BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA … · en orinas ácidas. GRAVEDAD ESPECÍFICA.- La densidad es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina y el peso

Fac. Cs. Qs. Dpto. De ANÁLISIS CLÍNICOS LABORATORIO DE QUÍMICA CLÍNICA III

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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

ÁREA ESPECÍFICA DE ANALISIS CLINICOS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

ASIGNATURA DE: QUIMICA CLINICA III CÓDIGO: LQF 416 L FECHA DE ELABORACIÓN: MARZO 2002 NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: FORMATIVO TIPO DE ASIGNATURA: CP PROFESORES QUE PARTCIPARON EN SU ELABORACIÓN: M.C. NORMA ELOÍNA LARA ROSANO M.C. SILVIA GARCÍA GONZÁLEZ QFB.LUCILA JUAREZ PEREZ

HORAS PRÁCTICA. 3 TOTAL DE CRÉDITOS: 0


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OBJETIVOS GENERALES.- El principal objetivo del curso es que el alumno sea capaz de llevar a cabo diversas pruebas de laboratorio que sean útiles en el diagnóstico de alteraciones en el equilibrio ácido-base y en la función renal, así como de enfermedades de la glándula tiroides y paratiroides. Así mismo conocerá y realizará diversas determinaciones útiles en el diagnóstico prenatal y embarazo. SISTEMA GENERAL DE EVALUACIÓN.- Se deberá cumplir con el 100% de asistencia al laboratorio. Participación: 20 % Seminario Desempeño Pre-reportes y Reportes (equipo) 30 % Examen 50 % Total 100 % NOTA: Una calificación aprobatoria corresponderá al 20% de la calificación final en la materia.


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MEDIDAS GENERALES DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE QUÍMICA CLÍNICA III

La seguridad es una parte fundamental en el desempeño de cualquier

laboratorio. En el caso de Análisis Clínicos Especiales II, los especímenes biológicos que se manejan, se consideran potencialmente infecciosos. Es por ello que los alumnos deben cumplir con ciertos requisitos para trabajar en el mencionado laboratorio.

El primer requisito inviolable es que los estudiantes deben trabajar con bata, guantes y perillas de seguridad en cada una de las prácticas.

En las ocasiones en que manejen reactivos tóxicos, también deberán portar cubrebocas.

También será obligatorio que cada equipo cuente con una franela para limpiar la superficie donde trabajen antes y después de realizada la práctica.

La forma de desechar material punzocortante, torundas y muestras biológicas será la siguiente:

El material punzocortante (agujas, lancetas y capilares) se colocarán en los contenedores especiales (rígidos rojos).

Las torundas, papel y aplicadores que hayan estado en contacto con las muestras biológicas, se colocarán en las bolsas rosas especiales.

La sangre, suero o plasma sobrante se depositará en tubos bien tapados y se colocarán en el mismo contenedor del material punzocortante.

Los tubos con restos de muestras biológicas se introducirán en una palangana con hipoclorito de sodio, para que después sean lavados por el personal de intendencia.

Todas estas medidas de seguridad se deben seguir rutinariamente, para evitar cualquier accidente que ponga en peligro la salud de los alumnos y personal que labora en los laboratorios del departamento de Análisis Clínicos.


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SESIÓN No. 1 SEMINARIO SOBRE LA RECOLECCIÓN DE MUESTRAS (UREA,

AMONIO, CREATININA Y ÁCIDO ÚRICO)

Objetivo: Conocer el control de calidad en la fase preanalítica en

la determinación de urea, amonio, creatinina y ácido úrico.


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SESIÓN No. 2 SEMINARIO RESPECTO A INTERFERENCIAS EN LAS

DETERMINACIONES DE UREA, AMONIO, CREATININA Y ÁCIDO ÚRICO

Objetivo: Que el estudiante, conozca los fundamentos de diversos métodos para la cuantificación de urea, amonio, creatinina y ácido úrico, investigue ventajas y desventajas de cada uno, así como las interferencias en cada uno de los métodos.


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SESIÓN No. 3 DETERMINACIÓN DE UREA, CREATININA Y ÁCIDO ÚRICO

Objetivo: Aprender a efectuar las determinaciones de urea, creatinina y ácido úrico detectando causas de interferencias y de error que se pueden presentar en dichas determinaciones. Discutir e interpretar los resultados para así llegar al diagnóstico de una alteración renal.

Introducción.- Una de las principales funciones del riñón consiste en la eliminación de los productos nitrogenados del catabolismo proteico. En presencia de un trastorno de la función renal, la disminución de la capacidad de excreción de los productos de desecho nitrogenados es un factor fundamental en la aparición de los síntomas. Las enormes reservas renales para la excreción de productos del catabolismo proteico se refleja en la ausencia de síntomas hasta que la función renal se encuentra reducida a menos de un tercio de la capacidad normal.

Urea.- La Urea es el principal producto final del catabolismo de las proteínas y aminoácidos, se genera en el hígado y representa el 45 por ciento del nitrógeno no proteico total. La concentración de Urea en sangre es determinada en la forma de nitrógeno ureico sanguíneo BUN. La producción de Urea y el BUN se encuentran aumentados cuando existe una mayor cantidad de aminoácidos metabolizados en el hígado. Esto puede observarse en casos de una dieta con elevado contenido proteico, de degradación tisular o de disminución de la síntesis proteica. Y se encuentran disminuidos en los casos de una dieta pobre en proteínas y en enfermedad hepática severa.

Creatinina.- Los niveles séricos de creatinina y su excreción urinaria dependen de la masa magra corporal del individuo normal. Exhiben una respuesta escasa o nula a las modificaciones dietéticas o a las alteraciones del equilibrio electrolítico. La creatinina es un derivado de la creatina que se forma por reacción espontánea o irreversible. La creatinina

libre no se reutiliza en el metabolismo del cuerpo, y por lo tanto funciona únicamente como producto de excreción de la creatina. La formación de la creatinina es constante, y aproximadamente un 2 por ciento de creatina es transformada de esta manera cada 24 horas. Dado que la creatinina es un reflejo directo de la masa muscular, su nivel sérico es más elevado en los hombres que en las mujeres.

