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1 Elenco degli organismi sottoposti a bio-inattivazione con vapore di perossido d’idrogeno e fonti di riferimento

1.1 Batteri

Tipo di organismo Nome dell’organismo Riferimento Bacillus anthracis var. ames 11 Bacillus anthracis var. sterne 11,14 Bacillus anthracis var. vollum 11 Bacillus alvel 17 Bacillus cereusa 4, 17 Bacillus circulans 4 Bacillus firmus 4 Bacillus licheniformis 17 Bacillus megaterium 3,17 Bacillus pumilusa 3,8,9,10,17 Bacillus sphaericus 17 Bacillus subtilisa 3,6,8,9,10 Bacillus thuringiensis 17 Clostridium difficile 7 Clostridium piliforme 19 Clostridium sporogenesa 8,9,10,12

Endospore batteriche Bastoncini gram +vi

Geobacillus stearothermophilusa (ex Bacillus stearothermophilus) 3,7,8,9,10,11,13,17

Mycobacterium smegmatisa 9,10 Lactobacillus caeseia 9,10

Bastoncini gram +vi

Listeria monocytogenesa 4 Enterococcus faecium (VRE) 7 Staphylococcus aureusa 4,6,7,8,14 S.aureus meticillino-resistente (MRSA) 7,13 Staphylococcus epidermidis 13,15

Cocchi gram +vi

Streptococcus faecalisa 9,10 Escherichia coli 6 Escherichia coli O157:H7a 4 Klebsiella pneumoniaea 4,7 Salmonella choleraesuisa 4 Salmonella typhimurium 6

Enterobatteriacee

Serratia marcescensa 9,10 Acinetobacter baumannii 7 Legionella pneumoniaea 4

Bastoncini gram -vi

Pseudomonas aeruginosaa 8,9,12 Batteri atipici Acholeplasma laidlawii (Mycoplasma) 16

a Anche quando gli esperimenti sono stati condotti con siero al 5%, la bio-inattivazione completa è stata portata a termine con successo

ESSICCA- TORE

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1.2 Virus

Genoma D/RNAa Famiglia Virus Rif. Herpes simplex Tipo 1 10 Laringotracheite infettiva 6

Doppio Herpesviridae

Virus della Pseudorabies 2 Doppio Iridoviridae Febbre suina africana 2

DNA (con involucro)

Doppio Poxviridaeb Vaccinia 2 Adenovirus 10,22 Doppio Adenoviridae Adenovirus canino 21

Doppio Birnaviridae Virus della bursite infettiva 6 Parvovirus canino 21 Parvovirus felino 21

DNA (senza involucro)

Singolo Parvoviridae

Parvovirus 5 Singolo Coronaviridae Virus della bronchite infettiva 6

Influenza A2 10 Singolo Orthomyxoviridae Virus dell’influenza aviaria 2,6

Singolo Paramyxoviridae Virus della malattia di Newcastle 2,6 Singolo Rhabdoviridae Virus della stomatite vescicolare 2

Virus Dengue 20

RNA (con involucro)

Singolo Flaviviridae Virus del colera suino 2 Calicivirus felino 21 Singolo Caliciviridae Virus dell'esantema vescicolare 2 Rinovirus 14 10 Polio Tipo 1 10

Singolo Picornaviridae

Malattia vescicolare suina 2

RNA (senza involucro)

Doppio Reoviridae Virus della lingua blu 2 a Singolo = genoma a singolo filamento, Doppio = genoma a doppio filamento b Alcuni membri delle Poxviridae sono senza involucro

1.3 Funghi

Tipo di organismo Nome Riferimento Spore fungine Aspergillus niger* 8,9,12

Penicillium sp. 17 Muffe Alternaria sp. 17 Candida albicans* 12 Lieviti Candida parapsilosis* 9,10

* Anche quando gli esperimenti sono stati condotti con siero bovino al 5%, la bio-inattivazione completa è stata portata a termine con successo

1.4 Nematodi

Organismo Riferimento Caenohabditis elegans 1 Syphacia muris 18

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2 Indicatori biologici Come indicatori biologici, BIOQUELL impiega le spore di Geobacillus stearothermophilus, inoculate su dischi di acciaio inossidabile, per formare una coltura essiccata con una popolazione di >1.0x106 unità che formano una colonia (ufc)/disco. Per agire come verifica del ciclo, questi dischi, sigillati in guaine di Tyvek, vengono esposti al vapore di perossido d’idrogeno generato da un sistema di bio-decontaminazione Clarus™.

