Chilote D. Paula

Rivero Mega M. Soledad

Seminario curso optativo: `` ESTUDIO INTERDISCIPLINARIO DE LA

ENFERMEDAD DE CHAGAS´´ 

Ramírez Moreno Ernesto , Santiago Guerrero José Luis

2009

T. cruzi se encuentra ampliamente distribuido en el continente Americano en correspondencia con la distribución de transmisores del orden Triatominae.

El papel de los triatominos en el ciclo de vida del parásito es fundamental pues en ellos T. cruzi se reproduce en fase de epimastigote y se diferencia a la fase de tripomastigote metacíclico que posee la capacidad de infectar al hospedante vertebrado.

Se han realizado gran cantidad de estudios tratando de demostrar la presencia de alguna fase de T. cruzi en saliva y por extensión, la transmisión del parásito por esta vía, los resultados han sido negativos en todos los casos.

Se ha estudiado la presencia de bacterias en las glándulas salivales de los triatominos e informes verbales preliminares indican la posibilidad de encontrar cocos Gram positivo.

Si la saliva de triatominos albergara bacterias u otras simbiontes potencialmente patógenos al humano, existe la posibilidad de su transmisión durante su alimentación.

Investigar la presencia de bacterias simbiontes en la saliva de Triatoma infestans y discriminar si son potencialmente patógenas para el humano.

Se emplearon lotes de cuatro machos y de cuatro hembras de Triatoma infestans, para cada uno de los tres esquemas de alimentación artificial que se probaron, los cuales consistieron en lo siguiente:

1. Se realizó una desinfección de la proboscis y se tomó una muestra de la zona externa de la misma como control negativo.

2. Se procedió a estimular la emisión de saliva mediante contactos suaves con la yema del dedo índice directamente sobre el pronoto de los ejemplares.

3. Tras la emisión de saliva, se colectó y se sembró.

Se procedió a embeber hisopos estériles con solución salina estéril precalentada a 37º C, se ofrecieron individualmente a los triatominos para que se alimentaran directamente del algodón rico en solución.

Se colocaron 2 ml de solución salina isotónica en recipientes estériles y se taparon con una membrana de látex estéril, se calentaron en baño Maria y se les ofrecieron a los triatominos para que se alimentaran a través de la membrana.

Se sembró masivamente el material biológico colectado en placas con medio Agar Soya Tripticasa y Gelosa Sangre respectivamente.

A continuación se procedió a incubar las

placas a 37º C durante 24 horas.

Se determinó su morfología colonial, morfología microscópica y tinción de Gram.

Se sembraron las siguientes pruebas bioquímicas: Cátalasa, Oxidasa, Hemólisis, Vogues-Proskauer, Lactosa, Maltosa, Rafinosa, Dextrosa, Arginina, Manitol, Urea, Almidón, Bilis Esculina y Novobiocina.

La metodología de estimulación del pronoto arrojó resultados negativos, en ningún caso se logró obtener saliva para ser sembrada en los medios de cultivo.

En la metodología del hisopo, sólo dos ejemplares se alimentaron de él y al sembrar no hubo crecimiento bacteriano.

La metodología de la membrana de Látex dio resultados positivos en todos los casos de alimentación de los triatominos por lo cual fue la metodología de elección para el estudio y las pruebas se realizaron por cuadruplicado.

