Anti Bodi Monoklonal

8/18/2019 Anti Bodi Monoklonal

1/26

laporan anti bodi monoklonal

BAB I

PENDAHULUAN

Selama beberapa dasawarsa, sejumlah besar (mungkin sampai jutaan

tahun) berbagai molekul antibodi (imunoglobulin) telah diketahui eksistensinya,

masing-masing bercirikan suatu tempat unik yang dapat mengikat diri pada

determinan molekular yang spesifik. Banyak ahli imonologi mula-mula mengira

bahwa semua antibodi itu terbuat dari rantai-rantai polipeptida yang sama dan

bahwa keunikan mereka itu disebabkan karena cara melipatnya rantai-rantai

polipetida mereka yang identik dan yang baru disintesis di sekitar antigennya. Teori

ini ternyata salah. Tiap antibodi mempunyai rangkaian asam amino sendiri, dan tiap

sel penghasil antibodi (sel plasma) hanya membuat suatu antibodi. ula-mula ini

merupakan penemuan yang menggelisahkan karena hal itu tampaknya berarti

bahwa harus ada gen tersendiri untuk setiap antibodi tertentu. !ika hal itu benar,

maka mungkin sebagian besar, jika bukan bagian yang terbesar, dari "#$-"#$

%ertebrata harus diperuntukkan bagi pengkodean molekul-molekul antibodi. Tetapi

spekulasi semacam itu tidak dapat diuji sebelum ahli kimia protein menetapkan

struktur dasar molekul antibodi. (&atson dkk ' **)

A.

Pengertian Antibodi

$ntibodi dibuat oleh tubuh untuk merespon serangan bakteri atau %irus.

$ntibodi ini melindungi tubuh terhadap serangan infeksi. $ntibodi dihasilkan oleh-oleh sel limfosit dan dapat juga dihasilkan dengan menumbuhkan sel-sel ini dalam

laboratorium. Sel-sel tersebut kemungkinan menghasilkan sejumlah besar antibodi

yang sejenis, ini dikenal sebagai antibodi monoklonal. +ntuk memahami bagaimana

hal ini bekerja, terlebih dahulu diperhatikan pengujian mekanisme alami dari tubuh

untuk membentuk antibodi. (http'id.sh%oong.comeact-sciencesbiology/010-

pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma)

B. Penetapan Struktur Dasar Molekul Antibodi

http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/


2/26

2engertian yang pertama mulai muncul pada awal tahun 31-an ketika

diketahui bahwa unit dasar antibodi itu terdiri dari dua rantai ringan (4) dengan berat

molekul /.111 dan dua rantai berat yang identik (5) dengan berat molekul 67.111,

yang terikat menjadi satu dengan pengikat disulfida. (8stilah 9ringan: dan 9berat: ini

berkaitan dengan pembedaan dalam berat molekul rantainya). Setiap unit empat

rantai tersebut mengandung dua tempat pengikat identik untuk antigen dengan

suatu tempat yang sebagian terbentuk oleh asam-asam amino dari rantai ringan

spesifik dan sebagian oleh asam-asam amino rantai berat spesifik. !ika bagan dasar

antibodi telah ditentukan , maka rangkaian asam amino dari rantai-rantai komponen

ringan dan berat dapat ditentukan dengan menggunakan antibodi-antibodi

homogen yang dibuat oleh sel-sel myeloma spesifik. yeloma adalah sel-sel

(plasma) kanker yang memproduksi antibodi, dan pada tiap hewan semua sel tumor

myeloma merupakan keturunan dari satu sel kanker asli. 8ni menjelaskan mengapa

semua molekul antibodi dari sembarang myeloma mempunyai rangkaian asam

amino yang sama. Baik rangkaian rantai ringan maupun rantai berat ber%ariasi dari

tipe antibodi yang satu dengan yang lainnya, tetapi dengan suatu cara yang seorang

pun tidak dapat mermalkannya dari semula. eskipun setiap rantai mempunyai

rangkaian yang unik, namun hampir semua kespesifikan itu terbatas pada ujung-ujung terminal amino ("aerah-daerah %ariabel atau atau daerah-daerah ;).

Setengah dari tiap rantai ringan dan tiga per empat dari tiap rantai berat mempunyai

rangkaian-rangkaian yang hampir identik (daerah tetap atau daerah-daerah


3/26

sepuluh ribu limfosit yang berbeda. "an asing-masing limfosit menghasilkan

antibodi yang berbeda jika diperlukan oleh tubuh. (http'id.sh%oong.comeact-

sciencesbiology/010-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma)

D. Hibridoma dan Antibodi Monoklonal

Teknik 5ibridoma adalah penggabungan dua sel dari organisme yang sama

maupun berbeda sehingga menghasilkan sel tunggal berupa sel hibrid ( hibridoma )

yang memiliki kombinasi dari sifat kedua sel tersebut. Teknik hibridoma ini sangat

penting untuk menghasilkan antibodi dan hormon dalam jumlah yang besar.