La creatinina es libremente filtrada a nivel glomerular y no es reabsorbida por los túmulos, la depuración de esta sustancia puede ser empleada para estimar el índice de filtración glomerular.

Ácido úrico.- En el catabolismo de los ácido nucleicos las bases purínicas liberadas por hidrólisis de sus nucleótidos son parcialmente reutilizadas en el proceso de síntesis metabólica, pero sufren en parte un proceso de oxidación a ácido úrico pasando por la formación de xantina (2,6-dioxipurina). En la mayoría de los mamíferos el ácido úrico (sustancia muy poco hidrosoluble) prosigue su degradación catabólica dando lugar a la alantoína, compuesto de excelente solubilidad que es rápidamente excretado por vía renal. En el hombre y en los antropoides falta la enzima


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necesaria para este último paso catabólico, la uricasa, y en consecuencia se elimina el ácido úrico como producto final del metabolismo de las purinas. La solubilidad máxima del ácido úrico en plasma sería de unos 8.5 a 8.8 mg/dL, y a un pH de 7.4 aproximadamente el 98 por ciento del ácido úrico total se encuentra bajo su forma de sal monoalcalina.

También se encuentra presente en los hematíes, y en condiciones de equilibrio su concentración eritrocitaria es aproximadamente la mitad de la plasmática. Debido a su muy mala solubilidad en los líquidos orgánicos, el ácido úrico es un catabolito potencialmente peligroso capaz de conducir a la constitución de formaciones cristalinas.

El adulto medio tiene un contenido total aproximado de 1.2 g de ácido úrico en el cuerpo, lo cual puede considerarse una reserva miscible con un recambio alto. El ácido úrico de esta reserva procede de tres orígenes: Catabolismo de Purinas endógenas, catabolismo de purinas exógenas y excreción renal/intestinal.

La mayor parte de la formación de ácido úrico tiene lugar en el hígado, por su gran actividad de xantino oxidasa; el adulto medio excreta aproximadamente de 0.4 a 0.8 g de ácido úrico en orina cada 24 horas. Los valores de referencia varían con el método, edad, factores raciales, sexo, factores sociales y factores geográficos.

Material y Métodos.-

Reactivos: Equipo:

Reactivo para Urea Espectrofotómetros c/celdas

Reactivo para Creatinina RA-50

Reactivo para Ácido úrico Baños María c/termómetros

Suero Control DC-Trol

Los reactivos podrán ser Serapack-Plus

Material por Sección: Material por Equipo:

2 pizetas con agua destilada Equipo Vacutainer

3 Pipeta de 1000 µL c/puntas Pipeta 10 µL c/ puntas

Algodón y alcohol Pipeta 25 µL c/ puntas

2 pipetas 10 mL Pipeta Pasteur c/chuzo

Cronómetros Gradilla

Técnicas.-

Se anexan los insertos para Creatinina, urea y ácido úrico.

Bibliografía.- Angel M.G., Angel R.M., Interpretación clínica del laboratorio, Ed.Panamericana, S.A. Bogotá, Colombia.


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Henry J.H., Tood-Sanford-Davidsohn, Diagnóstico y tratamiento clínico por el laboratorio, Ed. Salvat, Barcelona, España. Wallach J., Interpretación de los diagnósticos de laboratorio, Ed. Salvat, Barcelona, España.


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SESIÓN No. 4 SEMINARIO SOBRE EL EXAMEN GENERAL DE ORINA

FUNDAMENTOS DE MÉTODOS

Objetivo: Que el alumno comprenda los fundamentos de los métodos

para las pruebas química en el examen general de orina, así como las interferencias en dichas determinaciones.


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SESIÓN No. 5 SEMINARIO SOBRE EL CONTROL DE CALIDAD EN EL EXAMEN

GENERAL DE ORINA

Objetivo: El conocimiento del control de calidad en el examen

general de orina, durante las diversas fases: preanalítica, analítica y posanalítica.


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SESIÓN No. 6 EXAMEN GENERAL DE ORINA

Objetivo: Que el alumno aprenda la metodología para realizar el

examen general de orina, que se familiarice e identifique las diferentes estructuras que se presentan en el sedimento urinario, y correlacione los resultados para llegar al diagnóstico de diversas patologías donde dicho examen se altera.

Introducción.- El examen general de orina comprende el análisis de las características físicas, características químicas y el examen microscópico del sedimento. El EGO es una de las pruebas más frecuentemente realizadas en el laboratorio de Química Clínica, siendo utilizada como prueba de escrutinio para la detección temprana de enfermedades del tracto urinario. Tradicionalmente el EGO ha consistido de un examen físico-químico que es barato y simple de realizar, y del examen microscópico del sedimento urinario que es costoso, consumidor de tiempo, además de ser difícil de estandarizar debido a que depende de la subjetividad del operador.

CARACTERÍSTICAS FÍSICAS:

COLOR.- La orina normal presenta una amplia gama de colores, lo cual está determinado por su concentración. El color puede variar de amarillo pálido a ámbar, según la concentración de los pigmentos urocrómicos, y en menor medida de la urobilina y de la uretrita. Cuanto más pigmento tenga mayor será la intensidad del color.

ASPECTO.- La orina normal habitualmente es clara, pero se torna turbia por precipitación de partículas de fosfato amorfo en orinas alcalinas o de uratos amorfos en orinas ácidas.

GRAVEDAD ESPECÍFICA.- La densidad es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina y el peso del mismo volumen de agua medidos a una temperatura constante. Constituye un índice de la concentración del material disuelto en la orina, sin embargo, no sólo

depende del número de partículas, sino también del peso de éstas en la solución.

