2016 07 AES REBECCA CF WATERS Summary Reportnf-validation.afnor.org/en/wp-content/uploads/sites/2/2014/03/Synt... · The method REBECCA CF WATERS has been validated by AFNOR Certification

NF VALIDATION

AFNOR CERTIFICATION VALIDATION OF THE METHOD

REBECCA CF WATERS (ref. AEB120031 / AEB520031) Attestation number: AES 10/13 – 04/12

For the enumeration of Escherichia coli and coliforms

Protocol for human consumption waters

SUMMARY REPORT – JULY 2016 ‐ V1

Expert laboratory : Manufacturer : ISHA bioMérieux 25 avenue de la République Chemin de l’Orme 91300 MASSY 69280 MARCY L’ETOILE FRANCE FRANCE

This report of analysis concerns only objects subjected to analysis. Its reproduction is authorized only in the form of complete photographic facsimile. It contains 62 pages. Only some assays reported in this document are covered by the accreditation of the Section Laboratory of COFRAC. They are identified by the symbol (*). Assays realized at ISHA : 25 avenue de la République, 91300 Massy, France..

Table of contents 1. Introduction ................................................................................................................................................. 4

1.1. Validation history................................................................................................................................. 4

1.2. Validation repositories ........................................................................................................................ 4

1.3. Alternative method ............................................................................................................................. 4

1.4. Application scope ................................................................................................................................ 4

1.5. Reference method (*) .......................................................................................................................... 4

2. Method comparison study .......................................................................................................................... 5

2.1. Relative accuracy ................................................................................................................................. 5

2.1.1. Number and nature of samples ................................................................................................... 5

2.1.2. Raw results .................................................................................................................................. 5

2.1.3. Statistical exploitation ................................................................................................................. 6

2.1.4. Conclusion ................................................................................................................................... 7

2.2. Linearity ............................................................................................................................................... 8

2.2.1. Contamination levels ................................................................................................................... 8

2.2.2. Raw results .................................................................................................................................. 8

2.2.3. Statistical exploitation ............................................................................................................... 10

2.2.4. Conclusion ................................................................................................................................. 10

2.3. Detection and quantification limits ................................................................................................... 10

2.3.1. Protocol ..................................................................................................................................... 11

2.3.2. Results ....................................................................................................................................... 11

2.3.3. Conclusion ................................................................................................................................. 11

2.4. Selectivity ........................................................................................................................................... 11

2.4.1. Protocols .................................................................................................................................... 12

2.4.2. Results ....................................................................................................................................... 12

2.4.3. Conclusion ................................................................................................................................. 12

2.5. Practicability ...................................................................................................................................... 12

3. Interlaboratory study ................................................................................................................................ 14

3.1. Study organization ............................................................................................................................. 14

3.1.1. Participating laboratories .......................................................................................................... 14

3.1.2. Absence of coliforms in the matrix ............................................................................................ 14

3.1.3. Strain stability in the matrix ...................................................................................................... 14

3.1.4. Samples preparation and spiking .............................................................................................. 14

3.1.5. Samples labeling ........................................................................................................................ 15

3.1.6. Samples shipping, reception and analysis ................................................................................. 15

3.2. Results ............................................................................................................................................... 15

bioMérieux - REBECCA CF Waters Summary report - v1 - July 2016

Institut Scientifique d'Hygiène et d'Analyse 2/62

3.2.1. Temperature and state of the samples ..................................................................................... 15

3.2.2. Enumeration of culturable microorganisms .............................................................................. 16

3.2.3. Expert and collaborative laboratories results ........................................................................... 16

3.3. Interpretation of the results .............................................................................................................. 17

3.3.1. Bias calculation .......................................................................................................................... 17

3.3.2. Accuracy profile ......................................................................................................................... 17

4. Conclusion ................................................................................................................................................... 2

Appendices

Appendix 1 : User guide draft Appendix 2 : Alternative method protocol Appendix 3 : Reference method protocol Appendix 4 : Bacterial stress Appendix 5 : Relative accuracy results Appendix 6 : Linearity results Appendix 7 : LOD‐LOQ results Appendix 8 : Selectivity results Appendix 9 : Enumeration of culturable microorganisms Appendix 10 : Results of the interlaboratory study



1. Introduction

1.1. Validation history The method REBECCA CF WATERS has been validated by AFNOR Certification in April 2012 with the trademark NF Validation under the attestation number AES 10/13 – 04/12 for the enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria in waters for human consumption. A renewal of the method, without modifications, was conducted in Mars 2016 by the laboratory ISHA.

