Antikanker

5/19/2018 Antikanker

1/38

Antikanker

Husnul Khatimah Ulfa SUKRIANI KURSIA,S.Farm

150 2012 0092

BAB I

PENDAHULUAN

I.1 Latar Belakang

Kanker atau karsinoma adalah pembentukan jaringan baru yang

abnormal dan bersifat ganas (malignal). Suatu kelompok sel

mendadak menjadi liar dan memperbanyak diri dengan pesat sekali

dan hampir semua organ dihinggapi penyakit ganas ini, termasuk

limfe, darah, sumsum dan otak. Saat ini telah banyak dilakukan

pengujian tentang kandungan kimia dari suatu bahan alam. Selain

bertujuan untuk menentukan zat yang berkhasiat pengujian tersebut

juga dimaksudkan untuk menentukan efek toksisitas senyawa tersebut.

BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) merupakan salah satu metode

untuk skrining terhadap senyawa sitotoksik dengan menggunakan

larva udang (Artemia salina Leach). Penelitian ini merupakan

penelitian pendahuluan dalam rangka menemukan senyawa sitotoksik

yang diharapkan dalam perkembangan selanjutnya dapat menjadi obat

anti kanker.

Pada praktikum ini digunakan air rebusan daun srikaya (Annona

squamosaLinn). Daun srikaya dikenal dapat mengobati penyakit

kanker, dimana penggunaannya dalam masyarakat secara turun

temurun yaitu dengan merebus daun srikaya tersebut kemudian

diminum air rebusan tersebut. Pada praktikum, rebusan daun srikaya


2/38

Antikanker


150 2012 0092

diujikan pada larva udang (Artemia salina Leach), dengan parameter

jumlah letalitas larva udang. Angka kematian larva udang dihitung

sebagai Median lethal concentration. Larva udang dianalogikan

sebagai sel kanker yang pertumbuhannya pesat.

Senyawa antikanker adalah sitotoksik. Hal ini berdasarkan

pemikiran bahwa efek farmakologi adalah toksikologi sederhana pada

dosis yang rendah dan besar, untuk itu Brine shrimp lethality test

dapat digunakan sebagai uji pendahuluan senyawa antikanker.

I.2 Maksud Praktikum

Maksud dari percobaan ini adalah untuk menganalisis efek toksik

dari infus daun srikaya (Annona squamosaLinn)terhadap larva udang

dengan metode BSLT (Brine shrimp lethality test).

I.3 Tujuan Percobaan

Untuk menentukan efek toksik dari infus daun srikaya (Annona

squamosaLinn ) terhadap larva udang dengan metode BSLT (Brine

shrimp lethality test).

I.4 Prinsip Percobaan

Penentuan toksisitas berdasarkan konsentrasi efektif pada

rebusan daun srikaya yang ditandai dengan adanya kematian pada

larva udang ( Artemia salina Leach )selama 1 x 24 jam.


3/38

Antikanker


150 2012 0092

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 Teori Umum

Kebanyakan obat dapat diukur aktivitasnya secara cepat dan

teliti dengan metode kimiawi atau fisika, dengan mnggunakan alat

modern, misalnya dengan spektrofotometer ultraviolet/infrared. Dan

polarograf. (Tjay, 2002, hal : 16)

Untuk obat yang struktur kimianya belum diketahui dan untuk

sediaan tak murni atau campuran dari beberapa zat aktif, metode ini

tidak dapat dilakukan. Obat-obat ini diukur dengan metode biologis,

yaitu dengan bio-assay, dimana aktivitas ditentukan oleh organisme

hidup (hewan, kuman) dengan membandingkan efek obat tersebut

dengan efek suatu standar internasional. (Tjay, 2002, hal : 16)

Bio-assay dan penggunaan satuan biologis umumnya

ditinggalkan segera setelah terwujud suatu metode fisiko-kimiawi;

selanjutnya kadar dinyatakan dalam gram atau mg. Cara inilah yang

dilakukan pada tubokurarin (1955), kloramfenikol (1956) dan penisilin

(1960). Obat-obatan yang dewasa ini masih distandarisasi secara

biologis adalah ACTH, antibiotika polimiksin dan basitrasin, vitamin A,

faktor pembeku darah, sediaan antigen dan antibodi, digitalis, pirogen

dan insulin (meskipun struktur kimia dan pemurniannya sudah

dikenal). (Tjay, 2002, Hal : 16)Uji toksisitas dilakukan untuk


4/38

Antikanker


150 2012 0092

mengetahui tingkat keamanan dan kebahayaan zat yang diuji. Adapun

sumber zat toksik berasal dari alam maupun bahan sintetik( Anonim,

2007, hal.9 ).

Ada beberapa kemungkinan untuk menggolongkan toksikologi

diantaranya : (Mustchler, 1991. hal : 723)

1. Efek toksis akut, yang langsung berhubungan dengan pengambilan

zat toksik.

2. Efek toksik kronik, yang pada umumnya zat dalam jumlah sedikit

diterima tubuh dalam jangka waktu yang lama sehingga akan

terakumulasi mencapai konsentrasi toksik dan dengan demikian

menyebabkan terjadinya gejala keracunan.

Efek toksik yang terjadi sangat bervariasi dalam sifat, organ

sasaran maupun mekanisme kejanya. Efek toksik dapat bersifat

(Anonim, 2007, hal.9 ) :

1. Lokal ; yaitu hanya terjadi pada tempat bahan toksik besentuhan

dengan tubuh, misalnya pada saluran pencernaan, iritasi gas, atau

uap saluan nafas

2. Sistemik ; terjadi hanya setelah toksikan tersekap dan tersebar

kebagian tubuh yang lain. Umumnya toksikan hanya

mempengaruhi satu atau baberapa organ saja.

3. Reversible ; bila efek yang ditimbulkan dapat hilang dengan

sendirinya atau dapat hilang beberapa waktu setelah pemaparan

toksikan tertentu.