2.1 Idoneità del Geobacillus stearothermophilus come indicatore biologico:

• Con la possibile eccezione dei prioni (che richiedono ulteriori studi e non sono tecnicamente viventi) e dei coccidia (un gruppo di protozoi che comprendono il Cryptosporidium, una specie patogena che si trasmette attraverso l’acqua), le spore batteriche sono gli organismi viventi più resistenti agli antisettici ed ai disinfettanti2.

• Le spore di G. stearothermophilus sono note per essere l’organismo più resistente al vapore di perossido d’idrogeno3 ed è per questa ragione che lo standard nell’industria farmaceutica per le procedure di sterilizzazione prevede una riduzione di 6 unità logaritmiche nelle spore di G. stearothermophilus.

2.1.1 Valori D* comparativi (dati di una casa farmaceutica4)

Organismo Valore D in min. Organismo Valore D in min. B. pumilus 0.32 B. thuringiensis 0.80 B. cereus 0.11 B. sphaericus 0.13 B. alvei <0.16 Penicillium sp. <0.17 B. licheniformis <0.20 Alternaria sp. <0.06 B. megaterium <0.20 G.stearothermophilus 1.65 B. megaterium 0.20

* Il valore D è il tempo impiegato per ottenere una riduzione di 1 unità logaritmica nella conta delle spore (il che significa ridurre la conta vitale al 10% del proprio valore iniziale – ad es. da 100 a 10)

I valori D sopra riportati sono espressi in minuti e riferiti alla media di un minimo di tre test. Il valore D maggiore del G. stearothermophilus rappresenta l’obiettivo più difficile – di qui la scelta come indicatore biologico di riferimento. 2.1.2 Spore dell’organismo-test G. stearothermophilus su differenti substrati

Substrato Valore D in min. Substrato Valore D in min. UHMWPE 1.6 ACETAL 1.6 Hypalon ≤1.1 Poliuretano 1.7 Acciaio inossidabile 1.7 Nylacast Nylube ≤1.3 Silicone 1.6 Vetro 0.6 ULTEM 1.7 Polietereterchetone ≤0.7

L’acciaio inossidabile è il mezzo di trasporto prescelto. 2 McDonnel & Russell. Clinical Microbiology Reviews, 12:147-179 (1999). Antiseptics and Disinfectants: Activity, Action

and Resistance. 3 Kokubo, M, Inoue, T, Akers, J (1998) Resistance of common environmental spores of the genus Bacillus to vapor

hydrogen peroxide. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology, 52, 228-231 4 Dati forniti per gentile concessione della Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indiana

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2.2 G. stearothermophilus come proxy del Bacillus anthracis I dati seguenti risultano da uno studio indipendente, commissionato da BIOQUELL per verificare l’efficacia del vapore di perossido d’idrogeno nella bio-inattivazione dell’Antrace14. Test n°3 in una cappa biologica di sicurezza – indicatori biologici rimossi ad intervalli predefiniti

Tempo (min)

Bacillus anthracis var. sterne

Geobacillus stearothermophilus

Bacillus subtilis var. niger

3 + + + 6 + + – 9 – – –

12 + – – 15 – – – 18 – – –

Controllo + + + • + = rilevata crescita degli indicatori, – = nessuna crescita • Il B. anthracis è stato inattivato in 15 minuti • Il G. stearothermophilus sembra essere una proxy migliore per il B. anthracis piuttosto che per

il B. atrophaeus

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3 Riferimenti

3.1 Articoli giornalistici peer reviewed 1. Gustin, EJ, McDonnell, GE, Mullen, G, Gordon, BE (2002) The efficacy of vapour phase

hydrogen peroxide against nematode infection. Contemporary Topics in Laboratory Animal Sciences, 41, 77-78.

2. Heckert RA, Best M, Jordan LT, Dulas GC, Eddington DL, Sterritt WG (1997) Efficacy of

vaporized hydrogen peroxide against exotic animal viruses. Appl. & Environ. Microbiol, 63: 3916-8

3. Kokubo, M, Inoue, T, Akers, J (1998) Resistance of common environmental spores of the

genus Bacillus to vapor hydrogen peroxide. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology, 52: 228-231.

4. McDonnell, G, Grignol, G, Antloga, K (2002) Vapour-phase hydrogen peroxide

decontamination of food contact surfaces. Dairy, Food and Environmental Sanitation, 22, 868-873.

5. McDonnell, GE, Hartling, J, Armiger, S, Belete, B, Fritz, C (2001) Room decontamination with

vapour hydrogen peroxide VHP for environmental control of parvovirus. Contemporary Topics in Laboratory Animal Sciences, 40: 60-61.

6. Neighbor NK, Newbury LA, Bayyari GR Skeeleovk, Beasly JN, McNew RW (1994) The effect

of microaerosolized hydrogen peroxide on bacterial and viral poultry pathogens. Poult Sci, 73: 1511-1516.