1.2. Validation repositories The validation study of the method REBECCA CF WATERS was performed according to the validation protocol for an alternative commercial method as compared to a reference method (revision 1 – May 2010).

1.3. Alternative method Enumeration of E. coli is done by the detection of the β – D‐glucuronidase colouring colonies in blue with or without blue halo. Coliforms that express their β‐Galactosidase will be coloured, by the use of a specific substrate in pink to purple. The mix of selective agents inhibits the growth of interfering flora.

The protocol of the alternative method is as follows:

Figure 1 : protocol of the alternative method

Water filtration

Filter 100 mL (or 250 mL for bottled water) of water sample on a sterile membrane

Place the membrane on the center of the Petri dish containing the REBECCA CF WATERS medium

Incubation

Incubate the Petri dish at (36± 2) °C for (21±3) hours

Reading

β‐D‐glucuronidase positive E. coli: blue colonies Coliforms other than E. coli: pink colonies Coliforms: pink colonies + blue colonies

The user guide project is presented in appendix 1 and the alternative method protocol in appendix 2.

1.4. Application scope The application scope of the alternative method concerns waters for human consumption.

1.5. Reference method (*) The NF EN ISO 9308‐1 (2000): “Water quality ‐ Detection and enumeration of Escherichia coli and Coliforms bacteria ‐ Part 1: Membrane filtration method” was used as reference method. The protocol of the reference method is presented in appendix 3.



2. Method comparison studyThe following characteristics were studied during the comparative study: • Relative accuracy,• Linearity of the alternative method,• Selectivity of the alternative method,• Limit of detection and limit of quantification of the alternative method• Practicability of the alternative method

2.1. Relative accuracy The relative accuracy is the degree of correspondence between the response obtained by the reference method and the response obtained by the alternative method on the same samples.

2.1.1. Number and nature of samples Two categories of water were tested in duplicate with reference method and alternative method: bottled waters and fountain, wells and drilling waters. According to the new standard of validation, these two categories can be melted in one: waters for human consumption.

Different types of samples analyzed are summarized in table 1.

Table 1 : number and nature of samples analyzed

Target microorganism Water type Number of samples

analyzed Number of samples

used

Coliforms

Bottled waters 41 18

Non bottled waters 39 19

Total 80 37

Escherichia coli

Bottled waters 28 19

Non bottled waters 25 19

Total 53 38

Total Escherichia coli and other coliforms 133 75

Globally, 133 samples were analyzed and 75 results were used. No naturally contaminated sample was analyzed. The samples have been artificially contaminated. The contamination levels used cover the entire measurement range of the alternative method (appendix 4).

Regarding the initial validation, samples for which at least a replicate was inferior to 4 CFU per test portion were not taken into account for the statistical analysis. These results are grayed in the appendices, three results are concerned for the parameter “Coliforms” and three are concerned for the parameter “Escherichia coli”.

2.1.2. Raw results Raw results and statistical calculations are summarized in tables 2 and 3 and in appendix 5.

Figure 2 presents the two‐dimensional graphs for the category tested, respectively in CFU per test portion and in log CFU per test portion. The y‐axis is reserved for the alternative method and the x‐axis for the reference method. The statistical calculations and graphics were established from results after 48 hours of incubation for the reference method petri dishes.

The representation of a line of equation “y = x“ figures dashed on the graphs.