5/38

Antikanker


150 2012 0092

4. Irreversible ; yaitu efek yang menetap atau justru bertambah parah

setelah pemaparan toksikan berhenti.

Kanker berasal dari bahasa Yunani yaitu kartunus : kepiting,

artinya pembentukan jaringan baru yang abnormal dan bersifat ganas,

suatu kelompok sel dengan mendadak menjadi liar dan

memperbanyak diri secara pesat dan terus-menerus( Ganiswarna,

1995 : 564 )

Adapun sifat Umum Kanker yaitu (Ganiswarna, 1995: 565 )

1. Pertumbuhan berlebihan umumnya berbentuk tumor

2. Gangguan deferensiasi dari sel dan jaringan sehingga mirip jaringan

mudigah

3. Bersifat invasif,mampu tumbuh dijaringan sekitar

4. Bersifat metastatik,menyebar ke tempat lain

5. Memiliki hereditas bawaan,turunan sel kanker juga dapat

menyebabkan kanker

6. Adanya pergeseran metabolisme

Belakangan ini telah banyak pengujian tentang toksisitas yang

dikembangkan untuk pencarian produk alam potensial sebagai bahan

antineoplastik, metode pengujian tersebut antara lain simple brench-top

bioassay (terdiri dari brine shrimp lethality test, lemna minor bioassay

dan grown-gall potato disc bioassay) dan pengujian pada sel telur bulu

babi ( Mclaughlin, 1991 , hal. 34 )


6/38

Antikanker


150 2012 0092

1. Dengan berdasarkan pemikiran bahwa efek farmakologi adaolah

toksikologi sederhanan pada dosis yang rendah dan sebagian besar

senyawa antitumor. Senyawa yang mempunyai kemampuan

membunuih sel kanker dalam dalam kultur sel. Pengujian ini adalah

pengujian letalitas yang sederhana dan tidak spesifik untuk aktufitas

tumor, tetapi merupakan andikator toksisitas yang baik dan

menunjukan korelasi yang kuat dengan pengujian anti tumor lainnya

seperti uji sitotoksitas dan uji leukemia tikus. Karena kesederhanaan

prosedur pengerjaan, biaya yang rendah serta kolerasinya terhadap

pengujian toksisitas dan pengujian antitumor menjadikan brine shrimp

lethality test sebagai uji hayati pendahuluan untuk aktifitas anti tumor

yang sesuai dan dapat dilakukan secara rutin.

2. Lemmna minor bioassay terutama digunakan sebagai uji pendahuluan

terhadap bahan yang dapat menghambat dan meningkatkan

pertumbuhan tanaman. Dengan pengujian ini dapat diamati bahwa

senyawa anti tumor alami juga dapat menghambat pertumbuhan

lemmna, walaupun kolerasinya dengan pengujian anti tumor lanilla

kurang baik. Oleh karena itu, pengujian ini lebih diarahkan untuk

mencari herbisida dan stimulan pertumbuhan tanaman baru.

3. Grown-gall potato bioassay merupakan metode pengujian toksisitas

yang relatif cepat pengerjaannya, tidak mal, tidak memerlukan hewan

percobaan serta menunjukan korelasi yang Sangay baik dengan uji

antitumor lanilla. Disebabkan bakteri gram negatif agrobakterium


7/38

Antikanker


150 2012 0092

tumefaciens yang selanjutnya menyebabkan pertumbuhan jeringan

tumor secara otonom dan tidak dipengerahui oleh mekanisme control

normal tumbuhan. Pengujian dilakukan tumor grwon-gall pada urbi

kentang yang infeksikan dengan bakteri agrobakterim tumefaciens.

Suatu metode yang menggunakan udang laut artemiasalina leach

diajukan sebagai suatu bioassay sederhana untuk penelitian produk

alamiah hdala brine shrimp lethality test metode ini mangunakan hewan

uji artemia salina leach yang merupakan udang-udangan primitif

sederhana dan efektif dalam ilmu biologi dan toksikologi. Prosedur

penentuan LC50 dalam mg/ml dari ekstrak dilakukan dalam mdium air

asin. Besarnya aktifitas adari ekstrak ditjukan sebagai toksisitas terhadap

larva udang( Anonim, 2007, hal.10 ).

Brine shrimp lethality test dalah uji pendahuluan suatu

senyawa yang memiliki keuntungan yaitu hasil yang diperoleh lebih cepat

(24 jam), tidak mahal, mudah pengerjaannya dari pengujian lainnya

karena tidak membutuhkan peralatan dan latihan khusus/ sampel yang

digunakan relatif sedikit. Efek toksik dapat diketahui atau diukur dari

kematian larva karena pengaruh bahan uji ( Anonim, 2007, hal.10 ).

Pengertian tentang LC50 adalah konsentrasi dari statu senyawa

kimia diudara atau dalam air yang dapat menyebabkan 50% kematian

pada statu populasi hewan uji atau makhluk hidup tertentu.

Sedengkan LD50 adalah dosis dari statu senyawa kimia yang dapat

menyebabkan 50% kematian hewan uji yang diberikan pada setiap


8/38

Antikanker


150 2012 0092

individu yang telah ditentukan atau yang lebih tepat dalah dosis

tunggal yang diperoleh secara statistik dari suatu bahan yang dapat

menyebabkan 50% kematian hewan uji ( Mayer , 1982, hal. 31-34 )

Penggunaan LC50 dimaksudkan untuk pengujian ketoksikan

dengan perlakuan terhadap hewan uji secara berkelompok yaitu pada

saat hewan uji dipaparkan suatu bahan kimia melaluui udara maka

hewan uji tersebut akan menghirupnya atau percobaan toksisitas

dengan media air. Sedangkan LD50 digunakan untuk menguji

ketoksikan suatu bahan kimia dengan rute pemberian secara oral atau

intraperitonial pada hewan uji ( Mayer , 1982, hal. 31-34 ).

