Rev. Int. Contam. Ambie. 33 (Especial Biotecnología e ingeniería ambiental) 53-61, 2017DOI: 10.20937/RICA.2017.33.esp01.05

AISLAMIENTO Y ANÁLISIS CUALITATIVO DE BIOMASA MICROBIANA FÚNGICA DEGRADADORA DE HIDROCARBUROS DE UN CENOTE DE QUINTANA ROO

Ricardo GÓMEZ-REYES1, Sergio Alejandro MEDINA-MORENO2, Angélica JIMÉNEZ-GONZÁLEZ2 y Manuel Alejandro LIZARDI-JIMÉNEZ3*

1CentrodeInvestigaciónCientíficaydeEducaciónSuperiordeEnsenada.CarreteraEnsenada-Tijuana,número3918, Zona Playitas, Ensenada, Baja California, México, C. P. 22860

2UniversidadPolitécnicadePachuca.CarreteraPachuca-CiudadSahagún,kilómetro20,Ex-HaciendadeSantaBárbara,Zempoala,Hidalgo,México,C.P.43830

3ConsejoNacionaldeCienciayTecnología-InstitutoTecnológicoSuperiordeTierraBlanca.AvenidaVeracruzsinnúmero,esquinaHéroesdePuebla,ColoniaPemex,TierraBlanca,Veracruz,México,C.P.95180

* Autor para correspondencia: chamarripas@yahoo.com.mx

(Recibido julio 2015; aceptado junio 2016)

Palabras clave: hongos, biorremediación, petróleo, consumo por contacto directo

RESUMEN

Se cultivó en biorreactores de puente aéreo un consorcio microbiano para estudios ex situ. El consorcio fue obtenido de un cenote contaminado con fenantreno y naftaleno ubicadoenlaciudaddeCancún,QuintanaRoo,México.Enestetrabajosemostróqueelconsorcio microbiano está también compuesto por hongos con al menos una especie de Cladosporium,ademásdelasbacteriaspreviamenteidentificadasentrabajosanterioresdel grupo de investigación (Pseudomonas, Diplococcus y Enterobacter), por loquese conforma así un consorcio mixto. Se modeló la cinética de crecimiento de biomasa fúngicautilizandotresmodelos:Gompertz,deVonBertalanffyylogísticoparalosdatosobtenidosporespectrofotometría.Paratodosloscasos,VonBertalanffyfueelmodeloqueseajustódemanerasobresalientealosvaloresexperimentales(σ≤0.4).Elanálisispor estereomicroscopía contribuyó a dar una explicación cualitativa de los mecanismos deasimilacióndehidrocarburoenbiomasafúngica,alhacerevidenteelcontactodirectoentreestabiomasafúngicayelhidrocarburo.Finalmente,cultivosencajaspetrirecu-biertasconpetróleocrudomayacorroboraronquelabiomasafúngicaobtenida,producealgunaclasedehidrofobinasquepermitenromperlatensiónsuperficialentrelainterfasehidrofílica/hidrofóbica, favoreciendo así el contacto con el sustrato y los microorganismos.

Keywords:fungus,bioremediation,petroleum,directcontactuptake

ABSTRACT

Microbial consortium has been cultured in airlift bioreactors for ex situ studies. Con-sortium was obtained in Cancun city from a naphthalene and phenanthrene polluted sinkhole.Thisworkshowedthatthemicrobialconsortiumisfurthercomprisedofatleast one species fungi (Cladosporium)additionallytobacteriaidentifiedinaprevi-ouswork fromour researchgroup (Pseudomonas, Diplococcus and Enterobacter), forming thus a mixed consortium. Mathematical models were used to adjust biomass

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fungalgrowth(Gompertzmodel,deVonBertalanffymodelandlogisticmodel)byusingspectrophotometrydata.TheVonBertalanffymodelfittedwiththeexperimentaldata(σ≤0.4).Aswellasstereomicroscopyanalysisgivesaqualitativeanswerforthehydrocarbonuptakemechanisminthefungalbiomass.Inaddition,dropcollapsedtestsrevealthatfungalbiomassprobablyproducessomekindofhydrophobinstobreakthesurface tension between the hydrophilic / hydrophobic interface, thus favouring contact between substrate and microorganisms.

