Trad. Med. J., May 2013Vol. 18(2), p 118-120ISSN : 1410-5918

Traditional Medicine Journal, 18(2), 2013118

Submitted : 01-03-2013Revised : 21-04-2013Accepted : 15-06-2013DETERMINATION OF ALKALOID CONTENT OF ETHANOLIC EXTRACT

OF Hibiscus rosa-sinensis L. FLOWER

PENETAPAN KADAR ALKALOID DARI EKSTRAK ETANOLIK BUNGA KEMBANGSEPATU (Hibiscus rosa-sinensis L.)

Mimiek Murrukmihadi*, Subagus Wahyuono, Marchaban, Sudibyo MartonoFaculty of Pharmacy, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, IndonesiaABSTRACT

Kembang sepatu flower (Hibiscus rosa-sinensis L.) was fractionally used as expectorant. Based onBioassay Guided fractionation, an active fraction was separated, and the fraction was identified is Alkaloidwas the major compound based on TLC analysis. Viscosity value measured by viscometer was used as aBioassay model of expectorant activity in vitro and asetyl cysteine was used as positive control. Alkaloidcontent determination of the ethanolic extract was measured by TLC-Densitometric compared with standardcurve of isolated alkaloid as the selected marker (Y=12.1360X+2901.4474). The alkaloid content in theethanolic extract was determined as 2.35 0.67 %.

Keywords: alkaloid, ethanolic extract, Hibiscus rosa-sinensis L.

ABSTRAK

Bunga kembang sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L.) secara tradisional digunakan sebagai peluruhdahak. Berdasarkan atas Bioassay Guided Fractionation, fraksi aktif berhasil dipisahkan dan alkaloidmerupakan kandungan utama fraksi. Oleh karena itu alkaloid digunakan sebagai senyawa penanda(marker) ekstrak etanol Hibiscus rosa-sinensis L. Nilai viskositas digunakan sebagai model untuk aktivitaspeluruh dahak, dengan asetil sistein sebagai kontrol positif. Selanjutnya penetapan kadar alkaloid dalamekstrak etanol dilakukan secara KLT-Densitometri (n=5), kadar alkaloid dibandingkan dengan kurva bakudari alkaloid (marker) hasil isolasi (Y=12,1360X+2901,4474). Kadar alkaloid dalam ekstrak etanol kembangsepatu (Hibiscus rosa-sinensis L.) sebagai 2,35 0,67 %.

Kata kunci: alkaloid, ekstrak etanolik, kembang sepatu

PENDAHULUANHerbal merupakan obat alternatif yangtelah dimanfaatkan oleh nenek moyang. Salah satuyang digunakan adalah bunga kembang sepatu(Hibiscus rosa-sinensis L.), sebagai peluruh dahak(Anonim, 1985). Untuk mendapatkan efek yangkonsisten, ekstrak harus terstandar dan dapatmenjadi referensi material bagi peningkatanproduk herbal Indonesia (Eye, 2007).Murrukmihadi (2009) menyatakan bahwadidalam ekstrak bunga kembang sepatu terdapatalkaloid dapat digunakan sebagai marker untukstandar produk bunga kembang sepatu. Senyawamarker dapat sebagai senyawa aktif, penandaanalitik maupun penanda negatif. Bunga kembangCorresponding author : Mimiek MurrukmihadiE-mail : mimiekmurrukmihadi@ymail.com

sepatu dilaporkan dapat digunakan sebagai obatbatuk (Dalimartha, 1999), sehingga alkaloid dalamkembang sepatu dapat digunakan sebagaimarker/senyawa penanda.Penetapan kadar suatu senyawa dapatdilakukan dengan mengukur kerapatan noda darisenyawa yang bersangkutan dan telah dipisahkandengan cara kromatografi lapis tipis denganmenggunakan KLT-Densitometer. Penampakannoda menunjukkan hasil positif alkaloid denganmunculnya noda berwarna jingga-kecoklatanlempeng KLT ketika ditampakkan denagn pereaksiDragendorff. (Anonim, 2000).METODOLOGIBahanBunga kembang sepatu dipetik dari tamanGraha Sabha Pramana, Universitas Gadjah Mada,Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta, dandiidentifikasi di Bagian Biologi Farmasi, Fakultas