Nilai LC50 dapat digunakan untuk menentukan tingkat efek

toksik suatu senyawa sehingga dapat juga untuk mempediksi

potensinya sebagai anti kanker( Anonim, 2007, hal.9 ).

Siklus hidupArtemia silina bisa dimulai dari saat menetasnya kista atau

telur. Setalah 15-20 jam pada suhu 25C kista akan menetasa menjadi embrio.

Dalam waktu bebrapa jam embrio ini masih akan menempel pada kulit kista. Pada

fase ini embrio akan menyelesaikan perkembangannya kemudiaan berubah

menjadi naupli yang sudah akan bisa berenang bebas. Pada awalnya naupli akan

berwarna orange kecoklatan akibat masih mengandung kuning telur. Artemia

yang baru menetas tidak akan makan, karena mulut dan dan anusnya belum

terbentuk dengan sempurna. Setelah 12 jam mereka akan ganti kulit dan akan

memasuki tahap larva kedua. Dalam fase ini mereka akan mulai makan, dengan

pakan mikro alga, bakteri, dan detritus organik lainny. Pada dasarnya mereka


9/38

Antikanker


150 2012 0092

tidak akan pedulih (tidak pemilih) jenis pakan yang dikomsumsinya selama

bahan tersebut diair dengan ukuran yang sesuai. Naupli akan berganti kulit

selama 15 kali sebelum menjadi dewasa dalam waktu 8 hari. Artemia dewasa

rata-rata berukuran sekitar 8 mm, meskipun demikian pada kondisi yang tepat

mereka dapat mencapai ukuran sampai 20 mm. Pada kondisi demikian biomasnya

mencapai 500 kali dibandingkan biomas pada fase naupli.

Gambar siklus hidupArtemia silina

Dalam tingkat salinitas rendah dan dengan pakan yang optimal, betina

Artemia bisa mengahasilkan naupli sebanyak 75 ekor perhari. Selama masa

hidupnya (sekitar 50 hari) mereka bisa memproduksi naupli rata-rata sebanyak 10

-11 kali. Dalam kondisi super ideal, Artemia dewasa bisa hidup selama 3 bulan

dan memproduksi nauplii atau kista sebanyak 300 ekor(butir) per 4 hari. Kista


10/38

Antikanker


150 2012 0092

akan terbentuk apabila lingkungannya berubah menjadi sangat salin dan bahan

pakana sangat kurang dengan fluktuasi oksigen sangat tinggi antara siang dan

malam hari (Http://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.php)

Artemia dewasa toleran terhadap selang suhu 18 hingga

40C. Sedangkan tempertur optimal untuk penetasan kista dan pertubuhan adalah

25-30C. Meskipun demikian hal ini akan ditentukan oleh strain masing-

masing. Artemia menghendaki kadar salinitas antara 30 - 35 ppt, dan mereka

dapat hidup dalam air tawar salama 5 jam sebelum akhirnya mati (Http://www.o-

fish.com/pakanikan/artemia.php)

Variabel lain yang penting adalah pH, cahaya dan oksigen. pH dengan

selang 8-9 merupakan selang yang paling baik, sedangkan pH di bawah 5

atau lebih tinggi dari 10 dapat membunuh Artemia. Cahaya minimal diperlukan

dalam proses penetasan dan akan sangat menguntungkan bagi pertumbuhan

mereka. Lampu standar grow-lite sudah cukup untuk keperluan hidup

Artemia. Kadar oksigen harus dijaga dengan baik untuk pertumbuhan

Artemia. Dengan suplai oksigen yang baik, Artemia akan berwarna kuning

atau merah jambu. Warna ini bisa berubah menjadi kehijauan apabila mereka

banyak mengkonsumsi mikro algae. Pada kondisi yang ideal seperti ini, Artemia

akan tumbuh dan beranak-pinak dengan cepat. Sehingga suplai Artemia untuk

ikan yang kita pelihara bisa terus berlanjut secara kontinyu. Apabila kadar oksigen

dalam air rendah, dan air banyak mengandung bahan organik, atau apabila salintas

meningkat, artemia akan memakan bakteria, detritus, dan sel-sel kamir

(yeast). Pada kondisi demikian mereka akan memproduksi hemoglobin sehingga
http://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.php


11/38

Antikanker


150 2012 0092

tampak berwarna merah atau orange. Apabila keadaan ini terus berlanjut mereka

akan mulai memproduksi kista (Http://www.o-


Dekapsulisasi dapat meningkatkan peresentase keberhasilan sampai

dengan 10%. Penetasan dapat dilakukan pada semua jenis wadah.. Untuk

mempermudah "pemanenan" penetasan bisa dilakukan dalam akuarium berbentuk

prisma terbalik, atau berdasarkan prinsip "kamar gelap dan terang". Pemanenan

paling mudah dilakukan dengan cara di siphon (Http://www.o-


Dekapsulisasi merupakan suatu proses untuk menghilangkan lapisan

terluar dari kista artemia yang "keras" (korion). Proses ini setidaknya akan

mempermudah "bayi" artemia untuk keluar dari "sarang"nya. Dan kalaupun tidak

berhasil "menetas", kista yang telah didekapsulisasi masih bisa diberikan kepada

ikan/burayak dengan aman, karena korionnya sudah hilang, sehingga akan dapat

dicerna dengan mudah. Disamping itu proses ini juga sekaligus merupakan proses

disinfeksi terhadap kontaminan seperti bakteri, jamur, dan lain-lain

(Http://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.php)

Ad(a beberapa kemungkinan untuk menggolongkan toksikologi

diantaranya : Mustchler, 1991)

3. Efek toksis akut, yang langsung berhubungan dengan pengambilan zat toksik.

4. Efek toksik kronik, yang pada umumnya zat dalam jumlah sedikit diterima

tubuh dalam jangka waktu yang lama sehingga akan terakumulasi mencapai
http://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.php


12/38

Antikanker


150 2012 0092

konsentrasi toksik dan dengan demikian menyebabkan terjadinya gejala

keracunan.