Salah satu hasil dari teknik hibridoma ini adalah antibodi monoklonal .

$ntibodi monoklonal adalah antibodi yang diperoleh dari suatu sumber tunggal atau

sel klona yang hanya mengenal satu jenis antigen. 2embentukan antibodi

monoklonal dilakukan dengan menggunakan kelinci atau tikus.

BAB II

PEMBAHASAN

http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/http://id.shvoong.com/exact-sciences/biology/2274042-pembuatan-antibodi-monoklonal-dengan-hibridoma/


4/26


5/26

@arena spesifitasnya yang tinggi maka Teknologi antibodi monoklonal dapat

digunakan untuk membunuh sel kanker tanpa mempengaruhi sel-sel yang sehat.

Selain kegunaannya untuk mendiagnosis penyakit pada manusia, Teknologi antibodi

monoklonal juga banyak dipakai untuk mendeteksi penyakit-penyakit pada tanaman

dan hewan, kontaminasi pangan dan polutan lingkungan.

(http'biologigonD.blogspot.com111membuat-antibody-monoklonal.html

$ntibodi untuk penyembuh kanker biasanya ditangani dengan sitotoksin yakni

Dat radioaktif pembunuh sel kanker. Senyawa campuran itu diinjeksikan ke dalam

tubuh penderita, dan akan meluncur ke sel-sel kanker dan membunuhnya, tanpa

merusak sel-sel lain yang normal 5al ini sangat dimungkinkan karena setiap Dat

antibodi akan mengenal antigennya. (2rawirohartono ' /)

A. Metode Pembuatan Antibodi Monoklonal

. 8munisasi mencit

$ntigen berupa protein atau polisakarida yang berasal dari bakteri %irus,

disuntikkan secara subkutan pada beberapa tempat atau secara intra peritoneal.

Setelah 6 minggu disusul suntikan antigen secara intra%ena sekali atau beberapa

kali suntikan. encit dengan tanggap kebal terbaik dipilih? hari setelah suntikan

terakhir, antibodi yang terbentuk pada mencit diperiksa dan diukur titer antibodinya,

mencit dimatikan dan limpanya diambil secara aseptis, kemudian dibuat suspensi sel

limpa untuk memisahkan sel B yang mengandung antibodi.


6/26

oleh tubuh dilakukan suntikan imunisasi langsung pada limpa dan ternyata hasilnya

lebih baik dari cara kon%esional.

. Fusi sel limpa kebal dan sel mieloma

2ada kondisi biakan jaringan biasa, sel limpa yang membuat antibodi akan cepat

mati, sedangkan sel mieloma dapat dibiakkan terus-menerus. Fusi sel dapat

menciptakan sel hibrid yang terdiri dari gabungan sel limpa yang dapat membuat

antibodi dan sel mieloma yang dapat dibiakkan terus menerus, sehingga sel hibrid

dapat memproduksi antibodi secara terus-menerus, sehingga dalam jumlah yang

tidak terbatas secara in vitro.

Fusi sel diawali dengan fusi membran plasma sehingga menghasilkan sel

besar dengan dua atau lebih inti sel, yang berasal dari kedua induk sel yang

berbeda jenis yang disebut heterokarion. 2ada waktu tumbuh dan membelah diri

terbentuk satu inti yang mengandung kromosom kedua induk yang disebut sel hibrid.

Frekuensi fusi dipengaruhi beberapa faktor antara lain jenis medium? perbandingan

jumlah sel limpa dengan sel mieloma? jenis sel mieloma yang digunakan? dan bahan

yang mendorong timbulnya fusi (fusogen). 2enambahan polietilen glikol (2G=) dan

dimetilsulfoksida ("SE) dapat menaikkan efisiensi fusi sel.

6. Gliminasi sel induk yang tidak berfusi

Frekuensi terjadinya hibrid sel limpa-sel mieloma biasanya rendah, karena

itu penting untuk mematikan sel yang tidak fusi yang jumlahnya lebih banyak agar

sel hibrid dalam media selektif yang mengandunghypoxanthine, aminopterin,

dan tymidine (5$T).

$minopterin menghambat jalur biosintesis purin dan pirimidin sehingga

memaksa sel menggunakan salvage pathway . Seperti kita ketahui sel mieloma

mempunyai kelainan untuk mensintesis nukleotida. Sel mieloma tidak mempunyai

enDim timidin kinase atau hypoxanthine phosphonibosyltransferase, sehingga sel

mieloma yang tidak berfusi akan mati karena tidak memiliki enDim tersebut,

sedangkan sel hibrid karena mendapatkan enDim tersebut dan sel mamalia yang

difusikan dapat menggunakan salvage pathway sehingga tetap hidup dan

berkembang.

