Upload
others
View
11
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
i
USM
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK LENGKUAS MERAH
(Alpinia purpurata K. Schum) HASIL BERBAGAI LAMA EKSTRAKSI
BERBANTU GELOMBANG MIKRO DAN MASERASI
Skripsi S-1
Diajukan Untuk Memenuhi Sebagian Persyaratan
Dalam Mencapai Gelar Sarjana S-1
Program Studi S-1
Teknologi Hasil Pertanian
Disusun Oleh :
TRI HANDOYO PUTRO PAMUNGKAS
NIM : D.131.14.0006
PROGRAM STUDI S-1 TEKNOLOGI HASIL PERTANIAN
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
UNIVERSITAS SEMARANG
2019
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT, karena atas
limpahanrahmat, taufik serta hidayahNya sehingga penulis dapat menyelesaikan
laporan penelitian ini dalam bentuk skripsi yang berjudul “Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Lengkuas Merah ( Alpinia Purpurata K. Scum) Hasil Berbagai Lama
Ekstraksi Berbantu Gelombang Mikro Dan Maserasi” sebagai salah satusyarat
untuk memperoleh gelar sarjana pada Jurusan Teknologi Hasil PertanianFakultas
Teknologi Pertanian Universitas Semarang.
Dalam penyusunan skripsi ini, penulis mendapatkan bimbingan dan
bantuandari berbagai pihak. Oleh karena itu penulis ingin mengucapkan terima
kasihkepada:
1. Ir. Bambang Kuanrto, M.P selaku pembimbing utama yang telah bersedia
menyediakan waktu dan tenaganya untuk membimbing, mengarahkan, dan
memberikan masukan kepada penulis dalam melakukan penelitian dan
penulisanskripsi.
2. Ir. Elly Yuliarti Sani. M.Si, selaku pembimbing anggota yang telah memberikan
masukan dan pengarahan dalam penulisan skripsi ini.
3. Ir. Erry Pratiwi, M.P, selaku penguji yang telah memberikan masukan dan
pengarahan dalam penulisan skripsi ini.
4. Dr. Ir. Haslina, M.Si, selaku Dekan Fakultas Teknologi Pertanian Universitas
Semarang.
5. Ir. Sri Haryati, M.Si, selaku Ketua Jurusan Fakultas Teknologi Pertanian
Universitas Semarang.
v
6. Orang tuaku tercinta yang telah memotivasi dalam memberikan
pendidikanhingga perkuliahan.
7. Anak-anak Fakultas Teknologi Pertanian angkatan 2014 dan teman-temanselain
Fakultas Teknologi Pertanian.
8. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah
memberidukungan dalam penyusunan laporan skirpsi ini.
Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, untuk
itupenulis terbuka menerima saran dan kritik guna penyempurnaan dan semoga
skripsi ini dapat dimanfaatkan bagi semua pihak. Semoga skripsi ini dapat
bermanfaat bagi pembacanya.
vi
INTISARI
Tri Handoyo Putro Pamungkas, D.131.14.0006 “ Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Lengkuas Merah ( Alpinia purpurata K. Schum) Hasil Berbagai Lama
Ekstraksi Berbantu Gelombang Mikro Dan Maserasi “
Rimpang lengkuas mengandung minyak atsiri lebih kurang 1 % minyak
atsiri berwarna kuning kehijauan yang terutama terdiri dari metil-sinamat 48 %,
sineol 20 % - 30 %, eugenol, kamfer 1 %, seskuiterpen, δ-pinen, galangin. Bahan
baku lengkuas dapat menghasilkan minyak atsiri, selain itu juga bahan baku
lengkuas mudah didapat dan murah, maka pengolahannya dapat dikembangkan
untuk mendapatkan suatu produk oleoresin dengan proses ekstraksi dengan metode
MAE (Microwave Assisted Extraction) dan maserasi sehingga menghasilkan
produk oleoresin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh lama waktu
ekstraksi menggunakan metode Microwave Assisted Extraction (MAE) dan
maserasi terhadap total fenolik, flavonoid, tanin, dan aktivitas antioksidan oleoresin
lengkuas merah.
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September - November 2018 di
Laboratorium Rekayasa Pangan, Laboratorium Kimia Pangan Universitas
Semarang, dan Laboratorium CV. Cemix Pratama Bantul Yogyakarta. Rancangan
percobaan yang digunakan pada penelitian ini adalah Rancangan Acak Lengkap
(RAL) 5 perlakuan yang teridiri 5 level waktu (, 2, 4, 6, 8 dan 10 menit) dengan 4
kali ulangan.
Hasil penelitian menunjukan Perlakuan lama MAE dan maserasi
berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap seluruh variabel yang diamati yaitu kadar
fenolat, kadar flavonoid, kadar tanin dan aktivitas antioksidan. Semakin lama waktu
MAE, cenderung meningkatkan kadar dari variabel yang diamati seluruh variabel
yang diamati yaitu kadar fenolaik, kadar flavonoid, kadar tanin dan Aktivitas
Antioksidan. Karakteristik L5 (MAE 10 menit) sebagai perlakuan terbaik adalah
sebagai berikut kadar fenolik 0.7623 mg.EAG/g, kadar flavonoid 0,6109 mg.QE/g,
kadar tanin 0,8203 mg.EC/g, dan kadar Aktivitas Antioksidan 79.5663 %.
vii
ABSTRACK
Tri Handoyo Putro Pamungkas, D.131.14.0006 "Antioxidant Activity of Red
Galangal Extract (Alpinia purpurata K. Schum) Results of Various Helpful
Extraction LongingsMicrowave And Maserasi”
Galangal rhizome contains essential oil of approximately 1% volatile oil
greenish yellow which mainly consists of methyl-cinnamic 48%, cineol 20% - 30%,
eugenol, camphor 1%, sesquiterpen, δ-pinen, galangin. Galangal raw material can
produce essential oils, besides that, the galangal raw material is easily available and
inexpensive, so the processing can be developed to obtain an oleoresin product with
the extraction process using the MAE (Microwave Assisted Extraction) and
maserasi method to produce oleoresin products.This study aims to determine the
effect of extraction time using the Microwave Assisted Extraction (MAE) and
maserasimethod on total phenolics, flavonoids, tannins, and Antioxidant Activity
of red galangal oleoresin.
This research was conducted in September - November 2018 at the
Laboratory of Food Engineering, University of Semarang Food Chemistry
Laboratory, and Laboratory CV. Cemix Pratama Bantul Yogyakarta. The
experimental design used in this study was a 5 treatment Completely Randomized
Design (RAL) consisting of 5 levels of time (2, 4, 6, 8 and 10 minutes) with 4
replications.
The results showed that the old MAE and maserasi treatment had a
significant effect (p <0.05) on all observed variables namely phenolic levels,
flavonoid levels, tannin levels and Antioxidant Activity. The longer the MAE time,
tends to increase the level of the variables observed in all observed variables,
namely phenolic levels, flavonoid levels, tannin levels and Antioxidant Activity.
The characteristics of L5 (10 minutes MAE) as the best treatment were as follows
the phenolic levels of 0.7623 mg.EAG / g, flavonoid levels of 0.6109 mg.QE / g,
tannin levels of 0.8203 mg.EC/g, and antioxidant levels of 79.5663%.
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN COVER ................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN I ............................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN II ............................................................... iii
KATA PENGANTAR ............................................................................... iv
INTISARI .................................................................................................. vi
ABSTRACK .............................................................................................. vii
DAFTAR ISI ............................................................................................ viii
DAFTAR TABEL...................................................................................... x
DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xi
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang ................................................................................ 1
B. Perumusan Masalah ....................................................................... 3
C. Tujuan ............................................................................................ 3
D. Manfaat . ......................................................................................... 3
E. Hipotesis ......................................................................................... 3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
A. Lengkuas Merah (Alpinia purpurata K. Schum) ............................ 4
B. Total Fenolik ................................................................................... 6
C. Flavonoid......................................................................................... 7
D. Tanin ............................................................................................... 9
E. Antioksidan ..................................................................................... 10
F. Oleoresin ......................................................................................... 12
G. Pelarut ............................................................................................. 14
H. Ekstraksi ......................................................................................... 15
I. Oven Microwave ............................................................................. 17
J. MicrowaveAssisted Extraction ........................................................ 18
K. Maserasi ......................................................................................... 20
ix
BAB III METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................ 22
B. Alat dan Bahan ................................................................................ 22
C. Rancangan Percobaan .................................................................... 22
D. Prosedur Penelitian.......................................................................... 23
E. Diagram Alir Penelitian ................................................................. 24
F. Variabel Pengamatan ..................................................................... 25
BAB IVHASIL DPEMBAHASAN
A. Rimpang Lengkuas Merah .............................................................. 27
B. Total Fenolik ................................................................................... 30
C. Kadar Flavonoid .............................................................................. 32
D. Kadar Tanin ..................................................................................... 34
E. Aktivitas Antioksidan...................................................................... 37
F. Korelasi .......................................................................................... 39
BAB V PENUTUP
A. Kesimpulan ..................................................................................... 41
B. Saran ................................................................................................ 41
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 42
LAMPIRAN ............................................................................................... 45
x
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Sifat-sifat Minyak Lengkuas ........................................................... 6
2. Komponen Non-Volatile Oil dan Volatile Rimpang Lengkuas ....... 6
3. Hasil Randemen lengkuas Merah .................................................... 28
4. Hasil analisis total fenolat lengkuas Merah..................................... 29
5. Hasil analisis total flavonoid lengkuas merah ................................. 33
6. Hasil analisis tanin lengkuas merah ................................................ 35
7. Hasil analisis Aktivitas Antioksidan ............................................... 37
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Lengkuas Merah .............................................................................. 5
2. Struktur fenolik ............................................................................... 7
3. Struktur umum flavonoid .................................................................. 8
4. Stuktur asam tanat ........................................................................... 9
5. Senyawa Kimia Pada Lengkuas ...................................................... 13
6. Diagram Alir Penelitian .................................................................. 24
7. Grafik rerata hasil rendemen ekstrak lengkuas merah .................... 29
8. Grafik rerata total fenolat ekstrak lengkuas merah ......................... 31
9. Grafik rerata total flavonoid ekstrak lengkuas merah ..................... 33
10. Grafik rerata hasil kadar tanin ekstrak lengkuas merah .................. 36
11. Grafik rerata Aktivitas Antioksidan ............................................... 38
1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Tanaman lengkuas, laos atau kelawas (Alpinia galanga) merupakan jenis
tumbuhan rempah-rempah yang bisa hidup di daerah dataran tinggi maupun
dataran rendah. Umumnya masyarakat memanfaatkannya sebagai campuran
bumbu masak dan pengobatan tradisional. Pemanfaatan lengkuas untuk
masakan dengan cara mememarkan rimpang kemudian dicelupkan begitu saja
ke dalam campuran masakan, sedangkan untuk pengobatan tradisional yang
banyak digunakan adalah lengkuas merah Alpinia purpurata K. Schum.