INTRODUCCIÓN

ElEstadodeQuintanaRooesvisitadoanualmentepormilesdepersonasquearribanalsurdeMéxicoyquedejaronunaderramaeconómicaanualmayora$5000.00 millones de dólares (MDD) entre los años 2008a2014(SEDETUR2014).LaciudaddeCancúny la franja de la Riviera Maya son los polos turísticos del estado con mayor desarrollo, infraestructuras hote-leras y por consecuencia con mayor población humana (Medina-Morenoetal.2014,SEDETUR2014).

Por otro lado, elEstadodeQuintanaRooy lapenínsuladeYucatánmuestransuelodeorigenkárs-ticodealtaporosidad,loquedaorigenalaintrusiónsubterránea de un lente de agua dulce de origen me-teorológicoqueflotasobreunamasadeaguamarinamásdensa(Özler1999,Beddowsetal.2002).Estoslentessubterráneos,comúnmentellamadoscenotes,son el único recurso que provee agua dulce a lapoblaciónhumanadeQuintanaRoo.Sinembargo,sus características naturales están intrínsecamente relacionadas con la contaminación tanto marina como terrestre. Además, el atractivo natural de los cenotes como potencial nicho para el desarrollo turístico y la expansióndemográficadelaspoblacioneshumanassumandiversosfactoresantrópicosquedeterioranlacalidad de este recurso natural. En esta vía, se han cuantificadocenotescontaminadosporhidrocarburosalifáticos y aromáticos policíclicos (Medina-Moreno etal.2014).Ambosgruposdehidrocarburossoncon-taminantes con alto grado tóxico-oncológico para los sereshumanos(AgencyforToxicSubstances1995).

Años atrás se propuso la implementación de mi-croorganismosqueposeenlacapacidaddeutilizaresta pluma contaminante como fuente de carbono (HeadySwannell1999),siendolabiorremediaciónuna estrategia viable para la subsanar tanto cuerpos de agua como suelos contaminados con hidrocarburos (Chaillanetal.2004,Morenoetal.2004).Entrabajospreviosdenuestrogrupodeinvestigación(Lizardi-Jiménezet al. 2013) se identificaronbacteriasde-gradadoras de diésel (Pseudomonas, Diplococcus y Enterobacter) nativas de un cenote deCancún

contaminado por fenantreno y naftaleno. La promo-cióndelcrecimientoy lacaracterizaciónparcialdedichasbacteriassehizoatravésdebiorreactoresdepuente aéreo. Por otro lado, la información sobre la aplicacióndemicroorganismosfúngicosenlabiorre-mediación de cuerpos de agua, es escasa. Sin embargo, algunos estudios reconocen ventajas en el uso de este tipo de microbiota debido a su rápida adaptación en ambientescontaminadosyasueficientemetabolismopara metales pesados e hidrocarburos (Cerniglia et al. 1985),loquegarantizalasupervivenciadelinóculoyefectivizasuaccióndescontaminante.Además,sehademostradoqueloshongossonbuenosproductoresdeenzimasextracelularescapacesdedegradardistintoscontaminantes aromáticos y recalcitrantes debido a la especificidaddesubateríaenzimática(Colomboetal.1996,Rafinetal.2013).

Los modelos matemáticos de crecimiento son empleados para describir el comportamiento de microorganismosendiferentescondicionesquími-cas,talescomotemperaturaopH(Zwieteringetal.1990) a través de datos de sólidos suspendidos por pesoseco(Lizardi-Jiménezetal.2013)ounidadesformadoras de colonias (Tzintzun-Camacho et al.2012). Sin embargo, en muchas de las aplicaciones la espectrofotometría es usada como un método directo y sencillo para conocer el comportamiento de un sis-temabiológico,aunqueexistenescasosreportesdesu ajuste sobre modelos matemáticos en bioprocesos.