La gravedad específica se utiliza para medir el poder concentrador o diluyente del riñón en su esfuerzo por mantener la homeostasis en el organismo. La capacidad de concentración del riñón es una de las primeras funciones que se pierde como consecuencia de un daño tubular.

CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS.- Desde la introducción de las tiras reactivas simples y múltiples, el examen químico de la orina se ha convertido en un procedimiento sensible y rápido. Actualmente es posible analizar hasta 10 pruebas diferentes en menos de 60 segundos.

La Tira Reactiva es una banda angosta de plástico con pequeños tacos adheridos, cada taco contiene reactivo para una reacción diferente, lo que permite la determinación simultánea de varias pruebas. Un requerimiento crítico es que las reacciones de las tiras sean leídas en el momento prescripto después de haber sido sumergidas en la muestra, y luego deben ser comparadas cuidadosamente con la carta de colores proporcionada por el fabricante. Con el objeto de obtener resultados


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exactos y confiables con las tiras reactivas, deben tomarse ciertas precauciones para ayudar a mantener la reactividad de los reactivos. Las tiras no deben ser expuestas en medios húmedos, a la luz directa del sol, al calor, a sustancias volátiles, debiendo ser almacenadas en su envase original. Dicho envase no debe ser almacenado en la heladera ni ser expuesto a temperaturas superiores a 30°C.

El procedimiento para usar las tiras reactivas es el siguiente:

1. Sumergir completamente las áreas de prueba de la tira en orina fresca, bien mezclada y sin centrifugar y retirar la tira en forma inmediata. Debe tenerse cuidado de no tocar las áreas reactivas.

2. Eliminar el exceso de orina de la tira tocando con el borde de ésta el frasco que contiene la muestra.

3. En el momento apropiado comparar las áreas reactivas con la correspondiente carta de colores del envase. La lectura debe hacerse con buena iluminación para lograr una comparación exacta del color. De preferencia debe emplearse un lector de tiras reactivas como el Urilux.

En el examen químico determinamos las siguientes pruebas: pH, Glucosa, Proteínas, Hemoglobina, Bilirrubina, Cuerpos cetónicos, Urobilinógeno, Gravedad especifica, Nitritos y Leucocitos.

EXAMEN MICROSCÓPICO DEL SEDIMENTO.- Constituye una parte vital del análisis de orina de rutina, es una herramienta diagnóstica valiosa para la detección y evaluación de trastornos renales, así como del tracto urinario y otras enfermedades sistémicas.

Un buen examen microscópico del sedimento depende de dos factores: una muestra adecuada y un analista experimentado.

La mejor muestra para el análisis de orina de rutina, es la primera micción de la mañana; ya que los cilindros y los hematíes tienden a disolverse o a lisarse en muestras de baja densidad o de pH alcalino. La primera muestra de la mañana por lo general proporciona el medio concentrado y ácido necesario para mantener esas estructuras. El sedimento debe examinarse lo antes posible después de su recolección pero si no es posible hacer el examen en forma inmediata, puede refrigerarse la muestra durante unas horas.

Material y Método.-

Reactivos: Equipo:

Tiras reactivas Lector de tiras reactivas

Centrífuga

Microscopio

Técnica:

Se anexa el inserto de las tiras reactivas

Bibliografía:

Henry J.H., Tood-Sanford-Davidsohn, Diagnóstico y tratamiento clínico por el laboratorio, Ed. Salvat, Barcelona, España.


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Kaplan L., Pesce A ., Química Clínica: Teoría, análisis y correlación, Ed. Médica Panamericana, Buenos Aires.


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SESIÓN No. 7 RESOLUCIÓN DE CUADROS CLÍNICOS SOBRE ALTERACIONES

RENALES

Objetivo: Que el estudiante mediante los conocimientos

adquiridos, sea capaz de analizar casos clínicos reales relacionados con alteraciones renales y los sepa interpretar.


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SESIÓN No. 8 SEMINARIO SOBRE TOMA DE MUESTRA PARA DETERMINACIÓN

DE GASES SANQUÍNEOS ARTERIALES

Objetivo: Conocer todos los requisitos para una toma adecuada de

sangre arterial. Así también familiarizarse con la información que se obtiene con una determinación de gases sanguíneos arteriales.


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SESIÓN No. 9 DETERMINACIÓN DE GASES SANGUÍNEOS ARTERIALES Y

ELECTROLITOS

Objetivo: Que el alumno se familiarice con el manejo del gasómetro, aprenda a efectuar la determinación de gases sanguíneos arteriales así como de electrolitos, conociendo las posibles interferencias en dichas deterinaciones.

Introducción.- La determinación de gases sanguíneos arteriales (DGSA) es útil para conocer: 1) la oxigenación de la sangre, 2) evaluar el intercambio gaseoso, 3) la ventilación alveolar, 4) el equilibrio ácido-base y 5) para valorar la entrega tisular de oxígeno.

Por lo anterior esta determinación se solicita en pacientes con datos clínicos de falla respiratoria, con inestabilidad hemodinámica, con alteración del estado de conciencia o dentro de las pruebas preoperatorias.

Los gases sanguíneos deben determinarse en la sangre arterial con el fin de obtener toda la información antes mencionada, de modo que es importante desarrollar un razonamiento para decidir los criterios para determinar el sitio apropiado y la técnica de muestreo. Dichos criterios son:

1.-Flujo sanguíneo colateral. La punción arterial puede acarrear espasmo, coagulación intraluminal o hemorragia con formación de un coágulo periférico (hematoma). Cualquiera de estos factores puede reducir o interrumpir por completo el aporte sanguíneo a los tejidos del respectivo territorio vascular. Por lo tanto, una consideración importante al elegir los sitios de punción arterial es la circulación colateral disponible en caso de que la arteria se obstruya.

2.- Accesibilidad del vaso. Es más fácil palpar, estabilizar y punzar una arteria superficial que otra un tanto profunda. Las arterias superficiales están en los extremos distales de las extremidades, en sitios que suelen ser accesibles en el paciente externo y también en el paciente muy grave.

