9
Attenuation by Boron Supplementation of the Biochemical Changes Associated With Thioacetamide-Induced Hepatic Lesions Shakir Ali, 1 * G. Diwakar, 1 Sonica Pawa, 1 M.R. Siddiqui, 1 S.K. Jain, 2 and M. Abdulla 3 1 Department of Biochemistry, Faculty of Science, Jamia Hamdard Hamdard University), Hamdard Nagar, New Delhi, India 2 Center for Biotechnology, Faculty of Science, Jamia Hamdard Hamdard University), Hamdard Nagar, New Delhi, India 3 Trace Element-Institute for UNESCO, Imneuble Le Condorcet, Lyon, France Acute hepatic failure is a severe complication induced by certain chemicals, drugs, or virus. Thioacetamide generally has been used for the study of hepatic failure in ex- perimental animal model. The present study was aimed at to examine the role of boron in the pathogenesis of acute hepatic failure in rats. A single intraperitoneal injection of thioacetamide produced severe liver injury, as manifested by elevation in serum aminotransferases, alkaline phosphatase, and hepatic lipid peroxidation. Boron, when administered in the form of boric acid for three consecutive days followed by thioace- tamide, attenuated thioacetamide-mediated changes in the level of these biochemical parameters in a dose-dependent manner. The effect of boron supplementation on the survival rates of rats treated with a lethal dose of thioacetamide was also determined and found to lower the mortality rates in the group of animals supplemented with boron followed by thioacetmide. The effects on biochemical parameters and the sur- vival rates were dependent on the dose of boron administered as boric acid. It is concluded that boron provides protection against the thioacetamide-induced acute hepatic failure in rats in a dose-dependent manner. J. Trace Elem. Exp. Med. 15: 47 55, 2002. Ó 2002 Wiley-Liss, Inc. Key words: anti-hepatotoxic; hepatoprotective; boron; lipid peroxidation; aminotransferases; alkaline phosphatase INTRODUCTION Acute hepatic failure is a severe complication that is characterized by massive tissue necrosis [1]. Virus-, drug-, and chemical-induced liver injury account for most cases of acute hepatic failure in humans. Thioacetamide TAA), a thiono- sulfur-containing compound that induces liver damage, has often been used to *Correspondence to: Dr. Shakir Ali, Department of Biochemistry, Faculty of Science, Jamia Hamdard Hamdard University), Hamdard Nagar, New Delhi - 1100 62, India. E-mail: [email protected] Received 28 February 2000; Accepted 15 June 2001 Ó 2002 Wiley-Liss, Inc. The Journal of Trace Elements in Experimental Medicine 15:47±55 2002) DOI 10.1002/jtra.10000

Attenuation by boron supplementation of the biochemical changes associated with thioacetamide-induced hepatic lesions

Embed Size (px)

Citation preview

����������� ����� ���������������� ��� ����������� ������� �������������� ��������������������� ��������������

����� ���� ! "# $�%����� ����� &�%�� '#(# ����)���

#*# +����, ��� '# ������-

���������� � � ���� ����� ������� � �� ���� ��� � ������� �������� � ���� ����������� ������ �� ���� � !� �"#���� �� � �������� ������� � �� ���� ��� � ������� �������� � ���� ����������� ������ �� ���� � !� �$%���� &�����'!�� ���� �� ��&�#(� !���)�� *� #������ *�� �����

����� ������ ����� � ����� ���������� ������ �� ������ ������� � ���� � ����� � ����������� ��������� �� ���� � �� �� ��� ���� � ������ ����� � ������������ ����� ������ ��� ��� ��� ���� �� ���� �� �� ������ ��� ���� � ������ ��� ��������� � ����� ������ ����� � ��� � � ���� ������������� �������� ����������� �������� ����� ���� ������ � ���� ��� �� �������� � ������������ ��� � � ������� ��� ����� �� ��� ������ ��� ����������� ������ �������� ����� � ��� ��� � ���� ��� �� ����� ��� ������ ��� ������� �� ������������� ���������� ������������������� ������ � ��� ����� � ��� � ������������������ � � �� ����������� ������� ��� ���� � ����� ������������� �� ��� ������ ���� � ��� ������� ��� � ������ �� � � ����������� �� �� � ������������ ���� �� ����� ��� �������� ���� � ��� ����� � ����� ����������� �������� ������� �� ����������� ��� ���� �� ��������� ��������� ��� ��� ������� ���� ���� ��������� �� ��� �� � � ����� ���� ����� � ���� ���� �� ��������� ���� ����� ������ ��������� ���� � ��� ������������������ ����������� ����� � ��� � � �� ����������� ������� � ����� !���� !��� "��� #$%&'�$$� ())(� � ())( *����+ � ����

��� ����� �� ��������� �� ������������ ��� ������ � � � ����� �� ��� � ������������� ��� �����������

�.�(/$0���/.

����� ������ ����� � ����� ���������� ���� ���������,�� �� �� ��� �� ����� -#.� /�� �� ������ ��� �������������� ���� ����� ������� ���� � �� � � ����� ������ ����� � ����� � ����������� 0���1� � ������ ������������� �������� ���� ����� ���� ������� �� ���� ���� � �� ��

23���� �������� ��% 4�� 5���� ��� 4��������� � ������ ���� 6������ � 5������ ���7������ 07������ 8���� ��1� 7������ 9����� 9�� 4��� � ##)) :(� �����!����% ��; ����<����������

=������ (> 6������� ()))? �������� #$ ��� ())#

� ���� � ����� ��� ���

!�� "�#��� �� !��� $������� � $���� ����� %�� � �� &'()*'' +����,-.� &� &���/0�� &����

����� ����� ������ ����� � ����������� ����� -(.� 5������ ���� ���� �������� ��� �������� ����� �� ������� � �� �������� ��� �����������5����� �� ��� ���� ������ ���� � � ��� -@.� ����������� 5����� ������ �������,��� �� ��� � � ����� �� ���������� A&$) ����������� � � �������� � ��� �� ������ ������� �� � �� ������������� ��� �� �� ��� ��� ����� ��������� � ������ ����� �� ��� -&.� =�������� ��� �������� ������ �������� ������� ������ ��� ����������� ���� ���� �������� �� ���������� ���� � ���������� ������ ����� -$.� ������� ��� ���� � ������������� ���� 0=B51 � ��� ��������� �

���� ��� 0��1 �� �������� �������� � ������ ����� � ���� ��� �� ����� ���� ������ ��� �������� ��������� ��� ��� ���� �� ���� -:.� ����� ��� ���������� � �� � �� � ��� �������� ����� � �� ������ �� �� ���� �� ������ ��� ����� � �� ��� � ����� ��� � �� ����� � ����� ����� ����� ���� @�& ��� ���� ��� ���� ���� ������ � ��? � ���� � ������������ � ��� ��� �� � #&�#C � ��� �� ����������� ���� ���� ������ � �������� ��� ���� � �����% �� � �� ������������ � ����� ������������ #�) ���� ��� ����� -:.� 5���� �� ��� ���������� � �� ���� ���� ���������-:�>.� 9� �� ����� ����� � ���� ����� � �� �������� �� �� � ������������� $$ ��D��D��� -:.� 9� �������� �� ���������� ���� � ��� � ��� ����� ���� �������� �� ���� �������� � �� ->.� ����� ��� � �� ������ � �� ������������ ���� ����� ���� ��� �� ���� ��� �� � � ����������� ����� -C.�7������� � � ������ ���� �� 7������ -#). � � ��������� � ������ ���� ���� ��� ����� � ������ �� ���� �� ������ �� �� ������

��� ������ � �� ���� ����� � ���� ��� ���� � � ���� ��� ��������� ����� 9�� �� ��� A������ -##. � �� �� ��� ���� � ����� �� �������������� � � ����� � ���� ������� ������� �� ������ ����� �������� ��� ������������� ���� � � ��� � ��� ����� ���� ������� ��� � �� ���� ������� ��� �� �� ������ ��� ������ �� =B5� ����� � =B5 ���� ���� ��������� � ��� ��������� � ���������� ������ ����� -$.� � �� �������� ,�� ���� ����� ��� ��������� ��� ������ �� �� �������� � ��� �� ������� ������ � � ��������� �� � � ����

��� ��� ��� ���� �� � ��������� ���������� �� �������� ��� �������������������� � ������ ���� ����� �� ��� � ���� ��� ������� �� ��� ���������������������� 5������������� � ����� �� �� ����� �� ������ ������������� � ��� ������ �� �� ������ � ��� �� ��� ���� ������ � ���� � ����������� �� ��� � � ������ ��� ������ �� �� ��� ������ ���� � ��� ���� ���� ��� ������� �� ��� ��� ��������

'��1(��� �.$ '1��/$

�������

6����� * ��� ��� 0#$)�()) �1� ������� ��� ��� 3������ ����� 7�� �6����� � ��� 7������� ���� � �� � ��� ����� ����� ���� ���� ��� �#(�� ��������� ����� �� ��� ���� ����������� ��� ������� ��� ��� ��� ������� �� ��� ����� �� ����� ��� �� ������ ���� ��� ��� ������� � �� � ��� ���� ���� � ���� � ����� ����� �������� ����������� � ����� ������������ �� � �������� �������� ��� 5��� 3������ 3�� 05�� +�� � "B1�

(1 2� �� �

��������� �� ����� ������� 2������ ��� 13�������� �� ��3�� ��4��

����� ������ ����� �� ������ � ��� �� ���� ����� � ���� �������������� ������� � ��� 0&)) ��D�� ���� �����1� 3������ ��� ���� ���������� ������������� ������� � � ���� ������ � ������ ���� 0)�CE 9�3�1���� ��� ��������� � ������ ���� ���� #: � ���� ��������� ��� ����

�� �������� ��� ������ � ���� ������ ���� ��������� ��� ��� ����� �����#: � ���� ��� ���� ������ �� � �� �� ��� ����� � � �������� ��� ������ ��� ������� ��� ����� � �������� ��� ��������� �� ����� �� =�������� 6������ -#(. ��� �� �� �� ��� -#@.� �� ��������� !�,��� ����� ��� ����� ��� ��� �� ������ ��� � # �� ����� 6�� ��� ����������� � ������ ������� ��������������� 0��� ����������1 ��� ��� ����� � �� �� ��� 0�������� ���� ������ � ��� ����� ��F�� �� �7 '�&1� ��� ������ ����� �� �� 9���� �� ��� -#&. �� � ��� +�� ���������� ����� �� � ����� � ��������������� ����� ��� �� � ������� A����� � ���� ����� �� ��������� ���������� ��� ������ � +���� �� ��� -#$.�

15���������� $�����

�� ������ ��� ���� � ���� ��� ������������� �� ��� ������ � ��������� ������ �� �� ��� �� ���� �� ����������� ���� ���� ���������� 4������ �� � � �� �,�� )�#� )�(� )�@� �� )�& ������# ���� ����� 0�*1 ����������� �� ��� �� @ ��� ������ ��� ����� ��� ���� ������ � � ���� �� �� ��� 0&)) �� ���# �*� ���������������1� ��� �� ���� # � ���� ��� �� ��� � � ��� ��� ����� ����������� ��� ����� �� � � �� ��� ������� ��� �)�#� �)�(� �)�@� ��� �)�&� 4� � ����� � �� ����� )�# �� ���# ���� ��������� �� � �� ��� �� ��� ��������������� ������� ��� � ����� �������� ������F����� � ������� ��������� ���� � ��� ������������� ��� ����� ���� ���� � ���� ������ � ������ ���� ��� ��� ����� ���� ��� ���� � �� �� �� 0)�& �� ���# �*1 ����� � ������� � ��� ����� ���� ����� ��� ����� ����� � �� ��� �������� ��� ������� ����� ���� �������� ��� ��� �� ���� ������� ����� � ����� �

��3�3�� ������

��� ���� � �� ������������� �� ���������D�������� � ��� ���� ������� �� � � ����� ����� � �����* ��� ��� ������ ���� ����� ��� ������ ��� #) ��� � ���� ������ ��� ����� � ��� ���� ������ ���� ��� �������� � ��� ���� ��� ���� � �� � �������� 0)�&��D���*1 ����� � ������� ��� ����� ��������� ��� ��� 0#$) �� ���# �*1 �� ���� ������ �� #( ��� ������� ��� � ����� �� ����� ����� � �� ��� �������� B���� ����� ���� ������������ ������ ��� �F����� �� � � �� 0)�#� )�(� )�@� �� )�& �� ���# �*1 �� @��� ������ ��� ����� ��� ���� ������ � ��� ������ �� � � ���� ��� ���������� � ����� ��� ��� ������ �� � � ����������� �� ������ # � ���� ������� ������ � ��� �� � �� � � ��� ��������� ��� ����� �������� �� (&��������� �� ��� ���� ## ��� � ��� ����� ������� �F����� �� � � �� ����������� �� � �)�#� �)�(� �)�@� ��� �)�&�"������� � ���� ������� �� ����� ��

!22����#��� 2�#�� 3��� � 4 �#�� � 5�� (6

� ���� ���� ��� �� � �� � � ���� 9� �������� �� ��� ����� � ��� ������������ ��� ���� � �� � � ��� ���� )�& ��D�� �*� ��� �� ��� ��� ����� �� � ������� ������ � ���� ������ ���������� ( ���� ���� ��� �� � �� � � ����

���������� �������

��� �� ��� ���� ����� �� � ���� G ������� ������ 5������H � �� � �� � ���� �������� ���� ����� � ��������� ������� � ������� ����� ��� ����� ��� ����� ������� ������ � � ����� � )�)$ �� �� �� ��� ����� ��� ������ ��I�����

(1 0��

���� ��3��� �� ������� ������������ 6���7� ��������� ������������6� �7� ��� �������� &���������� 6��&7 �� (��� ������� ���� �� ����� ���

������ ����� � ���� �������� ��� � 0���� ���� � 1 ��� ���� ���������� ����� � � ��� ������� ��� �� ������� �� ��� ��� ���� � 6���� #� (���� @ �� ��������� 5����� ���� ������ � ���� ��� �� �������� � ��� � ��,�������� � �� �� ����� #: � ���� ��� ���� ������� � �� ����������� ������ �� ��,��� ����� �� �� ����� � ����� ����������� ��� ����� ������� ��

4 7 & 4� ����������� ���� � �� ������������ �� ������������������ ������ � ���� ������

�������� ��� � ������ � ���� ����� �� ����� #: � ���� ��� ���� ������ � ������������ 4� �

��� ��� ��������� �������� ��� � �� �� � ��� JJ"������ ��� "����� HH ����� � ��� ����� 2� � )�)$���� ��� ������� ����� �� �������� �� ��� ����������� ������������� ������ � �� �����������

���� � �� ������������� �� ��� ������ ������ ������ �� ����������� ��� �� ���� 93% ������

�������? �% ��? �% ������������

'� 2� �� �

4 7 � 5���� � ������� �������� ��� � ������ � ��� ���� �� ������� �� ������������ 4� � ���

��������� ��� �� ����� � ��� JJ"������ ��� "����� HH ����� � ��� ����� ����� �� ����� #: � ����

��� ���� ������ � ������������ 2� � )�)$ ���� �������� �� ��� ��� ������������� ����� � ��� �

93% ������ �������? �% ��? �% ������������

4 7 8 ������� ��� ����� � ������ ����� � ���� � ��� ��� ���������� ��� �� ������� �� ������

������� 4� � ��� ��������� ��� �� ����� � ��� JJ"������ ��� "����� HH ����� � ��� ����� ����� ��

����� #: � ���� ��� ���� ������ � ������������ 2� � )�)$ ���� �������� �� ��� ��� ������

������� ����� � ��� � 93% ������ �������? �% ��? �% ������������

!22����#��� 2�#�� 3��� � 4 �#�� � 5�� '&

���� ��� ������ ������ � ��� ������ � ���� ������ �������� ���������� 0���� �+�� �5�� ��� �+A1 �� ����� �� � �� � ����� � )�& ��D�� �*�

������� ����� &���5������� �� ��� ������� �� ���� �������� ����������� (���

7�������������������� ���� ��� � ��� ����������� �� � ������ � �������� � �� ���������� � ����������� ����� � ��� � ���� � ��� ����� � ��� ���������� ��� ����� �� � � �� ������� �� ��� 0���� 0�)�#� �)�(� �)�@� ����)�&1� � ������ ����� � � ��� ���������� �� �� ����� � �������������� � +�� ����������� ������� ���� � ��� ����� ������� ����� ����� ������������� �� �� ����� �� ������ � � � ������ ��������� �� ��� �� � � ���"����� ������ �� �� ����� �� � �� � � )�& ��D�� �* 06�� &1�

1����� �� �� �������������� �� ����������� �������� �� (���

��� ������ �� � � ��� ���� �� ��� ����� C � #) ����� � A����������� ������� ����� ��� ����� �� � � �� �� @ ��� ������ ��� �� ����� � � ������ ������ � � ��������� ��� ���� ���� � 6���� $ �� ����� �� ��

4 7 ( 7����� ��� ����������� ��� ���� � ��� ����� � �������������� � ��� ����� ����� ����

���I��� #: � ���� ��� ���� ������ � ������������ 2� � )�)$ ���� �������� �� ��� ��� ������

������� ����� � ��� � ��������� ��� ����������� ��� �� �� ����� � � ������ ��� �����������

���� �� ������� � ��� ����������� ��� �� ������� �� ������������ ��� �������� � ���

���������� �� ��������� �� ��� �� � � ��� 93% ������ �������? �% ��? �% ������������

'� 2� �� �

��������� �� ��� �� � � ��� 9� ������ � ������ �� �� ����� ���� ��� �� �� �� �� ����� �� ��� )�( �� )�@ �� ���# ���� ������ �� ��� �� ����� ���� �� � � ��� �� ��� ������ ��� � ���� �������� � )�# �� �� �������� ��� �K���� �� ��� � �� �� ������� �F��� �� ������� ��� ������ ������ � ��������� �� �������� �� � �� � ����� � )�& ��D�� �* � ���

$� �0 �/.

��� ����� ������ ����� ����� ���������� � ��� �� ��� ���� ������ ������������ ������ �� �� � ������� ��� �� ������ ������ ��� ����� �� ������� ���� ���������,�� �� ������� ���������� ��� � ������������������� -(�$�#:. ��� �� ���� � �� �� ��� ������� � ��������������� ������� * ��� ��� -#'.� ��� ��� ��� ���� �� ���������� �� ������ ��� ������������� � ����� ���� � ���������� ������ ������ ����� � * ��� ��� � ���������� ���� ����� �� ��� � ��� ��� � ���� ��� ������� �� ���� ��������� ������� ��� ���� ����� � ���� ��,��� � ������ ��� ������ �����06� � #�@1� ����� �� � ������� ��� ������������������ � � � ������ ��������������� ����� 06�� &1� � ��������� ������ � ������� ��� � ���� �������� � ��� ���� ��� ���� ������ � ���� � �� ����������� ����� � ���� ������ ���� � ����� ������� ����� ������� �� ��� �� �� � �� �����06�� $1� ��� � �� ��� ������� ������ �� � ��������� ���� � ����� � ������������

4 7 ' !��� � ����� ������������� �� ������������������ �������� � ��� � ��������� ��� ��

��� �� � �������� � ������������������ �������� � �� ����������� ������� 93% ������ �������? �%

��? �% ������������

!22����#��� 2�#�� 3��� � 4 �#�� � 5�� '8

��� ����� ������ �0 1 �� ���� ������ ����� ���� � ���� ���� �������� ��� 5���� �� ��� ���� � ����� ����� �� �������� ������� � �� ��������� ���� ���� ���� ������ �������� ��� ������� ��� �������������,��� -#>. ��� �� � ��� ��� ��������� ������ �������� ����� -#C. ������� ����� � ����� ��� � �������� ���� �� � ���� ���� �� �� � �������������� ������ -().� ���� ��������� �� ���� ����� �� ���� ��� ������ � � �� � ���� ��,��� ��� ��� ���� ��� A"9 ��������� � ��� ���� ������ � ���� �������� ������� ������� ��� �������� �� ���� � �� �� ��9�� �� ��� A������ -##�(#.�

�� ��� ��� ������ �� �� �������,�� � ����� ����� �� ����� � ���� ����� ���� �� ������ ��L���� �� ����� ��� ��B ���� -:.� ��� �������� ��������� �� ���� ���� �� ������������ ����� ��� ��� �������� ����������� �������� � ������������ ������ ��� ���� �� � ������� ������������ � ��� ��� ����� � � ��� ������ � ������������ ����� � A�� ������ ��� ��� �������� � �������� ������ ������������ ����� ������������� �������� ��� ������ ������� ����,�� ��� �������� ��������-(#.� ��� ����� � ����� �� ����,� ��� �������� �������� ��� ������ ������������ �� � �������������� �������

����� �������� �� ���� �� ����� �� �������� ��� ������� ������� � -##.���� ���� � ����� � ����� �� ����������� �������� � ���� � ��� ���������� ��� ��� ��,��� ������� � ��� ��������� ���� � ������ ��� �� ��=B5� �� ���� �������� -##.� �� � ������ ������� ����� �� ��� -$. ���� ��������=B5 � ��� ��������� � ��� ������������� B�� �� ��� ������ �� �������� � ��������� � ��� ��� ��� ��� �� �� ����� � � ������ ��� ������������ � ��������� ������ � ������� ��� � A����������� � ��� �������� � �� ����� ��������� �� ����������� � � � ��� ���������� �� ������������ 06�� &1� ������� ���� ����� �������� ����� ��������� ������ � ���� �� ��� ��� �� ������� � =B5� A������� �� �� ������ � � �������������� � �� ����������� ������ � � ��� ���� ����� � ��,��� � ������� ��� ������ �� �� �� ������

�� ������� ��� ���� ��� ���� ������ ���� ���� ����� � ��� �������� ������ � ��� ������� ������������������ ���� ����� � ��� � �������� ������ � ��������� �� ��������� ���� ��� ������ ��� ��� ����������� ����� �������� ���� � ���� ��� ������� ������D���������� ������� ���� � �� ��������� � ����������� ����� � ��� ����� � ����� �� ����,���� �������� �������� �� ����� �������� ��� ���������� �������������������� ����� �� � ������� ,�� �� ��������� �� ��� ��������������������� � ������ 6������� ������� � ���������� ���� � � ��� � ��� � ���� ����� ���� ���� �� ���� � ��� � � ���� ������� ����� ����������������� ���� ���� � �� ���� ## ��� ����� ��� ��������� � ������� ������� ���� ��� �������� �� ��� �� ��� ��������� � ������������,��� ������ �� ������ 6������ ���� ������ �������� �� ���� ��� ������� ��� ��� ��� �F��� ��� ���� ����� � ��� ��� �� �������� ��� ����������� � ��������� ��� ��������������� �� ��� � � ������ ��� �� � �� ��������� ��� �� ��� ��� ���� ��� ���������� ��������� � ������ �� ������ ���� ��� ���� ��� ������ � ����� ��� ��� ��� ��������� � ��� ��������� ����� �� ����� �� � ����

'( 2� �� �

��*./��1$"'1.�

*� ����� "�� 5��� 7� �� 0��51� /�� 3���������� ��� 7������ �� � ������ ��� �������������� 5A ����������� 35�= �� ������� ����� ��� ��� 7������ ������������ �� ������� ������ ������ ��� ��� ���� ���� ����� ������� ��� 8M3 0 7D�508M1DCC1�

(121(1.�1

#� BHM���� � 5������� 5*� *���� =� ����� ���� �����% ����I��� ��� �������� +�����#CC@?@(&%('@�('$�

(� +�� �� 65� N��� �� M"� A��� �� B�� /� ���� 7� 3������� ����� O�� ������������� �� ���� ��� ��� ������������������ ������ ������ 7������ #CC&?(#%&C#�&C$�

@� 7����� �+� 7�� ���� "�� 9��� =�� ������������������ ������ ����� � ����������� ���� ����������� ���� � ��,��� � ���� A�������� !�� ���� #C''?())%&@C�&&>�

&� A����� *=� 9��� =�� "������ � � ����������� ��� ����������� 5����� �� ��� �������� ��� � 4��� "���� 4 �� #C'>?:%@'C�@>>�

$� ����� =� ���� 7� 5��� 7� "��� P� P���� +� ��� Q� 7������ P� ��� �������� ������ �������� ������� ������ ��� ����������� ������� ��� ���� � ������������������������� ������ ������ 7������ #CCC?@#%('�@>�

:� "����� 6 � � ���������� ����� � ��� ������������� � ���� ��� � ������ ��� ����� ���� ����� !��� =� #CC>?::%@@#�@&#�

'� 3����� =!� N� **� N����� "�� "�3�� "�� "�3�� 7� ��� �F��� � ������ ���� ��� ������ ������� � ��� � ��� ����� !��� =� #CC>?::%@C$�@CC�

>� 6�� A�� M����� 4� M�,,�� ��� 7����� � =���������� ��������� � ���� ��� � ��� � ��������� �� �������� ����� ��������� �������� � #C>C?C%(::�

C� N� **� 3����� =!� "� ���� =6� ���� =!� A���� N4� ���� NQ� � �� � �� ��� ������ � ���� 6 ��� ��� � ������ ���� A�������� #CC#?###%#&$�#$#�

#)� 7������ 5�� 3��������� ��������� � ������ � ����� !����� +����� M������� 8N� �������� !��� =� #CC>?::%@&@�@$'�

##� 9�� �� 67� A������ M� 3����� ��� ��������� ��� �L����� � ����� ��������� � ������ � ��% ������� "� /����� 5�� ����� "� ����� � ����� R ���� ������� � ������� ���������� 9� 4���% *��� !� ���� +���? #CC$? � @:#�@'&�

#(� =����� 5� 6������ 5� � ���������� ������ �� ��� ����������� � ���� ��������� ������������� ��� ��������� �������� ���� ���� �� �� 3�� A��� #C$'?(>%$:�:@�

#@� �� �� B�� +���� B7� ����� " � � ������ �� ��� ���� ����������� � ������� ��� ������ � ��� I�� ���� �������� � ����� ��� 3��� #C&:?#:&%@(#�@(>�

#&� 9���� *M� 5����� �� =� *�� !4� +�� ������� ������� � ���� ��� � ������ #C:C?##@%@#$�@&#�

#$� +���� B7� =� �������� 9 � 6��� �+� =������ = � A����� ��� ������� ��� ������������������ ��� 3��� #C$#?#C@%(:$�('$�

#:� P�������� �� 6����� 7� 4����� =� ��������� ��� �� ��������� ���� �� ������ ��� ���� ��������� ������� � ���� ����� ���� ����� ������ �� ����������� � ��� � !��A����� #C>$?(>%(($�(@@�

#'� �� 5� �� �� N�� ��� "�� N����� 7� 4����� M� ������� �� ��������� ������� ���� ����� ������ ������ �� ����������� � ��� � !������������� ()))?'#%@$C�@:@�

#>� 4������ P� "��� /� =������� 7� 5� A� N���� "� ������� � ����������� ��A� � ������������������� � ��� ��,��� ������� ������� ������� #CC&?(:%$>@�$>:�

#C� ������ !� 7��� /� N�������� +� ���� �� ��� �� ���� �F��� � ���� ��������������������0�����������1 �� ��������� ����� � �F����� ��� � �� � "��� 6�� !�� 3�� A��������#CC&?#:%:#C�:((�

()� ���������� "� ������ �� 4��� �� ��������� 6� �� ��� ��� � ���� �F��� � ����� ������������ �������� � ����� !��� "�� ��� #CC>?#(%(�'�

(#� 9�� �� 67� 9�������� ��L������� �� ������ ����� �������� ����� ��� �� ���% ���������������� ��� ��������� � 6�5!� #CC#?$%(::#�(::'�

!22����#��� 2�#�� 3��� � 4 �#�� � 5�� ''