FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS

Y

BIOQUÍMICA

ASIGNATURA: BIOQUIMICA II

PRÁCTICAS N º 1 : ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLÓGICOS

ALUMNA:

- ROJAS RÉVOLO ROSARIO DIANA

CICLO: VII TURNO MAÑANA

DOCENTE: Q.F. JAVIER JACK CALDERÓN GÓMEZ

LIMA – PERÚ

2012

UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímica

PRÁCTICA Nº 1ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLÓGICOS

OBJETIVO:

- Producir la Hidrólisis del Sustrato Problema (Solución salina de Almidón).- La Hidrólisis va a ser efectuada por los catalizadores Biológicos y No Biológicos.- Realizar la comparación de catalizadores Biológicos (Amilasa) frente a otros Catalizadores de

tipo no Biológicos (H20 dest., y el HCl 10 %.).- Determinar cuáles de los Catalizadores produce cada tipo de Hidrólisis.

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PRÁCTICA Nº 1ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLÓGICOS

OBSERVACIONES:

- No enjuagar la boca con agua para luego botarlo y volverse a enjuagar nuevamente, ya que de ésta manera se reduce la concentración de amilasa que es la Solución madre que queremos obtener para el ensayo, ya que si enjuagamos y desechamos va a tener menor actividad.

- Agitar por inversión con diferentes dedos los tubos para homogenizar.- La muestra siempre debe estar bien cubierta por el agua para que el calor sea homogéneo.- La Reacción sólo dura hasta observar cambio de coloración.- Muestra.- Va a ser el catalizador Biológico. Amilasa en condición de Ayuno.- Trabajamos con Acido Muriático en vez de HCL 10%: 20 ml de Ac. Muriático en 100 ml de

H20 destilada.

RESULTADOS:

Tubos Nº 4 y 7:

1. HIDRÓLISIS NEGATIVOS Ó NULOS.- El Sustrato está intacto, se observará el color azul Marino Intenso; por eso se dice el Producto de Hidrólisis Negativa sigue siendo el mismo Almidón.El Lugol reconoce el Almidón, mediante la coloración característica: Azul Marino Intenso.

Tubos Nº 5,6 y 8:

2. HIDRÓLISIS PARCIALES Ó INCOMPLETOS.- El Sustrato ha sido Hidrolizado de manera parcial, por partes ó desordenada de la estructura del Polisacárido (Almidón).En éste Tipo de Hidrólisis se pueden encontrar hasta tres Productos distintos:

a) Glucosas (En baja proporción)b) Maltosas (Disacárido)c) Dextrinas (Trozos grandes de Carbohidratos) ( En mayor proporción)

Tubos Nº 9:

3. HIDRÓLISIS TOTALES Ó COMPLETAS.- Todo el Almidón ha sido destruido por completo, aquí los enlaces glucosídicos tanto alfa 1,4 como alfa 1,6 han sido rotos por completo, es por eso que el único producto que se forma en éste tipo de Hidrólisis son las Glucosas.

La Glucosa (Azúcar reductor) obtenida se identificó con los siguientes reactivos: Benedict y Fehling A+B.

- Rvo. Benedict.- pp. Rojo- Anaranjado ladrillo.- Rvo. Fehling A + B.- pp. Rojo ladrillo.

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PRÁCTICA Nº 1ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLÓGICOS

CONCLUSIÓNES:- Se cumplió con el objetivo de la práctica sólo con la observación de la Revelación del

producto final con la amilasa que aparentemente salía Hidrólisis Parcial con el sustrato, pero con el Producto + Rvo. (Benedict ó Fehling) obtuvimos una hidrólisis Total.

- Con Rvo. De Benedict y Fehling se corrobora que la amilasa es el mejor catalizador que el agua y el ácido.

-Tanto con Rvo. De Benedict y Fehling hay una oxidación del Cu+2 (color azúl) a Cu +1 (rojo)Fundamento:

Reacción con Rvo. Benedict.

Fundamento:

- El Reactivo de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH anomérico libre), como la lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solución alcalina como Cu2O de color rojo-naranja.

- El color azul de Cu++ es negativo para sustancias reductoras.

Reacción con Rvo. Fehling.

Fundamento:

- El Reactivo de Fehling, resulta al mezclar una solución de CuSO4 con una solución alcalina de tartrato de sodio y potasio, formándose un complejo del ión Cu++ de color azul intenso, que oxida a los aldehidos, reduciéndose a Cu2O de color rojo ladrillo.

