Efecto de extractos de propleosmexicanos de Apis mellifera sobre elcrecimiento in vitro de Candida albicansMara Leonor Quintero-Mora1, Amparo Londoo-Orozco1,Francisca Hernndez-Hernndez2, Patricia Manzano-Gayosso2,Rubn Lpez-Martnez2, Carlos Ignacio Soto-Zrate1,Liborio Carrillo-Miranda1, Guillermo Penieres-Carrillo1,Carlos Gerardo Garca-Tovar1 y Tonatiuh A. Cruz-Snchez11Facultad de Estudios Superiores Cuautitln, Universidad Nacional Autnoma de Mxico; 2Departamento deMicrobiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autnoma de Mxico

El propleos es una sustancia resinosa recolectada por las abejas (Apis mellifera)a partir de diferentes rboles y arbustos. Sus propiedades medicinales hanmantenido su popularidad a travs de los aos debido a que posee actividadantifngica, antibacteriana, antiviral y antiparasitaria, mostrando variacin en suactividad biolgica dependiendo de su origen geogrfico. En Mxico, lainformacin respecto a la actividad de este producto es muy limitada. El objetivode este trabajo fue evaluar la actividad antifngica de cuatro extractos etanlicosde propleos de tres diferentes Estados de la Repblica Mexicana, y de cuatroextractos comerciales sobre el crecimiento de Candida albicans. Se emplearonuna cepa de referencia (ATCC 10231) y 36 aislamientos clnicos de origenhumano de C. albicans. Se determin la concentracin mnima inhibitoria (CMI)por el mtodo de dilucin en agar. Se realizaron curvas de crecimiento en caldoglucosado de Sabouraud solo y con diferentes concentraciones de los extractosetanlicos de propleos; adems se determin si el efecto era fungicida ofungisttico. El extracto obtenido en Cuautitln Izcalli, Estado de Mxicopresent la mayor actividad biolgica, inhibiendo el 94,4% de los aislamientosclnicos a una concentracin de 0,8 mg/ml; la cepa de referencia fue inhibida auna concentracin de 0,6 mg/ml. El efecto fue fungisttico a bajasconcentraciones y fungicida a concentraciones superiores a la CMI. El extractoetanlico de propleos mexicano podra ser investigado como un tratamientoalternativo en algunas infecciones causadas por C. albicans.

Propleos, Actividad antifngica, Candida albicans.

Effect of Mexican propolis extracts from Apismellifera on Candida albicans in vitro growthPropolis is a resinous substance collected by bees (Apis mellifera) from differenttrees and bushes. Due to its antifungal, antibacterial, antiviral and antiparasiticproperties, it has continued to be very popular throughout the time showingvariable activity depending on its geographical origin. In Mexico, informationabout this product is very limited. The aim of this work was to evaluate theantifungal activity of four propolis ethanolic extracts from three different Mexicanstates, and four commercial extracts on Candida albicans growth. A referencestrain (ATCC 10231) and 36 clinical isolates of C. albicans were used. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) was determined by the dilution onagar method. Growth curves on Sabouraud Dextrose broth with and withoutdifferent propolis ethanolic extracts concentrations were performed. In addition,whether the effect was fungistatic or fungicide was determined. The propolisethanolic extract obtained from Cuautitln Izcalli, State of Mexico, showed thebest biological activity, inhibiting 94.4% from the clinical isolates at 0.8 mg/ml;the reference strain was inhibited at 0.6 mg/ml. The propolis effect wasfungistatic in low concentrations and fungicide in concentrations higher to MIC.The Mexican propolis ethanolic extract could be further investigated for itsalternative use for the treatment of some C. albicans infections.