(Vankar, 2006).
Berdasarkan warna, bentuk dan ukuran rimpang, lengkuas dibedakan
atas dua varietas, yaitu lengkuas putih dan lengkuas merah. Lengkuas putih
biasanya digunakan sebagai bumbu rempah untuk tambahan masakan,
sedangkan lengkuas merah biasanya dimanfaatkan sebagai obat. Secara
tradisional, lengkuas sering digunakan sebagai obat sakit perut, anti gatal, anti
jamur, anti inflamasi, anti alergi dan anti hipoglikemik (Darmawan, 2013).
Rimpang lengkuas mengandung minyak atsiri lebih kurang 1 % minyak
atsiri berwarna kuning kehijauan yang terutama terdiri dari metil-sinamat 48
%, sineol 20 % - 30 %, eugenol, kamfer 1 %, seskuiterpen, δ-pinen, galangin.
Selain itu rimpang juga mengandung resin yang disebut galangol, kristal
berwarna kuning yang disebut kaemferida dan galangin, kadinen,
2
heksabidrokadalen hidrat, kuersetin, amilum, beberapa senyawa flavonoid, dan
lain-lain (Tjitrosoepomo, 1994).
Lengkuas diketahui memiliki banyak kandungan senyawa kimia.
Kandungan kimia lengkuas antara lain senyawa-senyawa terpenoid seperti
galanolakton, 16-dial, 12-labdiena-1510,25, 12-labdiena-15 yang termasuk
dalam golongan diterpen dan 1,8 cineol yang termasuk golongan monoterpen
(Darmawan, 2013). Sehingga lengkuas ini bisa dikembangkan pengolahannya.
Berdasarkan urain diatas, maka bahan baku lengkuas dapat menghasilkan
minyak atsiri, selain itu juga bahan baku lengkuas mudah didapat dan murah,
maka pengolahannya dapat dikembangkan untuk mendapatkan suatu produk
oleoresin dengan proses ekstraksi dengan metode MAE (Microwave Assisted
Extraction) sehingga menghasilkan produk oleoresin. Oleoresin merupakan
campuran yang terdiri dari minyak atsiri pembawa aroma dan damar sebagai
pembawa rasa. Oleoresin umumnya didapatkan dari ekstraksi rempah-rempah
misalnya jahe, cengkeh, lada, kayu manis, dengan pelarut tertentu. Pelarut yg
dapat digunakan misalnya heksan, metanol, alkohol, aseton, isopropanol, dan
lain-lain. Oleoresin biasanya berbentuk pasta atau cairan kental.
Dalam penelitian ini lengkuas merah akan dikenai perlakuan lama
ekstraksi yaitu 2 menit, 4 menit, 6 menit, 8 menit dan 10 menit pada power 20P
dan maserasi selama 12 jam. Pemilihan perlakuan tersebut didasarkan pada
penelitian yang dilakukan oleh (Purwanto, 2010) yang mengekstaraksi
oleoresin jahe emprit menggunakan metode Microwave Assisted Extraction
(MAE).
3
B. Rumusan Masalah
Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah apakah lama waktu
ekstraksi menggunakan metode Microwave Assisted Extraction (MAE) dan
Maserasi dapat mempengaruhi total fenolik, flavonoid, tanin, dan aktivitas
antioksidan oleoresin lengkuas merah yang dihasilkan.
C. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah mengetahui pengaruh lama waktu ekstraksi
menggunakan metode Microwave Assisted Extraction (MAE) dan Maserasi
terhadap total fenolik, flavonoid, tanin, dan aktivitas antioksidan oleoresin
lengkuas merah.
D. Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini adalah memberi informasi ilmiah berupa data total
fenolik, flavonoid, tanin, dan aktivitas antioksidan oleoresin lengkuas merah
sekaligus memberi informasi pada masyarakat tentang pengaruh ekstraksi
menggunakan metode Microwave Assisted Extraction (MAE) dan Maserasi
pada oleoresin lengkuas merah.
E. Hipotesis
Diduga lama waktu ekstraksi menggunakan metode Microwave Assisted
Extraction (MAE) dan Maserasi berpengaruh terhadap total fenolik, flavonoid,
tanin, dan aktivitas antioksidan oleoresin lengkuas merah.
4
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Lengkuas merah (Alpinia purpurata K. Schum)
Morfologi lengkuas merah secara umum terdiri atas struktur rimbang,
batang, daun, bunga, buah dan biji. Batang lengkuas merah merupakan batang
Semu, tegak, masif, terdiri dari pelepah daun hijau kemerahan dengan tinggi 1
– 2 m. Akarnya berbentuk rimpang dengan daging akar berwarna merah
dengan bau menyengat. Daun tunggal, duduk dalam roset akar, lanset, ujung
runcing, pangkal tumpul dengan panjang 30 – 90 cm dan lebar 5 – 15 cm,
pertulangan menyirip berwarna hijau. Bunga majemuk, berkelamin dua, di
ujung batang berkelopak hijau, mahkota merah. Buah berbentuk kotak, bulat
dengan warna hijau dan biji bulat berwarna hitam (Suranto, 2004).
Tumbuhan lengkuas merah berdasarkan penggolongan dan tata nama
tumbuhan, termasuk ke dalam klasifikasi (Anonim, 1993) sebagai berikut:
Divisi : Spermatophyta
Sub Divisi : Angiospermae
Kelas : Monocotyledoneae
Bangsa : Zingiberales
Suku : Zingiberaceae
Anak suku : Alpinioideae
Marga : Alpinia
Jenis : Alpinia purpurata K. Schum
5
Lengkuas atau laos adalah rempah-rempah populer dalam tradisi boga dan
pengobatan tradisional Indonesia maupun Asia Tenggara lainnya. Bagian yang
dimanfaatkan adalah rimpangnya yang beraroma khas. Masyarakat
menggunakan lengkuas sebagai pewangi dan penambah cita rasa masakan.
Selain itu, rimpang mudanya banyak dimanfaatkan sebagai sayuran dan
lalapan. Dalam bidang pengobatan, lengkuas digunakan sebagai antiseptik,
pencegah kangker, antialergi, antijamur, dan antioksidan. Selain itu, digunakan
sebagai obat panu, pelancar haid, diuretik,memperkuat lambung,
meningkatkan nafsu makan, dan sebagai penyegar (Suranto, 2004).
Gambar 1. Rimpang lengkuas merah
Lengkuas banyak mengandung oleoresin yang terdiri dari komponen
damar dan minyak atsiri. Selain itu, lengkuas mengandung komponen flavonol,
yang terdiri dari galangin, kaemferol, kuersetin, dan miliselin. Komponen
lainnya adalah à-pinen, 1,8- sineol, limonen, terpineol, kaemferol, kuarsetin,
dan miristin (Suranto, 2004).
6
Tabel 1. Sifat-sifat Minyak Lengkuas
Komponen Total
Berat jenis 15o 0,9847
Rotasi optik + 4o 20’
Indeks bias 20o 1,5164
Bilangan asam 1,8
Bilangan ester 145,6
Kandungan eugenol 3 - 4%
Kelarutan Campur dengan alkohol absolut.
Sumber : (Schimmel, 2003)
Secara umum rimpang mengandung dua komponen utama, yaitu non-
volatile oil dan volatile oil.
Tabel 2. Komponen Non-Volatil dan Volatil Oil Rimpang Lengkuas
Fraksi Komponen
Non-volatil Oil Gingerol, shogaol, gingediols, gingediacetates,
Gingerdiones, Gingerenones.
Volatil Oil (-) zingeberene, (+) ar-curcumene, (-)-β
sesquiphelandrene, β bisaboline, α-pinene, bomyl
acetat, borneol, camphene, ρ-cymene, cineol, citral,
cumene, β elemene, farnesene,
Sumber: WHO Monographs on selected medicinal plants Vol 1, (1999)
B. Total Fenolik
Fenolik atau fenolat juga dikenal dengan nama asam karboksilat,
merupakan cairan bening yang beracun dengan bau yang khas. Rumus
kimianya adalah C6-H5-OH dan memiliki struktur grup hidroksil (-OH) yang
terikat dengan sebuah cincin phenyl yang juga merupakan senyawa aromatis.
Fenolik mempunyai sebuah cincin aromatic dengan satu atau lebih gugus
hidroksil sering bergabung dengan glikosida dan biasanya terdapat dalam
rongga sel. Beberapa golongan polimer penting seperti lignin, melanin, dan
tannin, adalah polfenol.
7
Fenolat memiliki kelarutan terbatas dalam air, yakni 8,3 gram/100 ml.
Fenolat memiliki sifat yang cenderung asam, artinya ia dapat melepaskan ion
H+ dari gugus hidroksilnya. Pengeluaran ion tersebut menjadikan anion
fenoksida C6- H5- O yang dapat dilarutkan dalam air.
Gambar 2. Struktur fenolik, Sumber: (wikipedia)
Dibandingkan dengan alkohol alifatik lainnya, fenol bersifat lebih asam.
Hal ini dibuktikan dengan mereaksikan fenol dengan NaOH, di mana fenol
dapat melepaskan H+. Pada keadaan yang sama, alkohol alifatik lainnya tidak
dapat bereaksi seperti itu. Pelepasan ini diakibatkan pelengkapan orbital antara
satu-satunya pasangan oksigen dan sistem aromatik, yang mendelokalisasi
beban negatif melalui cincin tersebut dan menstabilkan anionnya. (Robinson,
2005; Markakis, (1988). Dalam penelitian ini penentuan kadar total fenol
dilakukan menggunakan metode Follin – Ciocalteau karena paling mudah dan
murah proses pengerjaannya.
C. Flavonoid
Flavonoid merupakan senyawa bahan alam yang mengandung dua cincin
aromatik benzena yang dihubungkan oleh 3 atom karbon atau fenil
benzopiran(C6-C3-C6). Kerangka flavonoid terdiri atas satu cincin aromatik
A, satu cincin aromatik B, dan cincin tengah berupa heterosiklik yang
8
mengandung oksigen dan bentuk teroksidasi cincin ini dijadikan dasar
pembagian flavonoid ke dalam sub-sub kelompoknya (Hess, tt).
Sistem penomoran digunakan untuk membedakan posisi karbon di sekitar
molekulnya (Cook dan S. Samman, 1996). Berbagai jenis senyawa, kandungan
dan aktivitas antioksidatif flavonoid sebagai salah satu kelompok antioksidan
alami yang terdapat pada sereal, sayur sayuran dan buah, telah banyak
dipublikasikan.
1 2 3
Gambar 3. Struktur umum flavonoid, isoflavonoid, dan neoflavonoid
Sumber : (Grotewold, 2006).