3.- Tejidos periarteriales. Los músculos, tendones y grasa son bastante insensibles al dolor, en tanto que el periostio y los nervios son muy

sensibles. Así, las arterias rodeadas de tejidos comparativamente insensibles son mejores porque la punción duele menos. Además se prefieren las arterias que no tienen venas satélites para reducir la probabilidad de punzar por accidente una vena.

La arteria radial, a nivel de la muñeca, satisface los criterios precedentes porque es la más segura y accesible para la punción arterial. Este vaso está en la superficie de la muñeca y no lo acompañan venas importantes. Suele haber una adecuada circulación colateral por la arteria cubital y, si no se punza el periostio, el procedimiento es bastante indoloro.

Con el fin de verificar la circulación colateral, se lleva a cabo la Prueba de Allen. El paciente cierra con firmeza el puño para expulsar de la mano la mayor cantidad posible de sangre y se comprimen directamente en la muñeca las arterias radial y cubital para obstruirlas al mismo tiempo. Al abrir entonces la mano (sin extenderla del todo) la palma y los dedos aparecen blanqueados. Se suelta la arteria cubital solamente mientras se observan la palma y los dedos; deben sonrosarse en 15 segundos al llenarse los capilares con la sangre proveniente de la arteria cubital. Este sonrojo de toda la mano significa que la arteria cubital sola abastece a toda la mano,


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porque la arteria radial continúa ocluida. Esto es la prueba de Allen positiva, lo que indica que si al punzar la arterial radial ésta se obstruye, el aporte sanguíneo para la mano no habrá de disminuir.

La heparina es el anticoagulante de elección para la recolección de la muestra. Bastan 0.05 ml de heparina sódica (1,000 unidades/ml o 10 mg/ml) para anticoagular 1 ml de sangre. Se recomienda extraer de 2 – 4 ml de sangre arterial para este tipo de estudio.

Una vez extraída la muestra, se debe tapar la jeringa con un tapón de corcho o caucho y conservarla a una temperatura por debajo de 4º C por no más de 1 hora.

Material y Método.-

Equipo: Técnica.-

Gasómetro Gasometría arterial

Se darán las indicaciones al momento de la práctica.

Bibliografía:

Shapiro; Manejo Clínico de los gases sanguíneos, Ed,.Panamericana


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SESIÓN No. 10 RESOLUCIÓN DE CASOS CLÍNICOS SOBRE EQUILIBRIO ÁCIDO-

BASE

Objetivo: Que el estudiante analice casos clínicos relacionados

con desequilibrios ácido-base, y sea capaz de interpretar los resultados, llegando a un diagnóstico presuntivo.


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SESIÓN No. 11 SEMINARIO SOBRE FUNDAMENTOS DE MÉTODOS PARA LA

CUANTIFICACIÓN DE HORMONAS

Objetivo: Conocer los fundamentos de los diversos métodos para

la cuantificación de hormonas, así como las interferencias y control de calidad en dichas determinaciones.


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SESIÓN No. 12 CUANTIFICACIÓN DE HORMONAS TIROIDEAS Y SEXUALES

Objetivo: Que el alumno lleve a cabo la cuantificación de hormonas tiroideas y

sexuales, aprenda el manejo y mantenimiento adecuado del equipo empleado en dichas determinaciones. Introducción:

Hormonas Tiroideas.- Las hormonas tiroideas son producidas en el interior de las células de los folículos a partir de proteínas, del aminoácido tirosina y del elemento halógeno iodo. Las dos hormonas tiroideas más importantes son la tiroxina (T4 ), la cual contiene 4 átomos de iodo, y la triiodotironina (T3 ), que posee 3 átomos de iodo. Las hormonas tiroideas son liberadas del coloide y segregadas en la circulación en respuesta a estímulos de la glándula tiroidea como consecuencia de la acción de la hormona hipofisaria denominada tiroideoestimulante (TSH). Las iodotironinas en circulación en gran medida están unidas a la proteína, esto es, la globulina unidora de tiroxina (TBG), prealbúmina con capacidad de captar tiroxina (TBPA) y albúmina. La T4 muestra una afinidad mayor por la TBG y TBPA, pero la T3 también se une a las proteínas. Así pues, los cambios en el nivel de TBG producen cambios en las concentraciones séricas totales de T4 y T3 ( en el mismo sentido). Las funciones fisiológicas de dichas hormonas incluyen la regulación de las necesidades de oxígeno, temperatura y peso corporal. También regulan (en forma directa e indirecta) una variedad de parámetros del metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas. Las anomalías de la función tiroidea incluyen secreción excesiva o insuficiente de hormonas tiroideas y aumento de tamaño de la tiroides, generalizado o focal. Determinaciones típicas de la función tiroidea en diversas condiciones: T4 T4 libre T3 TSH Interpretación Comentarios ! ! N, ! ¡ Hipotiroidismo primario + 20% T3 normal

! ! N, ! N Hipotiroidismo secund TRH no es útil ¡ ¡ ¡ N Hipertiroidismo En tiroiditis hay discrepancia entre

T4 y PBI N N ¡ N Tirotoxicosis ¨T3¨ ! = disminuído ; N = normal; ¡ = aumentado TRH = hormona liberadora de Tiroides; PBI = iodo ligado a proteínas Las determinaciones que se llevarán a cabo como perfil tiroideo serán: T3 total, T4 libre y T4 total y TSH.