0. 8solasi dan pemilihan klan hibridoma


7/26

Sel hibrid dikembangbiakan sedemikian rupa, sehingga tiap sel hibrid akan

membentuk koloni homogen yang disebut hibridoma, tiap koloni kemudian dipelihara

terpisah satu sama lain. 5ibridoma yang tumbuh diharapkan mensekresikan antibodi

ke dalam medium, sehingga antibodi yang terbentuk bisa diisolasi.

+mumnya penentuan antibodi yang diinginkan, dilakukan dengan

cara enzyme linked immunosorbent assay (G48S$) atauradioimmunoassay (>8$).

2emilihan klon hibridoma yang dapat menghasilkan antibodi? dan yang kedua adalah

memilih sel hibridoma penghasil antibodi monoklonal yang potensial menghasilkan

antibodi monoklonal yang tinggi dan stabil.

(http'%i%alapharmacy.blogspot.com116teknologi-pembuatan-antibodi-

monoklonal.html )

B. Metode Pembuatan Antibodi Monoklonal Seara In !itro dan In !i"o

$ntibodi monoklonal adalah antibodi yang spesifik terhadap satu macam

epitop. "alam pembuatan antibodi monoklonal dapat dilakukan dengan cara in %itro

dan in %i%o. Secara in %itro antibodi monoklonal diproduksi dengan cara hibridisasi

sel myeloma dan sel limfa kemudian dibiakkan pada mikroplate 3 well dan

diinkubasikan pada inkubator 6/H< yang mengandung


8/26

Pembekuan sel

Sel yang akan dibekukan sebaiknya sel yang berumur -6 hari agar setelah

di thawing sel yang hidup lebih banyak. Sel yang akan dibekukan pada

setiap tube/cryotube mengandung sel kurang lebih 1.


9/26

7. 2ada saat fusi, mencit dibunuh dan limfa diambil secara aseptis?

3. 4imfa dimasukkan ke dalam medium yang bebas serum sebanyak 1 ml yang telah

dipanaskan 6/H< dan kemudian dengan glass objek disayat-sayat kemudian ditekan

dengan pinset?

/. Sisa jaringan kemudian dimasukkan pada tabung 71 ml dan letakkan pada inkubator

selama 7 menit?

*. Supernatan diambil dan kemudian disentrifugasi selama 7 menit pada le%el 6-0

dengan kecepatan 311 g atau 111 rpm?

. 2elet kemudian diresuspensikan dengan 1.*6I #50


10/26

/. 2elet diberi 5$T dan diinkubasikan pada inkubator selama 61 menit, lakukan dengan

pelan-pelan?

*.

asukkan ke dalam plate klonisasi 17well sekitar tetes, 3 plate 3 well

17well sampai kurang lebih 1 Ll untuk plate?

. Setiap 6-0 hari di makan 6 5$T dan 5T dan setelah itu setiap 1 hari diuji . +ntuk

lebih jelas lihat gambar 6.

=ambar 6. BS-%itro, "econe 1 #S, "econ 1. 5al lain yang perlu

diperhatikan adalah cryotube untuk membekukan sel boleh digunakan hanya satu

kali, di samping 8tu juga material dan alat-alat harus diberi tanda khusus untuk kultur

sel dan tdak diperbolehkan digunakan yang lainnya.

2enyimpanan bahan-bahan plastik harus diberi sirkulasi udara yang baik

sehingga tidak terjadi kerusakan bahan tersebut, karena banyak mengandung

formaldehid yang sangak toksik terhadap sel. Eleh karena itu palstik yang lama tidak

dapat dipergunakan lagi. @ualitas air pada laboratorium tissue culture harus

disediakan beberapa tingkatan kualitas air terutama untuk fusi sel seperti proses

pertukaran ion sangat penting misalnya osmose diperlukan kualitas air tingkat 88 atau

aMua bidest. Selain itu juga diperlukan dimineralisasi dengan cara pertukaran ion

yaitu kation dan anion yang nantinya digunakan selain untuk pengenceran atau

membuat larutan juga untuk pencucian alat. $Mua destilata yang diproses dengan

menggunakan spiral pemanas dari besi atau metal tidak bisa digunakan, sebaiknya

dari glas kuarsa karena tidak merusak proses ionisasi. Eleh karena itu kualitas air merupakan syarat utama dalam mengerjakan kultur sel.


11/26


12/26

"alam penggunaan serum sebagai salah satu bahan penumbuh sel sebelum

dipakai harus dites terlebih dahulu dengan berbagai konsentrasi misalnya 1I, 7I,

atau I. 5al ini sebaiknya juga dites pada hibridoma yang sudah establish.