Flavonoid berperan sebagai antioksidan dengan cara mendonasikan atom
hidrogennya atau melalui kemampuannya mengkelat logam, berada dalam
bentuk glukosida (mengandung rantai samping glukosa) atau dalam bentuk
bebas yang disebut aglikon (Baud et.al, 2014).
Uji kuantitatif dinyatakan sebagai jumlah flavonoid total menggunakan
metode yang diperkenalkan oleh (Chang et.al, 2002). Metode ini menetapkan
flavonoid sebagai senyawa kuersetin sehingga dalam perlakuannya
menggunakan kuersetin sebagai baku pembanding. Kadar flavonoid total
dilakukan dengan mengukur absorbansi senyawa uji lalu diekstrapolasikan
9
menggunakan persamaan regresi linear serangkaian seri kadar kuersetin
standar yang telah diukur absorbansinya sehingga kadar total flavonoid
sampel ditentukan sebagai kadar kuersetin (mg QE/100 g bahan ) (Baud,
2014).
D. Tanin
Tanin dalah suatu senyawa polifenol yang berasal dari tumbuhan, berasa
pahit dan kelat, yang bereaksi dengan dan menggumpalkan protein, atau
berbagai senyawa organik lainnya termasuk asam amino dan alkaloid. Secara
struktural tanin adalah suatu senyawa fenol yang memiliki berat molekul besar
yang terdiri dari gugus hidroksi dan beberapa gugus yang bersangkutan seperti
karboksil untuk membentuk kompleks kuat yang efektif dengan protein dan
beberapa makromolekul (Deaville et al, 2010).
Tanin mempunyai kemampuan mengendapkan protein, karena tanin
mengandung sejumlah kelompok ikatan fungsional yang kuat dengan molekul
protein yang selanjutnya akan menghasilkan ikatan silang yang besar dan
komplek yaitu protein tanin.
Gambar 4. Stuktur asam tanat (salah satu jenis tanin)
Sumber : (wikipedia)
Tanin mempunyai berat molekul 0,5-3 KD. Tanin alami larut dalam air dan
memberikan warna pada air, warna larutan tanin bervariasi dari warna terang
10
sampai warna merah gelap atau coklat, karena setiap tanin memiliki warna
yang khas tergantung sumbernya (Ahadi, 2003).
Senyawa tanin terdiri dari dua jenis yaitu tanin terkondensasi dan tanin
terhidrolisis (Hovart, 1981). Tanin memiliki peranan biologis yang kompleks
mulai dari pengendap protein hingga pengkhelat logam. Tanin juga dapat
berfungsi sebagai antioksidan biologis (Hagerman, 2002).
E. Antioksidan
Oksidasi adalah reaksi kimia yang dapat menghasilkan radikal bebas,
sehingga memicu reaksi berantai yang dapat merusak sel. Sedangkan
Antioksidan merupakan molekul yang mampu memperlambat atau mencegah
proses oksidasi molekul lain. Karakter utama antioksidan adalah
kemampuannya untuk menangkap radikal bebas.
Antioksidan berfungsi sebagai senyawa yang dapat menghambat reaksi
radikal bebas penyebab penyakit karsinogenis, kardiovaskuler dan penuaan
dalam tubuh manusia. Antioksidan diperlukan karena tubuh manusia tidak
memiliki sistem pertahanan antioksidan yang cukup, sehingga apabila terjadi
paparan radikal berlebihan, maka tubuh membutuhkan antioksidan eksogen.
Antioksidan alami mampu melindungi tubuh dari kerusakan yang
disebabkan oleh spesies oksigen reaktif, menghambat terjadinya penyakit
degeneratif, dan menghambat peroksidasi lipid pada makanan. Antioksidan
alami umumnya memiliki gugus hidroksi dalam struktur molekulnya (Sunarni
2005). Antioksidan alami dapat diisolasi dari tumbuhan dan tersebar di
berbagai bagian tanaman seperti pada kayu, kulit kayu, akar, daun, bunga,
11
buah, biji, rimpang, dan serbuk sari. Antioksidan sintetik yang banyak
digunakan adalah a-tokoferol, asam nordihidrokuairetis (NDGA), propilgalat
(PG), (tert)butilhidroksilkuinon (TBHQ), butilhidroksitoluena (BHT), dan
butilhidroksilanisol (BHA).
Berdasarkan fungsinya, antioksidan terbagi menjadi antioksidan primer,
sekunder, dan tersier. Antioksidan primer berperan mengurangi pembentukan
radikal bebas baru dengan memutus reaksi berantai dan mengubahnya menjadi
produk yang lebih stabil. Antioksidan primer terdiri atas superoksida dismutase
(SOD), katalase, dan glutation peroksidase. Ketiga antioksidan tersebut dapat
mengubah radikal bebas menjadi air.
Antioksidan sekunder berperan mengikat radikal bebas dan mencegah
amplifikasi senyawa radikal. Antioksidan sekunder terdapat pada vitamin C,
vitamin B, vitamin E, betakaroten, dan senyawa-senyawa fitokimia.
Antioksidan tersier terdiri atas enzim perbaikan DNA dan metionin sulfoksida
reduktase (Kartikawati 1999).
Salah satu uji yang dapat digunakan untuk menentukan aktivitas
antioksidan adalah metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Marxen dkk
(2007) menyebutkan bahwa penggunaan metode DPPH untuk pengukuran
radikal telah digambarkan oleh Burda dan Oleszek (2001).
Metode DPPH merupakan suatu metode yang mudah, cepat, dan sangat
baik untuk sampel dengan polaritas tertentu. Metode ini digunakan untuk
screening berbagai sampel dalam penentuan aktivitas suatu radikal (Koleva et
al. 2001, diacu dalam Marxen dkk, 2007). Selain itu, metode DPPH dapat
12
digunakan untuk menghitung kapasitas antioksidan secara keseluruhan pada
suatu sampel. Pengukuran absorbansi DPPH biasanya berkisar pada panjang
gelombang 515-520 nm (Marxen dkk, 2007).
Senyawa DPPH adalah komponen berwarna ungu yang tidak
berdimerisasi dan berbentuk kristalin. Senyawa tersebut merupakan radikal
bebas yang stabil Metode DPPH hanya mengukur senyawa antioksidan yang
terlarut dalam pelarut organik khususnya alkohol. Metode tersebut secara luas
digunakan untuk pengukuran dan perbandingan aktivitas antioksidan senyawa-
senyawa fenolik. (Marxen , 2007).
F. Oleoresin
Oleoresin adalah zat kimia berupa minyak kental yang memiliki sifat asli
seperti bahan bakunya (misalnya pala) yang terdiri dari campuran minyak atsiri
dan resin. Secara umum oleoresin didefinisikan sebagai campuran minyak dan
resin atau gum diperoleh hasil ekstraksi, pemekatan dan standarisasi minyak
atsiri (minyak essential dan komponen non volatile dari rempah-rempah).
Oleoresin berwarna coklat tua dan mengandung minyak atsiri 15-35%.
Oleoresin diperoleh dengan cara mengekstraksi rempah – rempah dengan
menggunakan pelarut organik tertentu. Sifat fisik oleorisin yaitu memiliki
bentuk seperti minyak kental sampai bentuk pasta. Sifat ini membuat oleorisin
sulit bercampur dengan makanan, sehingga untuk membantu pencampuran
sering ditambahkan pelarut yang diizinkan seperti propylene atau minyak
sayur.
13
Dibandingkan dengan minyak atsiri, senyawa aromatik dalam oleoresin
mempunyai aroma yang lebih lemah, namun lebih tahan lama dan menyebar.
Pada proses pengolahan makanan dibutuhkan pemanasan, sedangkan minyak
atsiri merupakan zat volatile yang dapat menguap dan hilang apabila
dipanaskan dalam suhu tinggi dan waktu yang lama. Mutu oleoresin
dipengaruhi beberapa faktor, yaitu jenis tanaman dan umur panen, perlakuan
bahan sebelum proses ekstraksi, sistem dan kondisi ekstraksi, perlakuan
terhadap oleoresin setelah ekstraksi, serta pengemasan dan penyimpanan
(Ketaren, 1980).
Gambar 5. Struktur senyawa kimia oleoresin lengkuas Sumber :(wikipedia)
Oleoresin mengandung bahan yang tidak menguap dalam jumlah besar
dan akan terus memberikan rasa walaupun minyak atsirinya telah menguap
(Cripps, 1973).
G. Pelarut
Pelarut adalah suatu zat yang melarutkan zat terlarut (cairan, padat atau
gas yang berbeda secara kimiawi), menghasilkan suatu larutan. Pelarut paling
umum digunakan dalam kehidupan sehari-hari adalah air. Pelarut lain yang
14
juga umum digunakan adalah bahan kimia organik (mengandung karbon)
biasanya disebut pelarut organik (Anonim, 2015).
Berdasarkan sumbernya pelarut dibedakan menjadi dua yaitu pelarut
organik dan pelarut anorganik. Pelarut organik merupakan pelarut yang
umumnya mengandung atom karbon dalam molekulnya. Dalam pelarut
organik, zat terlarut didasarkan pada kemampuan koordinasi dan konstanta
dielektriknya. Pelarut organik dapat bersifat polar dan non-polar bergantung
pada gugus kepolaran yang dimilikinya. Sedangkan pelarut anorganik adalah
pelarut selain air yang tidak memiliki komponen organik di dalamnya. Dalam
pelarut anorganik, zat terlarut dihubungkan dengan konsep sistem pelarut yang
mampu mengautoionisasi pelarut tersebut. Biasanya pelarut anorganik
merupakan pelarut yang bersifat polar sehingga tidak larut dalam pelarut
organik dan non-polar.
Sabel dan Warren (1973) menyatakan bahwa pelarut yang digunakan
hendaknya mempunyai titik didih yang tidak terlalu tinggi dan tidak terlalu
rendah, karena hal ini akan mempersulit pemisahan pelarut. Dan Cripps (1973)
menambahkan pada pelarut yang mempunyai titik didih rendah, pelarut akan
mudah diperoleh kembali dan dapat melarutkan oleoresin dengan cepat dan
sempurna.
Volume pelarut akan mempengaruhi jumlah oleoresin yang dihasilkan.
Semakin besar volume pelarut jumlah yang akan digunakan maka akan
semakin besar jumlah oleoresin yang akan terekstraksi (Suryandari, 1981).
Menurut (Somaatmadja, 1981) etanol merupakan pelarut yang paling aman
15
karena tidak beracun dalam batas kandungan 1% untuk bahan pangan. Etanol
adalah etil alkohol dengan rumus kimia C2HOH, yaitu suatu cairan bening
tidak berwarna, mudah menguap, berbau merangsang dan mudah larut dalam
air. Etanol mempunyai polaritas tinggi sehingga dapat mengekstrak oleoresin
lebih banyak dibandingkan pelarut organik lainnya seperti aseton. Etanol
mudah melarutkan senyawa resin, lemak, minyak, sebagian karbohidrat dan
senyawa organik lainnya (Anton, 2001).
