77

ภาคผนวก

78

ภาคผนวก ก ภาพทเกยวของ

79

ภาพท ก -1 ลกษณะเปลอกหมเมลดมะขามพนธสทอง

ภาพท ก-2 บดเปลอกหมเมลดมะขามทอบแหงใหเปนผงละเอยดดวยเครองปน (a) รอนผาน

ตะแกรงขนาด 30 เมช (b, c) บรรจในถงอลมเนยมฟอยดและเกบรกษาทอณหภม -20 องศาเซลเซยส (d)

(d) (c)

(a) (b)

ภาคผนวก ข วธตรวจวเคราะหคณภาพการตานอนมลอสระ

81

1. การตรวจวเคราะหปรมาณฟลาโวนอยด (flavonoids) ตรวจวเคราะหหาปรมาณของสารฟลาโวนอยดดวยวธ aluminum chloride colorimetric method ตามวธของ Yang et al. (2009) โดยผสมสารสกด 0.25 มลลลตร กบนากลน 1.25 มลลลตร เตมสารละลาย sodium nitrite (เขมขนรอยละ 5, w/v) 75 ไมโครลตร บมในทมดทอณหภมหองนาน 5 นาท และเตมสารละลาย aluminum chloride (เขมขนรอยละ 10, w/v) บมในทมดทอณหภมหองนาน 6 นาท จากนนเตมสารละลาย sodium hydroxide (เขมขน 1 โมลาร) 0.5 มลลลตร และนากลน 775 ไมโครลตร วดคาการดดกลนแสงดวยเครอง UV-Vis Spectrophotometer ทความยาวคลน 510 นาโนเมตร คานวณหาปรมาณของสารฟลาโวนอยดจากสมการ y = 0.0021x + 0.0185 คา R² = 0.9999 (ภาพท ก-1) ซงไดจากกราฟมาตรฐานของ catechin ทความเขมขน 50 100 200 300 และ 400 ไมโครกรมตอมลลลตร ในสารละลาย เมทานอล คานวณสารประกอบฟลาโวนอยดในสารสกดในหนวย g catechin equivalent (CE)/g of extract

ภาพท ข -1 กราฟมาตรฐานของ catechin ในการหาปรมาณฟลาโวนอยด

y = 0.0021x + 0.0185 R² = 0.9999

0.00

0.20

0.40

0.60

0.80

1.00

0 100 200 300 400 500

abso

rban

ce a

t 510

nm

concentation of catechin (ug/ml)

82

2. การตรวจวเคราะหปรมาณสารประกอบฟนอล (total phenolic compounds) ตรวจวเคราะหหาปรมาณของสารประกอบฟนอลในสารสกดเปลอกกลวยตามวธของ Luque-Rodriguez et al. (2007) โดยผสมสารสกด 400 ไมโครลตรกบสารละลาย Folin–Ciocalteu reagent (เขมขน 0.25 นอรมล) 2 มลลลตร และเตมสารละลายโซเดยมคารบอเนต (เขมขนรอยละ 7.5, w/v) 1.6 มลลลตร ผสมใหเขากนดดวย vortex บมหลอดทดลองในอางนาอนอณหภม 50 องศาเซลเซยส นาน 5 นาท จากนนบมตอในทมด 30 นาท วดคาการดดกลนแสงดวยเครอง UV-Vis Spectrophotometer ทความยาวคลน 760 นาโนเมตร คานวณหาปรมาณของสารประกอบฟนอลจากสมการ y = 0.0099x + 0.0382 คา R2 = 0.9985 (ภาพท ก-2) ซงเปนกราฟมาตรฐาน (calibration curve) ของ gallic acid ทความเขมขน 10 20 40 60 และ 80 ไมโครกรมตอมลลลตร ในสารละลายเมทานอลเขมขนรอยละ 80 คานวณสารประกอบฟนอลในหนวย g gallic acid equivalent (GAE)/g of extract

