Upload
others
View
6
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
���������� ������������������
�������/��� � ��!���� ��"#$%&"'( ��)*�+��,-./0123&45
6789:;9<=>���?���@A9<BCDEF��� ��4GHI(JK$&3"#$%&"'(LMNOB�PQRKS"TU0V�W�XYZ[[\]^_]^`aW
�b�c@defg������hi�!��������
�jkl�mnopqrsnopq�pqtsuvqw
�-./�!��xdeyzt{st{ �|}-./�~��H�B�T���"(RK���������V�&0�������PQRKS"TU0V�W
������,�H��� (�)����,�
�D���E�� ¡¢ £¤¥
¥¦�����,�H���
§¨�©ª«¬p�®T¯°RKS±2��²³´
���������µ�¶·ªx¸RKS±2H¹º9»`�
�¼½m{t{¾¿ÀÁ�ÂøÄ�ÅÆÇ�ÈÉ
§ÊË��ÌÍÁ���ÎÏ´�ÐÑ-./de�,���¶Ò!�� ��ÓÔ�I(JK$&3"#$%&"'(PÕ¶Ö�×%ØT��ÙÚÛ�Ë�Ü®T¯°ÝRÞ¯ßÝ&����Làáâã¶x¸Ä��Pä3�&�x
�å¥æRKS®K("T°&�x �-ç?è8«±�1&±Té�êë���ì�íbîïHðC�
�Êñ®T¯°ò óôLâõ�ö>÷÷Y_ø\�ù_úø\XY]ú[ú^ûü�¶ý�â
¬psnopþsz�����������¬p����x�µ�+�ò������
��µ�+�ò��¤||��� ���¤���
�� �� ��¤�Á��zl¤H�B����|��� ������µ�P������ï�±�S�&�H�B����P������±�1&±T����� ï�íb<«�¸RKS±2L!"OB��Ð����òbL#$��9%&'(W
)*����
¸��L!"OB�+�ò¬p+����&!
, ¨�©ª«¬p�-./pl0nw,Ò1�2�ë�3
4ø�+�ò 5678Ç��à 9:;Ã<á
=>��?@�A��Bô�üCHDE
F�
������,�H��� (�)����,� F�
�����G� �� ,� �,�
�b�c@defg��
���deÇ�HIJ-./�!�� �KL��M� NO3�yzt{st{z �|}H�=�x+�uvPw�QRHSTB��Ð�U�#ïVW��òbL�,OB�
��Ð�U�#ïVW��òbL�,XÁYZq�ò¥¦[ï�Á.z\�ò�¦Eï]w,^_Á½q`Yabc �¦dï
�,
��������� ���
¬p+����ò%e�+H���Pfgh�^�i�YVWxje�+H���PfghF¦�^�i�YVWåklÄ3��KmnUÄH���P(&ÃH o`STY��ïVW��òLp�6�H�«x¬p+����&ÃqÃrsLÈtOB�
Vu��+Hvö���L�,`wcæ�qmÁ?�xyz�{¦{^�i�Y`fcæDæP��æ¥æ]|�}0~? �¦�^�i�Y��¿q� ������¥ï�)*�AX¿k?� �FF^�i¦�Y�)*º��+ �¦¥�^�i�Y
�,
¬psnopþsz��
�Q��nw¬p��H���x¡�����F�H���9[F��Lp�B��L��OB���d$�)��+Lfgh��F�^�i�YVW9��JH�òOB6��9»B��L��OB�&ÃJH�Ã��`¬p��L¡��ö��ë�9öx�$,Ä3�ò�>��)��+Lx�,ö>���ë�9�òOB¬p+���A�L���üCOB�
� ��Ã�H�«xs�Zq�456L�{F�9DFFR����L�,�
fgh�F^�i�YLVu��+9�,Ùæç? �F^�i�VWiæX.Zq �F¦¥^�i�Y}0swzÁ �F^�i�YVW¬sq �F^�i�YVW
�,
¥¦������G������,�
� ¡¢ £¤¥ �E���E�
�����G� �����ÌÍÁ���ÎÏ Q+�uvPw�¡¢b
�b�c@defg��
£�,jklH�Bc@defg���¶p¤7��B�
¥ÊñHS��¦�§�0�tl¬p�uz+�uvPw¨ùZfû©ù_úª���¶Î���B�
«+�uvPw�QRPx]w,^_Á½qx]w¬w.q�nvsq���òbP×ÌÍÁ
£-./��~��H�Bjkl0q+Á�HIJ-./�!�� �KL®yzt{st{ �ÏW9§¯@A��°L��B6�L�±ö>²«éWPQ+�uvPw³´9<B�
¥µ�PQ+�uvPw�,�Lì�¶·¸¹`ºp=��B�Õ»¶w¼+.qþz