El objetivo de este trabajo fue aislar y caracte-rizarmicroorganismos fúngicos degradadores dehidrocarburos, que además pertenezcan almismoconsorciomicrobianoreportadoporLizardi-Jiménezet al. (2013) a través de biorreactores de columna de burbuja, así como encontrar un modelo matemático queseajustealosdatosexperimentales.

MATERIALES Y MÉTODOS

Consorcio microbiano y biorreactor “madre”. Seadquirióunejemplardelamicrobiotaautóctona de un cenote reportado como contaminado por

BIOMASA FÚNGICA HIDROCARBONOCLASTA DE UN CENOTE 55

fenantrenoynaftaleno,ubicadoenCancúnQuintanaRoo(Latitud:21º9’41.13”NyLongitud:86º52’23.77”W).Setomóunamuestradeaguade0.5L,entre 1 y 1.5 m de profundidad, conforme al cumpli-mientodelanormaNMX-AA-117-SCFI-2001paradeterminación de hidrocarburos en agua. El consor-cio fue cultivado en biorreactores de puente aéreo (Fig. 1) con 0.9 L de medio mineral básico (MMB) (Kennedy et al. 1975; Cuadro I) y 0.1 L de la muestra del cenote contaminado con hidrocarburos, bajo las siguientescondicionesexperimentales:T(ºC)=28,aireaciónconstante=2VVMypH=6.5constante,ajustadoconHCl2.0N,máslaadiciónde13g/Ldediéselcomoúnicafuentedecarbono.Estebiorreactorfuerealimentadoennuevoslotessecuencialesde14días tomando un 10 % en volumen del biorreactor para alimentar los nuevos lotes operacionales.

Biorreactor semilla de biomasa fúngica. Se tomóunamuestrade40mLdelbiorreactormadredespués del primer lote operacional y se centrifugó (SolbatJ-600,Solbatequipment)enfríoa13000rpm durante 30 min para retirar el volumen de ambas fases (acuosa/oleosa), así como precipitar la biomasa queincluyetresbacteriasidentificadaspreviamente(Pseudomonas, Diplococcus y Enterobacter). Poste-riormente se diluyó la pastilla de biomasa obtenida en 10 mL de una solución de agua destilada estéril + clo-ranfenicol (500 mg/L) para sembrar por estriado en cajas de Petri (por triplicado) con agar de cultivo papa dextrosa (PDA) de la marca bd- bioxon, así como dextrosa saborau (DSA) de la marca MCD. Ambos medios fueron incubados para un pre-crecimiento durante120ha30ºC.Loscultivosquepresentaronmejor crecimiento radial y de profundidad fueron re-sembradosbajolasmismascondicionesúnicamenteenmedioPDA,enelquesetransfirieronlasesporaslibres directo con el asa hacia el centro de las nuevas cajasPetri.Finalmente,seseleccionóelcultivomásrepresentativo en las muestras para transferir las es-poras a 100 mL (2 × 106 esporas/mL), de una solución demediomineraldeaislamiento(MMA)(Velasco-Álvarez2011; Cuadro I). Con lo anterior se generó un biorreactor semilla de biomasa fúngica, bajocondicionesdepH=5conNaOHal2N+6mL/Lde una solución de oligoelementos (Cuadro II), T(ºC)=30±2yunaagitaciónmecánicade180rpmen un incubador durante 120 h.