Figure 2 : two‐dimensional graph for relative accuracy in CFU and log CFU / test portion) (black line: y=x)

2.1.3. Statistical exploitation The relationship of relative accuracy between the reference method and the alternative method is evaluated with the linear model: 'y = a + bx '. This formula corresponds to the equation of the linear regression drawn from raw results obtained by experimentation, y representing the alternative method and x the reference method. There is a perfect accuracy (or there is no systematic bias) between the two methods if this equation is equal to the theoretical 'y = x' equation, which applies in the ideal model where the two methods behave similarly. The intercept is theoretically zero in this ideal model (hypothesis [a = 0]). The estimated intercept obtained with the two methods is checked using p {a = 0}. If the alternative method is a systematic bias against the reference method, the probability p {a = 0} is less than α = 0.05. The 'b' slope is theoretically equal to 1 in the ideal model (hypothesis [b = 1]). The estimated slope obtained with the two methods should pass by p {b = 1}. Statistically, if the alternative method does not give the same values as the reference method, the probability p {b = 1} is less than α = 0.05.

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 20 40 60 80 100 120 140 160

Alternative method (CFU

/100 ‐250 m

L)

Reference method (CFU/100 ‐ 250 mL)

Coliforms ‐ CFU/100 ‐ 250 mL

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5

Alternative method (log CFU

/100 ‐250 m

L)Reference method (log CFU/100 ‐ 250 mL)

Coliforms ‐ log CFU/100 ‐ 250 mL

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 20 40 60 80 100 120 140 160


/100 ‐250 m

L)

Reference method (CFU/100 ‐ 250 mL)

E. coli ‐ CFU/100 ‐ 250 mL

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5


/100 ‐250 m

L)

Reference method (log CFU/100 ‐ 250 mL)

E. coli ‐ log CFU/100 ‐ 250 mL



The linear regression method is chosen over the value of the robustness of the ratio R of overall repeatability standard deviation:

‐ If Rob.R > 2, linear regression by least‐squares (OLS 1) is used with the x‐axis for the reference method, ‐ if Rob.R < 0.5, a linear regression by least‐squares (OLS 2) is used with the x‐axis for the alternative method, ‐ If 0.5 < Rob.R < 2, orthogonal regression (GMFR) is used with the x‐axis to the reference method.

Parameter

Measu‐rement unit / test

portion

Rob.R Regression

used T

critical a t(a) b t(b)

Probabilities (%)

Intercept at 0

Slope at 1

Coliforms CFU 0.83 GMFR 2.03 3.05 1.15 0.93 1.60 25.50 11.34

log CFU 1.09 GMFR 2.03 0.13 0.73 0.93 1.28 46.92 20.56

E. coli CFU 0.92 GMFR 2.02 ‐6.12 1.61 1.00 0.01 11.00 99.00

log CFU 1.40 GMFR 2.02 ‐0.28 1.19 1.12 1.31 24.00 19.00

Table 2 : statistical data for the enumeration in human drinking waters

Parameter Measurement unit /

test portion

Bias (D) Repeatability

Average Median r rob. r

RM AM RM AM

Coliforms CFU ‐2.08 ‐1.50 33.63 30.40 17.61 14.68

log CFU 0.01 ‐0.01 0.22 0.20 0.17 0.18

E. coli CFU ‐6.16 ‐4.75 22.17 29.59 17.61 16.14

log CFU ‐0.07 ‐0.04 0.20 0.27 0.20 0.21

Table 3 : bias and repeatability of the two methods

The equations for the regression line and the correlation coefficient are as follows:

Table 4 : equations of the regression lines for the two parameters

Parameter

Raw data (CFU/100 or 250 mL) Log data (log CFU/100 or 250 mL)

Regression line Correlation coefficient (

r ) Regression line

Correlation coefficient (

r )

Coliforms Alt.=0.93 Ref. + 3.05 0.96 log Alt. = 0.93 log Ref. + 0.13 0.93

E. coli Alt. = 1.00 Ref. – 6.12 0.90 log Alt. = 1.12 log Ref. – 0.28 0.87

The hypothesis {a = 0 and b = 1} is accepted for the parameter “Coliforms” and the parameter ”Escherichia coli” for an expression of the results both in CFU/test portion or in lof CFU/test portion The median bias calculated between the alternative method and the reference method is low (between ‐4.75 and ‐1.50 in CFU/test portion or between ‐0.01 and ‐0.04 in log CFU/test portion). Whatever the kind of data used, the calculated limits of repeatability are similar for both methods.

