28-视频密度测量法对GFP表达的评价

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视频密度测量法对 GFP 表达的评价


生物学背景

GFP 绿色荧光蛋白已经成为现代遗传学研究中一个非常重要的工

具。它最初发现于一种生活在深海的维多利亚水母中，是目前为止唯一

一种天然的荧光蛋白。当用蓝光（489nm）照射时，该蛋白可以发出波

长为 511nm 的绿色荧光。通常情况下，修饰过的 GFP 基因已经被广泛

应用于现代分子生物学研究当中，具备了更多的特性，并可以放出不同

波长的荧光（例如增强型绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白和黄色荧光蛋白）。

LemnaTec Scanalyzer 技术除了能够进行广泛的生物学应用以外，还

可以通过于视频密度测定技术，检测 GFP 表达生物所释放出来的荧光，

该技术是基于数字图像分析基础上完成的。

硬件

LemnaTec Scanalyzer 系统能够获得极佳的数字图像，并能同时满足实验室特殊环境条件的需求。为

了获取高质量的真彩图像，一个高分辨率的数字相机是必需的，再加上反射抑制照明设备，就构成了数

字精确图像分析的基本组成部分。为了实现视频密度测定，LemnaTec Scanalyzer 还专门配置了一个可选

的 GFP 成像装置。通常情况下，利用一个冷光源和蓝光滤光镜激发荧光，还可以选择一个特殊的滤光镜

用于背光条件下的测定。

带有荧光标记植株的原始图像

由于 GFP 荧光的检测过程需要低强度、高灵敏度条件下（通常由价值昂贵的冷却式 CCD 芯片相机



完成）进行，因此带有适配滤光镜的高灵敏度成像系统常被被用作 GFP 荧光的检测器。LemnaTec 采用

现代、经济的相机技术，联合图像放大软件，有效降低了图像采集的成本。

软件

基于像素亮度和伪色图像，LemnaTec 软件便可以确定 GFP 荧光的强度，即使非常微弱的差异也能

够得以显现，从而快速、方便的对植物中 GFP 的分布进行鉴定。通过缩放图像面积，并会确定一个数值，

该值与样品 GFP 表达量密切相关。最后，数据可以导出为 MS-Excel 文件、HTML 文件或者标准 Text 文

档。这样，一个快速而可靠的 GFP 表达量测定就完成了。

强度

高低

荧光强度的伪色图像



生物体面积上荧光强度等级（百分数表示）

一直以来，LemnaTec Bonit 软件的设计理念始终是以最短的时间测定最大量的样品，并与 LemnaTec

Scanalyzer HTS 完美结合，承担着主要的成像任务。此外，Scanalyzer 系统还配有一个条形码阅读器，以

便日后更高效的处理更多样品。软件操作简便，数据真实可靠，符合实验室安全管理规范，用户需要通

过密码才能访问数据。通常情况下，原始数据（数字化图像）会和 GLP 相关数据一同保存，并且在处理

过程中不会发生丝毫改变。总之，与 Scanalyzer 系统相结合，Bonit 软件被认为是 GFP 表达半定量评价

的理想工具。

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