Mimiek Murrukmihadi

Traditional Medicine Journal, 18(2), 2013 119

Farmasi, Universitas Gadjah Mada pada bulanSeptember sampai dengan Oktober tahun 2008.Bunga kembang sepatu dicuci dan dikeringkandengan oven yang temperaturnya diatur antara40-50 0C. Bunga kering diserbuk dan disimpan dialamari es (40C) sampai saat untuk diekstraksi.Ekstraksi untuk Penetapan Kadar AlkaloidEkstraksi isolat untuk penetapan kadardilakukan berdasarkan penelitian yang sudahdilakukan (Murrukmihadi, 2011).Penentuan kadar alkaloidPembuatan kurva baku alkaloidPembuatan kurva baku alkaloid dilakukandengan cara 390 mg isolat kering dilarutkandalam metanol 1 mL (larutan stok), kemudiandibuat seri konsentrasi 24, 49, 98, 130, dan 293g/L, dengan volume penotolan 15 L. Carapembuatannya yaitu, dari larutan stok diambil 751L dilarutkan dalam metanol sampai 1 mL,sehingga didapat konsentrasi 293 g/L (dalam15 L berisi 293x15=4395 g). Dari larutan inidiambil 500 L dilarutkan dalam metanol sampai1 mL, kemudian diambil 667 g/L dilarutkandalam metanol sampai 1 mL, sehingga didapatkonsentrasi 130 g/L (dalam 15 L berisi130x15=1950 g). Kemudian diambil 500 Ldilarutkan dalam metanol sampai 1 mL, didapatkonsentrasi 98 g/L (dalam 15 L berisi98x15=1470g). Dari larutan ini diambil 500 Ldilarutkan dalam metanol sampai 1 mL, didapatkonsentrasi 49 g/L (dalam 15 L berisi49x15=735g). Terakhir diambil 500 L darilarutan tersebut kemudian diencerkan denganmetanol sampai 1 mL, sehingga didapatkonsentrasi 24 g/L (dalam 15 L berisi24x15=360 g).Penentuan alkaloid dalam ekstrak etanolikPenentuan alkaloid dilakukan dengan caramenimbang ekstrak etanol 3 g dilarutkan dalam 1mL metanol dan ditotolkan pada pelat KLTsebanyak 5 kali replikasi dengan volume masing-masing 10 L.Setelah pengembangan pelat KLT, bercakyang diperoleh diukur dengan KLT-Densitometeruntuk mendapatkan AUC.Analisis HasilData luas area yang didapatkan dari isolatdibuat persamaan regresi linier sebagaipersamaan kurva baku. Persamaan garis kurvabaku : Y = a+bx, dengan Y = AUC, X = kadar isolat(g/15L). Harga AUC sampel kemudiandimasukkan ke dalam persamaan garis kurva

baku, maka didapatkan kadar dari masing-masingsampel (persen kadar alkaloid dalam ekstrak).HASIL DAN PEMBAHASANPembuatan kurva bakuPenentuan panjang gelombang dilakukanpada scanning panjang gelombang 200-700 nmuntuk senyawa alkaloid dan memberikan makspada 200 nm. Tabel 1 menunjukkan kadar isolatversus AUC hasil densitometri untuk kurva bakuekstrak.Tabel I. Nilai Kadar Isolat vs AUC hasildensitometri untuk kurva baku ekstrak

