� ��������� ������������������ ��!�������
������������� ������������������������������ �(�
3����������,*������%� %%�������������+����*�� �%���!3-70!����
7�� *��� ����,*������%��������������%�������
(A�����5-�)44)4440344))0))43)00�
����!-�44)443443))3300)444))0)�)�������
(?���������������5-�0)4430))4)34430�
���������������!-�330)40)00343030)00)�0�����������
=��������������5-�44403403333))0303443��������!-�40)443333303)4)044�
4)7/��
�
�
'�����������������)%���� �� �&�� �%� *��*���� �� � ��� ���� %����������� �%� �� *��� ��� ��� ������� ������&������%���������-�>�������������� ��������%���>�+���������"� �.5�*����1��)%�����������(� �&��� ���� ���� *��*��� ����� � ��� ��%�*�����0����� �� ���� �������� <� ���+� � *�%����������&���.5�*����1��� ���� � ������8�����&��� +��>� ��� ����� ��H� ��%�*����� $8��� � �������&�������������� ����&� ���������&�����������*�������+���+���*�%����&������"��%��� ����������� �������� �*�� ��� ���� ����&������������������������>���.0/(<1�.5�*���(1�� ���� ��*>�&��� ������ ������� .0/<A1�.5�*���<1��3�������0��+��������"��%����&������0� 6� ������ � ��������� �8�������� �� ��������%��� 345-B(� .�� ������ 0/��A1� .5�*��� A1�� �� ������&��*��������������.0/<<1�.5�*���=1��
�
�������������������������) ����6 ��"� � ������&���� ����� ����� ������ �������� <�+���� ��&��� � � ��� ����� %�������� �*�%��� �%� %���>�� *��*�� � %��� ��� �&�� �����6 ����&� �&����� �� � ������ �+���345-B(��3��� ���*��� � ��� *���� �������� �� ������������� � +��� ����� ����� �� ��� �� �������������� � �I��
-(� �� �� +����� .5�*��� ?1�� 3���
��� ����������������%�)/�0��������� � �����������&��&��-$��� ��������*������������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
��
5�*��� ��� �*���� �*�*�����*�� � ����- ��"� � �����
������������&�*��*����%������ �&��.I<�1��
�
3��� ���������� ������� ���+� � ����� ��&��-�>�� ���� ���������&� +�������� � �� ��*���� .5�*��� �1�� 5*�������������������%������������+� ������*�*�������%��8������*��������8��5������+��������8�������%� ��������&���� �� �8������*���� ����8������������� �������+��� ����� ��*�� *�� ��� ��������*������ ��� �����8��%������������������ .5�*��� @1�� 3�� ��%��� ���� ���*�������*������������.��01�����&���%����&�������������� �� � �������� ���� � �*�� *�������������-���%� ����� &�� 7���"����*��������� +��� �����"� � �� ������� �� ����� �8������ �%� �&��� ��� �������� �� � ����������"���� �.5�*����������1��
�������3�����!�)�+��� �8����� � %������������ ��� ���� �&� ���� ����� �&��� ��� �������� �� � ���������!�)� �8�������� +���� ����� � �� ��������*��*��� �%���� ��� �&�� .5�*��� ��1�� ��� ������������� +���� ���� ������ � �&� 345-2(�� �&��� ����������� �� � �������� �!�)� +���� ���� ���� �� ��� � ���� ������+��� ��� �8���������%���� ��&��-����%���������)/�0��%��������������&���*��*���.5�*�����1��
:"������ ���� ���*���� ���+� � ��������� ��������� �%� �*�*�����*�� � ����� ���������� +��� � *� � +��� 345-� 2(� �� �������*��*����&���������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
5�*������) ����- ��"� �������������"������� ���H�
��%�*������������������<��0��������+�*�%����������
��������&���*��*���.I<�1��
��
*������������#�������
������������� �������������������������������<�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
���
���
5�*��� (�� ���*��&�������� ����� � ���+�� �����
)/�0�� +���� ���� �8������ � 0/(<�� �� �����������
���>������*������������ �+���������8&���.I<��1��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
��
5�*��� <�� ���*��&�������� ����� � ���+�� �����
)/�0��+���������8������ �0/<A������*>�&���������
�����������*������������ �+���������8&���.I<��1��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
���
5�*��� A�� ���*��&������������� � ���+��)/�0��
�8������0/��A����>���� �����%������ ���+��� %����-B(�
��������.I<��1��
�
�
�
�
�
�
�
��
��
�
5�*��� =�� ���*��&������������� � ���+��)/�0��
�8������0/<<����>�����&��*��������������.I<��1��
��
��
�
5�*��� ?�� 4����� ���������� �%� �����*�� �%���� �� �&��
����������+���345-B(�����������*��*����&�����.I<�1��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
��
�
��
5�*��� ��� 3��� ������ �%� ���� ���*��� � �����*���
0��� ��&������������� �����*���.�-$1�.I<��1���
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
���
5�*��� @�� )���� ��*�� ������� �%� ���*��� � ���*���
$8������ �%� ������������ �8������*���� � ����8� � ��
���*��+�����"���� �.I���1��
�
�
�
�
�
�
�
���
�
�
5�*��� ���� ���*������������ ����� � ��"���� �
�8������ �%� �������� �� �8������*���� ����8� �%����
��� ������� *����.I<��1�����
��
��������������� ��������� ������������������ ��!�������
������������� ������������������������������ �A�
������������������0��������345-�2(��
�
�
�
�
�
�
��
�
�
5�*��� ���� ���*������������ ����� � ��"���� �
�8�������%��&�����������������8������*��������8��%����
��� ������� *����.I(��1��
����������)�� ���� �������� ��* &�� +�� ��%��� � ����
��� ������ ����&� �%� )/�0�� �� ����
�������� �%� 345-� 2(�� )/�0�� +���� ������ �
%���� ���� �*���� � ����� ���*�� ����� ������ �
%���� �������� �*����&�� 7��"�*�� ��* ���
������� � � )/�0�� �� � ��"���� � �����
)/�0����"���*���6� ������������������*��� ��
������ ��* ��� %��� ���*�� ������ � �� ����
����*�����*����&�.�?��(���(�1��
0������� ����� �%� ��0�� ���� �����
���%���� � *���� ���� �8�������� �%� ���� 6�
���%����������� �0/����>����.�?��((��(<1��
9�� ���+� � ����� �>�� ��0��� )/�0� �����
�8������ 0/<<�� 0/��A� ���>���� �*��� �� ����
�8������ ���� 0/(<� �� � 0/<A� ��������� :*��
���*���� ���������� � ����� �*����&� ���� *���
�� �����%%�����������*�%������>�����
���&� ���������� ��"�� ���+�� ����� ����
��������� �� ����� %��� ��� ��������� %����
�*������0��������(-/�*��*���������� ����&�
����*��*������ ��������+���%������.�?���?��(���
(�1��
7������ ��� �������� *��*��� �&����� +���
�������&� ����� � ��� �� ����� � %���
���"������ ���� ������&�� �� *������ �%�
��� ��&���� .�<1�� ���� ���� ���� *���� �%�
�������� *��*��� �&����� �&� ��������� ��� �
.�?1�� �������� ��"�� *�� � � ���� �&����� %���
%%������ �*�������� ����� ����������� ��"��
*�� � ���� *��*��� �&����� ��� �"��*���� ����
��� ����������������%���������������� ��&�
%%������ ����� �� .(A�� (=1�� :������ *�� � �� ���
��* &� ���� ����� �%� ��������*���� �*�� ���
345-2� %���&� �� ��������� ��� ������
%%����������.(?��(�1��
�����������������������
���)4!�
�
�
����� � � � ����0:M�����
�
�� � � ��������
�����������������4)7/����
�
��
�
5�*��� ���� !3-70!� ���*���� ���+� � �8�������� �%�
�������� ���%�����*����� �������� .)4!1��� � �&���
��� �������� .0:M1� �� 345-B(� ������ � ���*��� 4)7/��
*�� ������*��>�������������
�
:*�� �"��������� ���+� � ����� ���� �������
��"��������*��*�� ������ �������� *��
�*��������� � +��� 345-2(� %��� ��� �&���
%%�������� � ���� ���*�� ������ � �%�
��� ��&��-�>�� ����� �� � �� �����&� �%�����8�
�*�*���� ��������������
���� �����������6���%�����*����+����
��� *� � �� �������� ��� �" ��� � �&�!3-70!�
�� � ��*������������ ����� ��� +��
���* � �������������*���*� �������������
N*>� ��� � ������ � ������� � �����������
����� .7M)1� %���� �*���� � ����� ���*�� �� �
� *� � ����� ���� � ������� ����������
��� ������ �� � ��*������ ������� ������
)����� ���&� *�� � 345-� 2�� %��� ��� ������
%%���������� �� �������� *��*���� *�������
�� +��>�� .�?1�� +���� �� ���� �������� ��* &� +��
*�� � 345-2(� ���+��� %������ �� �� ��� ��� ��
��� ������ � *���� %��� ���� %���� ���� ��
�������*��*���� *����(�+��>���
����� ����������� ����� �"������� �
��� ������ ��������� �%� �*���� � ����-
��"� ������������*�� ����+���%������%�345-�
2�����������*��*����&��������"���*����%%�� ��
.�(��(@��<�1��
$������� �������*�����* � ���� ��������
�%�)/�0�� �%�*��� �+���345-2(� �� �������
���+��� %������ ��� �������� ��%%�� �� *���������
�� +��>� .(�1�� ��+�"���� +�� � ���� *�� � ��&�
��%%�� ����*����* &��
��� ��� � �� ���?� ���������� � ����� �*����
)/�0��*� ����� *� �������� ��&��-�>��
������&��� �� ������� *��*��� �&����� *����
�*����345-�B�� ���������� ��������� .(�1��3��&�
*�� �345-B��+����+��*�� �345-�B(����+���
%������ ��� � ���� ��� ��� ���� ���+� � ����
��
*������������#�������
������������� �������������������������������=�
�8���������%�������� ��&������>������������
?� �� � �<� �&�� �%� ���� � *���� �*��� �� �*��
��* &� ���� �8�������� �%� �������� ���%-�
������+�����"���� ��%������� �&���%�� *�����
3�� �*�� >��+�� ���� ���� �� ���� %���� �������
����� 345-2(� ��� � *�� %%���������� �%�
)/�0�� ���� ���� ��� ��&��� �� ������� *��*���
�&�������
������������� �*����&�� �*�� ��* &� ���������� � ����
��� ��������� �%� �*���� �*�*�����*��
� ����- ��"� � ����� ������ � *� � �&�����
345-2(��������������*��*����%�������%��������
�� ������ 3����%����� )/�0��� � *� � +���
����������� ���+��� %������� ��&� ���"�� ��� ��
"��*����� ��*��� �%� ����&� ��������
������&���� ����� ������ %��� ��� *��� �����
���� ��"� ����������
��+�������������3��� �*������ +�*� � �>�� ��� �8������ �����
�����* �� ��� ������-0��������� %���!�������
�%� ��%�����O�"����&� �%��� ���������� ���
/�� 7�&���� ) ��� /��� ���������� :��������
�� �4&������������������������� ��������
�� � ���� )�* ������ ���������� ���������&�
�������%��������>� ���������������
'�� ����������)���&��*���7��"�������� �������%����������&������� ������&-O����@�@-�@@���������������9>�&�!���
�@@=C���E(?(-(?�������
��� � �9����P��'��O��� ������� /���'������'������/M�� ��� ����� �������� ���*�� ����������+��� (/� ����*��
�,*��*�- ��"� ���>���%%�� ��� �������&����������������������������AC��=E?���-?�@<��
(�� � 4�����&� �/�� ��������� ���>�*��� 3�� 3��������� �%� ���*���� �������� �%���� �%� ���� >���� +��� �*������*��
��� ��&�����������������:�������������7�&��3�����@@�C���E�<�-�A����
<����5*�*>�+��3��$&���/!��'� �����4��������������������* �����������������������*�%�����8����������
�%����������������>������������������*���)���@��C�=�E?@-�@��
A�� � ����������� ���������%����*�������������� ����-���*����%���*��������������0���:������!�����!������<C�
=�E=��-=(<��
=��� �3�+��!��'+���)7�������)��3�����������)�����09��3������������%����*����������������8����������
+�*� ��E�������%�����������)������!��*������C�<(�E��A-��A���
?���������3������������0*������������������������������%����*������������ �%�����:�������@@?C���EA�A-A(���
����M����/���+����:��'���9���������7����&�*��*�� ���� ��&�����%� %%������������������ � %%������&������������
�-545��� �345-B����M%�����@@?C�=�E�@(-�@@��
@�����>&������*�������3��M�������M��7��>���/�������������������%���������&��*����� *�������������%���������
�����+�������� �%����������,*�����%����*������ �����*�����"����� *������� ����������7��������)� ���
O�)������C�@@E<(@?-<<�����
�������>&�����M�������M���*�������3��0*��4��7��>���/���) ������ %%�����������%��*����� *�������������
%��������������+��������.��0�1��������������!�������<C��@E�A=-�=<��
�����9�>�������������'����������P��������3��'�+�������)��0����������E��������*�����%��� ����� �>����
%����+��� �����������%������ ���� �*�����%� �������8���� ����+����&��*����&��� ������������:������������
0������������C���E<��-<�?��
��������+� �$����������)M��7��"���9������>��4$��3������������%��������-�������������*��������������������%�
�������������������������Q�!� ���:������"������@@@C�?E�<@-�A@��
�(���7��>���/��������+���������������������������%��������������������*����������@@?C�<���?=E?�-?<��
�<���5*>*�����3�����������9�����&���)��5� �����������!����� �44��0���"���0)��������0����� ��%%�����%�
��*��-�>�� ���+��� %����-�� �� � �����%������ ���+��� %����-������ ��� ���������� ������&���� ����� *����
��� ������������������:������������0�����������(C���EAA-=<��
�A���/������0��/���L)��5��3&� ���+�>�7��M*&����57���*���������������&��������������%����� *����*����
�&��"�������������)�������!��*������C�<<E�@��-�@<���
�=���0�������N�����������>�+�>�!���'�*�������>� �+�����/���&����������0*��������$�����&����R*-7��������
N���*�� �����*�������������� %%���������������������������������*���������&�������������������0����
�������(C�AE=<�-=<=��
�?���N*>��7)��N�*�����)��;���7��/��O�������/)���*���������� *�������������)���*����� ��������*��������*���
�%��*����������������������������0���������C��(E<�?@-<�@A��
����P�*��� ��$�� ������� �3)�����&� �!)���* ���� � ��� 5��& � � �)����+>��� �'�� ��� �����*���� �����"�� ��*��������
������&�������������������������������������"�����*����%��>��������*������ � ����� ��"� �%����%������
� *������ �������� �������)����!������C��=<EA�-=���
�@���N"�%�������������"�-�*��%��"��M��) ����4��$ +�� ��0������������*������)������!���������&����
���*�������������������� ��%��������� " *�����)������!��������C��E<??-<����
��
��������������� ��������� ������������������ ��!�������
������������� ������������������������������ �?�
�������S���O��:�& >��)���3*��!���>�>�����/��������'4��3*���!����*���������������&���� %%����������
����������%��*���������*��������- ��"� ���������:������!��������C���E��=�-��=@��
������9�>�������4����3��7�� ������P�*���!4�������*������0������)���4�� ���������������&�������-���� �
�������%��������%*��-��>����� �%�����%����*��������������������������*���)���@@<C�?=EA?@-A@���
�����:� �&��;����-����������"�����������'���������������� �������'���-�*��� �������*����3$��!�������
"����������5���) ��������*�- ��"� �������&�������������&�� ��� ����+�������������������%%��� ��&�
�������*�-���"���������� *����0&��������&����=C��E�==-�??��
�(����)+� ��)��9>�����R��M� &��)��4���������4*��>�5��0��� ������ %%�����������%�� ����- ��"� �
� *����������������������������������� ����������%%�� �����������������<C��AE(���-(�����
�<�� � ���� ��� ��� )������ ��� M���� ��� ���� ��� ��� 3��� ����� �%� ������&�� ������ �&� %%�������� � ����� ��� �����
� %%�����������%���������������7��������)� ���O�)��@=�C�<=E�A((-�A<����
�A�����5��������0��%�����������%������+���������.9�����-������1�����������������7�&�����@�AC�<�E<�?-<A@����������
�=�� � ��;*� ��� �'�� 9���� $�� ������ $)�� ��7-�� �� � ��7-@� ��������� ��� ������ %%���������� �%� �*����
�*�����������������&����������� ��"�����������������&��%%����%��M-�����0����7�&��������C���@E�?A-��<��
�?�����������������������3���0������)���4�� ���������P����O������������� ����������%�����������+� ��"� �
������&��������������������$8��0����!����@@�C��(�E��=A�-�?���
��������>�&�)�����>��0���*���&���������&�57��0��������0:��7���������5��0��� ������ %%�����������%�
*��*�� ��*����������&��������������%���������+�3��*��$����@@�C�<E<�A-<����
�@�������*��������0������7��$����)�������&��� ������*�� ������%�������&����������������������� ����� �
����!��������C�((E���-��?���
(������ ��+���������0����4��3� �>�������������M���:��*������3������3���������)����+���%��������������
%������ ������� *����%�����*����������&������������������������&��!���0���*������<C�(��E@�<-@�@��
(��� � ���K����*��P���N�����'��9������� �*�K/��M�*��R������������� %�������� %������� %%�������� ��*����
� ����� ��"� �������������""���)���7��������������?C���E==(-=?���
(����$������3��9*�)9��4*��>�5��7������� *�����%���� ��&�� %%�����������%��*����� ����- ��"� �� *���
�����������&�������������������������=��)��������!��*�����=CA<E����-��(���
((�����* ����7������+� ��0��������/����&���+������$����������������� �������"��+����*�������������
�����*�%�������������������@@?C���E��A-�(A��
(<���7����������5����>�&��)�����>���0�����+����!'��/�*������!���������/����������*�������������������%�
� *����*����������&���������������������@@@��C���<E�<(-�<?���
(A�� ��*�����4*��N��K���K��M*����M*�K��3����7�������������%���*��������+�������&����������������&���
��"����� �������������� �������0��������(C���EA�?-A(A��
(=���$������;� ������>��� ���)��3���&���M���� ���������*������*�����������&�������������������� �
�&���+� ����&������&�*��*����&������/�"�4��+���/%%������=C�<�E(=�-(?���
(?�� � ��>&�� ��� 0������ /0�� 7��>���/��� ��7-=� �������� ��� ��������� �� �� �*����*������ �%� �*���������+�
������������������������&��!���0���*������C���<E<��-<����
(������>&�����M�������M���*�������3��!�����!M��7��>���/���0����������%��%%����%����7-���-<���� �-=������������
��������%���������%��*����� *�������������%��������������+���������0����3��*��!������AC�(��E�=@-�?=���(@�� � M��� � !���'�� � �0�� 0��� � ���� '�� ���� 0��� � ���� �*�� �'3�� 0������� ����� �� � �8�������� ����&��� �%�
������&��������������%�����*��������������+��� �� ������3��*��0����7�&�������������<C��<E(��-(�<��<��� �$�>����4!��4����� ����5���>���/���!���$�)+� � ����4*��>� �5��0��� ����������������%� � �����
���*�- ��"� ������������������������ ��������������������&��!���0���*������C��@�E?=(-?=@��