Efek samping toksik bergantung pada dosis dan spesifik bagi obat.

Sepanjang diberikan dosis yang cukup tinggi, efek samping toksik terjadi pada

setiap orang (Mustchler, 1991).

Kanker merupakan penyebab kematian nomor 2 setelah penyakit

kardiovaskular. Kuran dari dapat disembuhkan hanya dengan pembedahan atau

radiasi lokal, sisanya memerlukan kemoterapi sistemik selama sakitnya. Sebagian

kecil (kira-kira 10%) menderita neoplasma khusus, kemoterapi dapat

menyembuhkan atau memberikan remisi yang lama(Mycek, 2001).

Kemoterapi kanker merusak dan mematikan sel sehingga

menghentikan perkembangan tumor. Umumnya, serangan bersifat langsung

terhadap tempat-tempat terjadinya metabolisme sel dalam replikasi sel, misalnya

tersedianya prekursor urine dan pirimidin untuk proses sintesis RNA dan DNA

(Mycek, 2001).

Toksikologi sangat luas cakupannya. Ia menangani penelitian

toksisitas bahan-bahan kimia yang digunakan antara lain (Lu, 1995)

1. Di bidang kedokteran untuk tujuan diagnostik, pencegahan dan terapeutik.

2. Dalam industri makanan sebagai zat tambahan langsung maupun tidak

langsung.

3. Dalam pertanian sebagai peptisida, zat pengatur pertumbuhan, penyerbuk

buatan dan zat tambahan makanan hewan.

II.2 Uraian Bahan


13/38

Antikanker


150 2012 0092

1.Air laut (http://gadang-e-bookformaterialscience.blogspot.com)

Komposisi :

Air 96,5 %

Garam 3,5 %

Dalam 3,5 garam mengandung :

a. Senyawa klorida 55 % wt

b. Senyawa sulfat 7,7 % wt

c. Sodium 30,6 % wt

d. Calsium 1,2 % wt

e. Potassium 1,1 % wt

f. Magnesium 3,7 % wt

g. Lain-lain 0,7 % wt

2. Air Suling (Ditjen POM,1979)

Nama resmi : Aqua destillata

Sinonim : Air suling, aquadest

RM/BM : H2O / 18,02

Rumus bangun : H-O-H

Pemerian : Cairan jernih; tidak berwarna; tidak

berbau; tidak mempunyai rasa.

Penyimpanan : Dalam wadah tertrutup baik.

Kegunaan : Sebagai pelarut

3. Ragi (Ditjen POM, 1979)

Nama resmi : Ekstrak ragi
http://gadang-e-bookformaterialscience.blogspot.com/http://gadang-e-bookformaterialscience.blogspot.com/


14/38

Antikanker


150 2012 0092

Sinonim : Sari ragi

Pemerian : Kuning kemerahan sampai coklat, bau

khas tidak busuk

Kelarutan : Larut dalam air, membentuk larutan

kuning sampai coklat, bereaksi asam

lemah

Penyimpanan : Dalam wadah tertrutup baik.

Kegunaan : Sebagai sumber makananArtemia salina

Leach

II.3 Uraian Hewan Coba

II.3.1. Klasifikasi (Mudjiman, 1998)

Filum : Arthopoda

Divisio : Crustaceae

Subdivisio : Branchiopoda

Ordo : Anostraca

Famili : Artemiidae

Genus : Artemia

Species :Artemia salina Leach

II.3.2. Morfologi (Mudjiman, 1998)

Udang (Artemia salina) mengalami beberapa fase hidup,

tetapi secara jelas dapat dilihat dalam tiga bentuk yang sangat

berlainan, yaitu bentuk telur, larva (nauplii) dan artemia

dewasa. Telur yang baru dipanen dari alam berbentuk bulat


15/38

Antikanker


150 2012 0092

dengan ukuran 0,2-0,3 mm. Telur yang menetas akan berubah

menjadi larva. Telur yang baru menetas ini berukuran kurang

lebih 300 . Dalam pertumbuhannya larva mengalami 15 kali

perubahan bentuk yang merupakan satu tingkatan hidup,

setelah itu berubah menjadi artemia dewasa.

Waktu yang diperlukan sampai menjadi artemia dewasa

umumnya sekitar 2 minggu. Berbentuk silinder dengan panjang

12-15 mm. Tubuh terbagi atasl bagian kepala, dada dan perut.

Pada bagian kepala terdapat 2 tangkai mata, 2 antena dan dua

antenula. Dada terbagi atas 12 segmen yang masing-masing

mempunyai sepasang kaki renang. Perut ternagi atas 8

segmen. Dapat hidup dalam air dengan suhu 25o-30oC dan pH

sekitar 8-9.

II.3. 3. Uraian Tentang Larva (Mudjiman, 1998)

Telur-telur yang kering direndam dalam air laut yang

bersuhu 25oC akan menetas dalam waktu 24-36 jam. Dari

dalam cangkangnya keluarlah burayak (larva) yang juga dikenal

dengan istilah nauplius. Dalam perkembangan selanjutnya,

burayak akan mengalami 15 kali perubahan bentuk

(metamorfosis). Burayak tingkat I dinamakan instar, tingkat II

instar II, tingkat III Instar III, demikian seterusnya sampai Instar

XV. Setelah itu berubahlah mereka menjadi artemia dewasa.


16/38

Antikanker


150 2012 0092

Burayak yang baru saja menetas masih dalam tingkat

Instar I bentuknya bulat lonjong dengan panjang sekitar 400

mikron (0,4 mm) dan beratnya 15 mikrogram. Warnanya

kemerah-merahan karena masih banyak mengandung

makanan cadangan. Oleh karena itu, mereka masih belum

perlu makanan.

