Praktikum BioteknologiKelompok 4 ( Jumat)1. Eka Ayu M. 2. Ida
Marwa 3. Tommy Pradana 4. Faigoh Awwalita 5. Jayanti Vibriyani 6.
Yeni Rahmawati N. 7. Mohammad Dwi Sofyan 8. Putri Larasari 9. Imas
Rifki Sahara (072210101041) (082210101034) (082210101041)
(082210101062) (092210101010) (092210101079) (102210101010)
(102210101072) (102210101097)
Tujuan a. Pemotongan DNA dengan enzim endonuklease b.
Elektroforesis pada gel agarosa
Dasar TeoriA. PEMOTONGAN DNA DENGAN ENZIM ENDONUKLEASE Fragmen
DNA dipotong menggunakan enzim restriksi, enzim ini bekerjadengan
memotong nukleotida pada sisi pemotongan ujung tumpul. Fragmen
-fragmen DNA yang telah dipotong sebelumnya oleh enzim endonuklease
akan terpisah-pisah berdasarkan ukuran atau panjang DNA saat proses
elektroforesis. Hasil pemotongan menunjukkan semakin kecil ukuran
atau panjang DNA maka letaknya semakin dibawah membrane agarose dan
sebaliknya semakin besar atau panjang Fragmen DNA posisisnya akan
diatas membrane agarose.
B. ELEKTROFORESIS DNA Elektroforesis gel merupakan salah satu
teknik utama dalam biologi molekular. Elektroforesis adalah suatu
teknik pemisahan molekul seluler berdasarkan atas ukurannya dengan
menggunakan medan listrik yang dialirkan pada suatu medium yang
mengandung sampel yang akan dipisahkan. Teknik ini dapat digunakan
dengan memanfaatkan muatan listrik yang ada pada makromolekul,
misalnya DNA yang bermuatan negatif. Jika molekul yang bermuatan
negatif dilewatkan melalui suatu medium, misalnya gel agarosa
kemudian dialiri arus listrik dari satu kutub ke kutub yang
berlawanan muatannya, maka molekul tersebut akan bergerak dari
kutub negatif ke kutub positif.
Hasil Pengamatan Elektroforesis DNA
Pada gambar hasil elektroforesis diatas dapat diketahui bahwa
terjadi pemotongnan DNA, khususnyapada kelompok 6 tetapi berkas
atau band yang didapat tidak terlalu tebal.
Pembahasan
Langkah awal untuk elektroforesis DNA adalah dengan membuat
larutan gel agarose. Kemudian menuang gel tersebut ke dalam alat
elektroforesis yang sudah dipasang cetakan untuk membuat sumuran. (
Ditunggu sampai memadat ). Setelah padat, DNA dimasukkan ke dalam
sumuran dan dilakukan running. Running dilakukan dengan mengalirkan
arus listrik yang dipergunakan sebagai faktor pendorong gerakan
molekul DNA dengan elektroda positif terletak berhadapan dengan
sumuran. Hal ini karena DNA bermuatan negatif sehingga harus
dipergunakan kutub yang berlawanan untuk dapat menggerakkan DNA.
Tegangan listrik yang dipergunakan adalah 75 Volt selama 45 menit.
Tegangan yang dipergunakan cukup kecil karena DNA sangat rentan
terhadap tekanan fisik.
Setelah proses elektroforesis selesai, dilakukan pewarnaan, agar
molekul sampel yang sudah terpisah dapat terlihat. Hasil
elektroforesis yang didapat dari hasil praktikum menampakkan atau
menunjukkan keberadaan DNA yang ditandai dengan terlihatnya
pita-pita (band) pada lajur-lajur yang terdapat pada sumuran gel
dimana pita pita yang didapat tidak terlalu tebal. Faktor penyebab
tidak tidak terbaca nya suatu pita-pita adalah konsentrasi DNA
plasmid dalam loading buffer yang dimasukkan dalam sumuran gel
agarosa terlalu kecil. Potongan DNA yang terlihat tersebut
menunjukkan bahwa DNA telah terpisahkan.