Cultivo de biomasa fúngica en presencia de hidrocarburos. Se extrajo 10 % en volumen del biorreactor semilla para formar un nuevo lote de ope-ración con 300 mL de medio mineral de crecimiento (MMC)(Volkeetal.2006)+2mLdesoluciónde

CUADRO I. TIPOSDEMEDIOSMINERALESUSADOSPARACADAETAPADELEXPERIMENTO,MEDIO MINERAL BÁSICO, MEDIO MINE-RALDEAISLAMIENTO,MEDIOMINERALDECRECIMIENTO

Reactivo

Medio mineral usado (g/L)

Básico(Kennedy

et al. 1975)

Aislamiento(Velasco

2011)

Crecimiento(Volke2006)

NaNO3 6.75 5.1 3K2HPO4 2.15 0.6 1KCl 1.13 0.45 5MgSO4-7H2O 0.631 0.3 0.15Ex. De levadura - 3 -Sacarosa - 20 -Cloranfenicol - 0.5 0.5

D1: Diámetro interno reactor airlift

Entrada flujo aire

Difusor de aire

Gotas diésel

Burbujas de aire

D2: Diámetro interno tubo concéntrico

L1: Altura del medio aireado

L1 L2

D1

D2

L2: Longitud del tubo concéntrico

Fig. 1. Diseño de un biorreactor tipo puente aéreo para el cre-cimiento de biomasa nativa de cenotes

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oligoelementos (Cuadro II) y como fuente de car-bonoseutilizaron13g/Ldediéselycrudomayaenlotes independientes cultivados en matraces de 500 mL.LosmatracesfueronincubadosaT(ºC)=30±2y agitados continuamente a 180 rpm por 120 h. Una alícuotadecadamatrazfueanalizadapormicrosco-pía(QM-Q8,Quasar)paraobservarlainteraccióndelabiomasafúngicaencontactoconeldiéselycrudomaya en distintos días del crecimiento.

Cinética de crecimiento y modelado matemáti-co. Con un espectrofotómetro (Jasco Jenway- modelo 6405) semidieron las variaciones de absorbanciade la biomasa cultivada en los matraces con medio MMC+diéselcada24hdurante5d(Cuadro III). Las células de la biomasa se separaron por centrifu-gacióna4000xg a4oC durante 10 min, seguido deunlavadoconaguadesionizadayresuspensión(Rivera-Martínez et al. 2015). Para esta etapa, seefectuóunacurvadecalibración,enlaqueseubica-ronlospuntosmásaltosenlaabsorbanciaa403nm,mientrasqueelmedioMMCfueusadocomoblanco

para las mediciones. Finalmente,secompararonlosdatos experimentales obtenidos por espectrofotome-tría con tres modelos no lineales para la predicción delcrecimientomicrobiano:Gompertz(Zwieteringetal.1990),VonBertalanffy(VonBertalanffy1957)yelmodelologístico(Ricker1979).Elusodeclo-ranfenicol,queinhibelasíntesisproteicabacterianaal unirse con la subunidad 50 S del ribosoma desde elbiorreactorsemilla,permitióqueelcrecimientomodeladosólofueseeldebiomasafúngica.

Evaluación del contacto célula-hidrocarburo. UnasolucióndemedioMMCfuesolidificadoconagar PDA en cajas Petri, al añadir sobre los medios sólidos una cubierta de ~50 µL de diésel y crudo maya enunaproporción1:1 (Morikawaetal.1992).Sesembró por goteo 0.25 mL de un inóculo en dilución 1:100 del crecimiento obtenido en el medio MMC y se almacenó el cultivo a 30 ºC durante 72 h.

