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Quim. Nova, Vol. 33, No. 9, 1967-1972, 2010

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DESENVOLVIMENTO DE MTODO ANALTICO PARA QUANTIFICAO DO EFAVIRENZ POR ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-VIS

Lariza Darlene Santos Alves, Larissa Arajo Rolim, Danilo Augusto Ferreira Fontes e Pedro Jos Rolim-Neto*Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Rua Arthur de S, s/n, 50740-521 Recife PE, Brasil Mnica Felts de La Roca Soares e Jos Lamartine Soares SobrinhoDepartamento de Bioqumica e Farmacologia, Universidade Federal do Piau, Campus Universitrio Ministro Petrnio Portella, 64049-550 Teresina PI, Brasil

Recebido em 29/11/09; aceito em 13/4/10; publicado na web em 20/7/10

UV-VIS SPECTROPHOTOMETRY ANALYTICAL METHOD DEVELOPMENT FOR QUANTIFYING EFAVIRENZ. An UV-Vis spectrophotometry analytical method for quantifying Efavirenz was developed and validated as an alternative to replace the HPLC current method. The report method presents sample concentration of 10 g mL-1, dissolved in a solution ethanol:water (60:40, v/v), economic and technically adequate for the purpose adopted. The results and the statistical treated proved that the method being considered an precise and accurate analytical low cost alternative for laboratory routine. The adaptability of this method in product and other analytical methods development has been challenged by mathematical calculation of drug extinction coefficient in water and methanol and practical experiments, showing interesting results.

Keywords: UV-Vis spectroscopy; Efavirenz; analytical method.

INTRODUO

O Efavirenz (EFZ) um frmaco inibidor da transcriptase re-versa no nucleosdico, utilizado desde 1998 em associao com outros agentes antirretrovirais no tratamento da infeco pelo vrus da imunodeficincia humana.1 Atualmente utilizado por cerca de 75 mil das 200 mil pessoas em terapia antirretroviral no Brasil, che-gando a representar um custo de US$ 42.930.000 em 2007. Contudo, o licenciamento compulsrio, ocorrido no final deste mesmo ano, possibilitou ao Brasil a produo nacional do medicamento, garan-tindo o acesso universal a um nmero cada vez maior de pacientes, reduzindo custos e viabilizando a sustentabilidade do Programa de Doenas Sexualmente Transmissveis.2

No Brasil, assim como em grande parte do mundo, este frmaco considerado como de primeira escolha, associado aos frmacos zidovudina e lamivudina na terapia antirretroviral; exceto para ges-tantes e crianas menores de 3 anos. Essa opo est fundamentada na elevada potncia da supresso viral, comprovada eficcia a longo prazo e ao menor risco de efeitos adversos.2

Na literatura cientfica internacional, diversos mtodos anal-ticos para a quantificao do EFZ so preconizados utilizando-se cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) do frmaco isolado e na forma farmacutica cpsula,3 assim como em plasma na forma isolada e associado a outros antirretrovirais.4-14 Contudo, nenhum mtodo analtico por espectrofotometria de absoro no ultravioleta visvel (UV-vis) foi relatado.

Esta tcnica reconhecida pelas vantagens relacionadas ao seu uso, sendo utilizada principalmente no controle de qualidade na inds-tria farmacutica, que exige rapidez e confiabilidade nos resultados.15 Alm disso, possui baixo custo operacional, sendo de fcil utilizao e produz resultados de interpretao bastante simples.16

Paralelamente, a necessidade de proporcionar qualidade s medi-es qumicas est sendo cada vez mais reconhecida e exigida.15 Logo, para garantir que um novo mtodo analtico gere informaes confi-veis, o mesmo deve passar por uma avaliao denominada validao.