ภาพท ข -2 กราฟมาตรฐานของ gallic acid ในการหาปรมาณ total phenolic compounds

y = 0.0099x + 0.0382 R² = 0.9985

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

0 20 40 60 80 100

abso

rban

ce a

t 76

0 nm

Concentation of gallic acid (ug/ml)

83

y = 0.0005x - 0.1249 R² = 0.9986

0.00

0.05

0.10

0.15

0.20

0.25

0.30

0.35

0.40

400 500 600 700 800 900

Abso

rban

ce a

t 500

nm

concentration of catechin (g/ml)

3. การตรวจวเคราะหปรมาณโปรแอนโทไซยานดน (proanthocyanidin) การตรวจวเคราะหปรมาณโปรแอนโทไซยานดนใชวธ vanillin-HCl method ตามวธการของ

(Bordiga et al., 2011) โดยผสมสารสกด 1 มลลลตร กบสารละลาย vanillin ความเขมขนรอยละ 1 ผสมกบ hydrochloric acid ความเขมขนรอยละ 8 (อตรา 1:1, v/v) จานวน 5 มลลลตร ผสมสารใหเขากนด บมใน water bath อณหภม 30 องศาเซลเซยส เปนเวลา 30 นาท วดคา absorbance ดวยเครอง UV spectrophotometer ทความยาวเคลอน 500 นาโนเมตร คานวณหาปรมาณของปรมาณสารโปรแอนโทไซยานดนจากสมการ y = 0.0005x - 0.1249 คา R2 = 0.9986 (ภาพท ก-3) ซงเปนกราฟมาตรฐาน (calibration curve) ของ catechin ทความเขมขน 500 600 650 700 750 800 และ 850 ไมโครกรมตอมลลลตร คานวณสารโปรแอนโทไซยานดนในหนวย catechin equivalent (CE)/g of extract

ภาพท ข -3 กราฟมาตรฐานของ catechin ในการหาปรมาณ proanthocyanidins

84

4. การตรวจวเคราะหฤทธก าจดอนมลอสระ DPPH (DPPH radical scavenging activity) ตรวจวเคราะห DPPH radical-scavenging effect ในสารสกดโดยอางองวธของ Maier et al. (2009) โดยมการปรบเปลยนเลกนอยดงน ผสมสารสกด 1.5 มลลลตรกบสารละลาย DPPH (เขมขน 0.2 มลลโมลาร) 3 มลลลตร เขยาใหเขากนดวย vortex บมในทมดนาน 30 นาท วดคาการดดกลนแสงดวยเครอง UV-Vis Spectrophotometer ทความยาวคลน 517 นาโนเมตร สาหรบชดควบคมใชเอทานอลทาปฏกรยาแทนสารสกด คานวณคา DPPH radical scavenging activity จากสมการ DPPH radical scavenging activity (%) = (Absorbancecontrol – Absorbancesample) x 100

Absorbancecontrol

เตรยมกราฟมาตรฐานของ BHT ทความเขมขน 3.13 6.25 12.5 25 และ 50

ไมโครกรมตอมลลลตร คานวณคา DPPH radical scavenging activity และพลอตกราฟระหวางความเขมขน (แกน x) และคา DPPH radical scavenging activity ไดสมการเสนตรง y = 1.173x + 5.598 คา R2 เปน 0.9985 (ภาพท ก-4) คานวณฤทธตานอนมลอสระ DPPH ของสารสกดเทยบสมมลกบสาร BHT จากสมการเสนตรงทไดจากกราฟมาตรฐาน BHT

ภาพท ข -4 กราฟมาตรฐานของ BHT ในการหาฤทธตานอนมลอสระ DPPH

y = 1.173x + 5.598 R² = 0.9985

0

10

20

30

40

50

60

70

0 10 20 30 40 50 60

%DP

PH in

hibi

tion

concentration of BHT (g/ml)