Análisis estadístico. Se calculó la tendencia logarítmica de la cinética de crecimiento respecto a losmodelos,elcoeficientededeterminación(R2) y ladesviaciónestándar(σ).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Los datos experimentales obtenidos durante los ensayos de crecimiento de biomasa en medio MMC + diésel mostraron una tendencia en el crecimiento sigmoide con una desviación estándar entre ensayos menor o igual a 0.07 (Fig. 2). El ensayo E.2 presentó una tendencia logarítmica con una R2 =0.80.Porotrolado,losensayosE.1,E.3yE.4decayeronenlasúlti-mas72h.Sepuedeatribuirqueeldecaimientoocurriópor falta de las formas asimilables del diésel como fuente de carbono para la biomasa en medio MMC, o bien a un proceso de degradación del hidrocarburo. Sin embargo, la predicción mediante el modelamien-tomatemáticopermitiócorroborarqueelpromediode los ensayos se apega a las fases de desarrollo del crecimiento microbiano típico (Larcher et al. 2006) debidoaquelascurvasobtenidasexperimentalmentepresentaron coherencia con las curvas calculadas con cualquieradelosmodelos(Figura 3) .VonBerta-lanffyfueelmodeloquemejorseajustóalpromediode valores experimentales de la cinética microbiana (σ≤0.4).Enlafigura 3 puede observarse tanto la fase de crecimiento como la fase estacionaria típica de una cinética microbiana al término del día cinco. Desdeestaperspectivasepuedeinferirquelabio-masafúngicaseadaptóaunafuentedecarbonopocoasimilable durante los primeros cuatro días de culti-vo,loquediocomoresultadolamáximacapacidad

CUADRO II.SOLUCIÓNDEOLIGOELEMENTOSUSADOENELMEDIOMINERALAJUSTADODU-RANTEELCRECIMIENTODEBIOMASAFÚNGICA

Solución de oligoelementos (g/L)

FeSO4*7H2O 0.1CuSO4*5H2O 0.015ZnSO4*7H2O 0.161MnSO4*7H2O 0.008

CUADRO III. ABSORBANCIAA 403 nm dURANTELAS PRIMERAS 120 HORAS DE LOSTRATAMIENTOSENMEDIOMINERALDECRECIMIENTO+DIÉSEL. ENSAYO1 (E.1), ENSAYO 2 (E.2), ENSAYO 3 (E.3), ENSAYO4(E.4).DESVIACIÓNESTÁNDARENTREENSAYOS (σ).ABSORBANCIA A LA MÁXIMA BIOMASA PRODUCIDA (A). ABSORBANCIA A LA BIOMASA INICIAL (S0)

TratamientoTiempo(h)

E.1 E.2 E.3 E.4 σ

403 nm

0 1.35 1.40 1.39 1.32 0.0424 1.42 1.48 1.50 1.51 0.0448 1.52 1.50 1.61 1.50 0.0572 1.45 1.53 1.48 1.52 0.0496 1.49 1.60 1.55 1.66 0.07120 1.48 1.59 1.56 1.52 0.05A 1.52 1.60 1.61 1.66S0 1.35 1.40 1.39 1.32

BIOMASA FÚNGICA HIDROCARBONOCLASTA DE UN CENOTE 57

de asimilación del hidrocarburo a 1.6 nm de absor-bancia respecto a su fase estacionaria de cultivo. Aunque los datos experimentales obtenidos porespectrofotometría expresan no sólo el crecimiento delabiomasafúngicasinootrasvariablesderes-puesta, como la degradación parcial de diésel o la producción de otro posible metabolito secundario en losbiorreactores,esteensayofueútilpara“reflejar”elcrecimientodelabiomasafúngicaatravésdelusode modelos matemáticos no lineales diseñados para valorar el crecimientomicrobiano fúngicousandodirectamente los datos de absorbancia. Sin embargo, esimperativoexpresarquelaconcentracióninicialdebiomasaenelbiorreactorfue0.08±0.02g/Lylafinal fue1.2±0.02g/L lo cual coincide con el crecimientoqueseexpresaenlosmodelos.

ElmodelodeVonBertalanffy permitió ajustarlos datos experimentales obtenidos por espectrofo-tometría hacia las fases de desarrollo del crecimiento microbianofúngicoyaquealadicionarcloranfenicolinhibió la síntesis proteica bacteriana.