Propolis, Antifungal activity, Candida albicans

22 Rev Iberoam Micol 2008; 25: 22-26

Direccin para correspondencia:Dra. Mara Leonor Quintero MoraFacultad de Estudios Superiores CuautitlnUniversidad Nacional Autnoma de MxicoKm. 2.5 Carr. Cuautitln Teoloyucan San Sebastin Xhala CP 54700Cuautitln Izcalli, Estado de Mxico, MxicoTel.: +55 56231846Fax:+55 56231831E-mail: marileqm@hotmail.com

Aceptado para publicacin el 9 de octubre de 2007

2008 Revista Iberoamericana de MicologaApdo. 699, E-48080 Bilbao (Spain)1130-1406/01/10.00

Resumen

Palabras clave

Summary

Key words

Original

El aumento en la prevalencia de las micosis, la apa-ricin de cepas fngicas resistentes a los agentes antimic-ticos empleados en la actualidad y los efectos secundariosque estos ltimos provocan en los pacientes son, sin duda,algunos indicadores de la necesidad de encontrar o des-arrollar nuevos compuestos que cumplan con los requeri-mientos de un antifngico ideal. El propleos es una sus-tancia resinosa recolectada por las abejas (Apis mellifera)a partir de yemas, brotes y peciolos de las hojas de dife-rentes vegetales, y que mezclan en la colmena con ceras ysecreciones salivales. De acuerdo a varios autores, estecompuesto posee actividad antifngica, antibacteriana,antiviral y antiparasitaria [7,10,14,20]; otros estudios handemostrado que el propleos tiene propiedades como an-tioxidante, anticancergeno y antiinflamatorio [1,4,15,26].La composicin qumica del propleos es muy compleja:contiene ms de 160 componentes activos, entre ellos fla-vonoides, cido benzoico, cido cafeico y sus derivados.Se ha propuesto que su actividad biolgica depende demuchos factores y, por lo tanto, ha sido asociada a laregin geogrfica, la temporada de recoleccin, el tipo devegetacin, la especie de abeja y el solvente usado para suextraccin [3,24]. Hasta ahora no se ha demostrado queexista una sustancia individual o una clase particular desustancias responsables de la actividad biolgica y se con-sidera que tiene una actividad sinrgica entre diferentescompuestos [14].

Con anterioridad se ha demostrado la actividad bio-lgica del extracto de propleos sobre la levadura Candidaalbicans cuando se emplearon extractos de diferentes or-genes geogrficos, principalmente de Egipto, Turqua, Bra-sil, Bulgaria, El Salvador y Cuba [2,7,11,19,22,25]. Sinembargo, y a pesar de que en Mxico el propleos esempleado desde hace muchos aos como parte de la medi-cina tradicional y de que existe una gran variedad de pro-ductos comerciales, son muy pocos los estudios que se hanrealizado respecto a su actividad biolgica. El objetivo deeste estudio fue comparar la efectividad sobre el creci-miento de C. albicans de ocho extractos etanlicos de pro-pleos, cuatro de ellos obtenidos directamente de apiariosde diferentes regiones del pas y cuatro ms que se encuen-tran a la venta en tiendas naturistas o en supermercados anivel nacional.

Materiales y mtodos

Microorganismos. Se utilizaron una cepa de refe-rencia de C. albicans (ATCC 10231) y 36 cepas aisladas depacientes e identificadas como C. albicans por los procedi-mientos tradicionales (filamentacin en suero, produccinde clamidoconidios en agar harina de maz, crecimiento en

CHROMagar Candida, asimilacin de carbohidratos con elsistema API 20C AUX). Estos aislamientos de origenhumano provenan de exudado bucal (11), escamas deuas (11), escamas de piel (7), sangre (4), lquido de aspi-rado bronquial (1) y orina (1), y fueron mantenidos en agarYPD (yeast peptone dextrose) hasta su utilizacin.