85

4. การตรวจวเคราะหฤทธ tyrosinase inhibition activity ตรวจวเคราะหฤทธ tyrosinase inhibition ในสารสกดโดยอางองวธของ (Manosroi et

el., 2011) โดยเตรยมตวอยางสารสกดและสารมาตรฐาน kojic acid ทความเขมขนตางๆ 8 ความเขมขน คอ 1, 2.5, 5, 10, 20, 30, 40 และ 60 ไมโครกรมตอมลลลตร ในการทาปฏกรยาปเปตสารสกดหรอสารมาตรฐานแตละความเขมขน 100 ไมโครลตร ใสในแตละหลมของ 96-microwell plate เตมสารละลายเอนไซมไทโรซเนส (เขมขน 200 ยนตในสารละลายฟอสเฟสบฟเฟอรเขมขน 0.1 โมลาร) จานวน 100 ไมโครลตร เตมสารละลายไทโรซน (เขมขน 1 มลลกรมตอมลลลตรในสารละลายฟอสเฟสบฟเฟอรเขมขน 0.1 โมลาร) จานวน 50 ไมโครลตร และเตมสารละลายฟอสเฟสบฟเฟอรเขมขน 0.1 โมลาร จานวน 50 ไมโครลตร ผสมใหเขากนและบมท 37 องศาเซลเซยส นาน 60 นาท และนาไปวดคาการดดกลนแสงท 450 นาโนเมตร แตละระดบความเขมขนของสารสกดและสารมาตรฐานทาการทดลอง 3 ซา คานวณคา %tyrosinase inhibition ไดจากสตร

Tyrosinase inhibition activity (%) =[(A−B)−(C−D)/(A−B)]×100 เมอ A คอ คาการดดกลนแสงของ blank หลงการบม

B คอ คาการดดกลนแสงของ blank กอนการบม C คอ คาการดดกลนแสงของตวอยางหลงการบม D คอ คาการดดกลนแสงของตวอยางกอนการบม

คานวณคา 50% inhibition (IC50) ไดจากการพลอตกราฟระหวางคา %tyrosinase inhibition (แกน Y) กบคาระดบความเขมขน (แกน x) พลอตเสนแนวโนมและไดสมการ logarithm คอ y =aln(x) + b จากนนแทนคา y = 50 คานวณหาคา x จะไดคา 50% inhibition (IC50) ในหนวยมลลกรมตอมลลลตร

86

ภาคผนวก ค เครองมอเกบขอมลวจยศกษาประสทธภาพของผลตภณฑโลชนบ ารงผวขาว

สตรนาโนอมลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขามกบอาสาสมคร

87

หนงสอแสดงความยนยอมของอาสาสมครทเขารวมโครงการวจย เรอง การพฒนาโลชนบ ารงผวขาวเสรมสารตานอนมลอสระสตรนาโนอมลชน

จากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม ขาพเจา (นาย/นาง/นางสาว)………………………………………………อาย........................ อย บ า น เล ข ท ………………..ซอย…………………….……………ถนน ………………………………….แขวง/ตาบล…………………………………เขต/อาเภอ……………….………………………………………..จงหวด.………………………….……..…..............รหสไปรษณย…………………………………………… บตรประชาชน/ขาราชการเลขท…………………………………เบอรโทรศพท............................. ยนยอมการเขารวมการการทดสอบประสทธภาพของผลตภณฑโลชนบารงผวขาวเสรมสารตานอนมลอสระสตรนาโนอมลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม เปนเวลา 6 สปดาห

ลงนาม…………………………………………….. (……………..……………………………….) ผเขารวมโครงการ

88

ใบรายชออาสาสมครในการทดสอบประสทธภาพ ของโลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม

วนท.........................................................

Code ชอ นามสกล เบอรโทรศพท เวลาททดสอบ YN 01 YN 02 YN 03 YN 04 YN 05 YN 06 YN 07 YN 08 YN 09 YN 10 YN 11 YN 12 YN 13 YN 14 YN 15 YN 16 YN 17 YN 18 YN 19 YN 20 YN 21 YN 22 YN 23 YN 24 YN 25

89

ใบบนทกผล โครงการ โลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม

เครองวดส สปดาหท............ วนท.............................ผบนทก...............................