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Hormonas Sexuales.- En particular, todos los procesos reproductivos son regulados íntimamente por una serie de complejos sistemas interrelacionados que incluyen el hipotálamo, la hipófisis y las gónadas masculinas y femeninas. Entre las acciones más complejas llevadas a cabo por las hormonas se encuentran los mecanismos que tienen lugar a nivel del sistema reproductor. Contrariamente a la creencia popular, tanto los hombres como las mujeres segregan las mismas hormonas esteroides sexuales, es decir, andrógenos, estrógenos y progesterona. La diferencia de la secreción hormonal sexual entre los dos sexos no es absoluta, sino más bien una cuestión de grado. La testosterona representa el principal esteroide sexual en los hombres, mientras que el estradiol es la principal hormona sexual en la mujer. Los órganos reproductores femeninos se clasifican como estructuras externas e internas. Los órganos externos y la vagina desempeñan funciones en la copulación, mientras que los órganos internos localizados en el interior de la pelvis permiten el desarrollo y nacimiento del feto. Los órganos externos consisten en la vulva, vello pubiano, labios vaginales (mayor y menor), clítoris, vestíbulo vaginal y glándulas mamarias como accesorios del sistema reproductor.

Los componentes internos del aparato reproductor femenino están representados por los dos ovarios, dos trompas de Falopio, el útero y la vagina.

Los ovarios se encuentran localizados a cada lado del útero y cumplen la función dual de generación del óvulo y de secreción de las hormonas esteroides sexuales femeninas, estrógenos y progesterona. Al nacer, cada mujer posee aproximadamente 400,000 folículos inmaduros de tamaño microscópicos en los ovarios, cada uno de los cuales contiene un óvulo inmaduro. El folículo maduro está compuesto por tres capas de células, la teca externa, la teca interna y la capa de células de la granulosa. Las células de la teca interna representan la principal fuente de estrógenos. Por otro lado el sistema reproductor masculino consiste en dos testículos que producen esperma y andrógenos, un pene y un sistema de glándulas exocrinas cuyas secreciones constituyen el volumen de líquido seminal en el que es vehiculizado el esperma. Estas glándulas están representadas por las dos glándulas bulbouretrales (glándulas de Cowper), dos vesículas seminales y una próstata y un sistema de conductos bilaterales a través de los cuales el esperma es expulsado hacia el exterior del cuerpo, el epidídimo, los vasos deferentes y el conducto eyaculatorio. El testículo maduro normal está cubierto por una espesa cápsula blanca. que mantiene la presión sobre aproximadamente 250 lobulillos piramidales compuestos por túbulos seminíferos los cuales están separados por tabiques fibrosos. Estos túbulos componen más del 85 % del volumen testicular. Dichos túbulos están rodeados por una delgada membrana basal, una túnica propia fibrosa y células mioides. El tejido intersticial intertubular contiene


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células de Leydig, las cuales son responsables de la formación de andrógenos testiculares. Las gonadotrofinas hipofisiarias, FSH (Hormona foliculoestimulante) y LH (luteinizante), desempeñan un importante papel al influir sobre diferentes funciones a nivel de los órganos sexuales internos masculinos y femeninos. En la mujer, la FSH induce el crecimiento de los folículos ováricos y estimula la secreción folicular de estrógenos, mientras que la LH actúa en las fases finales del crecimiento folicular para inducir la ovulación (o liberación del óvulo desde el folículo) y actúa como estimulante de las células del cuerpo amarillo para inducir la formación de progesterona. Por otra parte, en los hombres, la FSH induce la espermatogénesis, mientras que la LH estimula la producción de testosterona. Las hormonas esteroides sexuales en ambos sexos estimulan en la adolescencia el crecimiento corporal y la unión de las epífisis con las diáfisis óseas. Además, estas hormonas inducen la síntesis proteica. Mientras los andrógenos afectan a los músculos esqueléticos, lo que confiere el aspecto muscular a los hombres, los estrógenos actúan en mayor grado a nivel del músculo liso. Los andrógenos inducen las características sexuales secundarias típicas del hombre, mientras que los estrógenos estimulan las de la mujer, así como el crecimiento y desarrollo de los órganos reproductores femeninos. La progesterona puede ser considerada como la hormona materna, pues junto con los estrógenos inducen el desarrollo característico durante el ciclo menstrual. En esta práctica se realizarán las cuantificaciones de las siguientes hormonas: Estradiol, FSH, LH, Progesterona , Prolactina y Testosterona. Material y Método.- Reactivos: Equipos para las determinaciones mencionadas por ELISA Equipo: CODA BIO-RAD Técnicas.- Se anexan los insertos de las determinaciones Bibliografía: Kaplan-Pesce: Química Clínica, Ed. Panamericana, Buenos Aires Argentina


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SESIÓN No. 13 PRUEBAS QUE EVALÚAN EL METABOLISMO ÓSEO

Objetivo: Conocer las pruebas de laboratorio adecuadas para la

evaluación de trastornos del metabolismo óseo, como calcio, fósforo, fosfatasa alcalina, dihidroxipiridinolinas y PTH. Correlacionar los resultados para llegar al diagnóstico adecuado.

Introducción.- El tejido óseo se compone de osteoide (sustancia

fundamental no mineralizada) y hueso calcificado. Es un tejido dinámico que sufre remodelación continua. El proceso de remodelación se produce por síntesis de la sustancia fundamental o la colágena por osteoblastos, mineralización o depósito de fosfato de calcio en la sustancia fundamental para formar hueso calcificado, y resorción o destrucción del hueso calcificado por efecto de los osteoclastos. Estos procesos ocurren sobre todo en las superficies óseas. Se cree que las células mesenquimatosas cerca de la superficie son los precursores de osteoclastos y osteocitos. Cierto número de hormonas influyen sobre el metabolismo de las células óseas. La hormona paratiroidea (PTH) estimula la transformación de las células madre óseas en osteclastos, aumenta el cAMP en el esqueleto y fomenta la resorción ósea osteoclástica. Los estrógenos inhiben la resorción ósea inducida por PTH, pero al parecer no estimulan la formación ósea o mineralización. Al haber PTH, la Vitamina D incrementa la formación de osteoclastos, que depende de la PTH. La Vit.D sola es capaz de estimular la osteólisis (movilización de calcio) y la síntesis de la sustancia fundamental por osteoblastos. Un factor no hormonal importante es la hipofosfatemia, que puede inhibir la síntesis de la sustancia fundamental por osteoblastos. Es clásico dividir la enfermedad ósea metabólica en osteomalacia, osteoporosis y osteítis fibrosa. Antes se pensaba que los trastornos metabólicos específicos de importancia patógena eran la deficiencia de Vit.D en la osteomalacia, deficiencia de la transformación de la sustancia fundamental en la osteoporosis, y exceso de hormona paratiroidea en la osteítis fibrosa.