A validao um processo contnuo que comea no planejamento da estratgia analtica e continua ao longo de todo o desenvolvimento e transferncia de um mtodo. Para registro de novos produtos, o rgo regulador do Brasil, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA), e o dos Estados Unidos da Amrica, o Food and Drug Ad-ministration (FDA), exigem a validao das metodologias analticas e, para isso, so estabelecidos documentos oficiais que direcionam os critrios a serem adotados nesse processo.17

Logo, a validao tornou-se uma ferramenta de qualidade e no mais um proforme inflexvel e automatizado. Com o desenvolvi-mento do setor de Desenvolvimento Analtico dentro do Controle de Qualidade, os tcnicos ganharam flexibilidade para adaptar os mtodos antigos, investigar desvios da qualidade e/ou desenvolver novos mtodos para os frmacos de interesse.

Na atualidade, o fundamento da tcnica analtica e a aplicao de equaes conhecidas acelera a investigao e otimizao dos mtodos e prticas aplicadas. Aplicando-se o clculo de absortividade molar ao mtodo desenvolvido e validado para o frmaco EFZ pode-se relativizar qualquer resultado gerado em absorvncia para qualquer sistema de solvente empregado, gerando agilidade e flexibilidade ao setor de Desenvolvimento Analtico.

Portanto, esse estudo descreve o desenvolvimento e a validao de um mtodo analtico para quantificao da matria prima EFZ, de forma que o mtodo atenda s exigncias da International Conference on Harmonization (ICH Q2A e ICH Q2B)18,19 e da ANVISA (RE n 899 de 2003),20 conferindo praticidade, confiabilidade e baixo custo para a utilizao deste mtodo na rotina laboratorial da indstria farmacutica.

PARTE EXPERIMENTAL

Material e mtodos

Matria-prima, reagentes e vidrariasPara as etapas correspondentes ao desenvolvimento do mtodo e

sua validao, foram utilizadas a matria-prima EFZ (Cristlia, lote: 1289/07, teor 98.00%) e o seu respectivo padro de trabalho (Xiamem

Alves et al.1968 Quim. Nova

Mchem, lote 050501, teor 98.32%) e a matria-prima zidovudina (Northeast lote: DY 070041, teor 97.88%) para a determinao da especificidade do mtodo desenvolvido. Os reagentes utilizados foram acetonitrila (Vetec, lote 0806979); metanol (Cintica, lote 11850); lcool etlico absoluto (Dinmica, lote 30065 e Vetec, lote 0806654); cido clordrico (Dinmica, lote 10023) e gua ultrapuri-ficada obtida por Milli-Q Millipore (Milli-Q System, Massachusetts, USA). Utilizaram-se vidrarias volumtricas calibradas com certifi-cado de calibrao por lote do fabricante Satelit.

EquipamentosOs equipamentos utilizados foram balana analtica Bioprecisa,

modelo FA2104N; espectrofotmetro UV-Vis B582 Micronal; agita-dor magntico SBSR e ultrassom 1.500 Barnson (70 W de potncia). Para a reprodutibilidade foram utilizados os seguintes equipamentos: balana analtica CT 225 Sartorius; espectrofotmetro UV-Vis modelo 50 Vankel e ultrassom 2.510 Barnson.

Desenvolvimento do mtodo analtico Primeiramente realizou-se um teste de solubilidade (a 25 C)

com diferentes solventes (gua, lcool etlico absoluto, metanol, acetonitrila e cido clordrico 0,1 M), de acordo com a Farmacopeia Brasileira.21 Neste estudo observou-se o comportamento do frmaco em diferentes solventes, com objetivo de definir a melhor soluo diluente para o mtodo analtico desenvolvido. Para tal, levou-se em considerao o poder de solubilizao do frmaco, custo e toxicidade do solvente e a sensibilidade do frmaco frente ao comprimento de onda utilizado. Diante disto, realizou-se uma varredura na faixa de 200 a 700 nm nos diferentes sistemas de solventes propostos (Tabela 1), para a identificao do comprimento de onda que apresentaria o valor de absorbncia mais adequado para o mtodo. A calibrao do equipamento espectrofotmetro foi realizada atravs de padres de referncia rastreados pelo National Institute of Standards and Technology (NIST).