$da beberapa serum charge seperti 77I charge foetal calf serum, 7I

charge newborn calf serum, 0 charge calf serum, /6I charge bo%ine serum.

Serum-serum ini sudah banyak dipasarkan. +ji untuk serum dapat dilakukan dengan

sel hibrid yang establish dan dilakukan pengamatan selama -6 minggu setelah fusi

atau menggunakan sel myeloma dengan phase pertumbuhan dengan cara

memasukkan sel sebanyak 111 sel per well padamikroplate kemudian setelah satu

minggu diuji dengan mikroskop fase kontras atau dilihat kadar protein dan jumlah sel

yang tumbuh. !ika jumlah selnya meningkat maka serum tersebut dapat digunakan

untuk hibridoma.

Makrofag ( Makrofag Feeder Cells )

akrofag dalam produksi antibodi monokoonal diperlukan untuk memfagosit

sel mati pada saat fusi sel limfosit dan sel myeloma. Sel ini dikultur pada mikroplate

3 lubang (well ) atau mikroplate 0 lubang yang dapat ditumbuhkan sampai 0

minggu sebelum di campur dengan sel hasil fusi. Sehingga siap untuk memfagosit

sel-sel mati yang tidak fusi.

akrofag dapat dikmoleksi dari limpa mencit yang sama, tetapi disarankan

menggunakan mencit yang berbeda karena akan mempengaruhi faktor

pertumbuhan. encit yang sering digunakan untuk mengkoleksi makrofag

sebagai feeder cells adalah jenis Balbc dan #>8. inimal mencit yang akan

diambil makrofagnya ekor. Tetapi jika makrofag dikoleksi dari mencit yang telah

diimunisasi hanya diperlukan mencit.

akrofag yang paling cocok untuk feeder cells adalah makrofag hasil kultur

monosit berasal dari darah perifer manusia yang distimulasi dengan $B-serum.

Bahan dan Reagensia

encit strain balbc atau #>8 atau mencit lainnya, tabung conical 71 ml,

tabung sentrifuse 7 ml, medium >28 301 (*11)' *1I >28 301, 1I medium

, garam Garles, 2BS tanpa


13/26

. Bagian yang akan difiksasi dibuat aseptis dengan ethanol *1I, kemudian kulit perut

dibuka.

6. asukkan - ml 2BS dengan pipet pasteur dan lakukanlah pipetisasi keluar masuk

dengan pelan-pelan (sedot dan tekan).

0.


14/26

Produksi $ntibodi Monoklonal &ada Mencit

"alam memproduksi antibodi monoklonal pada mencit banyak faktor yang

harus diketahui, karena produksi antibodi monoklonal dengan cara ini memerlukan

situasi yang betul-betul memenuhi persyaratan terutama pertumbuhan tumor untuk

membentuk asites di dalam ruang peritoneum mencit. Semakin cepat dan banyak

asites yang terbentuk semakin tinggi produkti%itasnya antibodi monoklonal. Eleh

karena itu dalam kapital selanjutnya akan membahas dasar produksi antibodi

monoklonal pada mencit dan faktor-faktor apa yang harus diperhatikan, standar

metode yang digunakan. Selain itu juga faktor penandaan (priming).

'asar &roduksi antibodi monoklonal &ada mencit

Terdapat persyaratan khusus untuk memproduksi antibodi poliklonal dalam

ruang peritoneum mencit, sehingga dapat memproduksi antibodi monoklonal.

Terutama perkembangan tumor sangat perlu diperhatikan. 5al ini semenjak tahun

3 oleh 2otter dan

=ambar 7. Skema standar etode 2roduksi $ntibodi onoklonal pada mencit

Boyce sudah membuat dan mengamati pada mencit setelah diinjeksi dengan

mineral oil dan mineral adju%ant terbentuk plasmacytoma. "ari efek inilah sehingga

dapat menstimulasi hibridoma sel untu dapat proliferasi di dalam ruang peritoneum

mencit. $danya reaksi ini mengakibatkan berdatangan sel adheren seperti

granulosit, makrofage ke dalam ruang peritoneum. Sehingga dengan adanya

pertumbuhan sel hibridoma terlihat terjadi keradangan pada perutruang peritoneum

mencit. 5al ini menandakan immunoglobulin diproduksi berupa asites dalam perut

mencit.

+ntuk dapat mengkoleksi cairan asites dari mencit dilakukan dengan cara

melakukan punksi.