- La reacción de Fehling está basada en la acción reductora que tienen los azucares sobre los iones cúpricos en medio alcalino.

- Sustrato Problema: Solución Salina de Almidón (Bien Diluída y Transparente): Solución Conservadora de Almidón.

- El Cloruro impide que el almidón se hidrolice con facilidad

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+ 2 Cu++ + 5 OH - + Cu 2O C=O

O-

R

HC=O

R 3 H2O +

PRÁCTICA Nº 1ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLÓGICOS

COMENTARIOS

- Por ser la primera práctica de laboratorio, hubo mucho alumnado presente, lo que originó mucha aglomeración.

- El asistente de Laboratorio nos entregó un Beacker de 100 ml rajado, el cual no lo revisamos al encontrar los materiales en nuestra mesa.

- El tiempo de práctica es muy corto por lo que debemos ganar tiempo lavando nuestros materiales apenas ingresemos al laboratorio y tomar nota de los procedimientos a realizar.

CRÍTICAS:

- El Lugol proporcionado para la práctica fue muy concentrado, muy puro, por eso lo diluimos agregándole agua destilada hasta obtener una coloración caramelo para poder observar la coloración Azul Marino Intenso.

- El Almidón utilizado y proporcionado por el Laboratorio no es Almidón puro, es almidón de trigo ya que cuando colocamos el tubo a contra luz nos es translucida como si lo es el Almidón Reactivo.

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PRÁCTICA Nº 1ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES

NO BIOLÓGICOS

DIGESTIÓN:

DETERMINACIÓN DE SUSTRATO:

DETERMINACIÓN DE PRODUCTO: Con ésta prueba se corrobora la Hidrólisis Parcial, de la Hidrólisis Negativa y de la Hidrólisis TotalObservación con la Revelación del producto:

PRÁCTICA Nº 1ACCIÓN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES NO BIOLÓGICOS

DETERMINACIÓN DE PRODUCTO:

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TUBO Nº 1 TUBO Nº 2 TUBO Nº 3

1 ml H20 destilada 1 ml HCl 10% 1 ml Amilasa (Muestra)

+ + +5 ml

Solución Salina de Almidón

5 ml Solución Salina de

Almidón

5 ml Solución Salina de

Almidón

+ + +B.M. 38ºC x 15

min.B.M. Hervir x 15 min B.M. 38ºC x 15 min

TUBO Nº 4 TUBO Nº 5 TUBO Nº 60,5 ml de 1 0,5 ml de 2 0,5 ml de 3

+ + +I gota Lugol I gota Lugol I gota LugolAzul Marino

IntensoRojo Concho de Vino Azúl Violáceo

Hidrólisis Negativa(Por que proviene del Digerido 1 el en cual hay H20.

Hidrólisis Parcial ó Incompleta

(Hay Glucosa en baja proporción con Maltosas y Dextrinas en mayor proporción)

Aparentemente Hidrólisis Parcial

Esperamos encontrar la Hidrólisis Total,

con una coloración pardoso amarillento

translúcido, color caramelo

TUBO Nº 7 TUBO Nº 8 TUBO Nº 90,5 ml de 1 0,5 ml de 2 0,5 ml de 3

+ + +2 ml Rvo. Benedict 2 ml Rvo. Benedict 2 ml Rvo. Benedict

Azul Marino Intenso

pp. Rojo ladrillo (muy poco pp.)

pp. Rojo ladrillo(en mayor cantidad)

Hidrólisis NegativaNo hay formación de pp porque no hay azúcar Reductor libre

Hidrólisis ParcialPoca glucosa, es decir poco azúcar reductor libre

Hidrólisis Total.Productos formados: Glucosas.

7 8 9

1 2 3

4 5 6

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TUBO Nº 7 TUBO Nº 8 TUBO Nº 90,5 ml de 1 0,5 ml de 2 0,5 ml de 3

+ + +2 ml Rvo.

Fehling A +B2 ml Rvo.

Fehling A +B2 ml Rvo.

Fehling A +BAzul Marino

Intensopp. Rojo ladrillo (muy poco pp.)

pp. Rojo ladrillo(en mayor cantidad)

Hidrólisis NegativaNo hay formación de pp porque no hay azúcar Reductor libre

Hidrólisis ParcialPoca glucosa, es decir poco azúcar reductor libre

Hidrólisis Total.Productos formados: Glucosas.

7 8 9

Con éstas pruebas se corrobora que la amilasa es el mejor catalizador que el agua y el ácido.