Ahora es claro que las diferentes formas de la enfermedad ósea metabólica pueden ocurrir en forma simultánea (en especial osteoporosis y osteomalacia) y de que los trastornos del metabolismo de la Vit.D tal vez jueguen un papel en las tres formas de enfermedad ósea metabólicas.


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Datos clínicos de la patología química en enfermedades del metabolismo óseo Suero Orina Enfermedad Ca++ HPO4

= Fosfatasa Alca. Ca++ H2PO4-

Hiperparatiroidismo ¡ ! N, ¡ ¡ ¡ primario Osteodistrofia renal !, N ¡ ¡ !

! Deficiencia Vit.D N, ! ! ¡ ! ¡ Osteoporosis N N N N, ¡ N idiopática Enf. de Paget N, ¡ N ¡ N, ¡ N Hipofosfatasia N, ¡ N ! ! N N ¡ = aumento; N = normal; ! = disminución; !! = gran disminución En esta práctica se llevarán a cabo las siguientes determinaciones: Calcio, Fósforo , Fosfatasa Alcalina, Hidroxipiridinolinas y PTH. Material y Métodos.- Reactivos: Equipo: Equipo para Calcio Centrífuga Equipo para hidroxipiridinolinas Equipo para Fósforo Espectrofotómetros c/celdas Equipo para Fosfatasa Alcalina CODA BIO-RAD Equipo para PTH (ELISA) Material por Sección: Material por Equipo: Pizetas con Agua destilada 12 tubos 16x150 Pizeta con SSI 3 tubos 10x100 3 pip. 10 ml 1 pip. 1 ml 1/100 2 pip. 5 ml 1 pip. 0.1 ml 1/100 2 pip. 2 ml Tubo Vacutainer rojo 2 pip. 1 ml 1/100 Torniquete,soporte y aguja 1 pip. 0.1 ml 1/100 1 pip. Pasteur corta c/chuzo Pip. De 25, 50 µL 1 gradilla Técnicas.- Calcio.- Se anexa el inserto del Equipo


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Fósforo.- Se anexa el inserto del Equipo Fosfatasa Alcalina.- Se anexa el inserto del Equipo Bibliografía: Greenspan, F.S.: Endocrinología Básica y Clínica, Ed.Manual Moderno, México Henry, J.H.: Tood-Sanford-Davidsohn Diagnóstico y tratamiento clínico por el laboratorio, Ed. Salvat, Barcelona España


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SESIÓN No. 14 y 15 PRUEBAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE EMBARAZO

Objetivo: Realizar las pruebas de laboratorio para el diagnóstico del embarazo, así como para el seguimiento de una mujer embarazada, previniendo con ello cualquier complicación de la madre durante la gestación. Interpretar los resultados.

Introducción.- El embarazo se establece de modo definitivo con la implantación, que es el proceso por el cual el blastocisto (gran cavidad llena de líquido con una capa superficial de células externas y una masa celular interna), se introduce en el revestimiento interno del útero (endometrio) y establece conexiones con la circulación materna. La implantación y crecimiento del cigoto requiere un medio hormonal adecuado, el cual se logra por la precisa sincronización de las funciones ováricas, embrionarias y endometrial durante los primeros días del embarazo. Tres o cuatro días después de la fecundación el cigoto ejerce un efecto luteotrófico directo sobre los ovarios mediante la secreción de la gonadotrofina coriónica humana (hCG) la cual estimula al cuerpo amarillo para que aumente su producción de progesterona y prolongue su vida útil hasta que la síntesis de progesterona y estrógenos placentaria se halle desarrollada lo suficiente. La detección de la hCG se ha empleado como una prueba clínica del embarazo desde 1927. La hCG sérica alcanza niveles detectables en 24 hrs. después de la implantación y aumenta rápidamente hasta niveles máximos (70 - 100 UI/ ml) unos 70 días después de la última mestruación normal.Después los niveles disminuyen rápidamente y se estabilizan entre 5 y 10 UI/ml, alrededor de los 120 días después del último período menstrual. La medición de la hCG no sólamente se usa para el diagnóstico del embarazo, sino también para el tratamiento de mujeres en riesgo de aborto espontáneo o para la evaluación de tumores trofoblásticos. La gonadotrofina coriónica sub-unidad beta (�hCG) es producida por el trofoblasto normalmente. Es de gran utilidad en el diagnóstico precoz del embarazo, en su control, en la mola hidatiforme, coriocarcinoma y embarazo ectópico.

El óvulo fecundado alcanza su madurez de implantación alrededor del 6o. día y empieza su actividad trofoblástica normal en el 8o. día por lo que pueden dosificarse millonésimas de mg desde el 10o. día de su implantación.