7. Independent testing conducted by St. Thomas’ Hospital, London (in preparation for

publication). 3.2 Presentazioni a conferenze 8. New Applications of Chemical Germicides: Hydrogen Peroxide, N. Arlene Klapes. ASM

International Symposium on Chemical Germicides, July 1990, Atlanta, Georgia. 9. Resistance of various micro-organisms to vaporized hydrogen peroxide in prototype tabletop

sterilizer. James R Rickloff, Paula A Oreliski, 89th Annual Meeting of the ASM May 1989, New Orleans.

10. Use of Vapourized Hydrogen Peroxide for the Bio-decontamination of Enclosed Areas. James

R. Rickloff, Interphex USA Conference, New York, 1990. 11. Extract from US Army test data. DECON 2002, San Diego, September 2002. 3.3 Rapporti indipendenti commissionati da BIOQUELL 12. Cabinet bio-decontamination trial. Centre for Applied Microbiology and Research (CAMR),

Porton Down. March 1995.

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13. Determination of the effectiveness of VPHP against methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis and Bacillus stearothermophilus. CAMR, Porton Down, UK. March 2001.

14. Anthrax deactivation investigation. Dstl, Porton Down. June 2002. 15. Assessment of the efficacy of vapour phase hydrogen peroxide as a room disinfectant. CAMR,

Porton Down. April 2003. 16. Inactivation of Mycoplasma using vapourised hydrogen peroxide. Mycoplasma Experience Ltd.

Sept 2003. 3.4 Altre fonti 17. Information supplied with kind permission of Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indiana. 18. Elimination of Pinworm Eggs from Caging Equipment with Vapourised Hydrogen Peroxide.

Report from the Max-Planck-Institute for Experimental Medicine. Krause, J & Riedesel, H. 19. Case study from a room bio-decontamination at Imperial College School of Medicine. April

2003. Contact BIOQUELL for further details. 20. Investigation into the efficacy of hydrogen peroxide vapour in the bio-deactivation of Dengue

virus. August 2003. Trials conducted in commercial confidence. Contact BIOQUELL for further details.

21. Viral deactivation trials. Oct 2002. Conducted in commercial confidence. Contact BIOQUELL

for further details. 22. Adenovirus deactivation trials. Sept 2003. Conducted in commercial confidence. Contact

BIOQUELL for further details.

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Appendice 1: Elenco alfabetico degli organismi sottoposti a test

Nome Classificazione Importanza Rif.

Acholeplasma laidlawii (Micoplasma) Batteri Atipico, senza parete

cellulare Parassiti e patogeni in esseri umani ed animali 16

Acinetobacter baumannii Batteri Bastoncino gram –vo Patogeno ospedaliero 7

Adenovirus 2 Virus Adenoviridae Patogeno umano/animale 10 Adenovirus canino Virus Adenoviridae Patogeno animale 21 Alternaria sp. Funghi Muffa Patogeno vegetale 17 Aspergillus nigera Funghi Spore fungine Patogeno umano/animale/vegetale 8,9,12

Bacillus alvel Batteri Bastoncino gram +vo, spore Patogeno opportunista animale 17

Bacillus anthracis var. ames 11

B.anthracis var. sterne 11, 14 B.anthracis var. vollum

Batteri Bastoncino gram +vo, spore

Patogeno umano/animale Agente responsabile del bioterrorismo con antrace

11

Bacillus cereusa Batteri Bastoncino gram +vo, spore Patogeno trasmesso negli alimenti 4,17

Bacillus circulans Batteri Bastoncino gram +vo, spore Organismo ambientale 3

Bacillus firmus Batteri Bastoncino gram +vo, spore Organismo ambientale 3

Bacillus licheniformis Batteri Bastoncino gram +vo, spore Patogeno trasmesso negli alimenti 17

Bacillus megaterium Batteri Bastoncino gram +vo, spore Organismo ambientale 3,17

Bacillus pumilusa Batteri Bastoncino gram +vo, spore Patogeno trasmesso negli alimenti 3,8,9, 10,18

Bacillus sphaericus Batteri Bastoncino gram +vo, spore

Patogeno opportunista animale, organismo di putrefazione 17

Bacillus subtilisa Batteri Bastoncino gram +vo, spore

Patogeno opportunista, indicatore biologico standard 3,6,8,910,12

Bacillus thuringiensis Batteri Bastoncino gram +vo, spore Patogeno animale 17

Caenohabditis elegans Nematode Rhaboditida Modello di organismo non-patogeno 1 Calicivirus felino Virus Caliciviridae Surrogato per virus tipo Norwalk 21 Candida albicansa Funghi Lievito Patogeno opportunista umano 12 Candida parapsilosisa Funghi Lievito Non-patogeno 9,10