Anggota badannya terdiri dari sungut kecil (antenula atau

antena I dan sepasang sungut besar (antenna II). Dibagian

depan diantara kedua sungut kecilnya terdapat bintik merah

yang tidak lain adalah mata naupliusnya (oselus). Dibelakang

sungut besar terdapat sepasang mandibula (rahang) dan

rudimenter kecil. Sedangkan dibagian perur (ventral) sebelah

depan terdapatlah labrum.

Pada pangkal sungut besar (antena II) terdapat bangunan

seperti duri yang menghadap ke belakang (gnotobasen seta)

bangunan ini merupakan cirri khusus untuk membedakan

burayak instar I, instar II dan instar III. Pada burayak instar I

(baru menetas) gnotobasen setanya masih belum berbulu dan

juga belum bercabang.

Sekitar 24 jam setelah menetas, burayak akan berubah

menjadi instar II. Lebih lama lagi akan berubah menjadi instar

III.Pada tingkatan II, gnotobasen setanya sudah berbulu tapi


17/38

Antikanker


150 2012 0092

masih belum bercabang. Sedangkan pada instar III, selain

berbulu gnotobasen seta tersebut sudah bercabang II.

Pada tingkatan instar II, burayak mulai mempunyai mulut,

saluran pencernaan dan dubur. Oleh karena itu, mereka mulai

mencari makan, bersamaan dengan itu, cadangan makanannya

juga sudah mulai habis. Pengumpulan makanannya dengan

cara menggerak-gerakkan antena II-nya. Selain itu untuk

mengumpulkan makanan antena II juga berfungsi untuk

bergerak. Tubuh instar II dan instar III sudah lebih panjang dari

instar I.

Pada tingkatan selanjutnya, disebelah kanan dan kiri mata

nauplius mulai terbentuk sepasang mata majemuk. Mula-mula

masih belum bertangkai. Kemudian secara berangsur-angsur

berubah menjadi bertangkai. Selain itu, dibagian samping

badannya (kanan dan kiri) juga berangsur-angsur tumbuh tunas

kakinya (torakopada). Mula-mula tumbuh dibagian depan

kemudian berturut-turut disusul oleh bagian-bagian yang lebih

ke belakang. Setelah menjadi instar XV, kakinya sudah lengkap

sebanyak 11 pasang, maka berakhirlah masa burayak, dan

berubah menjadi artemia dewasa.

II.4 Uraian Sampel

II.4.1 Klasifikasi Srikaya(Syamsuhidayat, 1991)

Divisi : Spermatophyta


18/38

Antikanker


150 2012 0092

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Bangsa : Ranunculales

Suku : Annonaceae

Marga : Annona

Spesies : Annona squamosaLinn

II.4.2. Morfologi Srikaya(Syamsuhidayat, 1991).

Kulit pohon tipis berwarna keabu-abuan, getah kulitnya

beracun. Batangnya (pada dahan) coklat muda, bagian

dalamnya berwarna kuning muda dan agak pahit. Pada bagian

ranting berwarna coklat dengan bintik coklat muda, lenti sel kecil,

oval, berupa bercak bulat pada batang.

Daun tunggal, bertangkai, kaku, letaknya berseling. Helai

daun berbentuk lonjong hingga jorong menyempit, ujung dan

pangkal runcing, dasar lengkung, tepi rata, panjang 5-17 cm,

lebar 2-7,5 cm, permukaan daun berwarna hijau, bagian bawah

hijau kebiruan, sedikit berambut atau gundul. Rasanya pahit,

sedikit dingin. Tangkai daun 0.4-2,2 cm panjangnya.

Bunganya bergerombol pendek menyamping dengan

panjang sekitar 2.5 cm, sebanyak 2-4 kuntum bunga kuning

kehijauan (berhadapan) pada tangkai kecil panjang berambut

dengan panjang 2 cm, tumbuh pada ujung tangkai atau ketiak

daun. Daun bunga bagian luar berwarna hijau, ungu pada bagian
http://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Annonahttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Annona%20squamosahttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Annona%20squamosahttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Annona%20squamosahttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=organism&word=Annona


19/38

Antikanker


150 2012 0092

bawah, membujur, panjangnya 1.6-2.5 cm, lebar 0,6-0,75 cm.

Daun bunga bagian dalam sedikit kebih kecil atau sama

besarnya. Terdapat banyak serbuk sari, bererombol, putih,

panjang kurang dari 1.6 cm, putik berwarna hijau muda. Tiap

putik membentuk semacam kutil, panjang 1.3-1.9 cm, lebar 0,6-

1,3 cm yang tumbuh menjadi kelompok-kelompok buah.

Berbunga dengan bantuan kumbang nitidula.

Buahnya buah semu, berbentuk bola atau kerucut atau

menyerupai jantung, permukaan berbenjol-benjol, warna hijau

berbintik (serbuk bunga) putih, penampang 5-10 cm,

menggantung pada tangkai yang cukup tebal. Jika masak, anak

buah akan memisahkan diri satu dengan yang lain, berwarna

hijau kebiruan. Daging buah berwarna putih semikuning, berasa

manis. Biji membujur di setiap karpel, halus, coklat tua hingga

hitam, panjang 1,3-1,6 cm. Biji masak berwarna hitam

mengkilap.