«!½9Pxo¾�¿H�B³´`�ò0�tl9¡¢`�òbL?Àx��Ð�UHÁÂ
��������� ���
£4 Ã�Äb���LÃ�>¬p5Å+����)*J��¶ÊËxpq|xâÖ`º9p¤7��B�
¥? Æm� L �45OBX+�zÇP<B¶xQ+�uvPw���HÈ/.��L��>�ÁǼqÉzÊqw�����LËÌöxÐqL&ÍOB��P`��
«� ��ÓÔ�¼¼qÎÏz�0¿ÏÌz0ÐqPÕ¶Ö�×ÌÍÁ
Ñ�)*�º��+�¸+���H�B�òPx�ÒÔ9Ó�¶ÔªxgÕ¼�w¶���
£������9 �¶�!OB�A��LüCö¬p+���L��OB���Ö×P9öªx»`;�Ãb����+5ÅH�Ã���`B4 Ã�Äb§LìÒö��B�
¥���5Å�H�B��¿q��?AgÕPØ4��9<«xQ� -./.pÙ.sz®Úµ�PszZq��9³´���L4ö��B�
«6789:;9<=>���9�?���@A9<BCDEF��� ��4GH¼qÎÏz�0¿ÏÌz0ÐqLMNOB�PQ+�uvPw³´
ÑÛܧH�B�)*�ZÝÞßò�����òH,àöxáµ�`=��B��,� �)+HIb4G����9P��Lsz|
¬psnopþsz��
£ËÖÙÚÛ¶¬psnopþsz����Làáâx��¸ÄPâ�kzÁx�å¥æ+�-quzÁxç?`º
ÙÚÛãä9x�Á�z��¬på�gÕ�>���z-z�Á.z\L��
¥æ�Ã��sXP�zH�B�æç?��9�ç,èPéêë7��`��
£� �� ��¨ìÒ�Á��zlªH�B�����P���9xÕ¶Ö³´��
|��� �¬p+���PxÕ¶Ö�íî¼sÊd§�H4�Þß����L�Ãö>³´��
¥æ�Ã��sXP�zH�B�æç?��9x����R�x�òµ�xï¸ð��@��ñ9��Ð�ÌÍÁ�,èL�,
¥¦¥+�uvPw�����òó¡¢b
������,�H��� (2),��ôÌ F�
�d��E�
���q� ü��,��õo`ã�°
ö÷`�°���
�öø`ù/��ú
4û` ���ú
oü�ý��
@jklþ��é-./ ��é
Ðqë7>����ò¯�òb-./
t:�-./��
�-./Km
Minimum genome factory�MGF�
��$��¶ø��R���ò�ÀZ�l¶ø���ö�Ëù/� ���zÁ¶à�9»B
�÷`�°�}âÊÁYzNO�
t:�jkl-./����
10��Lpª����
DGF,RGF,I�F
���b�c@defg�����
� ¡¢ £¤�D
F�
����E�
���LíÃö>��gÕ)�����+�uvPw
����b�c@defg�����
ó��� :�t�§ Designed Genome� Factory
� � ܦ�§ Refined Genome�Factory
� �/ Üo¾�¿ Intelligent Genome Factory
gÄ�n��)� ü������ �!�q-P+ü!�"#J+�tzlü!�
� ¡¢ £¤�D
F�
�{��E�
���b�c@defg�����
�ÖÖ�-.¸��$ %& '( )* ¨t�§ �je-./� �ü!ª
�+G�,-¸��t¸.t¸ Ñ/¡ 01 )*¨t�§23AmÒ¯�w.q�Ps+wzlü!ª¨t�§�!���¼ÌP0Ðqª
�+G�,-¸��t¸.t¸ Ñ/¡ 01 )*¨¦�§HSTBHIJ-./�!����ª
�42t¸t¸. â5 67 )* ¨¦�§de�I$�q-P+�ò �ª
�8ñt¸ v1 9: )* ¨¦�§deyzt{st{z �|}��ª
�;ñt¸�< =>t¸� ?> @ )*¨o¾�¿�deyzt{st{z �|}��ª
A×&Í����²³
� ¡¢ £¤�D
F�
�[��E�
�FF
�F
�
ÚÙddF]�
0
20
40
0 10 20 30 40Time (hr)
��b�c@defg t�§ Ù\©_^]\B�a\]ú�\�CZXøúDû
23Aѯ�g
� E�¯23AL¥E���
� �je-./�¥¦��P
��ö� F� �üøÇ
� GgCNO�°¶tHHÏW
XÁYZq ¥¦�[�^�i�YL�,I
XÁYZq`^�ic
XÁYZq�òJ
��J
� ûK^G,DúBL� M§üÕ�N,HvL
O� 23Aѯ9�ò�-./L�!ë
êx�J��H�P�ÇÏzZq�OB
6�9xë�J`�+�ò�LüC�
� &Ã�� HÏT/ôB9QR���
STJ`.p�q�XUw®A×��H�«
V`BÙ.¼0ÏX¼+LWË�� yhhK,panZ
-qwtq?�,�íbù/
�je-./ �ü!