Clostridium difficile Batteri Bastoncino gram +vo, spore, anaerobi obbligati

Patogeno ospedaliero – diarrea associata ad antibiotici 7

Clostridium piliforme Batteri Bastoncino gram +vo, spore, anaerobi obbligati

Malattia di Tyzzer nei roditori 19

Clostridium sporogenesa Batteri Bastoncino gram +vo, spore, anaerobi obbligati

Il genere comprende C.botulinum, C.difficile e C.perfringens, tutti patogeni umani importanti

8,9,10, 12

Enterococcus faecalisa Batteri Bastoncino gram +vo Patogeno ospedaliero (VRE) 9,10

Enterococcus faecium Batteri Cocchi gram +vi Patogeno ospedaliero – enterococchi resistenti alla Vancomicina (VRE)

7

Escherichia coli Batteri Enterobatteriacee Patogeno ospedaliero 6 Escherichia coli O157:H7 Batteri Enterobatteriacee Patogeno trasmesso negli alimenti 4

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Geobacillus stearothermophilusa Batteri Bastoncino gram

+vo, spore Indicatore termofilo e biologico per procedure di sterilizzazione

3,7,8, 9,12, 13,17

Herpes simplex Tipo 1 Virus Herpesviridae Patogeno umano 10 Influenza A2 Virus Orthomyxoviridae Patogeno umano 10 Klebsiella pneumoniaea Batteri Enterobatteriacee Patogeno ospedaliero 4,7

Lactobacillus caeseia Batteri Bastoncino gram +vo Industria alimentare, organismo di putrefazione 9,10

Laringotracheite infettiva Virus Herpesviridae Patogeno animale 6

Legionella pneumoniae Batteri Bastoncino gram -vo Causa la malattia del legionario 4 Listeria monocytogenes Batteri Bastoncino gram +vo Patogeno trasmesso negli alimenti 4 Malattia vescicolare suina Virus Picornaviridae Patogeno animale 2

Mycobacterium smegmatisa Batteri Bastoncino gram +vo Non-patogeno ma il genere include la M.tuberculosis 9,10

Parvovirus Virus Parvoviridae Patogeno umano/animale 5 Parvovirus canino Virus Parvoviridae Patogeno animale importante 21

Parvovirus felino Virus Parvoviridae Patogeno importante in animali da laboratorio 21

Penicillium sp. Funghi Muffa Patogeno opportunista umano/animale Storicamente Importante

17

Polio Tipo 1 Virus Picornaviridae Patogeno umano 10

Pseudomonas aeruginosaa Batteri Bastoncino gram -vo Patogeno ospedaliero 9,12

Rhinovirus 14 Virus Picornaviridae Patogeno umano 10 S.aureus meticillino-resistente (MRSA) Batteri Bastoncino gram +vo Patogeno ospedaliero criticamente

importante 13

Salmonella choleraesuisa Batteri Enterobatteriacee Patogeno trasmesso negli alimenti 4 Salmonella typhimurium Batteri Enterobatteriacee Patogeno trasmesso negli alimenti 6 Serratia marcescensa Batteri Enterobatteriacee Patogeno ospedaliero 9 Staphylococcus aureusa Batteri Bastoncino gram +vo Patogeno umano importante 4,6,7,9

Staphylococcus epidermidis Batteri Bastoncino gram +vo Patogeno ospedaliero 13,15,16

Syphacia muris Nematode Nematodi Vermi tondi di topo 19 Vaccinia Virus Poxviridae Vaccino vivo - vaiolo (Variola) 2 Virus del colera suino Virus Flaviviridae Patogeno animale 2 Virus dell’influenza aviaria Virus Orthomyxoviridae Patogeno animale 2,6 Virus della bronchite infettiva Virus Coronaviridae Patogeno animale 6

Virus della bursite infettiva (IBDV) Virus Birnaviridae Patogeno animale 6

Virus della febbre suina africana Virus Iridoviridae Patogeno animale 2

Virus della lingua blu Virus Reoviridae Patogeno animale 2 Virus della malattia di Newcastle Virus Paramyxoviridae Patogeno animale 2,6

Virus della Pseudorabies Virus Herpesviridae Patogeno animale 2 Virus della stomatite vescicolare Virus Rhabdoviridae Patogeno animale 2

Virus dell'esantema vescicolare Virus Caliciviridae Patogeno animale 2

Virus Dengue Virus Flaviviridae Patogeno umano, febbre emorragica 20

a Anche quando gli esperimenti sono stati ripetuti con siero bovino al 5%, la bio-inattivazione completa è stata portata a

termine con successo