Posteriormente foram realizadas comparaes entre as amostras obtidas pelas tcnicas de agitao por ultrassonicao e agitao mag-ntica (ambas sem aquecimento), paralelamente variao do tempo de agitao (5, 10 e 15 min para ultrassonicao e 10 e 15 min para agitao magntica). Alm disso, realizou-se a verificao da estabi-lidade das amostras, no sistema de solvente escolhido, avaliando-se o aspecto visual e a absorbncia das mesmas, preparadas em triplicata no intervalo de 0, 24 e 48 h, na presena e ausncia de luz.

Preparao da soluo amostra

As amostras de EFZ foram analiticamente pesadas e solubilizadas em lcool etlico absoluto, ultrassonicadas por 10 min, obtendo-se uma concentrao final de 500 g mL-1, aps aferio do balo volumtrico. Uma alquota foi retirada dessa soluo para diluio,

utilizando-se como sistema de solventes lcool etlico absoluto:gua purificada (60:40, v/v), obtendo-se uma concentrao final de 10 g mL-1. As amostras foram preparadas em triplicata e lidas no compri-mento de onda de 247 nm.

Preparao da curva controle

Partindo da soluo estoque do padro de EFZ (500 g mL-1), foram realizadas diluies com o sistema lcool etlico absoluto:gua purificada (60:40, v/v) para a obteno das seguintes concentraes: 8, 10 e 12 g mL-1. A curva controle foi preparada diariamente e utilizada para os clculos das concentraes.

Validao do mtodo analtico

Parmetros avaliadosNo processo de validao desta metodologia analtica foram

avaliados os seguintes parmetros: robustez, linearidade, intervalo, limite de deteco, limite de quantificao, preciso, exatido e es-pecificidade, de acordo com as normas estabelecidas pelo ICH18,19 e pela RE n 899/03 (ANVISA).20

A confiabilidade dos parmetros avaliados pode ser observada pelo coeficiente de variao (CV%) ou desvio padro relativo de uma srie de medidas. Para cada parmetro avaliado, foi determinado um CV% menor que 5%20 e tratados estatisticamente por Anlise de Varincia (ANOVA) One-Way e teste t de Student com um nvel de significncia de 95%.

O ensaio para determinao da robustez foi realizado a partir da variao dos seguintes parmetros: fabricante do lcool etlico ab-soluto (Dinmica e Vetec), influncia da luminosidade (presena e ausncia de luz) e tempo de preparao das amostras (0, 1, 2, 3, 4 h).

A linearidade do mtodo foi verificada a partir da anlise de trs curvas autnticas nas concentraes de 5, 8, 9, 10, 11, 12 e 15 g mL-1 de EFZ. Os resultados obtidos foram tratados estatisticamente atravs do clculo de regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados. Tambm foram estimados os limites de deteco (LD) e quantificao (LQ) de acordo com as equaes LD = DP x 3/IC e LQ = DP x 10/IC, onde DP o desvio padro do intercepto com o eixo do Y obtido com as trs curvas de linearidade e IC a mdia dos coeficientes angulares das respectivas curvas. Para calcul-los, foi considerado o desvio padro da reta com relao absorbncia do primeiro nvel de concentrao de EFZ das trs curvas de calibrao. Apesar desses parmetros no serem considerados como requisitos necessrios para testes da categoria I de validao (Testes quantitati-vos para a determinao do princpio ativo em produtos farmacuticos e matrias-primas),20 os mesmos foram realizados para a utilizao em uma posterior validao de limpeza de equipamentos.

A preciso do mtodo foi avaliada nos nveis de repetitividade (preciso intracorrida), preciso intermediria (preciso intercorridas) e reprodutibilidade (preciso interlaboratorial). A repetitividade foi verificada por 6 determinaes individuais a 100% da concentrao teste (10 g mL-1), analisadas em um pequeno intervalo de tempo. Para o parmetro preciso intermediria, 3 rplicas foram analisadas variando-se os dias e os analistas, ambas tambm na concentrao de 100%. A reprodutibilidade foi realizada em dois laboratrios diferentes em triplicata de amostras.