Menurut Mapiliandri (1989), etanol memberikan rendemen yang lebih
tinggi dibandingkan dengan ekstraksi heksan. Hal ini menunjukkan bahwa
komponen yang terkandung di dalam oleoresin lengkuas merah cenderung
polar, sehingga penggunaan pelarut yang polar akan menghasilkan rendemen
oleoresin yang lebih besar dibandingkan jika menggunakan pelarut non polar.
Kelebihan lain dari etanol adalah pelarut ini tidak menimbulkan bau yang
menggangu seperti kloroform dan etanol.
H. Ekstraksi
Ekstraksi merupakan suatu proses penarikan suatu komponen yang
diinginkan pada suatu bahan dengan cara memisahkan satu komponen atau
lebih dari suatu bahan. Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik
komponen kimia yang terdapat pada bahan alam (Markakis, 1982). Pada proses
ekstraksi semakin halus serbuk simplisia maka akan semakin baik proses
ekstraksinya, selain itu ekstraksi juga dipengaruhi oleh sifat fisik dan kimia
simplisia yang bersangkutan (Ahmad, 2006)
16
Tahap-tahap dalam melakukan ekstraksi oleoresin meliputi pemilihan
bahan, persiapan pelarut, dan pengawasan mutu. Persiapan bahan baku
mencakup pengeringan bahan baku sampai kadar air tertentu, penggilingan
untuk mempermudah proses ekstraksi serta mempermudah kontak bahan
dengan pelarut sehingga proses ekstraksi berlangsung dengan baik (Sabel dan
Warren, 1973).
Ukuran bahan baku yang biasa digunakan untuk ekstraksi adalah 40
mesh. Pelarut yang sering digunakan dalam ekstraksi oleoresin adalah etanol,
aseton, dan ethilen diklorida. Kehalusan partikel bahan yang sesuai akan
menghasilkan ekstraksi yang optimal dalam waktu yang singkat (Moestafa,
1981).
Ekstraksi akan lebih cepat dilakukan pada temperature tinggi, tetapi pada
ekstraksi oleoresin akan menyebabkan beberapa komponen dalam rempah
akan mengalami perubahan (Moestafa, 1981). Oleoresin tahan terhadap panas
hingga suhu 90oC tanpa mengalami perubahan mutu yang nyata. Pemanasan
yang melebihi suhu 100oC akan menyebabkan penguraian komponen penyusun
oleoresin, sehingga akan menimbulkan perubahan bau dan minyak atsiri
banyak yang menguap (Sabel dan Warren, 1973).
I. Oven Microwave
Oven microwave adalah oven listrik yang memanaskan dan memasak
makanan dengan cara memaparkannya radiasi elektromagnetik dalam rentang
frekuensi microwave. Oven microwave bekerja dengan memancarkan radiasi
gelombang mikro, biasanya pada frekuensi 2.450 MHz (dengan panjang
17
gelombang 12,24 cm). Oven microwave dapat bekerja dengan cepat dan efisien
karena gelombang elektro magnetiknya menembus makanan dan mengeksitasi
molekul-molekul air dan lemak secara merata.
Selain itu, gelombang mikro pada frekuensi ini tidak diserap oleh bahan-
bahan gelas, keramik, dan sebagian jenis plastik. Bahan logam bahkan
memantulkan gelombang ini, sehingga gelombang micro hanya diserap oleh
bahan saja. (Quoc, 2014).
Cara kerja oven microwave dalam memanaskan sebuah objek adalah
sebagai berikut :
1. Arus listrik bolak-balik dengan beda potensial rendah dan arus searah
dengan beda potensial tinggi diubah dalam bentuk arus searah.
2. Magnetron menggunakan arus ini untuk menghasilkan gelombang mikro
dengan frekuensi 2,45 GHz.
3. Gelombang mikro diarahkan oleh sebuah antenna pada bagian atas
magnetron ke dalam sebuah waveguide.
4. Waveguide meneruskan gelombang mikro ke sebuah alat yang menyerupai
kipas, disebut dengan stirrer. Stirrer menyebarkan gelombang mikro di
dalam ruang microwave.
5. Gelombang mikro ini kemudian dipantulkan oleh dinding dalam microwave
dan diserap oleh molekul – molekul makanan.
6. Karena setiap gelombang mempunyai sebuah komponen positif dan negatif,
molekul-molekul makanan didesak kedepan dan kebelakang selama 2 kali
kecepatan frekuensi gelombang mikro, yaitu 4,9 juta kali dalam setiap detik.
18
Microwave dapat membuat air berputar, putaran molekul air akan
mendorong terjadinya tabrakan antar molekul. Tabrakan antar molekul inilah
yang akan membuat molekul-molekultersebut memanas. Perlu diingat bahwa
sebagian besar makanan memiliki kadar air didalamnya dan jika makanan
tersebut memiliki kadar air berarti efek yang sama akan terjadi jika makanan
tersebut dimasukan dalam microwave. Selain itu harus dingat juga bahwa
molekul makanan yang lain akan menjadi panas karena ada kontak langsung
antara molekul tersebut dengan molekul air yang memanas.
J. Microwave Assisted Extraction
Microwave Assisted Extraction (MAE) merupakan ekstraksi yang
memanfaatkan radiasi gelombang mikro untuk mempercepat ekstraksi selektif
melalui pemanasan pelarut secara cepat dan efisien (Jain, 2009). Menurut
beberapa hasil penelitian, MAE meningkatkan efisiensi dan efektifitas
ekstraksi bahan aktif berbagai jenis rempah-rempah, tanaman herbal, dan buah-
buahan (Calinescu dkk, 2001).
Ganzler dan Salgo (1986) adalah yang pertama kali melakukan ekstraksi
menggunakan gelombang mikro. Mereka mengekstrak berbagai senyawa dari
tanah, bahan makanan, biji-bijian dan menyatakan bahwa ekstraksi berbantu
gelombang mikro lebih efektif dibandingkan dengan ekstraksi menggunakan
Soxhlet.
Daya gelombang mikro dan waktu merupakan dua faktor yang saling
mempengaruhi. Kombinasi daya yang rendah dan waktu ekstraksi yang
panjang dan sebaliknya merupakan pilihan yang bijak mengingat kombinasi
19
tersebut dapat menghindari terjadinya degradasi termal produk. Secara umum,
efisiensi ekstraksi dengan waktu ekstraksi yang singkat akan meningkat seiring
dengan meningkatnya daya mikrowave dari 30-150 W (Shu ,2003). Namun
demikian pada daya yang lebih tinggi (400-1200W), variasi daya tidak
memberikan pengaruh yang nyata pada rendemen ekstraksi (Gao, 2006).
Bahan-bahan yang terkandung dalam sampel tersebut akan menyerap
gelombang micro melalui proses yang disebut pemanasan dielektrik yang
artinya molekul-molekul pada makanan bersifat dipol eletrik yang berarti
molekul tersebut memiliki muatan negatif pada satu sisi dan positif pada sisi
yang lain. Gelombang micro bekerja melewatkan radiasi gelombang micro
pada molekul air, lemak maupun gula yang merupakan dipol elektrik yang
mempunyai kutub positif dan negatif, pada molekul-molekul ini akan berotasi
jika terkena berkas gelombang micro. Dengan kehadiran gelombang micro tiap
sisi akan berputar untuk mensejajarkan diri satu sama lain. Pergerakan molekul
ini akan mengakibatkan panas yang disebabkan gesekan antar molekul,
gesekan tesebut mengakibatkan panas (Gao dkk, 2006).
K. Maserasi
Maserasi adalah salah satu jenis metode ekstraksi dengan sistem tanpa
pemanasan atau dikenal dengan istilah ekstraksi dingin, pada metode ini
pelarut dan sampel tidak mengalami pemanasan sama sekali. Sehingga
maserasi merupakan teknik ekstraksi yang dapat digunakan untuk senyawa
yang tidak tahan panas ataupun tahan panas (Hamdani, 2014). Maserasi
20
dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari
(Afifah, 2012).
Prinsip maserasi adalah pengikatan/ pelarutan zat aktif berdasarkan sifat
kelarutannya dalam suatu pelarut. Langkah kerjanya adalah merendam
simplisia dalam suatu wadah menggunakan pelarut penyari tertentu selama
beberapa hari sambil sesekali diaduk, lalu disaring dan diambil beningannya.
Metode Maserasi umumnya menggunakan pelarut non air atau pelarut non-
polar. Maserasi biasanya dilakukan pada temperatur 15-20ºC selama 3 hari
sampai bahan - bahan yang larut, melarut (Ansel, 1989).
a. Cara kerja
1. 10 bagian simplisia dengan derajat halus yang cocok dimasukkan
kedalam bejana, lalu dituangi 90 bagian cairan penyari, ditutup dan
dibiarkan selama 3 hari terlindung dari cahaya, sambil diaduk berulang
– ulang.
2. setelah 5 hari, sari diserkai dan ampas diperas
3. Ampas ditambah cairan penyari secukupnya, diaduk dan diserkai,
sampaidiperoleh seluruh sari sebanyak 100 bagian
4. Setelah itu, sari dipekatkan dengan cara diuapkan pada tekanan rendah
dan suhu 50ºC hingga konsentrasi yang dikehendaki
b. Keuntungan maserasi
Proses maserasi ini menguntungkan dalam isolasi bahan alam
karena selama proses perendaman sampel akan terjadi proses pemecahan
dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di
21
luar selnya sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan
terlarut dalam pelarut organik dan senyawa akan terekstraksi sempurna
karena dapat diatur lama perendaman yang dilakukan.
c. Kekurangan Maserasi
Perlu dilakukannya pengadukan untuk meratakan konsentrasi
larutan diluar butir serbuk simplisia sehingga tetap terjaga adanya derajat
konsentrasi yang sekecil-kecilnya antara larutan didalam sel dengan
larutan diluar sel.
22
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September - November 2018 di
Laboratorium Rekayasa Pangan, Laboratorium Kimia Pangan Universitas
Semarang, dan Laboratorium CV. Cemix Pratama Bantul Yogyakarta.
B. Bahan dan Alat
1. Bahan : Rimpang lengkuas merah yang berumur 3 - 4 bulan diperoleh dari
Relokasi Pasar Johar, Semarang, Jawa Tengah, etanol, 70%, larutan DPPH
(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl), larutan Na2CO3, larutan AlCl3, aquadest,
kertas saring.
2. Alat : Oven Microwave merk SIGNORA, Waterbath Shaker Memmert,
Blender merk Pioner, termometer, spektrofotometer, pipet, glass beaker,
elemeyer beaker, sendok, garpu, pisau, talenan dan baskom.