2.1.4. Conclusion For all parameters, the correlation between the reference method and the alternative method is satisfactory.

Limits of repeatability are between 14.68 and 16.14 in CFU / test portion and between 0.18 and 0.21 log MPN / test portion for the alternative method and 17.61 in CFU / test portion and between 0.17 and 0.20 in log CFU / test portion for the reference method. The bias are between ‐4.75 and ‐1.50 CFU / test portion and between ‐0.01 and ‐0.04 log CFU / test portion.



2.2. Linearity The linearity is the ability of the method when used with a given matrix to give results that are in proportion to the amount of analyte present in the sample, that is an increase in analyte corresponds to a linear or proportional increase in results.

2.2.1. Contamination levels The matrix / strain couples are presented in Table 5. For each couple, four contamination levels were tested in duplicate by the reference method and the alternative method.

Table 5 : couple matrix – strain analyzed

Strain Matrix Target level for contamination

Escherichia coli ESC.1.112 Tap water

10‐ 30‐ 50‐ 100 (CFU/100 or 250 mL)

Citrobacter freundii CIT.1.4 Mineral water

Escherichia coli ESC.1.112 Spring water

Citrobacter freundii CIT.1.4 Fountain water

2.2.2. Raw results Raw results and statistical calculations are summarized in appendix 6. Graphs of figure 3 and 4 show the values of each sample obtained by the alternative method and the reference method. The y‐axis is reserved for the alternative method and the x‐axis for the reference method.

The representation of a line of equation 'y = x' figures dashed on the graphs.

Figure 3 : two‐dimensional graphs for linearity (black line: y=x)

Figure 3 (following) : two‐dimensional graphs for linearity (black line: y=x)

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 20 40 60 80 100 120 140 160


/250 m

L)

Reference method (CFU/250 mL)

Coliforms ‐Mineral water ‐ CFU/250 mL

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5


/250 m

L)

Reference method (log CFU/250 mL)

Coliforms ‐Mineral water ‐ log CFU/250 mL



0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 20 40 60 80 100 120 140 160


/100 m

L)


Coliforms ‐ Fountain water ‐ CFU/100 mL

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5


/100 m

L)


Coliforms ‐ Fountain water ‐ log CFU/100 mL

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 20 40 60 80 100 120 140 160


/250 m

L)


E. coli ‐ Spring water ‐ CFU/250 mL

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5


/250 m

L)


E. coli ‐ Spring water ‐ log CFU/250 mL

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 20 40 60 80 100 120 140 160


/100 m

L)


E. coli ‐ Tap water ‐ CFU/100 mL

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5


/100 m

L)


E. coli ‐ Tap water ‐ log CFU/100 mL



2.2.3. Statistical exploitation Statistical interpretations are carried out in accordance with the requirements of standard NF ISO 16140 (see tables 6 and 7). The linear regression method is chosen over the value of the robustness of the ratio R of overall repeatability standard deviation:

‐ If Rob.R > 2, linear regression by least‐squares (OLS 1) is used with the x‐axis for the reference method, ‐ if Rob.R < 0.5, a linear regression by least‐squares (OLS 2) is used with the x‐axis for the alternative method, ‐ If 0.5 < Rob.R < 2, orthogonal regression (GMFR) is used with the x‐axis to the reference method.