Extractos etanlicos de propleos. Se probaroncuatro extractos etanlicos de propleos obtenidos directa-mente de apiarios de las siguientes regiones geogrficas:Cuautitln Izcalli y Amatepec, Estado de Mxico; Cholula,Estado de Puebla; Arroyo Colorado, Estado de Veracruz.Para el procesamiento de los propleos se adopt la tc-nica descrita en el Curso de Industrializacin de ProductosApcolas [6]. Brevemente, el propleos fue recolectadomanualmente de la colmena y congelado durante unanoche; posteriormente se macer hasta formar un polvofino y se introdujo en alcohol al 70% en una proporcin al15% peso/volumen; esta mezcla se mantuvo a temperaturaambiente y en oscuridad durante siete das, homogeni-zando tres veces al da. Se filtr con papel Whatmann de0,45 m y al producto obtenido (fraccin soluble) se ledenomin extracto etanlico de propleos. Los extractoscomerciales fueron denominados 1, 2, 3 y 4; las concentra-ciones de cada uno se encontraban indicadas por el fabri-cante y oscilaban entre el 15 y el 30%.

Determinacin de la concentracin mnima inhibi-toria (CMI). Se llev a cabo de acuerdo al procedimientodescrito por Sawaya (2002) con algunas modificaciones.Para determinar la CMI, al medio agar glucosado deSabouraud (Difco, Mxico), a una temperatura de 40 C,se le adicionaron concentraciones de 0,4 hasta 10 mg/mlde agar de extracto etanlico de propleos. Posteriormente,la mezcla se homogeniz y verti en cajas de Petri estri-les. Se utilizaron dos placas control: a una se le adicionetanol al 70% en un volumen igual al empleado en lamxima concentracin del extracto etanlico de propleos,y la otra contuvo solo el medio de cultivo. Las placas fue-ron inoculadas utilizando hisopos estriles embebidos enuna suspensin de C. albicans de 24 h de crecimiento quecontena 106 UFC/ml en solucin salina estril. Todas lasplacas fueron incubadas a 35 C durante cinco das. Esteprocedimiento fue realizado por triplicado tanto con lacepa tipo como con los aislamientos clnicos. La CMI sedetermin como la concentracin mnima de extracto eta-nlico de propleos donde no hubo crecimiento visibledespus del periodo de incubacin.

Los resultados fueron sometidos a un anlisis esta-dstico utilizando la prueba de la t de Student.

Determinacin de las curvas de crecimiento. De uncultivo de 24 h de crecimiento en agar glucosado de Sa-bouraud se prepar una suspensin con la cepa de referen-cia de C. albicans (ATCC 10231) y se inocularon matraces

23Efecto de propleos sobre Candida albicansQuintero-Mora ML, et al.

Tabla 1. Valores de concentracin mnima inhibitoria (CMI) de extractos de propleos comerciales y otros provenientes dediferentes regiones de la repblica mexicana sobre la cepa de referencia C. albicans ATCC 10231 y cepas aisladas demuestras clnicas.

Extracto de propleos CMI (mg/ml) Media CMI (mg/ml) Nmero de C. albicans ATCC en los aislamientos aislamientos clnicos

10231 clnicos (n = 36) inhibidos (n = 36)

Cuautitln Izcalli, Estado de Mxico 0,6 0,7 34Amatepec, Estado de Mxico 1 1,1 35Arroyo Colorado, Veracruz 3 4,8 35Cholula, Puela > 10 7 5Extracto comercial 1 5 8,5 22Extracto comercial 2 > 10 7 4Extracto comercial 3 3 4,9 32Extracto comercial 4 5 6,3 25

conteniendo 50 ml de caldo glucosado de Sabouraud paraobtener una concentracin de 106 UFC/ml; se adicionextracto etanlico de propleos para obtener diferentesconcentraciones correspondientes a los valores de CMIdeterminados para cada extracto. Se incub en agitacin(200 rpm) a 35 C durante 10 h, tomando alcuotas cadahora para medir la densidad ptica a 600 nm. Para evaluarsi el efecto era fungicida o fungisttico se tom una mues-tra del cultivo con un asa a los mismos tiempos en que sedetermin la absorbancia para la curva de crecimiento y se inocul una placa de agar glucosado de Sabouraud quese mantuvo en incubacin durante 48 h a 35 C. Se consi-der que el crecimiento en la placa era indicativo de unefecto fungisttico, en tanto que la ausencia del mismocorresponda a un efecto fungicida.