15/26

kerugiannya adalah kebanyakan antibodi monoklonal yang diproduksi dan di dapat

sekitar 7-1I mengandung antibodi bukan antibodi monoklonal. 2roblem lainnya

yang muncul adalah pada saat menginjeksikan sel hibridoma ke dalam rongga

peritoneum terkadang terkontaminasi dengan bakteri, jamur dan mykoplasma.

Pemilihan dan Penanganan #ewan Coba

"alam pemilihan hewan coba biasanya dikaitkan dengan asal sel myeloma

dan sel limfa yang akan digunakan. Sebagai contoh, jika sel linie myeloma

K36.$g*.376 berasal dari mencit balbc dan kemudian difusikan dengan sel limfa

dari mencit balbc pula, maka hewan coba yang paling baik untuk menumbuhkan sel

tersebut adalah menggunakan mencit balbc. eskipun dapat juga menggunakan

generasi hibrid F dari balbc dengan strain lainnya.

!enis hewan lainnya yang dapat digunakan adalah heterolog hibridoma

mencit dan juga pada tikus (rat), tetapi harus dibuat imunodefisiensi terlebih dahulu

dengan cara pengambilan thymus (Thymus apalstich), penyinaran sinar ultra%iolet,

dan atau dengan cara

pemberian bahan imunosupresi atau S


16/26

2embuatan asites sangat tergantung tentang pengalaman dalam

penanganan sebelum sel hibridoma diinjeksikan ke dalam rongga peritoneum. 5al

ini karena jika kurang optimal, maka asites yang diproduksi tidak akan banyak.

Bahan yang sering digunakan sebagai priming antara lainmineral oil pristan

(#$%$&'$&-tetramethyl pentadecan) dan sebuah rantai alkan. Serta aju%ant freund

incompletes. $gen lainnya yang juga dapat menstimulir makrofage yaitu

thioglykolaat dan proteose-pepton. "ari banyak bahan yang digunakan

untuk priming ini dan hasilnya yang paling baik adalah selain !ncompleet reund*s

+d,uvant (8F$).

!ika setelah sekali injeksi sel hibridoma ke dalam ruang peritoneum tidak

muncul adanya tumor, maka dapat diulangi sekali lagisetelah -7 hari atau dapat

dilakukan ulangan berkali-kali. !adi efek dari priming adalah mempercepat

pertumbuhan sel hibridoma dalam rongga peritoneum mencit.

%aktu dan !olume Priming

2ada mencit yang diberi priming pristan 1-1 hari sebelum diinjeksi dengan

sel hibridoma mempunyai kecenderungan pertumb uhan sel hibridoma lebih cepat

dibandingkan dengan pemberian priming hari sebelum diinjeksi, dan asites yang

dibentukotomatis lebih cepat. "ari beberapa waktu pemberian priming di atas yang

paling baik untuk produksi asistes dan dapat menghasilkan antibodi yang tinggi

adalah pemberian priming 1 hari sebelum diinjeksi sel hibridoma.

2emberian priming dengan incomplete adju%ant dapat membentuk

plasmacytoma seperti dengan pristan, tetapi waktu yang baik pemberiannya adalah

6 hari sebelum diinjeksi dengan sel hibbridoma. Tetapi kedua bahan priming di atas

dalam stimulasi pembentukan asites pristan lebih lama dibandingkan dengan 8F$.

!umlah dosis maksimal pemberian ppristan pada mencit adalah o,7

mlmencit. 4ebih dari - ml dapat menurunkan produksi secara drastis. !adi 1,6

mlmencit paling baik pada mencit dengan berat badan 1 gram dan 1,7 ml untuk

hewan coba yang lebih berat.

+plikasi sel ibridoma


17/26

Sel hibridoma dimasukkan ke dalam rongga peritoneum melalui penyuntikan

intraperitoneal sekitaar 17 sel. Selain itu juga dapat dilakukan melalui rute intra%ena

retrobulbar atau intralimfa (intraspleen). !ika penyuntikan dilakukan langsung pada

limfa maka sel yang perlu dipersiapkan adalah 10sel. "engan jumlah sel ini sudah

mampu untuk berkembang di dalam mesenterium dari rongga perut. Tetapi jika

menginginkan produksi antibodi monoklonal yang cepat dan banyak maka jumlah sel

minimal 3-6 17selmencit. Tetapi kerugiannya adalah biasanya hewan cepat

mati, jika dibandingkan dengan pemberian sel yang lebih sedikit, dan juga produksi

immunoglobulinnya sedikit.

Pengambilan $sites

$sites dapat diambil jika sudah terlihat adanya produksi asites. $sites dapat

diambil berkali-kali, sehingga didapatkan %olume aistes lebih banyak. @erugiannya

jika diambil lebih dari sekali terkadang mencit mati. 2engambilan dengan cara

punksi ini maksimal pengambilan aistes 0-3 kali. $gar dalam pengambilan

mendapatkan cairan asites yang banyak maka perlu diinjeksi terlebih dahulu

dengan 7 ml cairan fisiologis larutan kochsal sebelum pengambilan.