En la primera semana de embarazo se encuentran hasta 30 mUI/ml y se van incrementado hasta la 9a. semana donde alcanza hasta 304,000 mUI/ml. Posteriormente bajan sus unidades hasta el 6o. mes de embarazo (50,000mUI/ml) y luego ascienden al 9o. mes a 106,200 mUI/ml. Esta concentración normal, permite por medio de la cuantificación de las unidades internacionales apreciar la evolución del embarazo. Cifras superiores a 350,000 mUI/ml en el 1er.trimestre o 150,000 mUI/ml después del 4o. mes hacen diagnóstico en mola hidatiforme. Después del tratamiento por histerectomía por ejemplo a los 2 meses debe hacer negatividad total. La dosificación puede verificarse en orina o suero, aunque el procedimiento de elección es en suero. Durante el embarazo se debe llevar también un control hematológico, ya que la hemodilución o sea el aumento de volumen sanguíneo producido por un aumento del volumen plasmático conduce a anemia normocítica normocrómica. Y se puede presentar anemia hipocrómica al haber mayor demando de hierro, sin la


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correspondiente compensación en la dieta principalmente en embarazos y lactancias frecuentes. En el caso de diagnóstico ectópico puede ser de utilidad el dato de Hemoglobina (Hb) y eritrocitos cada 6 hrs (al menos en 3 ocasiones), donde se observará una baja relativamente apreciable en el Hto, eritrocitos y Hb ya que se presenta un sangrado considerable. En este mismo caso de embarazo ectópico, se encuentra amilasemia después de 5 hrs de evolución, ya que las trompas de Falopio tienen una gran cantidad de amilasa y la ruptura de la mucosa libera cantidades suficientes para ser detectadas. Ahora bien, dentro de las pruebas de control prenatal, debe conocerse el grupo sanguíneo de la madre y de ser posible del padre. Esto es sobre todo para tener un concepto evaluativo de la ausencia o presencia del factor Rh, y prevenir en casos posteriores Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido (EHRN). Por lo anterior en esta práctica, se efectuarán las siguientes pruebas de laboratorio: hCG, Grupo Sanguíneo (ABO y Rh), Amilasa, Biometría Hemática . Material y Métodos.-

Sesión No.1 Determinación de β-hCG y Citometría hemática Reactivos: Equipo: Reactivo para �hCG Lafon Centrífuga Amortiguador para Wright Microscopios Colorante de Wright Gradilla para VSG Capilares para QBC QBC Auroreader o

KX 21 Sysmex

Material por Equipo 2 portaobjetos nuevos 2 pip. 0.1 ml 1/100 1 gradilla 1 tubo Vacutainer lila torniquete, aguja y soporte 1 gradilla Técnicas de la Sesión No.1 hCG y/o �hCG.- Se anexa el inserto del equipo. Citometría Hemática (BH).- Se seguirá la metodología aprendida en Hematología I. Revisar .

Sesión No.2 Determinaciones de Amilasa y Gpo. Sanguíneo ABO y Rh Reactivos: Equipo: Equipo para Amilasa Bioxon Centrífuga Reactivos para Gpo. Sanguíneo ABO Lafon Espectrofotómetro c/celdas Rectivos para Gpo.Sanguíneo Rh Lafon Baño María a 37º C Albúmina bovina al 30% Lafon Termómetro


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Suero de Coombs Lafon Pizetas con SSI Material por Sección: 3 pip. 10 ml Material por Sección: Material por Equipo: 2 pip. 5 ml 1 tubo Vacutainer rojo 2 pip. 1 ml 1/100 torniquete, aguja y soporte 1 pip. 0.1 ml 1/100 2 pip. Pasteur corta c/chuzo 1 vaso de p.p. 600 ml 14 tubos 13x100 3 tubos 16x150 1 pip. 1 ml 1/100 2 pip. 0.1 ml 1/100 1 gradilla Técnicas de la Sesión No.2

Amilasa.- Se anexa el inserto del equipo. Grupo Sanguíneo.- Determinación del grupo sanguíneo ABO en tubo. Prueba Directa. Se denomina así a esta determinación del grupo sanguíneo ABO porque se realiza directamente sobre los glóbulos rojos de la muestra. Para ello se centrifuga la muestra de sangre coagulada durante 5 min. a 3,000 r.p.m. a fin de que se separe el suero del paquete globular y se pasa el suero a otro tubo previamente rotulado. Se prepara una suspensión de glóbulos rojos problema al 2% en SSI.(0.1 ml de glóbulos rojos + 4.9 ml de SSI o bien 1 gota de eritrocitos + 2 ml de SSI). Determinación del grupo sanguíneo ABO en tubo. Prueba Inversa. Se denomina así porque consiste en verificar el grupo ABO, pero en el suero problema, es decir, según los anticuerpos que presente el suero problema, podemos saber qué gpo. ABO tiene la sangre. Esto es posible debido a que todas las personas de un determinado gpo. ABO tienen anticuerpos naturales contra los otros grupos. Instrucciones: 1.- Suspensión eritrocitos 2% 2.- Prueba Directa e Inversa


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Directa (celular) Inversa(serológica) Tubo Reactivo(2 gotas) G.R. 2% Tubo Suero (2 gotas) Células 2%(1gota) 1 Suero anti-A 1 gota 5 Suero problema A1+ 2 “ anti-B 1 gota 6 “ “ A2+ 3 “ anti-AB 1 gota 7 “ “ B+ 4 “ problema 1 gota 8 “ “ O+ 3.- Mezclar agitando suavemente la gradilla que los contiene y centrifugar a 3,400 r.p.m. durante 30 seg. 4.- Observar aglutinación, leer cada tubo y anotar los resultados.

Sistema Rh.-

1.- Tubo Reactivo (2 gotas) G.R. problema2 % 9 Suero anti RhoD 1 gota 10 Albúmina bovina 30% 1 gota (Tubo control Alb.) 2.- Mezclar, centrifugar 60 seg. a 3,400 r.p.m. 3.- Leer los tubos uno a uno y anotar los resultados. 4.- Si no aglutinan, incubar 30 min a 37º C; centrifugar 60 seg. a 3,400 r.p.m. 5.- Si no aglutinan, lavar 3 veces con SSI. 6.- Tubo Suero de Coombs 9 2 gotas 10 2 gotas 7.- Mezclar, centrifugar 20 seg. a 3,400 r.p.m. 8.- Leer cada tubo y observar aglutinación. INTERPRETACION: Sistema ABO: Prueba Directa Prueba Inversa Gpo. Sanguíneo Anti-A Anti-B Anti-AB AT G.R.: A1 A2 B O + - + - - - + - “A” - - - - + + + - “O” - + + - + + - - “B” + + + - - - - - “AB” AT = autotestigo