Resultados

Como se observa en la tabla 1 existe una gran varia-cin en la actividad de los diferentes extractos; el demayor actividad biolgica fue el que provena de Cuauti-tln Izcalli, Estado de Mxico, con una CMI para la cepade referencia de 0,6 mg/ml, y de 0,7 de valor medio paralas cepas de aislamientos clnicos. Los extractos etanlicosde propleos de Amatepec, Estado de Mxico y de ArroyoColorado, Veracruz, presentaron una menor actividad,seguidos de los extractos comerciales 1, 3 y 4. Los extrac-tos que menor actividad presentaron fueron el de Cholula,Puebla, y el extracto comercial 2. Con todos los extractosse observ que haba cepas que eran inhibidas a concentra-ciones menores que la cepa de referencia, y que otrascepas requeran concentraciones mayores. En la figura 1 seobserva que extractos como el de Cuautitln Izcalli, Ama-tepec y Arroyo Colorado inhibieron ms del 95% de lasmuestras en concentraciones de 0,8, 2 y 7 mg/ml, respec-tivamente. Los extractos comerciales 3 y 4 inhibieron el 89% de las cepas con una concentracin de 10 mg/ml.Finalmente, los extractos provenientes de Cholula y elextracto comercial 2 inhibieron, a las mismas concen-traciones, solo el 13 y el 11% de las muestras, respectiva-mente.

Respecto al efecto inhibidor del extracto etanlicode propleos de Cuautitln Izcalli, sobre los aislamientosclnicos se observ que los aislamientos de escamas deuas fueron los ms sensibles a concentraciones menores,seguidos de los aislamientos de sangre, exudado bucal,escamas de piel y aspirado bronquial. Dos cepas no fueroninhibidas por ninguno de los propleos: una provenientede exudado bucal y otra de orina. Estos resultados fueronsimilares para los extractos restantes con excepcin delextracto de Cholula y el extracto comercial 2, donde solofueron sensibles dos muestras de exudado bucal, una deescamas de piel y una de escamas de uas, sensibles todasellas desde una concentracin de 5 mg/ml.

Se evalu el efecto de los extractos etanlicos depropleos sobre el crecimiento in vitro de C. albicans en-contrndose que no haba incremento en la densidad pticaen los cultivos que estuvieron en contacto con los extractos.Los resultados fueron similares para todos los extractosprobados y sin diferencias considerables entre las concen-traciones empleadas. En la figura 2 se muestra la inhibicindel crecimiento de tres de los ocho extractos estudiadossobre la cepa de referencia de C. albicans, con las concen-traciones a las que se present mayor actividad inhibitoria:Cuautitln Izcalli 0,8 mg/ml, Amatepec 2 mg/ml y ArroyoColorado 7 mg/ml.

En este estudio fue evaluada la actividad fungicidadel extracto de Cuautitln Izcalli en la cepa de referencia

C. albicans (ATCC 10231), encontrando que fue depen-diente de la concentracin y el tiempo de exposicin. Seobserv que el efecto fue fungisttico a concentracionesmenores de propleos e iguales a la CMI, 0,6 mg/ml, per-maneciendo este efecto hasta las 10 h. En concentracio-nes superiores a la CMI, empleando la concentracin de1,2 mg/ml, el efecto fungisttico permaneci durante lasprimeras seis horas y a partir de la sptima hora el efectofue fungicida. A la concentracin de 2,4 mg/ml fue fungi-cida a partir de la segunda hora.

Discusin

El propleos ha sido empleado por sus propiedadesmedicinales desde la antigedad por culturas como la egip-cia, griega y romana [12]. Se sabe que es relativamenteatxico: dosis diarias de 1.400 mg/kg no causan ningnefecto negativo en ratones, aunque masticar grandes canti-dades de propleos en bruto puede producir nuseas yotros trastornos digestivos [13].