Penggunaan sel asites

Sel hibridoma yang dipanen dari rongga perut mencit adalah merupakan sel

yang sudah adaptasi di dalam rongga perut oleh karena itu setelah dilakukan

pemanenan asites, sel dapat diinjeksikan kembali pada mencit baru tanpa didahului

dengan pemberian priming. Sel ini dapat disimpan pada -*1H< dan tahan sampai 3

bulan.

Produksi humanantibodi monoklonal &ada rongga &erut mencit

2roduksi human-antibodi monoklonal pada mencit sulit dan terdapat

beberapa kendala karena sel hibridoma pada mencit terjadi enotransplantat dan

terjadi reaksi yang berlebihan. Eleh karena itu hewan coba perlu dilakukan

pelemahan sisten imun dengan cara penyinaran ultra %iolet. 2roduksi asites human-

antibodi monoklonal relatif lebih sedikit dibandingkan dengan sel hibridoma normal

pada mencit. Eleh karena itu diperlukan beberapa tahapan. 2ertama ditumbuhkan

pada mencit melalui penyuntikan sel tumor secara in %itro. $khirnya sel diinjeksikan

kembali untuk produksi asites.


18/26

@erugian produksi human-antibodi monoklonal adalah.

. Berlangsung lama dan harus aktif untuk adaptasikan sel dalam perut mencit dan

selanjutnya dilakukan kokulti%asi secara in %itro selama 6 bulan.

. Sulit mendapat hewan S2F dan juga harganya mahal?

6.

$lat untuk penyinaran kadang sulit untuk mendapatkannya?

0. 2embentukan tumor pada setiap hewan sekitar -7 mlmencit dengan konsentrasi

antibodi maksimal mg 8g=ml.

C. Dasar Hibridisasi Dan Produksi Antibodi Monoklonal

Si&at dan produksi sel m'eloma dan sel linie tumor

Sebagai bahan dasar dalam pembuatan antibodi monoklonal terdapat

empat persyaratan yang harus dipenuhi antara lain '

. Sel tidak dapat mensistesi antibodi kompler atau imunoglobulin 4-chain dan 5-chain

sendiri?

. Sel tidak boleh mempunyai enDim defek, supaya setelah seleksi fusi dapat dieliminir?

6. Sel harus mempunyai sifat fusi yang yang baik, sehingga didapatkan sel hibridoma

yang banyak dan baik?

0. Sel harus dapat membawa sifat molekul dalam hibridoma untuk menginduksi

sintesis antibodi monoklonal yang tinggi.

(anpa sekresi imunoglobulin

Sel myeloma atau sel tumor mempunyai sifat fisik yang tidak dapat

memproduksi atau mensintesis sendiri antibodi secara utuh atau rantai antibodi,

tetapi dapat memproduksi setelah hibridisasi. 5al ini karena terdapat sisternalkombinasi kompartment dari kromosom , 0, (manusia) atau 3, , dan 3 pada

mencit dari sel asal, selain itu juga sel myeloma tidak dapat mensintesis antiboodi,

sehingga dapat menseleksi untuk memproduksi antibodi monoklonal yang intak

dengan kromosom sel B saja. Terdapat beberapa sel myeloma etablish

seperti maus myeloma yang berkode antara lain 26 36$g*.376, S2E-$g0 dan

26-#S-$g0- tetapi kadang terjadi mutan. Sedang 26-#S--$g0- secara

intraseluler bebas rantai kappa, tetapi tidak dapat berdifusi dengan baik.


19/26

De&ek en)im untuk seleksi

Setelah dilakukan fusi terdapat empat kemungkinan populasi sel yang

berbeda yanitu tidak terjadi fusi di antara sel myeloma, tidak terjadi fusi di antara sel

limfosit, tidak terjadi hibridoma yang salah dan terjadi hibridoma yang benar. $pa

yang terjadi setelah fusi terhadap keempat macam sel fusi tersebutO Sel yang tidak

fusi dengan sel B akan mati beberapa hari setelah fusi atau paling lama 6 minggu.

Sel yang salah fusi dengan dua sel B dan satu sel myeloma, dua sel myeloma

dengan satu sel B, keduanya sel B, sel B dan sel T tidak mempunyai kemampuan

hidup dan akan mati dalam beberapa hari. Sel hibridoma yang sempurna fusi akan

tumbuh terus dan paling tidak dalam hibridisasi paling sedikit akan didapatkan sel

hibridoma sekita 1-0 meskipun masih ada sel yang tidak fusi seperti sel myeloma

yang dapat tumbuh cepat dan dapat proliferasi, maka diperlukan trik untuk

menyiasati sel tersebit agar cepat tereliminer atau mati maka perlu ditambahkan

medium hymidin inase (T@) agar terjadi defek enDim, atau

ditambahkan ypoxanthin 0uanidin "hosphoribosyl ranferase (5=2>T). "engan

adanya defek enDyme, maka sel akan mati, sedang sel hibridoma (sel fusi) tidak

akan mati.