Table 6 : statistical data of the couple matrix – strain analyzed for the “Coliforms” parameter(r: coefficient of correlation)

Water type

Data Rob. R Regression

used F

critical Rob. F

P (Rob.F)

r Regression line

Mineral (250 mL)

Raw 2.50 OLS1 6.94 2.62 0.19 1.00 1.08 Ref. – 2.23

Log 10.49 OLS1 6.94 0.81 0.51 1.00 1.01 log Ref. – 0.00

Fountain (100 mL)

Raw 1.00 GMFR 6.94 64.85 0.00 0.98 1.03 Ref. + 3.23

log 0.60 GMFR 6.94 166.79 0.00 0.98 1.40 log Ref. – 0.69

Table 7 : statistical data of the couple matrix – strain analyzed for the “E. coli” parameter(r: coefficient of correlation)

Water type

Data Rob. R Regression

used F

critical Rob. F

P (Rob.F)

r Regression line

Spring (250 mL)

Raw 1.83 GMFR 6.94 0.19 0.84 1.00 0.88 Ref. + 7.11

Log 2.83 OLS1 6.94 0.46 0.66 1.00 0.84 log Ref. + 0.30

Tap (100 mL)

Raw 1.15 GMFR 6.94 3.21 0.15 0.99 1.02 Ref. – 3.23

log 0.73 GMFR 6.94 0.05 0.95 1.00 1.01 log Ref. – 0.04

The relationship between the 2 methods is not linear: ‐ if Rob.F > critical F or, ‐ if P (Rob.F) < α (= 0,05).

2.2.4. Conclusion For the “Escherichia coli” parameter, the relationship between the two methods is linear regardless of the water type and the data used (raw data or log data). For the “Coliforms” parameter, the relationship between the two methods is linear for the mineral water but not linear for the fountain water. However, the correlation coefficient of the regression line is satisfactory for this water type.

The linearity of the alternative method is satisfactory.

2.3. Detection and quantification limits The detection and quantification limits are checked in accordance with the standard EN ISO 16140. Three parameters are determined. Here are their ISO 16140 definitions:

‐ the critical level (LC) is the smallest amount which can be detected (not null), but not quantified as an exact value. Below this value, it cannot be sure that the true value is not null. At this level, the false negatives probability β is 50 % (β is the second type of statistical error).



‐ the detection limit (LOD) is higher than the critical level, because it involves a power, the probability 1 ‐ β, which has to be well over 50 %, for example 95 %. ‐ the quantification limit (LOQ) is the smallest amount of analyte, (that is the lowest actual number of organisms), which can be measured and quantified with defined precision and accuracy under the experimental conditions by the method under validation.

2.3.1. Protocol The limits of detection and quantification were determined by analyzing a pure culture of Escherichia coli strain ESC.1.120 and a pure culture of the strain of Citrobacter freundii CIT.1.5 by the alternative method. Six levels of contamination (including level 0), with six replications for each level, were studied in sterilized water.

2.3.2. Results Raw results are presented in appendix 7 and the summary in the following tables.

Table 8 : data (s0 and x0) for the enumeration of Escherichia coli (underlined: the reference level)

Level (CFU/100mL) Number of positive samples Standard deviation (So) Bias (Xo)

0 0 0.00 0

0,4 3 0.82 0.5

0,6 2 0.52 0

1,1 5 1.00 1

2,1 3 1.27 0.5

2,8 6 1.37 2

Table 9 : LC, LOD and LOQ values of the alternative method for the enumeration of Escherichia coli

Formula Values obtained

Critical level (CL) 1.65 So +Xo 1.85

Limit of detection (LOD) 3.3 So+Xo 3.19

Limit of quantification (LOQ) 10 So + Xo 8.66

Table 10 : data (s0 and x0) for the enumeration of coliforms (underlined: the reference level)

Level (CFU/100mL) Number of positive samples Standard deviation (So) Bias (Xo)

0 0 0.00 0

0,4 1 0.41 0

0,7 3 0.82 0.5

1,2 5 0.75 1

2,2 4 1.17 1

3,2 6 1.23 3

Table 11: LC, LOD and LOQ values of the alternative method for the enumeration of coliforms

Formula Values obtained

Critical level (CL) 1.65 So +Xo 1.85

Limit of detection (LOD) 3.3 So+Xo 3.19

Limit of quantification (LOQ) 10 So + Xo 8.66

2.3.3. Conclusion The limits of detection and the limits of quantification of the alternative method are satisfactory.

2.4. Selectivity The selectivity of the alternative method is evaluated by its inclusivity and its exclusivity.



Inclusivity is the ability of the alternative method to detect the target analyte from a wide range of strains. Exclusivity is the lack of interference by a relevant range of non‐target strains with the alternative method.