Durante los ltimos 30 aos se han intensificado losestudios farmacolgicos y qumicos, demostrando que lospropleos de diversas regiones geogrficas tienen diferen-tes composiciones y actividad biolgica [3,12].

Desde 1988 se ha descrito la actividad del extractoetanlico de propleos frente a 23 cepas del gnero Can-dida aisladas de diferentes partes del cuerpo humano,encontrando que era fungisttico a una concentracin de0,55 mg/ml [21]. Otros autores encuentran actividad fun-gicida en el extracto etanlico de propleos estudiadofrente a 15 cepas, con una concentracin del extracto de 3a 7 mg/ml, siendo C. albicans ms sensible que otras espe-cies de su gnero, como Candida tropicalis, Candida kru-sei o Candida guilliermondii [17]. Algunos autores hanrecomendado la utilizacin del propleos como un antisp-

24 Rev Iberoam Micol 2008; 25: 22-26

Figura 2. Efecto de los tres extractos de propleos con mayor actividadbiolgica sobre el crecimiento de C. albicans (ATCC 10231).

Figura 1. Porcentaje de aislamientos clnicos inhibidos por las distintasconcentraciones de los diferentes propleos. Los resultados son elpromedio +/- desviacin estndar de tres experimentos independientes.El * denota diferencias significativas (p < 0,05).

tico para la prevencin y tratamiento de la candidosis oral[5,17,18]. Se ha mencionado, incluso, que el extracto eta-nlico de propleos podra ser usado como medicina alter-nativa en el tratamiento de las candidosis en pacientes VIHpositivos, siendo tan efectivo como la nistatina y superan-do a otros antifngicos como el clotrimazol, el econazol yel fluconazol [16]. El propleos tambin ha sido empleadopara el tratamiento de infecciones vaginales crnicas, conel 61,1% de las pacientes mostrando mejora despus deseis meses sin necesidad de otro tratamiento [9].

En este estudio se demostr que todos los extractosetanlicos de propleos mexicanos probados presentaronactividad biolgica contra C. albicans, tanto los obtenidosdirectamente de apiarios como los extractos comerciales.Sin embargo, su actividad biolgica fue muy diferenteentre s, presentando valores CMI similares a los descritospara extractos obtenidos en otras partes del mundo, y quevan de 0,2 a 12 mg/ml [8,18,23]. En este estudio se emplela tcnica de dilucin en agar para la determinacin de laCMI al ser el mtodo ms efectivo para la evaluacin delefecto del propleos sobre C. albicans; el procedimientono es afectado por la baja solubilidad de los componentesdel propleos, y es posible diferenciar su actividad biol-gica de acuerdo a su composicin [23]. Se realizaron cur-vas de crecimiento para evaluar el tiempo en el cual se lle-vaba a cabo la inhibicin, observada desde la primera hora,permaneciendo constante hasta las diez horas. A este res-pecto no se encontraron referencias para poder estableceruna comparacin. Sin embargo, cuando se evalu la acti-vidad fungicida del extracto de Cuautitln Izcalli, quepresent la mayor actividad biolgica con la cepa de refe-rencia ATCC (10231), se observ que el efecto fue fungis-ttico hasta una concentracin equivalente a dos veces laCMI, observndose un efecto fungicida a partir de las sietehoras de incubacin. Estas concentraciones coinciden conlas descritas para otros extractos etanlicos de propleos,como se haba mencionado anteriormente [17,21].

En trabajos previos se ha demostrado que las dife-rencias en la actividad biolgica de diversos extractos depropleos se deben a su composicin qumica, ya queprovienen de diferentes regiones geogrficas; sin embar-go tambin podran estar influyendo la poca de reco-leccin del propleos, la especie de abeja y el mtodo depreparacin de la tintura, como han mencionado otrosautores [3,12,14,24]. Se ha propuesto que las proporcionesdel cido cafico, los flavonoides y los steres fenlicosson los principales responsables de la actividad biolgica,

pero tambin se ha demostrado que existe un efecto sinr-gico entre estos y otros componentes del extracto [10]. Porlo anterior, es necesario sealar que se requieren anlisisms rigurosos que permitan garantizar la calidad de estosextractos antes de salir al mercado.