C. Rancangan Percobaan
Rancangan percobaan yang diggunakan dalam penelitian ini adalah
Rancangan Acak Lengkap (RAL) 5 perlakuan 4 kali ulangan. Adapun
perlakuan yang telah ditetapkan adalah sebagai berikut :
T0 : Kontrol (Maserasi 12 jam, tanpa perlakuan MAE)
T1 : MAE selama 2 menit
T2 : MAE selama 4 menit
T3 : MAE selama 6 menit
T4 : MAE selama 8 menit
23
T5 : MAE selama 10 menit
D. Prosedur Penelitian
1. Mempersiapkan alat dan bahan.
2. Membersihkan rimpang lengkuas merah dari kotoran dan mengiris rimpang
lengkuas dengan ketebalan 1,5 mm.
3. Rimpang Lengkuas merah yang telah diiris kemudian dihaluskan
menggunakan blender selama 3 menit.
4. Sebanyak 40 g bubur lengkuas merah dituang ke dalam glass beaker,
kemudian ditambahkan sebanyak 200 ml pelarut etanol.
5. Kemudian dilakukan Microwave Assisted Extraction dengan memasukkan
glass beaker ke dalam microwave sesuai dengan waktu yang telah
ditentukan (2 menit, 4 menit, 6 menit, 8 menit, 10 menit) dengan power 20
(160 watt).
6. Maserasi dilakukan selama 12 jam dihomogenisasi dengan homogenizer
selama 15 menit.
7. Oleoresin yang dihasilkan kemudian disaring menggunakan kertas saring
untuk memisahkan ampas dengan pelarut.
8. Kemudian dievaporasi dengan waterbath pada suhu 78˚C selama 12 jam
sehingga diperoleh oleoresin lengkus merah kental.
9. Oleoresin yang dihasilkan kemudian di analisis total fenolat, flavonoid,
tanin dan aktivitas antioksidannya
24
E. Diagram Alir Penelitian
Rimpang lengkuas merah
Bubur lengkuas
Oleoresin lengkuas Merah
Gambar 6. Diagram alir penelitian
Sortasi
Pencucian
Pemotongan (1,5 mm)
Penghalusan (3 menit)
Penimbangan (40 gr bubur / sampel)
Pencampuran 200 ml per sampel
(Ethanol 70%)
Limbah cair
Microwave Asissted Extraction (waktu 2, 4,6,8,10 menit, 20 P)
Maserasi (12 jam)
Penyaringan Residu pelarut
Analisis: 1. Total Fenolik
2. Flavonoid
3. Tanin
4. Antioksidan
Waterbath (78ºC, 12 jam)
Air
25
F. Variabel Pengamatan
1. Total Fenol (Metode Follin – Ciocalteau; Pourmorad dkk, 2006)
Standar asam galat dibuat dengan variasi konsetrasi 5-125 ppm dan
diukur absorbansinya pada panjang gelombang 765 nm. Kemudian ditimbang
100 mg oleoresin lengkuas, kemudian ditambahkan 0,5 ml etanol, 2,5 ml
aquadest, daa 2,5 ml reagent Follin – Dennis. Campuran didiamkan selama 5
menit kemudian ditambahkan 2 ml Na2CO3 7,5% dan divorteks lalu diinkubasi
selama 15 menit pada suhu 45 oC. Absorbansi sampel diukur pada panjang
gelombang 765 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
2. Total Flavonoid (Chang dkk, 2002)
Standar kuersetin dibuat dengan variasi konsentrasi 20 - 60 ppm.
Sebanyak 0,5 mL yang diukur absorbansinya pada panjang gelombang 400-
800 nm. Kemudian sebanyak 20 mg sampel ditimbang dan dilarutkan dalam
10 mL etanol teknis kemudian disentrifuge sehingga diperoleh konsentrasi
2000 ppm. Sebanyak 0,5 mL sampel uji ditambahkan dengan 0,1 mL
AlCl310%, 0,1 mL natrium asetat 1 M dan 2,8 mL aqudest. Setelah diinkubasi
selama 30 menit. Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis
pada panjang gelombang maksimum kuersetin 437,55 nm.
3. Tanin (Xu dan Chang 2007)
Prosedur kerja untuk uji kadar tanin dengan senyawa katekin (C) adalah
sebagai berikut sampel 50 μl ditambah 3 ml metanol vanilin 4% dan 1,5 ml
HCl pekat kemudian divorteks 2 menit, ditera pada λ 500 nm dan digunakan
metanol sebagai blanko. Kadar tanin terkondensasi dihitung sebagai mg
26
ekivalen catechin (EC)/ g ekstrak kering dengan kurva kalibrasi (8,9-44,4
mg/L) dengan r = 0,99. Analisis dilakukan 3 batch masing-masing 3 kali
ulangan.
Kurva kalibrasi asam galat digunakan untuk menentukan kadar senyawa
tanin yang terkandung dalam sampel melalui persamaan regresi dan dinyatakan
dalam satuan mg ekuivalen asam galat/g ekstrak (mg GAE/g ekstrak) dengan
rumus perhitungan.
C= 𝑪𝟏 ×𝑽
𝑴
C : Total tanin (mg GAE/g ekstrak) M : Berat ekstrak (g)
C1 : Konsentrasi asam galat (mg/l) V : Volume ekstrak (l)
4. Aktivitas Antioksidan dengan metoda RSA (Radikal Scavanging Activity)
DPPH (1-1Dhypenil-1 Picrylhydrazil) menurut Awak, (2010)
Sebanyak 20 ml larutan ekstrak pada beberapa konsentrasi yang
diencerkan dua kali (2,5-40 µg/ml) dalam etanol dicampurkan dengan 10 ml
DPPH 0,5 mM dalam etanol. Campuran tersebut kemudian dikocok dengan
kuat dan dibiarkan pada suhu 25°C dalam gelap selama 25 menit. Larutan
blanko dibuat untuk setiap larutan sampel dengan mencampurkan 2 ml larutan
sampel dan 10 ml etanol. Sebagai kontrol negatif adalah 1,0 ml larutan DPPH
0,5mM ditambahkan 2,0 ml etanol. Absorbansi (Abs) diukur pada panjang
gelombang 518 nm menggunakan spektrofotometer. Adapun rumus
penghitungan aktivitas antioksidan adalah sebagai berikut :
Aktivitas Antioksidan = 1 - 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙+𝑘𝑜𝑡𝑟𝑜𝑙
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙× 100%
27
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Rimpang Lengkuas Merah
Rimpang lengkuas merah adalah produk yang diperoleh setelah berumur
3 - 4 bulan, rimpang lengkuas merah diperoleh dari relokasi pasar Johar,
Semarang, Jawa Tengah. Rimpang lengkuas merah kemudian dilakukan
pencucian umtuk menghilangkan kotoran, rimpang lengkuas merah
selanjutnya dilakukan pengrisisan menyamping dengan ukuran ketebalan
kurang lebih 1,5 mm.
Rimpang lengkuas merah yang telah diiris kemudian dihaluskan
menggunakan blender selama selama kurang lebih 3 menit. Sebanyak 40 g
bubur lengkuas merah dituang ke dalam glass beaker, kemudian dituang
sebanyak 200 ml pelarut etanol. Selanjutnya dilakukan Microwave Assisted
Extraction dengan memasukkan glass beaker ke dalam microwave sesuai
dengan waktu yang telah ditentukan yakni (2 menit, 4 menit, 6 menit, 8 menit,
10 menit ) dengan power 20 dan maserasi selama 12 jam.
Selanjutnya didapatkan Oleoresin yang kemudian disaring menggunakan
kertas saring untuk memisahkan ampas dengan pelarut. Kemudian dievaporasi
dengan waterbath pada suhu 78˚C selama 12 jam sehingga diperoleh oleoresin
lengkuas merah kental. Hasil ekstrak rimpang lengkuas merah menunjukkan
perbedaan yang nyata pada pengujian (P<0,05) karena perlakuan lama
ekstraksi menggunakan MAE ( Microwave Assisted Extraction)pada lengkuas
merah. Hasil randemen ekstrak lengkuas merah dapat dilihat pada Tabel 3.
28
Tabel 3. Hasil Randemen lengkuas Merah
Sampel Rendemen (%)
T0 (Control) 10,1084a
T1 (2 menit) 10,5314b
T2 (4 menit) 12,3084c
T3 (6 menit) 12,4380d
T4 (8 menit) 12,8489e
T5 (10 menit) 13,4787f
Keterangan: Angka yang ditandai superskrip yang tidak sama pada kolom
menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Pada Tabel 3. menunjukkan rata-rata hasil randemen dari pengaruh
berbagai perlakuan lama Microwave Assisted Extraction pada lengkuas merah.
Rata-rata minimal rendemen ekstrak lengkuas merah sebesar 10,1084 % dan
rata-rata maksimalnya sebesar 13,4787 %. Dapat dilihat bahwa hasil rendemen
lengkuas merah perlakuan T5 dengan lama MAE 10 menit memiliki hasil
rendemen paling tinggi yaitu 13,4787 % dibandingkan ekstrak lengkuas merah
perlakuan T0 dengan lama Microwave Assisted Extraction (MAE) 0 menit
memiliki hasil rendemen paling rendah yaitu 10,1084 %.
Berdasarkan hasil uji lanjut dengan metode DMRT 5%, pada sampel
T0, T1, T2, T3, T4 dan T5 menunjukkan adanya beda nyata mengenai hasil
rata-rata rendemen ekstrak lengkuas merah. Hasil rendemen ekstrak lengkuas
merah disajikan dalam bentuk grafik garis. Pada Gambar 7. menunjukan hasil
rata-rata rendemen ekstrak lengkuas merah mengalami peningkatan setelah
dilakukan ekstraksi dengan perlakuan berbagai lama waktu dibandingkan
dengan lengkuas merah segar.
29
Gambar 7. Grafik rerata hasil rendemen ekstrak lengkuas merah
Menurut (Chen, 2007) adanya thermal stress akibat timbulnya
gelombang panas yang cepat membuat pelarut lebih cepat menguap dan
rendemen yang dihasilkan lebih pekat. Etanol yang ditambahkan saat ekstraksi
berfungsi untuk mendenaturasi sel sehingga semakin tinggi konsentrasi yang
digunakan, maka semakin banyak membran sel yang terdegradasi yang
mengakibatkan komponen pigmen mudah keluar dari membran dan
menghasilkan rendemen yang lebih banyak.
Menurut (Turkmen, 2005) mengemukakan bahwa perlakuan
pemanasan terhadap kobis brussel dapat memperbaiki sifat dan meningkatan
rendemen yang dihasilkan. Peningkatan rendemen tersebut diduga karena
perlakuan pemanasan dapat menyebabkan komponen senyawa-senyawa dalam
suatu bahan pangan dapat mudah lepas dari dalam sel, sehingga meningkatkan
hasil ekstraksi.