A exatido foi definida atravs da manipulao de amostras preparadas em triplicata nas concentraes de 80, 100 e 120% da concentrao terica do EFZ, sendo determinada aps o estabeleci-mento da linearidade e intervalo do mtodo.

O parmetro especificidade foi verificado atravs da contamina-o da soluo me de 500 g mL-1 de EFZ com 1 mg do antirretroviral zidovudina, com o objetivo de observar a especificidade do mtodo

Tabela 1. Sistemas solventes utilizados na preparao da soluo me de 500 g mL-1 (1 diluio) e da soluo amostra de 10 g mL-1 (2 diluio)1a diluio 2a diluiometanol metanolmetanol lcool etlicometanol sistema de diluio (lcool etlico:

gua purificada, 60:40, v/v)lcool etlico lcool etlicolcool etlico metanollcool etlico sistema de diluioacetonitrila gua purificada

Desenvolvimento de mtodo analtico para quantificao do Efavirenz 1969Vol. 33, No. 9

frente a uma possvel contaminao, j que ambos so manipulados na mesma rea de produo de uma indstria. A soluo me conta-minada foi diluda para se obter uma soluo na concentrao de 10 g mL-1. Tambm foi preparada uma soluo amostra no contamina-da, contendo apenas o EFZ na mesma concentrao e outra soluo numa concentrao de 0,2 g mL-1 de zidovudina, correspondente concentrao final deste frmaco na soluo contaminada de EFZ aps diluio.

Determinao da absortividade molar

A espectrofotometria fundamentada na lei de Lambert-Beer, que a base matemtica para medidas de absoro de radiao por amostras no estado slido, lquido ou gasoso, nas regies ultravioleta, visvel e infravermelho do espectro eletromagntico. A absortividade molar (e) uma grandeza caracterstica da espcie absorvente, cuja magnitude depende do comprimento de onda da radiao incidente.21 As amostras para a determinao da absortividade molar do EFZ nos solventes gua purificada e metanol foram preparadas utilizando-se a mesma tcnica descrita anteriormente, variando-se apenas o tempo de sonicao das amostras preparadas em gua (4 h). Para as leituras das amostras, tambm se utilizou o comprimento de onda de 247 nm do mtodo desenvolvido e validado.

Verificao da aplicabilidade da absortividade molar

Por meio dos trs parmetros utilizados na covalidao do mtodo analtico, verificou-se estatisticamente a diferena dos resultados tericos obtidos por meio do clculo da absortividade molar e dos resultados prticos realizados com os dois solventes, gua purificada e metanol. Tais parmetros foram executados de forma idntica validao do mtodo desenvolvido com o sistema solvente lcool etlico absoluto: gua purificada (60:40, v/v).

RESULTADOS E DISCUSSO

Desenvolvimento do mtodo analtico

Conforme avaliao da solubilidade do EFZ frente a diferentes solventes, observou-se que este se apresenta como praticamente in-solvel ou insolvel em gua e em cido clordrico 0,1 M, conforme classificao da Farmacopeia Brasileira.22 Para o solvente acetonitrila, o frmaco apresentou-se facilmente solvel, enquanto que para os solventes metanol e lcool etlico absoluto o frmaco se mostrou pouco solvel.

Os resultados obtidos fornecem informaes importantes sobre o comportamento do frmaco, possibilitando a escolha inicial dos solventes mais adequados para a completa solubilizao do EFZ e que permitam a mxima estabilidade da soluo, proporcionando a quantificao adequada do frmaco.

Para o mtodo em desenvolvimento, utilizaram-se inicialmente metanol, lcool etlico e acetonitrila, como solventes iniciais de solubilizao. Aps a escolha destes solventes, foram realizadas varreduras utilizando vrias combinaes de solventes para a diluio das solues, incluindo a possibilidade da adio de uma proporo de gua. A proporo deste no sistema foi determinada de acordo com a estabilidade do EFZ em permanecer solvel por 48 h em repouso, aps completa solubilizao. As combinaes dos sistemas testados para a preparao das amostras esto descritas na Tabela 1.