2.4.1. Protocols Fifty one target strains (including twenty one strains of Escherichia coli) and thirty one non‐target strains (from the collections of national, international and internal ISHA) were analyzed. The tests were performed according to the protocol of the alternative method. The contamination rate used for inclusiveness are between 30 and 100 CFU/100 mL and are 103 to 105 times the detection concentration of the alternative method (about 104 CFU / 100 mL) with respect to exclusivity.

2.4.2. Results Raw results are in appendix 8. All target strains (coliforms and Escherichia coli) tested are detected by the alternative method. Among the thirty non‐target strains tested, one showed a cross‐reaction with the alternative method. A strain of Shigella sonnei showed typical colonies on REBECCA CF WATERS medium. However, many works mentioned that some strains of Shigella, particularly S. sonnei, possess a β‐D‐glucuronidase activity, which explains this result.

2.4.3. Conclusion The selectivity of the method is satisfactory.

2.5. Practicability The practicability was evaluated according to the 13 criteria defined by AFNOR Technical Committee.

1‐ Mode of packaging of test components The REBECCA CF WATERS are packaged in bags of 20 Petri dishes.

2‐ Volume of reagents None.

3‐ Storage conditions of components and shelf‐life of unopened products The REBECCA CF WATERS Petri dishes should be conserved at 2 – 8°C.

4‐ Modalities after first use Each REBECCA CF WATERS medium serves a unique analysis and should not be reused.

5‐ Equipment and specific local requirements Usual tools for microbiology laboratory.

6‐ Reagents ready to use or for reconstitution None.

7‐ Training period for operator with no experience with the method Use of the method REBECCA CF WATERS does not require special training. The duration of training is estimated to be 1 hour.

8‐ Handling time and flexibility of the method in relation to the number of samples The duration of a filtration according the reference method (ISO 9308‐1) is approximately 1.5 min using disposable filter units and 3.5 min using non‐disposable filter units. Duration of use of REBECCA CF WATERS method is about 1.5 to 2 min.



9‐ Time required for results The delay in obtaining results for the alternative method is 22 ± 2 hours.

10‐ Operator qualification Identical as necessary for the reference method

11‐ Steps common with the reference method None.

12‐ Traceability of analysis results None.

13‐ Maintenance by laboratory None.



3. Interlaboratory studyThe main object of the collaborative study is to determine the variability of the results obtained by different laboratories analyzing identical samples and to compare these results within the framework of the comparative study of the methods.

3.1. Study organization

3.1.1. Participating laboratories The interlaboratory study was realized by the expert laboratory and fifteen participating laboratories.

3.1.2. Absence of coliforms in the matrix Before spiking, the absence of coliforms was verified in the batch of bottled mineral water used, according to the reference method.

3.1.3. Strain stability in the matrix The strain stability in mineral water matrix was evaluated for 3 days at (5±3)°C. The strain used was E. coli (Code ISHA: ESC.1.119) isolated from aquatic environment. The samples were analysed at D0, D+1 and D+2 by the reference method. The results are summarized in table 12.

Table 12 : results (CFU/ 250 mL) of the stability study of the strain ESC 1.119 in mineral water

Day Level 1 Level 2 Level 3

D1 30 85 148

D2 30 68 126

D3 26 62 113

The results show that the E. coli strain used is stable for 2 days at (5±3)°C in mineral water.

3.1.4. Samples preparation and spiking The matrix was inoculated with the target strain suspension to obtain 4 contamination levels: ‐L0: 0 CFU in 250 mL ‐L1: 1 to 20 CFU in 250 mL ‐L2: 20 to 80 CFU in 250 mL ‐L3: 80 to 150 CFU in 250 mL

The matrix was distributed at 508 mL in sterile bottles. Every bottle was individually spiked and homogenized. Eight samples per laboratory were prepared (2 samples per contamination level). Each laboratory received 8 samples to analyze, 1 sample to quantify the endogenous microflora and 1 water sample containing a temperature probe. The results of the enumerations of the heterophilic flora, the target levels and the real levels of contamination are presented in table 13.