���Î�+�½z�z
� ¡¢ £¤�D
F�
¥F��E�
MGB874
mRNA
1.5Mbp
� ¡¢ £¤�d
F�
¥���E�
¥���E�
o¾�¿�b�c@defg�� X]ø\[[_^\]øa\]ú�\CZXøúDû �XaC�
;;ñt¸
��/¯YôB
I$�q-P+�òë�¶#ïHÏW
23At:���¯ZdE�¦¥[\]L^,
v����áý
���_é`��!0�tl�ayZ¼w×RgK�_obé`���
#�óc���dM�!0�tl�|�� eJ+�½z�z_YX²f�
g�oh�òbÏW�����ó�ù/�Ãohi|t�
î�jüÕÐÑ�����]w�j)QüÕüCkl�
m noQe�Þß5Îü!
� ¡¢ £¤¥¥
F�
���� �®���`ºHSTB�����������x-./453H�B� �� ������Lp�x%H¬p+���H�«�ò9»B6�¶e�7��B�+H���Pfgh�f]ZX\�g_�\�h_\[BÜ��pq�R�<>«��òi��^�i�YVWx¬p+���H�=��ò9»B6�¶e�7��`��+H���Pr���o��VW�klÄ3��KmnUÄH���P&ÃH o`fgh��ïVW���òLp�6�H�«x¬p+����&ÃqÃrsLÈtOB�
#���������� ������
� ¡¢ £¤[[
F�
¥¥��E�
� ¡¢ £¤[[
F�
¥D���E�
##���������� ������
�stt¸t¸. uv ¹7 w)* ¨����A��Ç�� ?�KLªª�xyt¸ z¡ '{ w)* ¨� �Ã�����������ª�|}t¸ ^~ � )* ¨� �q-P+�4 Ã�Äb ü���b��5Å� ª�ò ������$ �� ��� �Áz+^
¨��jkl��H�B�����0�tlm�pq��ª�����t¸t¸. �1 �� )*
¨4 Ã�Äb� 34Ã� �hg����üÕ¸J��ª
�ò ������$ �5 �� �Áz+sz/z ¨? Æm� ���üÕü!��ª�t�t¸t¸. t? �� )* ¨�Yú[\�X\[[�XZøZ[û©ø�HSTB� ����ü!�����ª���t¸t¸. m� ð: )* ¨�ÁǼqÉzÊqw?� �������)���ª
�t�t¸ �5 ï� )*¨i�Âv����GfæÙCg��H�B�� ��0¿ÏÌz0Ðq�8���ª
�ò ������$ �z ¡ @¢��£¨� ��0¿ÏÌz0Ðq�>��´¤âÊÁYz¥¦��ªª
�xyt¸t¸. �§ ¨ï )* ¨.�qoï�H�B�� ��0¿ÏÌz0Ðq�n��ª
�t©t¸t¸. Ñ> 9 )* ¨��� �������)���ª
�stt¸t¸. tz ª� )* ¨ÛܧH�B��)*�«ÝÞßò���,���ª
A×&Í����²³
� ¡¢ £¤[[
F�
¥E���E�
��Ü!½�¬p+���Px����9Ã��7B¨�¶¬�º9<«x¸Ò HS���Ãë7B��b��L¡�OB�òÇ��ÃP:;9<B�r69x�$4 Ã�â9deüÕL®¯OB6��9»B���Lc@�OBÍP�z�L��öx������9�Ã��`¬p+���L��OB6�L���OB�
4 Ã�Äb§
+.�¿|
�������+�ò
N+°Å����
w.q�ɱq
�23AéW`Ww.q�ɱqx+.�¿|ÍP�zLÃ��N+°Å����
��!ÍP�z�üC
�ó�� -./��!