Elanálisisalamorfologíadelabiomasafúngicasugiere que entre sus constituyentes, el consorciotienehongosfilamentososdelaespecieCladospo-rium. En la figura 4seobservanconidiosramificados(ramoconidios) y cadenas de conidios característicos de las hifas de esta especie, además de mostrar un color marrón oliváceo, una capa mucosa y una forma estriada del micelio muy similar a C. perangustum (Jang et al. 2013). Las especies de Cladosporium tienen preferencia por el medio de cultivo PDA, en el que alcanzaron un diámetro de crecimientomicelar máximo de 60 mm (Bensch et al. 2010).

100x

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Fig. 4. Análisismorfológicode la biomasa fúngica:Durante todas lasobservacionespormicroscopíasevisualizabanhifastabicadasyseptadasque sugierencorresponder algrupoCladosporium. La flechanegraqueapareceenlaimagenesunpatróndereferenciaen el microscopio

1.2

1.3

1.4

1.5

1.6

1.7

0 20 40 60 80 100 120

Abs

orba

ncia

(403

nm

)

Tiempo (h)

Fig. 2. Cinética de crecimiento microbiano para los ensayos E.1 (□),E.2(◊),E.3(∆),E.4(○)ysupromedio(*)

1.35

1.40

1.45

1.50

1.55

1.60

0 20 40 60 80 100 120

Abs

orba

ncia

(403

nm

)

Tiempo (h)

Fig. 3. Predicción de cinética de crecimiento con tres modelos matemáticos;Gompertz (□), deVonBertalanffy (∆)yelmodelo logístico (◊)para justificarque losdatosexperimentales(○)seapeganalasfasesdedesarrollodurante una cinética de crecimiento dinámica

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Esto se ve apoyado por nuestros cultivos al tener un crecimiento fructífero y de similar diámetro en medio de cultivo PDA en lugar de DSA. Adicionalmente, Parbery (1971) y Cofone et al. (1973) han reportado la capacidad de Cladosporium para adaptarse a sitios contaminadosporhidrocarburos,loquepareceres-paldarquelasobservacionesmorfológicaspodríanserlascorrectasalidentificarestehongocomopartede un consorcio microbiano aislado de un cenote contaminado por fenantreno y naftaleno en la ciudad deCancún.

En los experimentos para evaluar los mecanismos de contacto celular al hidrocarburo, se detectan dos formas diferentes de adaptación al crudo maya: a) halo transparente alrededor del radio de la biomasa y b) halo oscuro alrededor del radio de la biomasa (Fig. 5). Sneha et al. (2012) asocian el diámetro del halo transparente con la producción de biosurfactantes enbacteriasdegradadorasdehidrocarburos.Aunqueen hongos no existen reportes sobre la producción de biosurfactantes, existe la capacidad de ciertas especies fúngicas para producir proteínas de bajopeso molecular con actividad surfactante llamadas hidrofobinas (Cox yHooley 2009). Este tipo deadaptación permite la adhesión de las gotas de hidro-carburos,loquefacilitaladifusióndelossustratoshidrofóbicos al interior de las células microbianas (Bouchez 2001,VanHamme2001,Abbasnezhad2011,Tzintzun-Camachoetal.2012).

Cladosporium ha sido ampliamente caracteri-zadoporproducir distintos tiposdehidrofobinasdurante otros procesos adaptativos (Lacroix et al. 2007),loquesustentanloshallazgosencontradosen los experimentos para evidenciar el contacto

célula-hidrocarburo realizado durante el presentetrabajo. Esto último puede interpretarse como elpapelquedesempeñaCladosporium en el consorcio mixto,enelquefacilitalainteracciónhidrocarburo/célula durante el proceso de biorremediación. No obstanteesimperativomencionarqueunatécnicamolecular sería idealparaclasificarelhongoen-contrado en este trabajo. Las ventajas de emplear cultivos mixtos en lugar de cultivos puros para la degradación de hidrocarburos han sido demostradas (Machin-Ramírezetal.2010)ylosbeneficiossonatribuidosalosefectossinérgicosqueseestablecenentre los diferentes miembros de los consorcios microbianos.Enlainteracciónpoblacionalqueseestablece en un consorcio microbiano mixto, es posible que algunas especies remueven u oxidenparcialmente los metabolitos producidos por otros microorganismos hidrocarbonoclastas (Ghazali2004,Díaz-Ramírezetal.2008).