Code ชอ นามสกล แขนขาง

คา L คา a คา b

YN01 ซาย

ขวา

YN02 ซาย

ขวา

YN.... ซาย ขวา

90

แบบสอบถาม การทดสอบความพงพอใจของผบรโภค

เรอง การทดสอบความพงพอใจของผบรโภคตอผลตภณฑผลตภณฑโลชนบ ารงผวขาวสตรนาโนอมลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม

ตวอยางทแจกให : ตวอยางผลตภณฑโลชนบ ารงผวขาวสตรนาโนอมลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม

ค าแนะน า โปรดทาเครองหมาย √ ลงใน หรอเตมขอความทตรงกบความเปนจรง 1. เพศ 1.) ชาย 2.) หญง 2. อาย

1.) ตากวา 20 ป 2.) 20 – 30 ป 3.) 31 – 40 ป 4.) 41 – 50 ป 5.) 50 ปขนไป

3. การศกษาสงสดทไดรบ 1.) ตากวาปรญญาตร 2.) ปรญญาตร 3.) ปรญญาโท 4.) สงกวาปรญญาโท 4. อาชพ 1.) นกเรยน/นกศกษา 2.) ขาราชการ/รฐวสาหกจ 3.) พนกงานบรษทเอกชน 4.) ธรกจสวนตว 5.) อน ๆ (โปรดระบ)..................................................................................... 5. รายไดตอเดอน

1.) ตากวา 10,000 บาท 2.) 10,000-20,000 บาท 3.) มากกวา 20,000 บาท

ตอนท 1 ขอมลทวไปของผตอบแบบสอบถาม

91

วธการใช ทดสอบตวอยางกบผวหนงบรเวณทอนแขนดานในโดยทาตวอยางทไดรบและตอบคาถามในแบบสอบถาม ค าแนะน า กรณาใสหมายเลขในชองวางใหตรงกบความพงพอใจของทานมากทสด 1 = พอใจนอยทสด 2 = พอใจนอย 3 = พอใจปานกลาง 4 = พอใจมาก 5 = พอใจมากทสด

คณลกษณะ ระดบความพงพอใจ 1 2 3 4 5

1. สของผลตภณฑ 2. กลนของผลตภณฑ 3. ความขนหนดของโลชน 4. การกระจายตวของโลชนบนผวหนง 5. การซมเขาสผวของโลชนหลงใช 6. ความชมชนของผวหลงใช 7. ความนม/เรยบเนยนของผวหลงใช 8. อาการระคายเคองของผวหลงใช เชน อาการแสบ, รอน และคน เปนตน (หากไมมอาการไมตองกรอก)

9. ความชนชอบโดยรวมตอผลตภณฑ

สวนท 2: ใหตอบค าถามหรอท าเครองหมายกากบาท (x) ในชองทตรงกบความคดเหนของทาน 1. หากเราผลตผลตภณฑดงกลาวเพอจาหนาย ทานคดวา ราคาของผลตภณฑนควรเปนเทาใดตอขวดโลชน ขนาด 120 กรม ...................................... บาท/ขวด 2. ทานมความประสงคใชผลตภณฑของเราตอไปหรอไม ใช ไมใช เนองจาก ...................... ........................................................................................................................................ ........................ ขอเสนอแนะอนๆ ............................................................................ ....................................................