��!i�|mL�±O4G
MCS
c@Ãori
E. coliÃori
�zÀz-./
�z¿Êz�z
}°`+�½z�z
4Ã-./
�4 Ã���«²����HSTB��³´x���Ðq�¸Ä�+�ò�QR�t�§��µ¶9¡¢b�&'�
w·G ���^�i`fgh� {¦{^�i�Yc
Û�bù ¥EE�^�i`fgh �¦�^�i�Yc
O
O
ClOH
OH
COOH
,�
&Ã�ì¸öÜ4 Ã�Äb¹¦�DY_º]Y_[Z Ù���F�H�$���L��OB� -./LMNOB6�H�=�
4 Ã����9;�Ãb��L¡�Hö>klÄâ�A3�¸Ä�òLg»a�e�&ÃL�±ö�xQRö�pª�
,�Ü
� ¡¢ £¤[[
F�
¥d���E�
55ŧC¦ Z¼øúøDú]Y_XZ
5Å� ½BY
E73E73
T70T70
E384E384 M138M138
M152M152V156V156
D219D219E216E216
T70
E384 M138
M152V156
D219E216E73
� �459íb20ï¾��1/6H
jklmz�L�Ãö>���<áù/�¿À
���3ïVW��òbÏWL�,I
� �45S��üÕü!
��¿q�g ÀÁ0wszÁ�ÁÂöÃ�Ä7Ål�
Æ�4ÃÇîa�� 5Å�H¨�Ãý�
�ÁǼqÉzÊqwÐq
r��c@4G
Z
À 0
? Æm� �� ��������
4Ã�?���kl�¸Ä����ÈÉgÕ
��¿q��?AgÕ
-./.pÙ.sz
� ���� ü�8ü
A×&Í vò ������$xt�t¸x��t¸
�Á0Êq¯YôB
�JÜ ���?¬p+������
� ¡¢ £¤�FD ¥����E�
F�
��ë�� Ë¥�>��� ��0¿ÏÌz0Ðq����QÈÌ�¯��
� ¡¢ £¤��D
F�
¥{���E�
������� ��ò Ã�� �ÀÊÀxt©t¸�
��î� ?ÍÎ��� �H�B�A�)*X¿k?�Ïn�ò+���L��ö>���� ^�ix�Ó�x�ð��
#�î� ?ÍÎ��� �H�B}.ÁuzÁ��Ïn�ò+���L��ö>� ���� ^�ix�Ó�x�ð��
g�î� ?ÍÎ��� �H�B�öÐ}.ÁXÁ¼zÁ��ò+���L��ö>��a� ^�ix�Ó�x�ð��
î�X¿k)°Ñ�?ÍÎ��� �H�B}.ÁX¿q���ò+���L��ö>� �a� ^�ix�Ó�x�ð��
a�GgCò��Ò æÒ ����� H�Bsq?���ò+���LüCö>��a� ^�ix�Ó�x�ð��
Ó�Ò æÒ ���X¿k)°Ñ��� �H�B]|�0}X¿k?���ò+���L��ö>� �g� �·x�ð��
Ô�u}0jþz\��� �LÃ�B]|�0}X¿k?���ò+���L��ö>��Ô� ^�ix�Ó�x�ð��
Õ�Ib��� �LÃ�BAÖ×Ø?���ò+���L��ö>� �a� �^��ix�Ó�x�ð��
Ù������ �LÃ�B}.Á�?×Ø?���ò+���L��ö>� �#a ^�ix�Ó�x�ð��
���z-z}0|m{�l�z\¶0wP�lCDEF�?� �ÏË��íbHÚLOB6�L�ö>�
#��$����«ÝÞßò�®�,��Hx.¼Àz\�m{âz�zíbL�ìö>�
g�XÁ¼zÁÛ� � �M� � bL45OB��L��ö>�
î�ÀÁÜZÁÍÎ� xÌn{qÍÎ� xX¿k)°Ñ� xÒ æÒ ��N,� x.¼Àz\xCDEF½k}0jþz\x
×Ø?AÖ� ��Ý�xöÝ�xIb�`º�9>` �L¨�� L�ìöx67�LÃ�B� J�ò+����
)�LC�>�
Þß�Ã�ò�HPQ+JÞ� ü,� ��Ðqß�H�B� ��� ¬p+����H��&Ã
X]ø\^DZø\Bæù_úæCZXøúDû�XùC���� � /`� `º�Lß�ö>�X]ø\^DZø\B���Ò�
�ù_úæCZXøúDûc
&ÃÌÍÁ��ò+�����
��� �íÃ�>��)�����
� ¡¢ £¤�¥¥
F�
¥[���E�
Ûܧ�íÃH�B9:«ÝÞßò�����ø7gà¯YôB�stt¸�
�)*�º��+á��òbÏW
ââ50ï��òbÏWL�
,
�òµ��Ðk��L¬ã�,
�)*�º��+á���äå
� ¡¢ £¤�D¥
F�
DF���E�
D����E�
��!�q-P+ü!H�B��� ��Ã�>����)������
�b�c@de DGF4 Ã�Äb§�R. opacus B4��K. rhizophila DC2201�
"#J+�tzlü!����&Í
ËiJ+�tzlü!����&Í
�0мwæq+�tzl�ç+Ç|��npqæz+sqw��ÝÎP��w�.n�â|�qoü
�ߥJËi��«ÝÎÈÌèÎï¸Ëi�æ�q-P+QÒ
� �b¯
E�¯x �éê¯
µ¶
DGF×Ë�q-P+�Ü1382R. opacus B4�×Ë�q-P+�Ü3159K. rhizophila DC2201�×Ë�q-P+�Ü1446
R S x�9:¬p+���HSTB§A� ��Þß�ëmz��ìN�NBRCH�B? �ìN
9:¬p+����&!
ò �Ã
Þß5x�b� ��ü!
+�tzlü!��
+�tzlü!Lkl�Ðk��L�,�
� ¡¢ £¤�E¥
F�
��nw¬p��������=>��ò ���� ü�wXgÛ��¬p�âþuz íî,�{»�[��ï
�ðñò íî,�{»�[��ï
�ó�âô��$ íî,�{»�[��ï
¬p¼q¬zuÐq������=>��ò ���� ü�RITE��sÌ
g�¬psnopþsz�����
� ¡¢ £¤�d¥
F�
D����E�
gg�¬psnopþsz�����
íx��� �õÉï�u>��t¸ ö÷ øù )* ¨�z-z�Á.z\�fgª�ÀsnúÁZXt¸mz��û wúû�b¦�Ùú_�)* �î,�{»�[���
¨�Á��zlüÕ��!� �ü!ª��üë��z��$ tu ·� $^
¨��jklJ��H�B¬¬psnopþsz� ª�ýò·t¸ þ� � )*
¨�¦a[¼øZ�_X¼��HSTBÎÁ�q?}þz\íb5I¯�²f�ü!ª�stÒ t¸ �= ¹ø w)*
¨¼sÊ�d§�¦a[¼øZ�_X¼���dde|� ü�ü!ª
íî,�{»�[��ï�sýt¸ �� �¡ )* ¨������nw¬p��<78��ª
���t¸ �� �� )*¨�¿H�Bbgf���ë���Á.z\�� �ª
�5t¸t¸. âE �� )*¨��yÇ������ë��9:�PszZq��ª
���t¸ � �ù )*¨�§�éÅ��q-P+�oh�ò��i���HvOB)���ª
A×&Í����²³
� ¡¢ £¤�d¥
F�
D¥���E�
ÒÒ ����� ��A×��
|��� �¬p+���»¼sÊ�d§�Þß45»
¬p��¤���
�C6, C5�
C3»C6����ò0�tl�üC
-4 ?�D-ç?�- X¿k?�L-X.Zqx¬sq�-XÁ¼zÁ�}0swzÁ�
�szq¸ÄoE)�÷ �����
¬p��¡�4ë�Ã-���C6xC5��^@×R�Ã- “���û�+�H¹OBÄb
�9J�òbÏW-Þß ��}-Þß-./�!ÌÍÁ�Ðq
de ��ß�Jüø-²«`W�Þß��ü!--./ʼw�zP�ü!-de|�HvOBü!