As varreduras espectrofotomtricas, realizadas para verificao dos sistemas que apresentavam as melhores absores na faixa de comprimentos de onda entre 200 e 700 nm, demonstraram que todos os sistemas testados apresentaram absores semelhantes no

comprimento de 247 nm; com exceo do sistema acetonitrila/gua, que apresentou uma absoro duas vezes maior aos outros sistemas na concentrao de 10 g mL-1. Portanto, devido alta solubilizao deste frmaco neste solvente e, consequentemente, da absoro elevada na faixa de concentrao testada, esse sistema mostrou-se inadequado para o mtodo.

Somado a este fato, para a escolha final do sistema a ser utilizado, levou-se em considerao a toxicidade e o custo do solvente, alm da possvel adio de uma proporo de gua ao sistema, o que as facilita as leituras provenientes de estudos de preparao de complexos com ciclodextrinas, disperses slidas e ensaios de dissoluo. Levando em considerao esses critrios, optou-se pelos solventes lcool etlico/sistema de diluio (lcool etlico:gua, 60:40, v/v) para a primeira e segunda diluies, respectivamente (Figura 1).

Nas anlises realizadas para a determinao do tipo e tempo de agitao na preparao das amostras, foi possvel definir a ultrassoni-cao por 10 min como o mtodo a ser padronizado, uma vez que este se apresentou como o mais eficiente para o mtodo proposto (Tabela 2).

Validao do mtodo analtico

RobustezO mtodo desenvolvido demonstrou ser robusto quanto va-

riao dos fabricantes de lcool etlico absoluto. De acordo com os resultados obtidos, o F calculado para esse parmetro foi de 0,0218, inferior ao F tabelado (7,7086), sendo o CV de 0,28 e 0,14 para os fabricantes Dinmica e Vetec, respectivamente. Com relao avaliao da estabilidade das solues no intervalo de 4 h a partir da preparao das amostras e da influncia da luminosidade, obteve-se

Tabela 2. Resultados experimentais do desenvolvimento do mtodo com relao ao tipo e tempo de agitao das amostras

Tipo/Tempo de agitao

Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Mdia CV%

Sonicao 5 min 0,490 0,495 0,495 0,493 0,58Sonicao 10 min 0,510 0,511 0,519 0,513 0,96Sonicao 15 min 0,505 0,502 0,503 0,503 0,30

F calculado = 25,7146 F tabelado = 5,1432Agitao 10 min 0,471 0,476 0,491 0,474 0,53Agitao 15 min 0,495 0,491 0,496 0,494 0,54

F calculado = 93,0250 F tabelado = 7,7086

Figura 1. Estrutura qumica do EFZ (C14H9ClF3NO2) e varredura espectro-fotomtrica no sistema solvente selecionado


um F calculado de 2,1185 (F tabelado = 5,1922) e 4,1784 (F tabelado = 5,3176), respectivamente, demonstrando que no houve diferenas estatisticamente significativas entre os mesmos (Tabela 3).

Linearidade A anlise de regresso linear dos mnimos quadrados apresentou

um coeficiente de correlao de 0,99978, indicando linearidade dentro dos limites das concentraes estudadas, obtendo-se a equa-o da reta y = 0,0520x 0,0099. Atravs da anlise de varincia (Tabela 4) pode-se testar a validao do mtodo e a significncia estatstica da curva ajustada. De acordo os resultados, observou-se que o mtodo linear e no houve falta de ajustes para as mdias estudadas, apresentando um valor de F de 2,9582, abaixo do valor crtico tabelado (4,3807).

Ainda como resultado da avaliao da linearidade, calcularam-se os LD e LQ. Os resultados encontrados foram de 0,21 para LD e 0,69 g mL-1 para LQ.