II.4.3. Kandungan Kimia

Secara umum, tanaman srikaya mengandung skuamosin,

asimicin (Taylor andFrancis, 1999),atherospermidine (Petasai,

1986), lanuginosin, alkaloid tipe asporfin (anonain) dan

bisbenziltetrahidroisokinolin (retikulin). Pada organorgan

tumbuhan ditemukan senyawa sianogen. Pulpa buah yang telah

masak ditemukan mengandung sitrulin, asam aminobutirat,
http://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=asimicinhttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=atherospermidinehttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=atherospermidinehttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=atherospermidinehttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=lanuginosinhttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=anonainhttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=anonainhttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=lanuginosinhttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=atherospermidinehttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=atherospermidinehttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=asimicin


20/38

Antikanker


150 2012 0092

ornitin, dan arginin. Biji mengandung senyawa poliketida dan

suatu senyawa turunan bistetrahidrofuran; asetogenin

(skuamostatin C, D, anonain, anonasin A, anonin 1, IV, VI, VIII,

IX, XVI, skuamostatin A, bulatasin, bulatasinon, skuamon,

ncoanonin B, neo desasetilurarisin, neo retikulasin A,

skuamosten A, asmisin, skuamosin, sanonasin, anonastatin,

neoanonin). Juga ditemukan skuamosisnin A, skuamosin B, C,

D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N; skuamostatin B, asam lemak,

asam amino dan protein. Komposisi asam lemak penyusun

minyak lemak biji srikaya terdiri dari metil palmitat, metil stearat,

metil linoleat. Daun mengandung alkaloid tetrahidro isokuinolin,

p-hidroksibenzil-6,7-dihidroksi-1,2,3,4-tetrahidroisokinolin

(demetilkoklaurin=higenamin). Bunga mengandung asam kaur-

1,6-ene-1,9-oat diinformasikan sebagai kornponen aktif bunga

srikaya. Akarnya mengandung flavonoid, borneol, kamfer,

terpen, alkaloid anonain, saponin, tanin, dan polifenol. Kulit kayu

mengandung flavonoid, borneol, kamfer, terpen, dan alkaloid

anonain. Buah muda mengandung tanin.

II.4.4 Penelitian Antikanker

Senyawa-senyawa asetogenin (skuamostanin A, B, C,

dan D) serta annotemoyin-1 dan -2, dan glukopiranosid kolesteril

pada srikaya memiliki efek sitotoksik (Yang et al., 2009, Rahman

et al., 2005), inhibitor agregasi platelet (Yang et al., 2002),
http://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=argininhttp://kanaya.naist.jp/knapsack_jsp/result.jsp?sname=metabolite&word=arginin


21/38

Antikanker


150 2012 0092

inhibitor replikasi HIV (Wu et al., 1996), agen antidiabetes

(antihiperglikemik) dan antioksidan (Kaleem et al., 2006, Panda

and Kar, 2007), pestisida (Jaswanth, 2002), serta dapat

digunakan dalam terapi Neisseria gonorrhea (Shokeen, 2005).

Kandungan skuamosinnya berfungsi sebagai insektisida,

sementara kandungan ascimicinnya memiliki efek antileukemia

(Taylor and Francais, 1999). Caryophyllene oxide pada kulit

batang memiliki aktivitas analgesik dan antiinflamasi (Chavan,

2009), serta cyclosquamosin D pada biji terbukti menunjukkan

inhibisi sitokin proinflammatory pada makrofag J774A.1

terinduksi Pam3Cys (Yang, et al., 2008).

Ekstrak air dan organik Annona squamosa menginduksi

apoptosis sel BC-8, dengan menginduksi fragmentasi DNA dan

aktivasi caspase-3. Pengamatan dengan flowcytometry

menunjukkan terbentuknya badan apoptosis setelah inkubasi sel

setelah diterapi dengan ekstrak selama 24 jam. Selain aktivasi

caspase-3, kedua ekstrak juga meregulasi ekspresi gen Bcldan

BclXLyang berperan dalam induksi apoptosis (Pardharasardhi et

al., 2004)

II.5. Prosedur Kerja (Anonim,2013)

II.5.1. Penyiapan Larva

Sebanyak 50 mg telur Artemia Salina Leach,

direndam dalam 200 ml air laut pada konndisi pH 7-8 di


22/38

Antikanker


150 2012 0092

bawah cahaya lampu dan suhu 25oC dan dilengkapi dengan

aerator. Telur udang akan akan menetas setelah 24 jam dan

menjadi larva. Larva yang telah berumur 2 hari (48 jam)

digunakan sebagai hewan uji aktivitas ketoksikan.

II.5.2 Pelaksanaan Pengujian

Sampel uji yang telah ditimbang dilarutkan dengan

metanol hingga diperoleh konsentrasi 2 mg/ml sebagai

larutan persediaan. Dari persediaan tersebut dipipet ke

dalam vial masing-masing 1, 10, 100, 1000, dan 10.000 l

dengan menggunakan mikropipet. Kemudian pelarutnya

diuapkan lalu ditambahkan 5 ml air laut. Untuk ekstrak yang

tidak larut dalam air laut sebelumnya dilarutkan dengan

metanol 1%. Kontrol dibuat dengan menggunakan metanol

1% dibuat dengan perlakuan yang sama dengan sampel.


23/38

Antikanker


150 2012 0092

BAB III

METODE KERJA

III.1 Alat Yang Digunakan

Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini adalah aerator,

batang pengaduk,corong, gelas kimia, keranjang, karet gelang, kertas

perkamen, kompor, lampu 5 watt dan perangkatnya, mikropipet,

neraca analitik, pipet tetes, selang infus, sendok tanduk, spoit 5 ml,

toples,vial dan zak plastik.

III.2 Bahan Yang Digunakan

Adapun bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah air laut,

air suling, ragi, aluminium foil dan rebusan daun srikaya.

III.3 Cara Kerja

III.3.1 Penyiapan Hewan Coba


24/38

Antikanker


150 2012 0092

1. Disiapkan alat dan bahan.

2. Kemudian zak plastik di pasangkan di toples dengan

membentuk kerucut dibagian dalam yang diikat dengan

karet gelang

3. Kemudian diisi dengan air laut dan dimasukkan larva udang

(Artemia salina) dan sisi terbuka disinari dengan cahaya

lampu 5 watt setelah 48 jam nauplii tersebut sudah dapat

digunakan sebagai hewan uji.