30
B. Total Fenolik
Kandungan total fenolik (termasuk gingerol dan shogaol) merupakan
komponen yang berperan sebagai antioksidan yang terdapat dalam oleoresin
lengkuas merah yang dinyatakan dalam mg.EAG/g. Hasil analisis kandungan
total fenolat lengkuas merah menunjukkan perbedaan yang nyata pada
pengujian (P<0,05) karena perlakuan lama waktu MAE pada lengkuas merah.
Hasil analisis total fenolik lengkuas merah dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil analisis total fenolik lengkuas Merah
Sampel Rerata (mg.EAG/g)
T0 (Control) 0,4396a
T1 (2 menit) 0,5828b
T2 (4 menit) 0,6511c
T3 (6 menit) 0,7263d
T4 (8 menit) 0,7294d
T5 (10 menit) 0,7623e
Keterangan: Angka yang ditandai superskrip yang tidak sama pada kolom
menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Pada Tabel 4. menunjukkan rata-rata hasil kandungan total fenolik dari
pengaruh lengkuas merah segar dan berbagai perlakuan lama Microwave
Assisted Extraction pada lengkuas merah. Nilai rata-rata hasil total fenolik
paling rendah ekstrak lengkuas merah sebesar 0,4396 mg.EAG/g dan nilai rata-
rata paling tinggi sebesar 0.7623 mg.EAG/g. Dapat dilihat bahwa hasil total
fenolik lengkuas merah setelah dilakukan MAE lebih rendah secara nyata
dibanding pada lengkuas merah segar.
Berdasarkan hasil uji lanjut dengan metode DMRT 5%, pada sampel
T3 dan T4 menunjukkan tidak berbeda nyata mengenai hasil rata-rata hasil
kandungan total fenolik ekstrak lengkuas merah. Pada sampel T0, T1, T2 dan
31
T5 menunjukkan berbeda nyata. Hasil kadar fenolik lengkuas merah disajikan
dalam bentuk grafik garis dapat dilihat pada pada Gambar 8.
Gambar 8. Grafik rerata total fenolik ekstrak lengkuas merah
Pada Gambar 8. dapat dilihat bahwa hasil rata-rata kandungan total
fenolik ekstrak lengkuas merah mengalami peningkatan setelah dilakukan
MAE dengan perlakuan berbagai macam lama waktu dibandingkan dengan
lengkuas merah segar. Menurut (Puji mujani, 2010) hal ini diduga terjadi
degradasi senyawa fenol komplek menjadi genol sederhana. selain itu diduga
senyawa fenol tidak mengalami oksidasi enzimatis sehingga jumlahnya tidak
menurun.
Selain itu, diduga disebabkan karena lama waktu dan suhu yang tinggi
akan menyebabkan kelarutan senyawa phenolic dalam pelarut semakin besar.
Dengan meningkatkan waktu dan suhu, difusi yang terjadi juga semakin besar,
sehingga proses ekstraksi juga akan berjalan lebih cepat. Akan tetapi dalam
meningkatkan suhu operasi juga perlu diperhatikan, karena suhu yang terlalu
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
T0(Control)
T1(2menit)
T2(4menit)
T3(6menit)
T4(8menit)
T5(10menit)
(mg.
EAG
/g
Perlakuan
32
tinggi dapat menyebabkan kerusakan pada bahan yang sedang diproses.
Komponen bioaktif utama dalam lengkuas, yaitu gingerol, merupakan senyawa
yang tahan panas (Miryanti, 2011).
C. Kadar Flavonoid
Analisis kadar flavonoid ekstrak lengkuas merah dinyatakan dalam
mg.QE/g. Hasil analisis kandungan flavonoid lengkuas merah menunjukkan
perbedaan yang nyata pada pengujian (P<0,05) karena perlakuan lama waktu
Microwave Assisted Extraction pada lengkuas merah.
Tabel 5. Hasil analisis total flavonoid lengkuas merah
Sampel Rerata (mg.QE/g)
T0 (Control) 0,3608a
T1 (2 menit) 0,4066b
T2 (4 menit) 0,4935c
T3 (6 menit) 0,5393d
T4 (8 menit) 0,6077 e
T5 (10 menit) 0,6109 f
Keterangan: Angka yang ditandai superskrip yang tidak sama pada kolom
menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Pada Tabel 5. menunjukkan rata-rata analisis flavonoid dari pengaruh
berbagai perlakuan lama Microwave Assisted Extraction pada lengkuas merah.
Kandungan flavonoid lengkuas merah setelah dilakukan MAE lebih besar dari
pada lengkuas merah segar. Rata-rata minimal kandungan flavonoid ekstrak
lengkuas merah sebesar 0.3608 mg.QE/g dan nilai rata-rata maksimal sebesar
0,6109 mg.QE/g. Dapat dilihat bahwa hasil rendemen lengkuas merah
perlakuan T5 dengan lama MAE 10 menit memiliki kandungan flavonoid
paling tinggi yaitu 0,6109 mg.QE/g dibandingkan ekstrak lengkuas merah
perlakuan T0 dengan lama MAE 0 menit memiliki hasil rendemen paling
33
rendah yaitu 0.3608 mg.QE/g. Perlakuan T1 dengan lama waktu MAE 2 menit
diperoleh kadar flavonoid sebesar 0,4066 mg.EAG/gr. Perlakuan T2 dengan
lama waktu MAE 4 menit diperoleh kadar flavonoid sebesar 0,4935 mg.QE/g.
Perlakuan T3 dengan lama waktu MAE 6 menit diperoleh kadar flavonoid
sebesar 0,5393 mg.QE/g. Perlakuan T4 dengan lama waktu MAE 8 menit
diperoleh kadar flavonoid sebesar 0,6077 mg.QE/g.
Berdasarkan hasil uji lanjut menggunakan metode Duncan Multiple
Range Test (DMRT) 5%, menunjukkan bahwa terdapat beda nyata antar
perlakuan . Hasil kandungan flavonoid ekstrak lengkuas merah disajikan dalam
bentuk grafik garis dapat dilihat pada Gambar 9.
Gambar 9. Grafik rerata total flavonoid ekstrak lengkuas merah
Flavonoid merupakan senyawa bahan alam yang mengandung dua cincin
aromatik benzena yang dihubungkan oleh 3 atom karbon atau fenil
benzopiran(C6-C3-C6). Kerangka flavonoid terdiri atas satu cincin aromatik
A, satu cincin aromatik B, dan cincin tengah berupa heterosiklik yang
mengandung oksigen dan bentuk teroksidasi cincin ini dijadikan dasar
0
0,2
0,4
0,6
0,8
T0(Control)
T1(2menit)
T2(4menit)
T3(6menit)
T4(8menit)
T5(10menit)
Perlakuan
(mg.
QE/
g)
34
pembagian flavonoid ke dalam sub-sub kelompoknya (Hess, tt). Grafik di atas
menunjukkan bahwa kadar flavonoid lengkuas merah setelah di MAE lebih
besar dari pada lengkuas merah segar.
Hal ini diduga senyawa flavonoid mudah terekstrak pada lengkuas merah
setelah dilakukan MAE dibanding lengkuas merah segar. Flavonoid
merupakan senyawa fenol yang memiliki sistem aromatik yang terkonjugasi.
Saat proses MAE sistem aromatik diduga mengakibatkan senyawa flavonoid
dalam bentuk glikosida akan terdegradasi menjadi aglikon dan gula sehingga
meningkatkan aktivitas antioksidan. Flavonoid berperan sebagai antioksidan
dengan cara mendonasikan atom hidrogennya atau melalui kemampuannya
mengkelat logam, berada dalam bentuk glukosida (mengandung rantai
samping glukosa) atau dalam bentuk bebas yang disebut aglikon (Baud et.al,
2014).
D. Kadar Tanin
Tanin (katekin) merupakan senyawa flavonoid yang sering disebut
dengan asam tanat dan asam galatonat ynag dinyatakan dalam satuan mg.EC/g.
Hasil analisis kandungan tanin lengkuas merah menunjukkan perbedaan yang
nyata pada pengujian (P<0,05) karena perlakuan lama waktu MAE pada
lengkuas merah.
35
Tabel 6. Hasil analisis tanin lengkuas merah
Sampel Rerata (mg.EC/g)
T0 (kontrol) 0,4839a
T1 (2 menit) 0,6335b
T2 (4 menit) 0,7048c
T3 (6 menit) 0,7845d
T4 (8 menit) 0,7875d
T5 (10 menit) 0,8203e
Keterangan: Angka yang ditandai superskrip yang tidak sama pada kolom
menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Tabel 6. menunjukkan rata-rata hasil kandungan tanin dari pengaruh
berbagai perlakuan lama MAE pada lengkuas merah. Rata-rata minimal kadar
tanin ekstrak lengkuas merah sebesar 0,4839 mg.EC/g dan rata-rata
maksimalnya sebesar 0,8203 mg.EC/g. Dapat dilihat bahwa hasil kadar tanin
lengkuas merah perlakuan T5 dengan lama MAE 10 menit memiliki hasil tanin
paling tinggi yaitu 0,8203 mg.EC/g dibandingkan ekstrak lengkuas merah
perlakuan T0 dengan lama MAE 0 menit memiliki hasil tanin paling rendah
yaitu 0,4839 mg.EC/g. Pada perlakuan lama waktu T1 dengan lama MAE 2
menit diperoleh tanin lengkuas merah sebesar 0,6335 mg.EC/g. Perlakuan L2
dengan lama MAE 4 menit diperoleh kandungan tanin sebesar 0,7048
mg.EC/g. perlakuan T3 dengan lama waktu MAE 6 menit diperoleh tanin
sebesar 0,7845 mg.EC/g. perlakuan T4 dengan lama waktu MAE 8 menit
diperoleh tanin sebesar 0,7875 mg.EC/g. Perlakuan T5 dengan lama MAE 10
menit diperoleh kadar total fenolat sebesar 0,8203 mg.EAG/g.
Berdasarkan hasil uji lanjut dengan metode DMRT 5%, pada sampel
T3 dan T4 menunjukkan tidak berbeda nyata mengenai hasil rata-rata hasil
36
kandungan total fenolat ekstrak lengkuas. Pada sampel T0, T1, T2 dan T5
menunjukkan berbeda nyata.
Gambar 10. Grafik rerata hasil kadar tanin ekstrak lengkuas merah
Pada Gambar 10 menunujukan bahwa kadar tanin terkondensasi
lengkuas merah setelah dilakukan MAE dalam media etanol 70% secara nyata
lebih tinggi dibandingkan dengan lengkuas merah segar. Peningkatan kadar
tanin tertingi pada sampel T5 dengan lama waktu MAE 10 menit. Semakin
lama waktu MAE tanin yang terekstrak cenderung semakin besar hal ini karena
semakin banyak komponen bioaktif yang dapat terekstrak oleh pelarut
(Harborne, 1996).