Si&at &usi 'ang baik

Sifat fusi yang baik adalah dapat mengahsilkan sel hibridoma yang banyak.

!ika sel linie tumor sesuai dengan kriteria sebagai persyaratan membuat hibridoma

maka akan mendapatkan sel partner yang baik, dan otomatis akan menghasilkan

sel hibridoma yang baik pula. Selain itu juga tidak ditemukan sel adanya sel mutasi

pada tingkat subklone.

*ualitas Hibridoma

5ibridoma dikatakan baik jika daya sintesis antibodi monoklonal tinggi.

2ernyataan ini sangat penting jika menginginkan produksi antiboodi monoklonal

dalam kapasitas yang cukup banyak. $pakah ingin memproduksi atau mendapatkan

kultur hibridoma 1 Lgml atau 71 Lgml. Sampai saat ini sel myeloma dapat

menginduksi sintesis antibodi monoklonal. Eleh karena itu sekarang teknik ini

berkembang pesat untuk memproduksi antibodi monoklonal anti human. Selain itu

juga tidak banyak ditemukan mutagenesis pada subklone. "engan demikian melalui


20/26

teknologi gen teknik kemungkinan yang akan datang didapatkan sel yang baik,

sehingga menghasilkan fusi yang baik. (>antam ' 116)

D. Cara *er+a Antibodi Monoklonal

Tidak seperti kemoterapi dan radioterapi, yang bekerja secara kurang

spesifik, tujuan pengobatan antibodi monoklonal adalah untuk menghancurkan sel-

sel limfoma non 5odgkin secara khusus dan tidak mengganggu jenis-jenis sel

lainnya. Semua sel memiliki penanda protein pada permukaannya, yang dikenal

sebagai antigen. $ntibodi monoklonal dirancang di laboratorium untuk secara

spesifik mengenali penanda protein tertentu di permukaan sel kanker. $ntibodi

monoklonal kemudian berikatan dengan protein ini. 5al ini memicu sel untuk

menghancurkan diri sendiri atau memberi tanda pada siinduk kekebalan tubuh untuk

menyerang dan membunuh sel kanker.

Sebagai contoh, rituimab, antibodi monoklonal yang dipakai dalam

pengobatan limfoma non 5odgkin, mengenali penanda protein ituimab secara efektif menyerang sel limfoma agar dapat dihancurkan siinduk

kekebalan tubuh dan membunuh sel-sel kanker.


21/26

agar memberikan hasil yang terbaik sampai saat ini belumlah diketahui secara

pasti.Tahapannya '

. embuat sel kanker lebih dikenali oleh sisten 8mmun

Sistem immun akan aktif jika terdapat musuh (antigen) dalam tubuh. Sekali sisten

immun mengenali adanya musuh tubuh, maka ia akan memanggil teman-temannya

untuk melawan musuh ini. Tapi tidak selamanya sistem antibodi monoklonal

mengenali sel kanker. >ituimab bekerja agar sistem immun lebih kenal dengan sel

kanker sehingga sistem pertahanan tubuh bisa bekerja lebih efektif dalam rangka

menghajar sel kanker.

. enghambat Faktor-faktor 2ertumbuhan Sel @anker

!ika sebuah Dat kimia yang disebut sebagai =rowth Factor menempel pada

sel kanker, maka pertumbuhan sel kanker yang ditempeli akan meningkat drastis,

kalo pertumbuhan sel kankernya tambah banyak secara otomatis kankernya akan

bertambah ganas. "idasarkan fakta inilah, obat-obatan $ntibodi onoklonal seperti

cetuimab bekerja menghambat ikatan antara growht factor dengan reseptor pada

sel.

6. enghantarkan >adiasi ke Sel @anker

@ombinasi obat antibodi monoklonal dengan partikel radioaktif, kita bisamenghantarkan radiasi langsung tepat sasaran pada sel kanker. 5al ini digunakan

untuk memastikan radiasi tersebut tidak merusak sel yang sehat. "engan adanya

obat yang penggunaannya masih dalam pengawasan F"$ ini, maka efektifitas

radioterapi pada pasien kanker bisa lebih ditingkatkan.

-. Dosis dan Pemberian Antibodi

"osis dan pemberian ber%ariasi untuk setiap antibodi yang diberikan.