No Kadar baku(g/L)Kadar baku

dalam 1 15 L AUC1 24 360 9928,62 49 735 12034,43 98 1470 18605,24 130 1950 24416,75 293 4395 57654,4Keterangan : Persamaan garis regresi kurva baku adalahY =12,1360 X + 2901,4474r = 0,9939, X = kadar alkaloid (g/ 15L), Y = AUCKenaikan konsentrasi atau kadar isolattertentu sebanding dengan kenaikan nilai AUCpada densitometer. Hal ini sesuai dengan apa yangdidapat, semakin tinggi kadar isolat, semakinbesar AUC (Tabel I). Setelah dilakukanperhitungan secara regresi liniair, maka didapatpersamaan garis regresi liniair sebagai kurva bakualkaloid yaitu Y =12,1360 X + 2901,4474 dengan r= 0,9939. Linieritas merupakan salah satuparameter untuk menilai kesahihan metodeanalisis dengan melihat nilai hubungan respondari berbagai konsentrasi zat baku pada suatukurva baku yang dilihat sebagai nilai koefisienkorelasi (r).Penetapan kadar alkaloid dalam ekstraketanolSampel ekstrak sebesar 3 g dilarutkandalam metanol sampai 1 mL, sehingga didapatkankonsentrasi 3 mg/L. Sebanyak 10 L ditotolkan(n=5) pada plat silika gel F254 (Merck) tebal 0,25mm sebanyak lima replikasi. Kemudian plat KLTdikembangkan dengan fase gerak etilasetat:metanol (1:5 v/v).Karena bercak yang diharapkan tidakterdeteksi dengan UV 254 maupun 366 nm, makabercak ditandai pada tepi plat sesuai dengan KLTisolat yang telah dilakukan sebelumnya dandideteksi dengan pereaksi semprot Dragendorff.Bercak yang telah ditandai atau sesuai Rf denganDragendorff ditentukan AUC (luas dibawah kurva)

DETERMINATION OF ALKALOID..

Traditional Medicine Journal, 18(2), 2013120

pada maks 200 nm menggunakan KLT-Densitometer.Nilai AUC sampel ekstrak etanolik bungakembang sepatu dengan kadar 30 mg/ 10L. NilaiAUC replikasi sampel memenuhi rentang nilai AUCpada isolat yaitu pada 9928,6 hingga 57654,4(Tabel II).Tabel II. Nilai Kadar alkaloid dalam sampel ekstraketanolikNo Kadar(mg/10L) AUC Kadar (%)1 30 21725,7 3,452 30 16560,2 2,503 30 12729,6 1,804 30 15516,2 2,315 30 12156,1 1,70X 2,35SD 0,67Tabel II menunjukkan bahwa dalam ekstrak etanolikbunga kembang sepatu terdapat alkaloid yang dapatdiisolasi dan sebagai senyawa penanda dengan kadarsebesar 2,35 0,67 %.

KESIMPULANBunga kembang sepatu memilikikandungan alkaloid yang dapat diisolasi dan dapatdijadikan sebagai senyawa penanda. Kadaralkaloid dari ekstrak etanolik bunga kembangsepatu adalah 2,350,67%.

DAFTAR PUSTAKAAnonim, 1985, Tanaman Obat Indonesia, Jilid I,Departemen Kesehatan Republik Indonesia,Jakarta.Eye, 2007, Memodernkan Obat Tradisional dariTanaman, Republika, 23 November 2007 citAnonim, 2007, Memodernkan ObatTradisional dari Tanaman,http://www.kimia-lipi.net/index.php?pilihan=berita&id=58, 1Juli 2009.Murrukmihadi, M., 2009, Aktivitas MukolitikEkstrak etanolik dan Fraksi Aktif BungaKembang Sepatu (Hibiscus rosa-sinensis L.)pada Mukus Usus Sapi secara InVitro,Laporan Penelitian Program HibahPenelitian Berkualitas Prima FakultasFarmasi Universitas Gadjah Mada,YogyakartaDalimartha, S., 1999, Atlas Tumbuhan ObatIndonesia. Ungaran : Trubus Agriwidya.Anonim, 2000, Parameter Standar Umum EkstrakTumbuhan Obat, Cetakan Pertama, 3, 9-11,Departemen Kesehatan Republik IndonesiaDirektorat Jenderal Pengawasan Obat danMakanan Direktorat Pengawasan ObatTradisional, Jakarta.Murrukmihadi, M., 2011, Isolasi dan PenetapanKadar Alkaloid Dalam Ekstrak Etanolik,Fraksi Tidak larut Etil Asetat dan FraksiHasil VLC Dalam Bunga Kembang Sepatu(Hibiscus rosa-sinensis L.), 2011,Disampaikan pada Kongres Ikatan ApotekerIndonesia di Manado.