III.3.2 Pembuatan Bahan

1. Rebusan Daun Srikaya

Disiapkan Alat dan bahan, kemudian dipanaskan air

dan daun srikaya sampai mendidih dan dipisahkan air

rebusan dan daunnya kemudian disimpan rebusan daun

srikaya tersebut dalam gelas kimia dan siap digunakan

2. Pembuatan suspensi ragi

Disiapkan alat dan bahan, kemudian ditimbang ragi

100 mg ditambahkan dengan 10 ml air laut lalu diaduk lagi

hingga homogen, kemudian disimpan ragi tersebut dalam

gelas kimia dan siap digunakan.

III.3.3 Perlakuan Hewan Coba


25/38

Antikanker


150 2012 0092

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, Dipipet

rebusan daun srikaya dengan menggunakan mikropipet

kedalam masing-masing 3 vial yang berisi sesuai konsentrasi

yang telah ditetapkan yaitu 1 g/ml, 10 g/ml dan 100 g/ml

dan 1000 g/ml lalu dicukupkan volumenya hingga 5 ml

kemudian kedalam tiap vial ditambahkan dimasukkan 10 ekor

larva udang (Artemia salina Linn) dan ditambahkan dengan 3

tetes ragi dan dicukupkan 10 ml air laut dan ditutup

menggunakan aluminium foil dan diberi beberapa lubang lalu

diinkubasi selama 1x24 jam kemudian diamati jumlah larva

yang mati setelah 24 jam dan diamati LC 50 dan LC80.

Dilakukan 3 kali replikasi.


26/38

Antikanker


150 2012 0092

BAB IV

HASIL PENGAMATAN

Konsentrasi N R P y

1 30 7 23,33 % 4,29

10 30 7 23,33 % 4,29

100 30 19 63,33 % 5,33

1000 30 27 90 % 6,25

Control 30 5 16,67 % 4,05

Keterangan

n = jumlah total larva udang yang digunakan

r = jumlah total respon kematian larva ua\dang

P = persentase total kematian larva udang

Y = nilai probit


27/38

Antikanker


150 2012 0092

BAB V

PEMBAHASAN

Kanker ialah suatu penyakit sel dengan ciri gangguan atau

kegagalan mekanisme pengatur multipikasi dan fungsi homeostatis

lainnya pada organisme multiseluler.

BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) merupakan salah satu metode

untuk skrining terhadap senyawa sitotoksik dengan menggunakan

larva udang (Artemia salina Leach). Pengujian ini merupakan

pengujian pendahuluan dalam rangka menemukan senyawa sitotoksik

yang diharapkan dalam perkembangan selanjutnya dapat menjadi obat

anti kanker. Larva udang (Artemia salina Leach) dianalogikan sebagai

sel tubuh yang tumbuh dengan cepat. Parameter dalam percobaan ini

adalah melihat jumlah kematian dari larva udang (Artemia


28/38

Antikanker


150 2012 0092

salina Leach) dengan sampel air rebusan daun srikaya (Annona

squamosaLinn). Dimana daun srikaya (Annona squamosaLinn) ini

dipercaya secara turun-temurun dapat mengobati penyakit kanker.

Langkah awal dari metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test)

adalah penetasan telur udang. Faktor yang mempengaruhi penetasan

telur udang antara lain : cahaya, oksigen dari aerator, dan pH 6-7

(netral). Larva yang digunakan berusia 48 jam ( 2 hari ), karena pada

usia tersebut larva sudah mampu mencari makanan sendiri. Kemudian

sampel air rebusan daun srikaya (Annona squamosaLinn) diujikan

pada larva udang (Artemia salina Leach) dengan variasi konsentrasi

yaitu 1 g/ml, 10 g/ml, 100 g/ml, 1000 g/ml, dan control negatif.

Variasi konsentrasi dimaksudkan untuk melihat konsentrasi yang

memberi efek toksisitas yang tinggi. Sedangkan control negatif yang

menggunakan air laut tanpa sampel dimaksudkan untuk melihat

perbandingan jumlah kematian pada larutan sampel dengan larutan

control. Sumber makanan bagi larva selama pengujian digunakan

larutan ragi.

Pada percobaan, diperoleh jumlah kematian pada konsentrasi

1g/ml sebanyak 23,33%, 10 g/ml sebanyak 23,33%, 100 g/ml

sebanyak 63,33%, 1000 g/ml sebanyak 90%, dan pada larutan

control sebanyak 16,67. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi

konsentrasi dari sampel air rebusan daun srikaya (Annona

squamosaLinn) maka semakin tinggi pula efek toksisitasnya.


29/38

Antikanker


150 2012 0092

Pengujian terhadap rebusan daun srikaya (Annona

squamosaLinn) disimpulkan bahwa Lc50 larva udang (Artemia salina

Leach) adalah 50,59197481 g/ml - 17,81853181 g/ml dan Lc80

adalah 128,2374206g/ml sehingga dapat dikatakan rebusan daun

srikaya (Annona squamosaLinn) pada percobaan ini memiliki potensi

toksisitas menurut metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test).

BAB VI

PENUTUP

VI.1 Kesimpulan

Dari percobaan ini dapat disimpulkan bahwa LC50 dari Larva

udang (Artemia salina Leach) adalah 17,81853181 g/ml -

50,59197481 g/ml, dan LC80 larva udang (Artemia salina Leach)

adalah 0,152931288 g/ml -128,2374206 g/ml. Sampel air rebusan

daun srikaya (Annona squamosaLinn) memiliki sifat toksik terhadap

larva udang (Artemia salina Leach).

VI.2 Saran


30/38

Antikanker


150 2012 0092

Praktikan diberi kesempatan untuk memperbaiki laporan ketika

ada kesalahan dalam penyusunan.

DAFTAR PUSTAKA

Calleja, M.C.and Persoone, G.: 1992, 'Cyst-Based Toxicity Tests', ATLA20, 396405.

Carballo JL, Hernandez-Inda ZL, Perez P, Garcia-Gravaloz MD.Comparison between two brine shrimp assays to detect in vitrocytotoxicity in marine natural

Harborne, 1999, Phytochemical Dictionary Second Edition, Taylor andFrancis.