Es importante recordar que las pruebas in vitro noreflejan las condiciones reales encontradas en infeccionesclnicas, si bien son de utilidad para poder realizar poste-riormente estudios in vivo.

En conclusin, en este trabajo se evalu la actividadantifngica de ocho extractos etanlicos de propleos pro-venientes de diferentes regiones de Mxico frente a cepasde C. albicans, una de referencia (ATCC 10231) y 36 ce-pas de origen clnico, resultando que los propleos deCuautitln Izcalli y Amatepec, Estado de Mxico, fueronlos que presentaron mayor actividad biolgica. Aun cuan-do se han logrado importantes avances en la investiga-cin acerca del propleos y su actividad biolgica frente aC. albicans, es recomendable ampliar los estudios enfoca-dos a la caracterizacin de este producto, incluyendo laidentificacin del o los principios activos, y determinar sumecanismo de accin, as como su efecto en otros hongosde importancia mdica.

A las pasantes de qumico-farmacutico-bilogo Carol Martnez Urbn y ngeles Marn Ruiz,por su apoyo en la realizacin de las pruebas de sensibilidad. A los mdicos-veterinarios-zootecnistas Marco Antonio Mendoza Saavedra,Edna Maribel Legazpi Nuevo y Consuelo lvarez Rodrguez por su asistencia tcnica.Al Maestro en Ciencias Crisforo Mercado por lasmuestras de propleos proporcionadas. Este estudiofue financiado por los proyectos DGAPA PAPIITIN202105-3, PAPIIT IN203106-3 y PROFIP (UNAM).

25Efecto de propleos sobre Candida albicansQuintero-Mora ML, et al.

1. Akao Y, Maruyama H, Matsumoto K,Ohguchi K, Nishizawa K, Sakamato T,Araki Y, Mishima S, Nozawa Y. Cellgrowth inhibitory effect of cinnamic acidderivatives from propolis on human tumorcell lines. Biol Pharm Bull 2003; 26:1057-1059.

2. Bankova V, Boudourova-Krasteva G,Sforcin JM, Frete X, Kujumgiev A,Maimoni-Rodella R, Popov S.Phytochemical evidence for the plantorigin of Brazilian propolis from So Paulo State. Z Naturforsch [C] 1999;54: 401-405.

3. Bankova V, Popova M, Bogdanov S,Sabatini AG. Chemical composition ofEuropean propolis: Expected andunexcepted results. Z Naturforsch [C]2002; 57: 530-533.

4. Blonska M, Bronikowska J, Pietsz G,Czuba ZP, Scheller S, Krol W. Effects ofethanol extract of propolis (EEP) and itsflavones on inducible gene expression inJ774A.1 macrophages. J Ethnopharmacol2004; 91: 25-30.

5. da Silva RRGP, Pimenta FC, Ribeiro RSCL. Antimicrobial activity oftwo commercial propolis extracts. Braz J Oral Sci 2006; 5: 967-970.

6. Gonzlez Guerra Ana Ramona. Frmulasapiteraputicas. Cosmticos, apifrmacosy suplementos nutricionales. Curso deIndustrializacin de productos apcolas.Veracruz, Mxico, 2000.

7. Gler P, Sorkun K, Salih B. The effect ofsome Turkish propolis on the productquantity of Agaricus bisporus (Lange.).Pak J Bot 2003; 35: 437-445.

8. Hegazi AG, El Hady FK. Egyptianpropolis: 1-antimicrobial activity andchemical composition of Upper Egyptpropolis. Z Naturforsch [C] 2001; 56: 82-88.

9. Imhof M, Lipovac M, Kurz Ch, Barta J,Verhoeven HC, Huber JC. Propolissolution for the treatment of chronicvaginitis. Int J Gynaecol Obstet 2005;89:127-132.