Lebih lanjut (Nurlita et.al, 2016) menjelaskan bahwa dalam ekstraksi
menggunakan gelombang mikro cairan bahan yang diekstrak menyerap
gelombang radiasi yang selanjutnya bereaksi dengan berbagai senyawa yang
terkandung dalam oleoresin. Pada saat MAE terjadi proses radiolisis, eksitasi,
dan ionisasi berbagai senyawa aktif yang terus meningkat seiring dengan
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
T0(kontrol)
T1(2menit)
T2(4menit)
T3 (6menit)
T4(8menit)
T5(10menit)
(mg.
EC/g
)
Perlakuan
37
semakin lamanya MAE hingga tercapai waktu optimal ekstraksi. Menurut
Quoc dkk (2015) ekstraksi dengan MAE menghasilkan kadar tanin teh yang
lebih tinggi dibandingkan dengan ekstraksi menggunakan refluks, Ultrasound
assisted extraction (UAE) dan maserasi. Metode ekstraksi yang berbasis
gelombang mikro memiliki transfer massa dan panas yang lebih baik sehingga
distribusi panas akan merata dan energi yang dibutuhkan untuk menghasilkan
panas cenderung lebih kecil.
E. Aktivitas Antioksidan Lengkuas Merah
Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode DPPH
yang dinyatakan dalam satuan persen (%). Hasil analisis antioksidan lengkuas
merah menunjukkan perbedaan yang nyata pada pengujian (P<0,05) karena
perlakuan lama waktu MAE pada lengkuas merah. Tabel 7. menunjukkan rata-
rata hasil aktivitas antioksidan dari pengaruh berbagai perlakuan lama MAE
pada lengkuas merah. Rata-rata minimal aktivitas antioksidan ekstrak lengkuas
merah sebesar 50.4599% dan rata-rata maksimalnya sebesar 79.5663%.
Tabel 7. Hasil analisis Aktivitas Antioksidan
Sampel Rerata (%)
T0 (kontrol) 50,4599a
T1 (2 menit) 55,0919b T2 (4 menit) 60,3809c
T3 (6 menit) 67,9040d
T4 (8 menit) 74,2115e
T5 (10 menit) 79,5663f
Keterangan: Angka yang ditandai superskrip yang tidak sama pada kolom
menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
Pada Tabel 7. menunjukkan hasil aktivitas antioksidan ektrak lengkuas
merah perlakuan T5 dengan lama MAE 10 menit memiliki hasil aktivitas
38
antioksidan paling tinggi yaitu 79.5663 % dibandingkan ekstrak lengkuas
merah perlakuan T0 dengan lama MAE 0 menit. Pada perlakuan lama waktu
T1 dengan lama MAE 2 menit diperoleh aktivitas antioksidan lengkuas merah
sebesar 55.0919 %. Perlakuan T2 dengan lama MAE 4 menit diperoleh
kandungan antioksidan sebesar 60.3809 %. perlakuan T3 dengan lama waktu
MAE 6 menit diperoleh aktivitas antioksidan sebesar 67.9040 %. perlakuan T4
dengan lama waktu MAE 8 menit diperoleh aktivitas antioksidan sebesar
74.2115 %.
Gambar 11. Grafik rerata Aktivitas Antioksidan
Pada Gambar 11. menunjukkan aktivitas antioksidan tertinggi
diperoleh dari T5 yaitu oleoresin lengkuas merah yang memiliki kadar tanin
dan flavonoid tertinggi diketahui bahwa oleoresin yang kadar flavonoid dan
tanin yang tinggi mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi. flavonoid dan
tanin merupakan senyawa aktif yang berpotensi sebagai antioksidan alami.
0
20
40
60
80
T0(kontrol)
T1(2menit)
T2(4menit)
T3(6menit)
T4(8menit)
T5(10menit)
(%)
Perlakuan
39
Peningkatan aktivitas antioksidan ini sesuai hasil penelitian yang
dilakukan oleh Lestari (2006) bahwa peningkatan waktu ekstraksi cenderung
meningkatkan bahan atau senyawa target yang diekstrak. Hal ini disebabkan
karena semakin lama waktu antara pelarut dengan bahan proses penetrasi
pelarut dalam sel bahan (sampel) cenderung semakin banyak senyawa aktif
yang berdifusi jeluar sel (Suryandari, 1981).
F. Korelasi Total Fenolik, Flavonoid, Tanin dan Aktivitas Antioksidan
Ektrak Etanol Lengkuas Merah.
1. Korelasi Total Fenolik dengan Aktivitas Antioksidan
Pada baris person correlation antara total fenol dengan aktivitas
antioksidan ataupun sebaliknya menghasilkan korelasi sebesar (r = 0,922).
Pada garis sig. (2 tailed) menunjukan angka 0,000 yang menunjukkan
signifikan korelasi antara total fenolik dan aktivitas antioksidan ataupun
sebaliknya. Koefisien determinasi dihitung dengan cara mengkuadratkan
nilai r tersebut kemudian dikalikan 100% untuk menafsirkan pearson
correlation (r), koefisien determinasi dari korelasi tersebut adalah 85,00 %.
Dari penjelsan diatas dapat ditarik kesimpulan bahwa korelasi (r) antara
total fenolik dan aktivitas antioksidan kuat 0,922 (mendekati 1) dan
korelasinya signifikan karena nilai signifikasinya < 0,05.
2. Korelasi Tanin dangan Aktivitas Antioksidan
Pada baris person correlation antara total fenol dengan aktivitas
antioksidan ataupun sebaliknya menghasilkan korelasi sebesar (r = 0,921).
Pada garis sig. (2 tailed) menunjukan angka 0,000 yang menunjukkan
signifikan korelasi antara total fenol dan aktivitas antioksidan ataupun
40
sebaliknya. Koefisien determinasi dihitung dengan cara mengkuadratkan
nilai r tersebut kemudian dikalikan 100% untuk menafsirkan pearson
correlation (r), koefisien determinasi dari korelasi tersebut adalah 84,82 %.
Dari penjelsan diatas dapat ditarik kesimpulan bahwa korelasi (r) antara
Tanin dan aktivitas antioksidan kuat 0,921 (mendekati 1) dan korelasinya
signifikan karena nilai signifikasinya < 0,05.
3. Korelasi Flavonoid dengan Aktivitas Antioksidan
Pada baris person correlation antara total fenol dengan aktivitas
antioksidan ataupun sebaliknya menghasilkan korelasi sebesar (r = 0,975).
Pada garis sig. (2 tailed) menunjukan angka 0,000 yang menunjukkan
signifikan korelasi antara total fenol dan aktivitas antioksidan ataupun
sebaliknya. Koefisien determinasi dihitung dengan cara mengkuadratkan
nilai r tersebut kemudian dikalikan 100% untuk menafsirkan pearson
correlation (r), koefisien determinasi dari korelasi tersebut adalah 95,06 %.
Dari penjelsan diatas dapat ditarik kesimpulan bahwa korelasi (r) antara
Tanin dan aktivitas antioksidan kuat 0,921 (mendekati 1) dan korelasinya
signifikan karena nilai signifikasinya < 0,05.
41
BAB V
PENUTUP
A. Kesmpulan
Perlakuan lama waktu MAE dan maserasi berpengaruh nyata (p<0,05)
terhadap seluruh variabel yang diamati yaitu kadar fenolik, kadar flavonoid,
kadar tanin dan aktivitas antioksidan. Semakin lama waktu MAE dan maserasi
semakin meningkatkan seluruh kadar variabel yang diamati, karakteristik T5
(MAE 10 menit) dipilih sebagai perlakuan terbaik karena memiliki
karakteristik peningkatan kadar yang baik dengan sebagai berikut kadar fenolik
0.7623 mg.EAG/g, kadar flavonoid 0,6109 mg.QE/g, kadar tanin 0,8203
mg.EC/g, dan kadar aktivitas oksidan 79.5663%.
B. Saran
Berdasarkan hasil penelitian ini perlu dilakukankan penelitian lebih
lanjut dengan perlakukan kajian variabel bebas selain perlakuan lama MAE
dan maserasi.
42
DAFTAR PUSTAKA
Ahadi, M. R. 2003. Kandungan Tanin Terkondensasi dan Laju Dekomposisi pada
Serasah Daun Rhizospora mucronata lamk pada Ekosistem Tambak
Tumpangsari, Purwakarta, Jawa Barat. Skripsi. Institut Pertanian
Bogor,Bogor .
Baud, G.S., M.S. Sangi & H.S.J. Koleangan. 2014. Analisis senyawa metabolit
sekunder dan uji toksisitas ekstrak etanol batang tanaman patah tulang
(euphorbia tirucalli l.) Dengan metode brine shrimp lethality test (bslt).
Calinescu, I., C. Ciuculescu, M. Popescu, S. Bajenaru, G. Epure.
2001. Microwaves Assisted Extraction of Active Principles from Vegetal
Material. Romanian International Conference on Chemistry and Chemical
Engineering.
Cook, N. C. & Samman, S., 1996, Flavonoids : Chemistry, Metabolism,
Carsioprotective Effects, and Dietary Sources, Nutr. Biochem., 7, 66-67
Chang CC, Yang MH, Wen HM, Chern JC. 2002. Estimation of total flavonoids
content in propolis by two complementary colorimetric methods. J Food
Drug Anal 10: 178-182.
Darmawan, D.A. 2013. Efektivitas Ekstrak Etanol Lengkuas Putih (Alpinia galanga
L. Willd.) dalam Menghambat Pertumbuhan Candida albicans Secara In
Vitro. Tugas Akhir. Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas
Kedokteran Universitas Brawijaya
Deaville, E. R., D. I. Givens, & I. Mueler-Harvey. 2010. Chesnut and Mimosa
tannin silages: Effect in sheep differ for apparent digestibilty, nitrogen
utilitation and losses. Anim. Feed Sci. Technol. 157: 129-138.
Fathona, D. 2011, Kandungan Gingerol dan Shogaol, Intensitas Kepedasan dan
Penerimaan Panelis Terhadap Oleoresin Jahe Gajah (Zingiber officinale
var. Roscoe), Jahe Emprit (Zingiber officinale var. Amarum), dan jahe
merah (Zingiber officinale var. Rubrum). Skripsi. Institut Pertanian Bogor,
Bogor.
Goldman, E. dan Green, L.H. 2009. Practical Handbook of Microbiology. CRC
Press, Boca Raton.
Ganzler, K and A. Salgo, Microwave Extraction-a new method superseding
traditional Soxhlet extraction.