��òb
§A
�Ó
���¡��
�Ì���|��è�
�i�§A
�ò�
Þß0nwH�B�Ã�a�X¼+:�ðVW �?¯
=>��ò ���� üRITE
� ¡¢ £¤�d¥
F�
DD���E�
� ¡¢ £¤�FE
F�
DE���E�
�����G� Ö � óÖ � Ç � �
£�b�c@de
fg��
�4�+g�
�Ò J4Ã���
�I$�q-P+�gÕ�
�d§�ç ���
�Ò J4Ã���
45���
�I$�q-P+�gÕ�
�ç?gÕ�
¥��������� ���
�9:�!ÍP�z
��?� 4G
�o/0¿ÏÌz0Ðq
+��.l
�9:Û� �
�?ÍÎ� 5IA
�o/0¿ÏÌz0Ðq
+��.l
�9:Û� �
��)*�º��+gÕ��
«¬psnopþsz��
�4 ��g��
�d§N+°ÅA
�����H�B¸ÄgÕ��
�d§N+°ÅA
�����H�B¸ÄgÕ��
� ¡¢ ÆKã�E
������,�H��� (3)eJ!ò"3�²f F�
D¦� @`H#
Dd���E�
�����G�H#
���
H#
�óÖ�
H#
����
$¡
�%&K�
óc�'3
£�b�c@de
fg��g� # Ô Óî Ùg
¥������� �� ��� �î F Ô �î� #ÕÔ
«¬psnopþsz�� ÓÓ �g �# ��Õ g#�
� ¥ ��� �a #Ó g�# Ô��
� ¡¢ ÆKã��F
������,�H��� (3)eJ!ò"3�²fx(4),��(� F�
D¦� H#x$¡x¸ô�'�+Ì��'�&è
D����E�
��&Ã�� �ì¸öH��� (1),��&Ã��b F�
D{���E�� ¡¢ )¤�
D¦¥ &Ã�� �ì¸öH������
����b�c@defg�����
�}sq
�t�§ÙaC23Aѯ9�+�ò
�ócÇ.p�q�XUw
�XÀm¿X��Áz+Ç�oLL¥*
��
�¦�§waC� �bc@de9�Á.z\++�tXz\`º�ò Ã� ®I$�q-P+�Ò �ò
�ócÇ.p�q�XUw
��/
�o¾�¿XaC9I$�q-P+�òÈÉ�uÊ�
�ócÇ.p�q�XUw
�FJ���§¯o, vLíÃö�c@®-..pÙ.szL/�JH?0�o,
� ¡¢ )¤¥
//p�Á¸�4 Ã�ÄbÙ���F�H�$� -./LMNöx4 Ã����9;�Ãb��L¡�Hö>klÄâ�A3��òL¥»E�eH&Ã
�Á0Êq��?��¿q�dMA�gÕ�³´H?4OBCDEF�?� -./.pÙ.szLíÃöx�$4Ã�?���ÈÉgÕÇý�
���
�ºAx� xX+��zL�Ãö>¬p�q1z���â���2�Ç�Ã
�gl� ®¸v�� HÏT>ü!1z��®¼q1Át{q�� Lý�
ÀÊÀ��)*X¿k?�ò+���`º&ÃÌÍÁH�ö>+���L+�uvPwkle��V�HÒ :�9&Ã
ø7gà��)*�º��+����òH���xhg+�����exg�eV3H�ò&Ã
F�
D¦D¦ &Ã�� �ì¸öH����#�#���������� ������
D[���E�
��&Ã�� �ì¸öH��� (1),��&Ã��b
� ¡¢ )¤E
F�
D¦E &Ã�� �ì¸öH����g�
g�¬psnopþsz�����
wXgÛ�Ö�� �x|��� �¬p+���H�B�$¸Ä�å��Ò ��L&Íâ���V�H&ÃWË�
sÌ�æ�Ã��hg0�tlL4 ?VóǨ�Ã��`ÂÃb������ò0�tl�ö��ý�LQR
�45J`�¾zÁX¼+&'Lp�x&Ã�� Ç
EF���E�
��&Ã�� �ì¸öH��� (1),��&Ã��b
F�
¬p+�����òbÏW�qÃrsÈt
uã6� Bô���Û7
;ÃÈt
�����
A�ò 0�tl�üC
Õ¶Ö¶.ßJH}WL¯�
���� ��
�¬p������ë�5Å��
���������� � ���
�HIJ-./�����yzt{st{z �|}
D¦d 2�ë�H���
� ¡¢ 8¤� E���E�
��&Ã�� �ì¸öH��� (2)2�ë