Característica Colonia A Colonia B Colonia C Colonia D

Tamaño 1mm 3mm 1mm 1mm

Color Blanco Blanco blanco Blanco

Forma Circular Ameboide Circular Circular

Elevación Convexa Convexa Convexa Convexa

Superficie Lisa Lisa Lisa Lisa

Aspecto Húmedo Húmedo húmedo Húmedo

Borde Entero Ondulado Ondulado Entero

Luz Transmitida Opaca Opaca Traslúcida Opaca

Luz reflejada Brillante Brillante Brillante Brillante

Consistencia Mucoide Mucoide Butirosa Butirosa

Pigmento difusible

S/pigmento

s/pigmento S/pigmento S/pigmento

Medio de cultivo

TSA TSA TSA TSA Tabla 1

Colonia A Colonia B Colonia C Colonia D

Gram Positivo Positivo Positivo Positivo

Morfología Cocos Cocos Cocos Cocos

Agrupación

racimos Pares o cadenas

pares pares

Tabla 2

Las características macroscópicas y microscópicas (tablas uno y dos) de las bacterias obtenidas, no se correlacionan con los grupos de microorganismos que son potencialmente patógenos para el humano y que en un momento podrían causar septicemia o alguna infección grave.

Experimento

Triatomino 1

Triatomino 2

Triatomino 3

Triatomino 4

1 A,B,D A,B,C,D A,B.C,D Negativo

2 A,B,C,D A,B,D Negativo A,B,C

3 Negativo A,B,C,D A,B,C,D A,B,D

4 D A,B,D A,B,C,D A

Tabla 3

Experimento Triatomino 1 Triatomino 2 Triatomino 3 Triatomino 4

1 A,B A,B,C A,B,C,D A,B,C,D

2 Negativo A,B,C Negativo A,B,C,D

3 A,B Negativo Negativo A,B

4 A,B,C,D Negativo A,B A,B,C,D

Tabla 4

Los resultados muestran pocas diferencias entre las bacterias aisladas.

Bioquímica Colonia A Colonia B Colonia C Colonia D

Hemólisis

Lactosa Positivo Positivo Positivo Positivo

Vogues Proskauer

Positivo Positivo Negativo

Maltosa Positivo Positivo Positivo Positivo

Rafinosa Negativo Negativo Positivo Negativo

Dextrosa Positivo Positivo Positivo

Arginina Positivo Positivo Negativo

Manitol Positivo Negativo Negativo Negativo

Úrea Positivo Positivo Negativo

Almidón Positivo

Bilis esculina Positivo

Novobiocina R S S

Oxidasa Negativo Negativo Negativo Negativo

Catalasa positivo Positivo Negativo Positivo tabla 5

Las pruebas bioquímicas (tabla 5) en combinación con las características antes referidas, permitieron establecer tres especies de bacterias del genero Staphylococcus:

1. S. saprophyticus2. S. hominis 3. S. caseolyticus

De importancia medica como agente etiológico de infecciones del tracto urinario

También se aisló Enterococcus sp., el cual no es considerado patógeno para el humano, pero todas las especies encontradas son potencialmente capaces de causar septicemia en casos excepcionales y de inmunocompromiso.

Se confirma la existencia de simbiontes en saliva de T. infestans y no se descarta la posibilidad de presencia de patógenos.

Los triatominos son potencialmente capaces de transmitir a los simbiontes salivales, pues se aislaron mediante un proceso equivalente a su alimentación natural.

1. Pan American Health Organization Regional Office of the World Health Organization (PAHO/WHO). 2000. Geoepidemiological Spaces for Surveillance and Control A Series of Four Maps. Pp 2-5.

2. Charles B. Bread, *Ravi V. Durvasula, and Frank F. Richards. 1998 Bacterial Symbiosis in Arthropods and the Control of Disease Transmission. Vol 4 (4): 582- 584.

3. Eichler S, Schaub GA. Development of symbionts in triatomine bugs and the effects of infections with trypanosomatids. PMID: 11971650 [PubMed - dexed for MEDLINE].

4. Barrow Ig and Rka Fel Tham. 1993. Cowan and Steel´s. Manual for the Identification of Medical Bacteria. 3 RD ed. P54-57. Cambridge University Prees.

5. Clementina Magos Lopez, Francisco Sánchez Villareal, Gonzalo Gutiérrez, Roberto Tapia Conyer. 1992. Banco Nacional de Sueros Vol. 34 (2).