PrecisoO mtodo desenvolvido demonstrou ser preciso nos trs nveis

avaliados: repetitividade, preciso intermediria e reprodutibilidade. Para o parmetro repetitividade os resultados obtidos apresentaram uma mdia de 100,32 e um CV de 1,35%, abaixo do valor mximo especificado.20

Na preciso intermediria foi demonstrado que o mtodo preciso para anlises realizadas por analistas diferentes em um mesmo dia e em dias diferentes, estando a variao encontrada dentro dos limites especificados, pois atravs do tratamento estatstico foi demonstra-do que os F calculados para as anlises foram menores do que o F crtico (Tabela 5).

O mtodo tambm se apresentou reprodutivo quando avaliado em diferentes laboratrios, utilizando equipamentos diferentes. Os resultados avaliados podem ser visualizados na Tabela 6.

ExatidoA exatido do mtodo foi averiguada atravs da anlise de

trs concentraes distintas (80, 100 e 120%), encontrando-se os resultados dentro dos limites especificados. Para este parmetro, foi aplicado o teste t Student, o qual demonstrou que o t calculado para

cada concentrao foi de 0,8308; 0,8543 e 0,3523, respectivamente, sendo estes menores que o t tabelado (4,3026), comprovando que no houve diferena significativa entre as mdias das trs concentraes analisadas.

EspecificidadePara o mtodo proposto, a soluo amostra de EFZ foi contami-

nada com uma impureza, a zidovudina. Embora este frmaco possua absoro mxima no comprimento de onde de 270 nm,23 muito prxi-mo ao comprimento em estudo (247 nm), no houve interferncia na absoro do EFZ neste comprimento de onda e na concentrao de 0,2 g mL-1 de zidovudina. Esse valor encontra-se dentro do intervalo que compreende os LD e LQ da zidovudina, que so de 0,0394 e 0,0597 g mL-1,23 respectivamente (Figura 2).

Figura 2. Varreduras realizadas para a avaliao da especificidade do mtodo

Tabela 3. Resultados da robustez com relao ao parmetro luminosidade e estabilidade das amostras

Concentrao %Tempo (h) Presena de luz Ausncia de luz0 100,96 100,511 100,77 100,582 100,22 100,833 101,15 100,834 101,41 100,15Mdia 101,10 100,78CV % 0,24 0,25

Tabela 4. Resultado do tratamento estatstico por ANOVA one-way para a regresso linear

Fonte SQ GL MQ F F-crticoModelo 0,488486777 1 0,488486777 15515,9 4,3807Residual 0,000598175 19 3,14829E-05 Curva linearFalta de ajuste 9,28417E-05 5 1,85683E-05 0,51443 2,9582Erro puro 0,000505333 14 3,60952E-05 No h falta de ajusteTotal 0,489084952 20 0,024454248

Tabela 5. Resultados experimentais obtidos na preciso intermediria com os diferentes sistemas testado

Analistas Dia 1 Dia 2 lcool etlico: gua (60:40, v/v)

Analista 1 100,84% 100,51%Dia

F calculado = 2,1109F tabelado = 18,5128

Analista 2 100,52% 100,26%Analista


gua purificada

Analista 1 100,67% 100,17%Dia




Metanol

Analista 1 100,15% 100,39%Dia




Tabela 6. Resultados experimentais obtidos para a reprodutibilidade

Laboratrio 1 2 3 Mdia CV%I 100,77 98,08 100,58 99,81 1,505 F calculado = 0,7384II 99,42 98,65 99,04 99,04 0,390 F tabelado = 7,7086

Desenvolvimento de mtodo analtico para quantificao do Efavirenz 1971Vol. 33, No. 9

Absortividade molar (e)

A absorbncia da amostra foi de 0,555 para o solvente metanol e 0,318 para a gua purificada, por meio da aplicao da equao M = m/mol x V; onde M a concentrao molar, m a massa e V o volume. Conhecida a massa molar do EFZ (315,68 g mol-1), tem-se que a concentrao molar do mesmo a 10 g mL-1 igual a 3,1677 x 10-5 mol. Aplicando-se a equao e = Abs.M-1, calculou-se a absortividade molar do EFZ em gua purificada (9028,63 M1 cm1) e metanol (17520,59 M1 cm1). Uma vez realizado o calculado da absortividade molar do frmaco no solvente de interesse, pode-se descobrir a concentrao molar de qualquer amostra desconhecida solubilizada no solvente em questo.