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Sistema Rh: Anti-Rho D Control Interpretación + - Rho Positivo - - Posible Du Después de Suero de Coombs: + - Rh(-) Du(+) - - Rh(-) Du(-) Bibliografía: Albarrán C., Albarrán, L.: Manual Técnico de Banco de Sangre, Ed.Prensa Médica Mexicana, S.A. México Griffin J.E.: Manual Clínico de Endocrinología y Metabolismo, Ed.McGraw-Hill, México


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SESIÓN No. 16 y 17

PRUEBAS PARA EVALUAR EL ESTADO PRENATAL

Objetivo: Efectuar diversas pruebas de laboratorio que ayudan a evaluar el estado prenatal, colaborando con ello a prevenir complicaciones en el producto. Interpretar los resultados. Introducción.- Una prueba para evaluar la función placentaria es la cuantificación de fosfatasa alcalina termoestable, ya que presenta importantes elevaciones en el suero materno durante el tercer trimestre. Por otra parte es importante un Examen General de Orina (EGO) ya que al final del embarazo puede presentarse albuminuria ortostática, huellas de glucosa y lactosa. La piuria del sedimento, generalmente es de contaminación vaginal. También es frecuente un aumento de descamación leucocitaria vaginal, que hay que tener en cuenta en los exámenes de orina. Si ésta persiste en forma muy notable , es preciso verificar urocultivo por la frecuencia de infecciones tipo Coli en este estado. El embarazo también ejerce una acción diabetógena definitiva en las mujeres así predispuestas. Al principio, la diabetes se hace aparente sólo durante el embarazo y desaparece después del parto (diabetes gestacional); rara vez persiste.Hay pruebas de que el factor hormonal, como el lactógeno placentario y la destrucción acentuada de la insulina endógena por la placenta, ayuda a precipitar la diabetes. Por eso conviene cuantificar glucosa durante el embarazo. Respecto a la bioquímica sanguínea es frecuente la hipercolesterolemia con niveles máximos a la trigésima semana, normalizándose a los 2 meses después del parto. En cambio urea y Nitrógeno ureico bajan considerablemente. Así mismo se ha observado tendencia a la hipoproteinemia, hipoglicemia e hipocalcemia. Respecto a algunas patologías, el término toxemia del embarazo incluye las alteraciones encontradas durante la gestación o poco después del parto, y que se caracterizan por la aparición de hipertensión, edema y proteinuria (preeclampsia) y en casos graves, convulsiones y coma (eclampsia). Tal clasificación usualmente incluye un buen número de padecimientos diversos de los riñones y de los vasos sanguíneos que pueden comenzar o exacerbarse durante el embarazo.

La toxemia aparece más a menudo en mujeres primigrávidas y en las de más de 35 años de edad. La aparición puede ser insidiosa o brusca y comúnmente después de la 24 semana de gestación. La hipertensión es un signo temprano acompañado por lo general de proteinuria, el Nitrógeno de Urea muchas veces no se eleva a más de 20 mg/dl y el Ácido Úrico habitualmente elevado, refleja una disminución en la depuración renal de los uratos. Se presenta hipoalbuminemia que generalmente contribuye a la formación del edema.


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En esta práctica se realizarán las siguientes pruebas: EGO, Química Sanguínea Completa, Proteínas Totales y Albúmina, Calcio y Fosfatasa Alcalina. Material y Métodos.-

Sesión No.16 Se efectuará la QSC Reactivos: Equipo: Equipo para Glucosa Sera-Pak Espectrofotómetros c/celdas Equipo para Urea Sera-Pak, Baños Marías a 37º C Equipo para Creatinina Sera-Pak Termómetros Equipo para Ácido Úrico Spinreat Centrífuga Equipo para Colesterol Sera-Pak Material por Equipo: 1 tubo Vacutainer rojo Material por Sección: torniquete, aguja y soporte 4 pip. 10 ml 1 pip. Pasteur c/chuzo 4 pip. 5 ml 10 tubos 13x100 6 pip. 1 ml 1/100 6 tubos pyrex 16x150 5 pip. 0.1 ml 1/100 1 pip. 0.1 ml 1/100 1 pip. 5 ml 1 gradilla Técnicas de la Sesión No.16.- Se anexan los insertos de la Química Sanguínea Completa Material y Métodos.-

Sesión No.17 Se realizarán las cuantificaciones de Proteínas Totales y Albúmina, Fosfatasa alcalina total y placentaria y EGO Reactivos: Equipo:

Equipo para Proteínas Totales y Alb. Centrífuga Equipo para Fosfatasa Alcalina Espectrofotómetros c/celdas Tiras reativas para EGO Combur 10 Baño María a 37º C Termómetro Lector de Tiras reactivas Material por Sección: 4 pip. 10 ml Material por Equipo: 1 pip. 1 ml 1 tubo Vacutainer rojo 1 pip. 0.1 ml 1/100 torniquete, aguja y soporte 1 pip. 5 ml 1 pip. Pasteur corta c/chuzo 1 porta y 1 cubreobjetos


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2 tubos 13x100 8 tubos 16x150 1 pip.5 ml 1 pip. 1 ml 1/100 1 pip. 0.1 ml 1/100 1 gradilla Técnicas para Sesión No. 17.- Se anexa el inserto de las Tiras Reactivas(EGO), proteínas totales y albúmina, así como para fosfatasa alcalina total y placentaria. Bibliografía: Griffin, J.E.: Manual Clínico de Endocrinología y Metbolismo, Ed.Mc Graw Hill, México Henry, J.H.: Tood-Sanford-Davidsohn Diagnóstico y tratamiento clínico por el laboratorio, Ed. Salvat, Barcelona España

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BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA … · en orinas ácidas. GRAVEDAD ESPECÍFICA.- La densidad es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina y el peso