Sebagai contoh, rituimab, antibodi monoklonal yang umum digunakan dalam

pengobatan #54 diberikan intra%ena, melalui jarum yang masuk ke dalam pembuluh

darah , biasanya di lengan. >ituimab diberikan sebagai PtetesanQ yang berarti obat

dimasukkan dulu ke dalam kantong infus, kemudian cairan menetes perlahan ke

dalam pembuluh darah dengan mengandalkan kekuatan gra%itasi.

!ika antibodi monoklonal digunakan dalam kombinasi dengan kemoterapi,

rituimab biasanya diberikan sesaat sebelum kemoterapi pada awal setiap siklus

pengobatan. Sebelum tetesan infus diberikan, obat lain untuk mencegah beberapa


22/26

efek samping antibodi monoklonal diberikan R contohnya parasetamol untuk

mengurangi demam dan anti-histamin untuk mengurangi kemungkinan reaksi alergi.

eski demikian, efek samping antibodi monoklonal umumnya ringan dan sementara

serta dapat diatasi dengan mudah. !ika terjadi efek samping saat obat diberikan,

tetesan infus dapat diperlambat atau bahkan dihentikan hingga efek samping

berakhir.

+ntuk pengobatan pertama, pasien menginap di rumah sakit atau

sementara tinggal di sana sebelum pulang ke rumah.4lanjutan biasanya lebih cepat

dan efek sampingnya lebih sedikit. @ebanyakan orang dapat mendapat pengobatan

lanjutan ini sebagai rawat-jalan dan pulang ke rumah pada hari itu juga.

. E&ek Samping Antibodi Monoklonal

Seperti semua obat, antibodi monoklonal dapat menyebabkan efek samping.

ituimab dapat menyebabkan reaksi alergi. =ejalanya dapat berupa'

- =atal atau mendadak muncul warna kemerahan

- Batuk, mengi atau sesak napas

- 4idah bengkak atau rasa bengkak di tenggorokan

- Gdema, atau pembengkakan karena kelebihan cairan dalam jaringan tubuh


23/26

>eaksi alergi berat terhadap rituimab jarang ditemukan dan pasien diamati

selama masa pengobatan akan munculnya gejala-gejala ini. 2asien harus

melaporkan gejala yang dialaminya begitu muncul. Seringkali, yang perlu dilakukan

hanyalah memperlambat atau menghentikan sementara tetesan intra%ena sampai

reaksi alergi berakhir. 2asien umumnya diberikan anti-histamin sebelum mulai

pengobatan untuk membantu mencegah atau mengurangi masalah ini.

2enggunaan antibody monoclonal sebagai terapi kanker juga mampu

menimbulkan efek samping, mulai efek samping yang ringan sampai efek samping

yang menjadikan pasien dalam kondisi gawat darurat.

Gfek Samping +mum '

>eaksi alergi seperti gatal dan bengkak.

=ejala seperti flu, padahal bukan flu

#ausea

"iare

2engeringan @ulit

Gfek Samping yang jarang terjadi, namun berbahaya.

2erdarahan hebat

=angguan jantung

>eaksi anafilaksis (hipersensitif)

2enurunan jumlah hitung darah

BAB III

*ESIMPULAN

(eknik Hibridoma adalah penggabungan dua sel dari organisme yang

sama maupun berbeda sehingga menghasilkan sel tunggal berupa sel hibrid

( hibridoma) yang memiliki kombinasi dari sifat kedua sel tersebut. Teknik hibridoma

ini sangat penting untuk menghasilkan antibodi dan hormon dalam jumlah yang

besar.


24/26

Salah satu hasil dari teknik hibridoma ini adalah antibodi monoklonal .

$ntibodi monoklonal adalah antibodi yang diperoleh dari suatu sumber tunggal atau

sel klona yang hanya mengenal satu jenis antigen. 2embentukan antibodi

monoklonal dilakukan dengan menggunakan kelinci atau tikus.


25/26

sehat. "engan teknologi yang ada, dapat dibuat antibodi monoklonal yang hanya

menyerang protein dan menyerang sel-sel tanpa mempengaruhi sel-sel yang sehat.

*egunaan antibodi monoklonal lainn'a adala, sebagai berikut

. untuk mendeteksi kandungan hormon korionik gonadotropin ( 5


26/26

&atson, !ames "., etc. **. 67+ 8ekombinan$ Suatu "ela,aran Singkat . Grlangga,

!akarta.

http://4putradaritimur.blogspot.com/2012/05/laporan-anti-bodi-monoklonal.html
http://4putradaritimur.blogspot.com/2012/05/laporan-anti-bodi-monoklonal.htmlhttp://4putradaritimur.blogspot.com/2012/05/laporan-anti-bodi-monoklonal.html

Documents

Anti Bodi Monoklonal