ขอขอบคณทกทานทตอบแบบสอบถาม

ตอนท 2 ขอมลเกยวกบการทดสอบผลตภณฑ

92

ภาคผนวก ง ผลการทดสอบความพงพอใจของผเขารวมฝกอบรมเชงปฏบตการ

93

แบบสอบถามความพงพอใจของผเขารวมฝกอบรมเชงปฏบตการเพอถายทอดเทคโนโลยการผลตโลชนบารงผวขาวสตรนาโนอมลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม โดยมหวขอการประเมนความพงพอใจทงหมด 11 ดาน คอ (1) ดานรปแบบกระบวนการจดอบรม/กจกรรม, (2) ดานความเชยวชาญของวทยากรและการใหบรการของทมงาน, (3) ดานความเหมาะสมของสงอานวยความสะดวก, (4) ดานความเหมาะสมของสถานทจดกจกรรม, (5) ดานความพรอมเอกสารประกอบกจกรรม, (6) ดานอาหารวางและอาหารกลางวน, (7) ดานความเหมาะสมของระยะเวลาการจดกจกรรม, (8) ความพงพอใจโดยรวมตอคณภาพการใหบรการ, (9) ความรความเขาใจหลงการเขารวมกจกรรม, (10) การนาความรไปประยกตใชประโยชนได และ (11) ความพงพอใจโดยรวมตอการเขารวมกจกรรม โดยผลการประเมนความพงพอใจของผเขารวมฝกอบรม แสดงในตารางท ค-1 ดงน

94

ตารางท ง-1 คะแนนความพงพอใจของผเขารวมฝกอบรมเชงปฏบตการเพอถายทอดเทคโนโลยการผลตโลชนบารงผวขาวสตรนาโนอมลชนจากสารสกดเปลอกหมเมลดมะขาม

หวขอประเมนความพงพอใจ คะแนนเฉลย

รอยละความพงพอใจ

ระดบความพงพอใจ

1.ดานรปแบบกระบวนการจดอบรม/กจกรรม 4.60 92.00 มากทสด 2.ดานความเชยวชาญของวทยากรและการใหบรการของทมงาน 4.53 90.67 มากทสด 3.ดานความเหมาะสมของสงอานวยความสะดวก 4.27 85.33 มาก 4. ดานความเหมาะสมของสถานทจดกจกรรม 4.47 89.33 มาก 5. ดานความพรอมเอกสารประกอบกจกรรม 4.13 82.67 มาก 6. ดานอาหารวางและอาหารกลางวน 4.13 82.67 มาก 7.ดานความเหมาะสมของระยะเวลาการจดกจกรรม 4.13 82.67 มาก 8.ความพงพอใจโดยรวมตอคณภาพการใหบรการ 4.60 92.00 มากทสด 9. ความรความเขาใจหลงการเขารวมกจกรรม 4.13 82.67 มาก 10. การนาความรไปประยกตใชประโยชนได 4.33 86.67 มาก 11.ความพงพอใจโดยรวมตอการเขารวมกจกรรม 4.60 92.00 มากทสด หมายเหต เกณฑคะแนนเฉลยทใชในการประเมนผล คอ 4.51 – 5.00 หมายถง มความพงพอใจในระดบมากทสด 3.51 – 4.50 หมายถง มความพงพอใจในระดบมาก 2.51 – 3.50 หมายถง มความพงพอใจในระดบปานกลาง 1.51 – 2.50 หมายถง มความพงพอใจในระดบนอย 1.00 – 1.50 หมายถง มความพงพอใจในระดบนอยทสด

จากตารางท 1 พบวาผเขาเขารวมอบรมมความพงพอใจดานรปแบบกระบวนการจดโครงการ/กจกรรม ความพงพอใจโดยรวมตอคณภาพการใหบรการ และความพงพอใจโดยรวมตอการเขารวมกจกรรม สงสด 4.60 ซงอยในระดบมากทสด และมความพงพอใจดานอนๆ อยในระดบมากถงมากทสด โดยมคะแนนความพงพอใจอยในชวง 4.13-4.53 คดเปนรอยละ 82.67-92.00

95

ภาคผนวก จ บทความตพมพเผยแพร

96

1. น าเสนอผลงานแบบบรรยาย ในงานประชมวชาการระดบชาต “พบลสงครามวจย” ประจ าป 2558 สองทศวรรษราชภฏพบลสงครามจากทองถนสอาเซยน

วนท 13-14 กมภาพนธ 2558 ศนยวฒนธรรมภาคเหนอตอนลาง มหาวทยาลยราชภฏพบลสงคราม จงหวดพษณโลก

97

98

2. น าเสนอผลงานแบบโปสเตอร ในงานประชมวชาการระดบนานาชาต The 7th International Science, Social Science, Engineering and Energy

Conference I-SEEC 2015, November 24-26, 2015 Wang Chan Riverview Hotel, Phitsanulok, Thailand

99