Jaswanth, A., 2002, Evaluation of mosquitocidal activity of Annonasquamosa leaves against filarial vector mosquito, Culexquinquefasciatus Say., Department of Pharmacology, PeriyarCollege of Pharmaceutical Sciences for Girls, Tiruchirappalli, 620021, India.

M., Kaleem, 2006. Antidiabetic and antioxidant activity of Annonasquamosa extract in streptozotocin-induced diabetic rats,Department of Biochemistry, Faculty of Life Sciences, Aligarh MuslimUniversity, Aligarh 202002, India.


31/38

Antikanker


150 2012 0092

Mudjiman, A. 1998. Udang Renik Air Asin. Bhrata Karya Aksara:Jakarta.

Mukhlesur Rahman M., Parvin S., Ekramul Haque M., Ekramul Islam M.,and Mosaddik M.A., 2005, Antimicrobial and cytotoxic constituentsfrom the seeds of Annona squamosa, Fitoterapia.76(5):484-9.

P. Shookeen, 2005. Preliminary studies on activity of Ocimum sanctum,Drynaria quercifolia, and Annona squamosa against Neisseriagonorrhoeae, Ambedkar Center for Biomedical Research, Universityof Delhi, Delhi, India.

Petasai, M.S., 1986, Thesis, Fac.Pharm.Sci., Chulalongkorn Univ.,Bangkok.products. BMC Biotechnology. 2002;2:1472-6570.

S., Panda, 2007, Antidiabetic and antioxidative effects of Annonasquamosa leaves are possibly mediated through quercetin-3-O-glucoside, School of Life Sciences, Devi Ahilya University, TakhshilaCampus, Indore-452017, Madhya Pradesh, India.

Syamsuhidayat, Sri Sugati, and Johnny Ria Hutapea, 1991, InventarisTanaman Obat Indonesia (I), Departemen Kesehatan RI, Jakarta.

Y.C., Wu, 1996, Identification of ent-16 beta, 17-dihydroxykauran-19-oic

acid as an anti-HIV principle and isolation of the new diterpenoidsannosquamosins A and B from Annona squamosa, GraduateInstitute of Natural Products, Kaohsiung Medical College, Taiwan,Republic of China.

Y.L., Yang, 2002, New ent-kaurane diterpenoids with anti-plateletaggregation activity from Annona squamosa, Graduate Institute ofNatural Products, Kaohsiung Medical University, Taiwan, Republic ofChina.

Yang H., Zhang N., Li X., He L., and Chen J., 2009, New nonadjacent bis-

THF ring acetogenins from the seeds of Annona squamosa.,Fitoterapia.

Yang H.J., Li X., Zhang N., Chen J.W., Wang M.Y., 2009, Two newcytotoxic acetogenins from Annona squamosa., J Asian Nat ProdRes. 11(3):250-6.

Http://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.php
http://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.phphttp://www.o-fish.com/pakanikan/artemia.php


32/38

Antikanker


150 2012 0092

LAMPIRAN

1. Skema Kerja

Sampel Rebusan Daun Srikaya

0,1, 1, 10, dan 100 g/ml

Dimasukkan dalam vial dan dicukupkan 5 ml air laut

Masukkan 10 ekor larva udang (Artemia salinaLeach)

Dicukupkan 10 ml air laut

Diinkubasi 1x24 jam


33/38

Antikanker


150 2012 0092

Dihitung LC50

PERHITUNGAN

Konsentrasi N R p y

1 30 7 23,33 % 4,29

10 30 7 23,33 % 4,29

100 30 19 63,33 % 5,33

1000 30 27 90 % 6,25

Control 30 5 16,67 % 4,05

Keterangan

n = jumlah total larva udang yang digunakan

r = jumlah total respon kematian larva ua\dang

P = persentase total kematian larva udang

Y = nilai probit

Konsentrasi

SampelKematian Larva % Kematian


34/38

Antikanker


150 2012 0092

1g/ml 7 23,33 %

10g/ml 7 23,33 %

100g/ml 19 63,33 %

1000g/ml 27 90 %

Control 5 16,67 %

y = a + bx

x = log [ ]

y = probit

X x Y y x.y

1 1 4,29 18,4041 4,29

2 4 5,33 28,4089 10,66

3 9 6,25 39,0625 18,75

= 6 = 14 = 15,87 = 85,8755 = 33,7

a =

()

=141587 6337

=

= 3,33

b =

()

=333761587

=

= 0,98

y = 3,33 + 0,98 x


35/38

Antikanker


150 2012 0092

Untuk Lc50

y = a + bx

probit 50 = a + b [log Lc]

5 = 3,33 + 0,98 [log Lc]

Log Lc50=

= 1,70408163265306g/ml

Lc50= anti log 1,70408163265306g/ml

= 50,59197481g/ml

Untuk Lc80

y = a + bx

probit 50 = a + b [log Lc]

5,84 = 3,33 + 0,98 [log Lc]

Log Lc80=

= 2,56122449g/ml

Lc80= anti log 2,56122449 g/ml

= 364,1031949g/ml

Standar Defiasi

X N Y w n.w

1 30 4,29 0,532 15,96


36/38

Antikanker


150 2012 0092

2 30 5,33 0,616 18,48

3 30 6,25 0,336 10,08

44,52

y = a + bx

= 3,33 + 0,98 (1)

= 4,31

=

=

= 1, 020408163

SE log Lc50=

=148163

= 0,152931288

SE Lc50 =Lc50x 2,303 x SE log Lc50

= 50,59197488g/ml x 2,303 x 0,152931288

= 17,81853181 g/ml

SE log Lc80=

=

148163

= 0,152931288

SE Lc80 =Lc80x 2,303 x SE log Lc80

= 364,1031949 g/ml x 2,303 x 0,152931288

= 128,2374206g/ml


37/38

Antikanker


150 2012 0092

Daur Hidup Larva :


38/38

Antikanker


150 2012 0092

Alat Penetasan Larva :

Documents

Antikanker