Verificao da aplicabilidade da absortividade molar

PrecisoO mtodo desenvolvido demonstrou ser preciso por meio da

repetitividade e preciso intermediria para os dois solventes anali-sados. Na repetitividade, os resultados obtidos apresentaram um CV de 0,92% para a gua purificada e 1,13% para o metanol. Na preciso intermediria foi demonstrado que o mtodo preciso para anlises realizadas por analistas diferentes em um mesmo dia e em dias dife-rentes, sendo a variao enquadrada dentro dos limites especificados para ambos solventes (Tabela 5).

EspecificidadePara o mtodo proposto, a soluo amostra de EFZ nos dois sol-

ventes analisados foi contaminada com uma impureza, zidovudina, no havendo interferncia na absoro do EFZ neste comprimento de onda.

Linearidade Os resultados do estudo de linearidade esto agrupados na Tabela

7, bem como a mdia dos pontos estudados. A anlise de regresso linear dos mnimos quadrados demonstrou um coeficiente de corre-lao de 0,9994 e 0,9939 para metanol e gua, respectivamente, indi-cando a linearidade dentro dos limites das concentraes estudadas, obtendo-se a equao da reta y = 1,1107x + 0,0011 para o metanol e y = 0,9308x + 0,0081 para gua. De acordo com os resultados, verificou-se que o mtodo linear e no houve falta de ajustes para as mdias estudadas, apresentando um valor de F de 2,9582, abaixo do valor crtico tabelado de 4,3807.

Aplicando-se o mtodo de comparao entre duas grandezas, no qual o mdulo do valor terico subtrado do valor prtico, sendo o resultado dividido pelo valor terico e multiplicando por cem, obtm-se em percentual o quo distante o resultado experimental est do modelo terico. Para os valores avaliados na linearidade, para ambos solventes menores, a variao encontrada foi menor do que 5%, sendo, portanto, adequados analiticamente (Tabela 7).20

CONCLUSO

O mtodo apresentado foi desenvolvido e validado segundo o ICH (ICH Q2A, 2005; ICH Q2B, 2005) e a ANVISA (RE n 899, 2003), apresentou a confiabilidade requerida para um mtodo analtico. Alm de se mostrar como uma alternativa rpida, segura e de baixo custo quando comparado ao mtodo por CLAE.

Paralelamente, a absortividade molar pode ser utilizada no setor de Desenvolvimento Analtico para facilitar o desenvolvimento de novos mtodos, a investigao de desvios de qualidade e/ou adaptao dos mesmos. Por meio dos parmetros utilizados, demonstraram-se as vantagens do uso dentro do limite de confiabilidade analtica.

Tabela 7. Resultados experimentais e tericos para o parmetro linearidade nos solventes gua purificada e metanol

Resultados prticos

Terico x Prtico

Concentrao (g/mL)

Absterica

Abs prticaMdia (n3) DP % CV % %

guapurificada

5 0,143 0,146 0,004 2,986 2,0988 0,229 0,228 0,002 0,914 0,4379 0,257 0,252 0,007 2,646 1,94610 0,286 0,292 0,006 1,907 2,09811 0,315 0,322 0,003 1,076 2,22212 0,343 0,338 0,004 1,067 1,45815 0,429 0,421 0,006 1,323 1,865

Metanol 5 0,277 0,275 0,004 1,455 0,7228 0,444 0,448 0,005 1,007 0,9019 0,499 0,502 0,005 0,913 0,60110 0,555 0,555 0,005 0,826 0,00011 0,611 0,607 0,003 0,414 0,65512 0,666 0,668 0,004 0,605 0,30015 0,833 0,832 0,003 0,367 0,120

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