10. Kartal M, Yldz S, Kaya S, Kurucu S,Topu G. Antimicrobial activity of propolissamples from two different regions ofAnatolia. J Ethnopharmacol 2003; 86: 69-73.

11. Koo H, Rosalen PL, Cury JA, Park YK,Ikegaki M, Sattler A. Effect of Apismellifera L. Propolis from two brasilianregions on caries development indesalivated rats. Caries Research 1999;33: 393-400.

12. Kosalec I, Pepeljnjak S, Bakmaz M,Vladimir-Kneevi S. Flavonoid analysisand antimicrobial activity of commerciallyavailable propolis products. Acta Pharm2005; 55: 423-430.

13. Krell R. Value-added products frombeekeeping. Rome, FAO AgriculturalServices Bulletin N. 124, 1996.

14. Kujumgiev A, Tsvetkova I, Serkedjieva Yu,Bankova V, Christov R, Popov S.Antibacterial, antifungal and antiviralactivity of propolis of different geographicorigin. J Ethnopharmacol 1999; 64: 235-240.

15. Kumazawa S, Hamasaka T, Nakayama T.Antioxidant activity of propolis of variousgeographic origins. Food Chem 2004; 84:329-339.

16. Martins RS, Pereira ES Jr, Lima SM,Senna MI, Mesquita RA. Effect ofcommercial ethanol propolis extract onthe in vivo growth of Candida albicanscollected from HIV-seropositive and HIV-seronegative Brazilian patiens withoral candidiasis. J Oral Sci 2002; 44: 41-48.

17. Ota C, Unterkircher C, Fantinato V,Shimizu MT. Antifungical activity ofpropolis on different species of Candida.Mycoses 2001; 44: 375-378.

18. Palamin-Azevedo RV, Chinalli-Komesu M,Candido RC, Salvetti C, Caetano-Rezende FH. Candida sp in theoral cavity with and without lesions:maximal inhibitory dilution of propolis andperiogard. Rev Microbiol 1999; 30: 335-341.

19. Popova M, Bankova V, Spassov S,Tsvetkova I, Naydenski C, Silva MV,Tsartsarova M. New bioactive chalconesin propolis from El Salvador. ZNaturforsch [C] 2001; 56: 593-596.

20. Prytzyk E, Dantas AP, Salomao K, Pereira AS, Bankova VS, De Castro SL,Aquino Neto FR. Flavonoids andtrypanocidal activity of bulgarian propolis.J Ethnopharmacol 2003; 88: 189-193.

21. Rojas N, Lugo S. Efecto antifngico delpropleos sobre cepas del gneroCandida. Memorias del I Simposio sobrelos Efectos del Propleos en la SaludHumana y Animal. Varadero, Cuba, 1988,42-53.

22. Salomao K, Dantas AP, Borba CM,Campos LC, Machado DG, Aquino Neto FR, de Castro SL. Chemicalcomposition and microbicidal activity ofextracts from brazilian and bulgarianpropolis. Lett Appl Microbiol 2004; 38:87-92.

23. Sawaya AC, Palma AM, Caetano FM,Marcucci MC, da Silva Cunha IB, Araujo CE, Shimizu MT. Comparativestudy of in vitro methods used to analysethe activity of propolis extracts withdifferent compositions against species ofCandida. Lett Appl Microbiol 2002; 35:203-207.

24. Sforcin JM, A Fernandes Jr, Lopes CAM,Bankova V, Funari SRC. Seasonal effecton Brazil propolis antibacterial activity. J Ethnopharmacol 2000; 73: 243-249.

25. Ugur A, Arslan T. An in vitro study onantimicrobial activity of propolis fromMugla province of Turkey. J Med Food2004; 7: 90-94.

26. Wang BJ, Lien YH, Yu ZR. Supercriticalfluid extractive fractionation study of theantioxidant activities of propolis. FoodChem 2004; 86:237-243.

26

Bibliografa

Rev Iberoam Micol 2008; 25: 22-26