El análisis por microscopía durante el crecimiento debiomasafúngicaenmatracesconmedioMMC,revelaquepartedelabiomasalibresedesplazacon-tinuamente hacia gotas aisladas de los hidrocarburos usados (Fig. 6), adhiriéndose entre el contorno de las fraccionesapartadas.Entrabajosprevios(Tzintzun-Camachoetal.2012)semuestraque,porlogeneral,la biomasa microbiana consume los hidrocarburos en pequeñasgotasemulsificadas.Porloqueesimpor-tantemantenerunaagitaciónconstantequemezclelo más posible la fase oleosa con la acuosa. Por otra parte después de un periodo < 120 h, se logró observar quepartedelabiomasaeracapazdepenetrarhaciaelinteriordelasgotasdehidrocarburo.Puestoquese trata de una imagen bidimensional no se puede

TRASEROA)

TRASEROB)

FRONTALA)

FRONTALB)

Fig. 5. Pruebasdelmediomineraldecrecimientosolidificadocubiertoconpetróleo crudo maya. En el caso A) y B) el petróleo se superpuso en labiomasafúngica

BIOMASA FÚNGICA HIDROCARBONOCLASTA DE UN CENOTE 59

aseverarquelabiomasaestépenetrandodirectamenteen las fracciones de hidrocarburo. No obstante, esta últimapremisapuededarsignificadoalahipótesisacerca de la producción de hidrofobinas en la pared celulardelabiomasafúngica.

CONCLUSIÓN

ElcrecimientofúngicoenmedioMMC+diéseldemostróqueelconsorciohidrocarbonoclastaaisladodeuncenotecontaminadoenCancúnycrecidoenunbiorreactor está compuesto de un cultivo mixto en el cuállabiomasafúngicapuedesercapazdedegradardiferentesfraccionesdeloshidrocarburosquefueronutilizadoscomofuenteprimariadecarbono. El creci-mientodelabiomasafúngicafueajustadoamodelosmatemáticos no lineales diseñados para calcular el crecimientomicrobiano, en los que se obtuvieronfactoresde correlación relevantes.ElmodeloVonBertalanffy permitió describir matemáticamente las fasesdedesarrollodelcrecimientomicrobianofúngi-co.Labiomasafúngicadegradadoradehidrocarburosestá compuesta por hongos del género Cladospo-rium, reportado como degradador de hidrocarburos en suelos. Las observaciones microscópicas y las

pruebasdelmedioMMCsolidificadorecubiertoconpetróleocrudomayadanindiciosdequelabiomasamicrobiana fúngica produce proteínas antipáticas,probablemente hidrofobinas.

AGRADECIMIENTOS

R.Gómez-ReyesagradeceaM.A.Lizardi-Jimé-nezyalaUniversidadPolitécnicadePachuca.AlosIngenierosDecle-CarrascoyTec-Caamal,porelapo-yo técnico durante el desarrollo de los experimentos. A la Coordinación Nacional de Becas de Educación Superior en el marco de becas de movilidad nacional (folio620440)porelapoyofinanciero.

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Fig. 6. Microscopíaduranteelcrecimientodebiomasafúngicaenmatraces con medio mineral de crecimiento. La biomasa fúngicaseadhierehaciaelcontornodeunagota aislada de diésel, diversas fracciones de crudo maya son aprovechadas poresporaslibresenelsistema.Laflechanegraesunpatrónde referencia en el microscopio

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