Gao, M., Song, B., Lin, C., 2006, DynamicMicrowave Assisted Extraction Of
Flavonoids From Saussurea Medusa Maxim. Cultured Cells, Biochemical
Engineering Journal.
Grotewold, E., 2006, The Science of Flavonoid, halaman 71-73, Springer ,United
States of America.
43
Hagerman, A. E. 2002. Tannin Handbook. Department of Chemistry and
Biochemistry, Miami University, Miami.
Hess, D, tt. Plant Physiology, Molecular, Biochemical, and Physiological
Fundamentals of Metabolism and Development. Toppan Company (S) Pte
Ltd, Singapore: 117-118
Jain, T., V. Jain, R. Pandey, A. Vyas, S. S. Shukla. 2009. Microwave Assisted
Extraction for Phytoconstituents – An Overview. Asian Journal Research
Chemistry.
Kartikawati D. 1999. Studi efek protektif vitamin C dan vitamin E terhadap respon
imun dan enzim antioksidan pada mencit yang dipapar paraquat. Tesis.
Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Kuncahyo, I. dan Sunardi, 2007. Uji aktivitas antioksidan ekstrak belimbing wuluh
(averrhoa bilimbi, l.) Terhadap 1,1-diphenyl-2- Picrylhidrazyl (dpph).
Seminar Teknologi Nasional, Yogyakarta.
Lestari, W. 2006. pengaruh nisbah rimpang dengan pelarut dan lama ekstraksi
terhadap mutu oleoresin jahe merah (Zingiber officinale var. rubrum).
Skripsi. Intitut Pertanian Bogor, Bogor.
Marxen, K. Vanselow K.H., Lippemeier S., Hintze R., Ruser A. dan Hansen U.P.
2007. Determination of DPPH Radical Oxidation Caused by Methanolic
Extracts of Some Microalgal Species by Linear Regression Analysis of
Spectrophotometric Measurements. Sensors.
Maslarova, N.V. Yanishlieva. (2001). Inhibiting oxidation dalam Jan Pokorny,
Nedyalka Yanislieva dan Michael Gordon: Antioxidants in food, Practical
applications. Woodhead Publishing Limited, Cambridge: 22-70
Nurlita, S, B.L. Sari, D.P. Rahayu. 2016. Penetapan kadar flavonoid ekstrak etanol
60 % daun teh putih (Camellia sinensis l.) dan benalu teh (Scurulla
atropurpurea bl. dans) hasil iradiasi gamma. Junal Fitofarmaka.. Universitas
Pakuan, Bogor.
Ramadhan, A.E. dan Phaza, H.A., 2010, pengaruh konsentrasi etanol, suhu dan
jumlah stage pada ekstraksi oleoresin jahe (Zingiber officinale Rosc.) secara
batch, Skripsi, Universitas Diponegoro, Semarang.
Suhartono, E., Fujiati, Aflanie, I. (2002). Oxygen toxicity by radiation and effect of
glutamic piruvat transamine (GPT) activity rat plasma after vitamine C
treatmen, Diajukan pada Internatinal seminar on Environmental Chemistry
and Toxicology, Yogyakarta.
Suranto., (2004). Khasiat dan Manfaat madu Herbal. Agromedia Pustaka Jakarta.
Stecher P.G. (Editor), 1968, The Merck Index: an Encyclopedia of Chemicals and
Drugs., Merck & Co. Inc. USA., p. 31-32,472
44
Sunarni,T., (2005). Aktivitas Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa
kecambah Dari Biji Tanaman Familia Papilionaceae, Jurnal Farmasi
Indonesia.
Tjitrosoepomo, G. (1994). Morfologi Tumbuhan. Gajah Mada. University Press.
Yogyakarta
Vankar, P.S., V. Tivari, I.W., Singh, and N. Swapana, 2006. Antioxidant properties
of some exclusive species of Zingiberacea family of Manipur. Electronic
Journal of Environmental, Agriculture and Food Chemistry (EJEAFChe).
5(2): 1318-1322
WHO (1999). Monographs on Selected Medical Plants. Volume 1. World Health
Organization, Geneva.
Widayanti, S.M. (2004). Uji penggunaan microwave pada proses ekstraksi jahe
(Zingiber Officinale Rosc.). Skripsi. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
45
Lampiran
Kadar Phenol (mg.GAE/g)
Test of Homogeneity of Variances
Kadar_Phenol
Levene Statistic df1 df2 Sig.
,738 5 18 ,605
ANOVA
Kadar_Phenol
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups ,294 5 ,059 2386,230 ,000
Within Groups ,000 18 ,000
Total ,294 23
Descriptives
Kadar_Phenol
N Mean Std. Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
T0 4 ,4397013 ,00644611 ,00322306 ,4294441 ,4499585 ,43316 ,44770
T1 4 ,5829060 ,00364459 ,00182230 ,5771067 ,5887054 ,57929 ,58797
T2 4 ,6511744 ,00528389 ,00264195 ,6427665 ,6595822 ,64539 ,65696
T3 4 ,7263840 ,00515280 ,00257640 ,7181847 ,7345832 ,72110 ,73317
T4 4 ,7294937 ,00510071 ,00255035 ,7213773 ,7376100 ,72277 ,73472
T5 4 ,7623349 ,00353641 ,00176820 ,7567077 ,7679621 ,75882 ,76725
Total 24 ,6486657 ,11313832 ,02309426 ,6008916 ,6964398 ,43316 ,76725
46
Kadar_Phenol
Duncana
Perlakuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5
T0 4 ,4397013
T1 4 ,5829060
T2 4 ,6511744
T3 4 ,7263840
T4 4 ,7294937
T5 4 ,7623349
Sig. 1,000 1,000 1,000 ,387 1,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
Kadar Tanin (mg.GAE/g)
Descriptives
Kadar_Tanin
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
T0 4 ,4838909 ,00673757 ,00336879 ,4731699 ,4946119 ,47705 ,49225
T1 4 ,6334813 ,00380938 ,00190469 ,6274198 ,6395429 ,62970 ,63878
T2 4 ,7048171 ,00552281 ,00276140 ,6960290 ,7136051 ,69877 ,71087
T3 4 ,7844563 ,00538579 ,00269289 ,7758863 ,7930263 ,77894 ,79155
T4 4 ,7874515 ,00533134 ,00266567 ,7789682 ,7959349 ,78043 ,79291
T5 4 ,8203042 ,00369631 ,00184815 ,8144226 ,8261859 ,81663 ,82544
Total 24 ,7024002 ,11831525 ,02415100 ,6524401 ,7523604 ,47705 ,82544
Test of Homogeneity of Variances
Kadar_Tanin
Levene Statistic df1 df2 Sig.
,738 5 18 ,605
47
ANOVA
Kadar_Tanin
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups ,321 5 ,064 2388,711 ,000
Within Groups ,000 18 ,000
Total ,322 23
Kadar_Tanin
Duncana
Perlakuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5
T0 4 ,4838909
T1 4 ,6334813
T2 4 ,7048171
T3 4 ,7844563
T4 4 ,7874515
T5 4 ,8203042
Sig. 1,000 1,000 1,000 ,425 1,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
Kadar Flavonoid (mg.QE/g)
Descriptives
Kadar_Flavonoid
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
T0 4 ,3602147 ,00603357 ,00301678 ,3506140 ,3698155 ,35361 ,36682
T1 4 ,4066326 ,02091064 ,01045532 ,3733591 ,4399061 ,38523 ,43462
T2 4 ,4885554 ,01908919 ,00954459 ,4581803 ,5189306 ,46388 ,50665
T3 4 ,5393407 ,00585755 ,00292877 ,5300201 ,5486614 ,53162 ,54534
T4 4 ,6077327 ,00619868 ,00309934 ,5978692 ,6175962 ,60094 ,61452
T5 4 ,6110126 ,00954003 ,00477002 ,5958322 ,6261929 ,60063 ,62299
Total 24 ,5022481 ,09743422 ,01988868 ,4611053 ,5433910 ,35361 ,62299
48
Test of Homogeneity of Variances
Kadar_Flavonoid
Levene Statistic df1 df2 Sig.
2,310 5 18 ,087
ANOVA
Kadar_Flavonoid
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups ,215 5 ,043 257,947 ,000
Within Groups ,003 18 ,000
Total ,218 23
Kadar_Flavonoid
Duncana
Perlakuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5
T0 4 ,3602147
T1 4 ,4066326
T2 4 ,4885554
T3 4 ,5393407
T4 4 ,6077327
T5 4 ,6110126
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000 ,724
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
49
Aktivitas Antioksidan (%)
Descriptives
Aktivitas_Antioksidan
N Mean
Std.
Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for
Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
T0 4 50,4599212 ,10729259 ,05364629 50,2891947 50,6306476 50,32852 50,59133
T1 4 55,0919842 ,22441854 ,11220927 54,7348842 55,4490842 54,79632 55,32194
T2 4 60,3810775 ,16964448 ,08482224 60,1111353 60,6510197 60,18397 60,57819
T3 4 67,9040736 ,34559207 ,17279603 67,3541595 68,4539877 67,41130 68,19974
T4 4 74,2115637 ,40679316 ,20339658 73,5642650 74,8588624 73,85020 74,77004
T5 4 79,5663601 ,16964447 ,08482224 79,2964178 79,8363023 79,36925 79,76347
Total 24 64,6024967 10,51489806 2,14634458 60,1624447 69,0425488 50,32852 79,76347
Test of Homogeneity of Variances
Aktivitas_Antioksidan
Levene Statistic df1 df2 Sig.
1,430 5 18 ,261
ANOVA
Aktivitas_Antioksidan
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 2541,738 5 508,348 7543,211 ,000
Within Groups 1,213 18 ,067
Total 2542,951 23
50
Aktivitas_Antioksidan
Duncana
Perlakuan N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5 6
T0 4 50,4599212
T1 4 55,0919842
T2 4 60,3810775
T3 4 67,9040736
T4 4 74,2115637
T5 4 79,5663601
Sig. 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000 1,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 4,000.
Korelasi
Correlations
Kadar_Phenol Kadar_Tanin
Kadar_Flavono
id
Aktivitas_Antio
ksidan
Kadar_Phenol Pearson Correlation 1 1,000** ,942** ,922**
Sig. (2-tailed) ,000 ,000 ,000
N 24 24 24 24
Kadar_Tanin Pearson Correlation 1,000** 1 ,942** ,921**
Sig. (2-tailed) ,000 ,000 ,000
N 24 24 24 24
Kadar_Flavonoid Pearson Correlation ,942** ,942** 1 ,975**
Sig. (2-tailed) ,000 ,000 ,000
N 24 24 24 24
Aktivitas_Antioksidan Pearson Correlation ,922** ,921** ,975** 1
Sig. (2-tailed) ,000 ,000 ,000
N 24 24 24 24
**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).
51
52
53
54
55