Table 13 : target level, real level and culturable microorganisms of the matrix

Contamination level

Flora (CFU/mL) Escherichia coli ESC.1.119 (CFU/250 mL)

22°C 36°C Target level Real level

0

<1 <1

0 0

1 1 à 20 22

2 20 à 80 92

3 80 à 150 165



3.1.5. Samples labeling The labelling of the bags was realized as follows: a code to identify the laboratory: from A to O (cf. table 14) and a code to identify each sample, only known by the expert laboratory. The samples and the temperature control vials (water sample with a temperature probe) were stored at 4°C before shipping.

Table 14 : sample code by contamination level

Contamination level (CFU/ 250 mL) Sample code

0 4 / 5

1 – 20 1 / 8

20 – 80 3 / 6

80 – 150 2 / 7

3.1.6. Samples shipping, reception and analysis The samples were shipped in a coolbox the 5th of March 2012. The coolboxes were received the 6th of March 2012 by all the participating laboratories. The control temperature was recorded upon receipt of the package and the temperature probe sent to the expert laboratory. The samples were analyzed on the 7th of March. The expert laboratory concurrently analyzed a set of samples under the same conditions with both methods.

3.2. Results

3.2.1. Temperature and state of the samples The temperature readings upon reception, the one recorded by the probe and the state of the samples are shown in table 15.

Table 15 : temperature and state of the samples upon reception and during the shipping (/: data not available)

Laboratory Temperature (°C) upon reception

Temperature (°C) recorded by the probe

State of the samples

Mean SD

A / 1.3 0.4 /

B 3.1°C 1.9 0.8 Good

C 5.5°C 1.2 0.8 Good

D 7.9°C 2.3 0.7 Good

E 3.2°C / / Good

F 7.5°C 2.4 0.8 Good

H 5.0°C 1.7 0.6 Good

I 7.4°C / / Good

J 4.6°C 2.5 1.0 Good

K 2.7°C 1.8 0.8 Good

L 1.1°C 1.8 0.4 Good

M 4.1°C 1.4 1.0 Good

N 3.3°C 1.7 0.7 Good

O 3.1°C 0.8 0.5 Good

The analysis of thermal profiles of probes showed for all participants that the average of temperature during the shipment is between 0,8 and 2,5°C.



3.2.2. Enumeration of culturable microorganisms Results are in appendix 9. For the whole laboratories, the enumeration of culturable microorganisms at 22°C vary between < 1 and 525 CFU/mL. Concerning the culturable microorganisms at 36°C, the results vary between < 1 and 70 CFU/mL.

3.2.3. Expert and collaborative laboratories results The overall results are presented in appendix 10. The results of the reference method are presented for a reading of the Petri dishes after 48 h incubation at (36 ± 2)°C. The results of the alternative method are presented for a reading after (21 ± 3) h of incubation at (36 ± 2)°C.

For both methods, all counted coliforms were confirmed as E. coli. All results presented are expressed in number of Escherichia coli per 250 mL of water.

Data of laboratories H, I and L were excluded from final analysis of results: ‐laboratory H presented results are very different comparing target contamination level and between repetition values for the two methods. However, for each sample tested, the values were concordant between the alternative method and the reference method. ‐for Laboratory I, all results obtained with the reference method are between 0 and 3 UFC/250 mL while the results of the alternative method seem correct. The lead researcher in this laboratory has been contacted by the expert laboratory and it seems that the person who analyzes have encountered problems in sample handling. ‐laboratory L reported that the volume of water was less than 250 mL for two samples analyzed using the alternative method.

The laboratory M did not return his scorecard at the Expert laboratory despite several reminders.

The results of twelve laboratories are presented in the following table 16.

Table 16 : E. coli enumeration results for 250 mL sample water (RM: reference method, AM: alternative method, R1: replicate 1 and R2: replicate 2)

Laboratory

Level 0 Level 1 Level 2 Level 3

RM AM RM AM RM AM RM AM

R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2 R1 R2

A <1 <1 <1 <1 14 19 23 13 62 58 52 55 134 127 124 106

C <1 <1 <1 <1 16 18 18 10 63 65 69 52 141 116 152 131

D <1 <1 <1 <1 16 13 21 10 53 71 58 44 122 114 126 96

E <1 <1 <1 <1 26 15 13 13 56 55 59 46 128 126 120 106

F <1 <1 <1 <1 19 18 21 8 74 64 46 50 147 128 111 126

H <1 <1 <1 <1 18 20 10 10 73 74 73 74 116 149 134 144

I <1 <1 <1 <1 16 14 14 15 84 73 56 57 123 127 125 133

J <1 <1 <1 <1 17 14 11 15 44 49 27 49 117 52 92 54

K <1 <1 <1 <1 26 13 15 8 62 72 54 64 120 90 108 119

M <1 <1 <1 <1 17 22 14 9 72 81 66 47 136 157 132 122

N <1 <1 <1 <1 14 20 16 18 72 84 64 61 152 126 131 100

O <1 <1 <1 <1 21 16 20 13 52 53 51 54 122 115 113 99

Expert <1 <1 <1 <1 12 15 20 7 66 44 41 42 125 117 135 98



3.3. Interpretation of the results The data presented in the following paragraphs were calculated from the results in CFU/250 mL an in log CFU/250 mL in the same way than the presentation of the results of the preliminary study.

3.3.1. Bias calculation Table 17 shows the target value, the mean, standard deviation of fidelity, the relative bias and the bias of each level of contamination.

Table 17 : calculation of the bias of the alternative method

Values in CFU/250 mL log CFU/250 mL

Contamination level Low Medium High Low Medium High

Target value 17.00 64.50 126.00 1.23 1.81 2.10

Mean 14.08 55.33 111.82 1.13 1.74 2.06

Relative bias ‐0.17 ‐0.14 ‐0.07 ‐8,23% ‐4,14% ‐1,93%

Bias 0.83 0.86 0.93 ‐0.10 ‐0.08 ‐0.04

The accuracy of the method is estimated by the bias which varies from 0.83 to 0.93 UFC/250 mL and from ‐0.10 log UFC/250 mL to ‐0.04 log UFC/250 mL. The bias calculated in the comparative study varies from ‐1.50 to ‐4.00 UFC / test portion and from ‐0.04 to ‐0.01 log UFC / test portion (E. coli or coliforms).

3.3.2. Accuracy profile Table 18 shows the values of tolerance and the tolerance limits of the alternative method for probability of tolerance values of 80% and 90%.

Table 18 : Values and tolerance limits of the alternative method

Probability of

tolerance Niveaux

CFU/250 mL log CFU/250 mL

Bas Moyen Haut Bas Moyen Haut

80%

Low tolerance value 7.36 41.13 88.72 0.92 1.61 1.94

High tolerance value 20.81 69.54 144.95 1.34 1.86 2.18

Low tolerance limit 43% 64% 70% ‐0.31 ‐0.20 ‐0.016

High tolerance limit 122% 108% 115% 0.11 0.05 0.08

90%

Low tolerance value 5.35 36.85 80.18 0.86 1.57 1.90

High tolerance value 22.82 73.82 153.49 1.40 1.90 2.22

Low tolerance limit 31% 57% 64% ‐0.37 ‐0.24 ‐0.20

High tolerance limit 134% 114% 122% 0.17 0.09 0.12

Figure 4 shows the accuracy profiles in CFU/250 mL and in log CFU/250 mL for a tolerance probability of 80% and 90%.



Figure 4: Accuracy profile of the alternative method with tolerance probability at 80 % and 90%

-0,5

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2

Niveaux

Bia

is (

%)

Biais Limite basse tolérance (différence)Limite haute tolérance (différence) Limite d'acceptabilité basseLimite d'acceptabilité haute

20%

40%

60%

80%

100%

120%

140%

160%

180%

200%

0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 120,0 140,0

Niveaux

Bia

is (

%)


-0,5

-0,4

-0,3

-0,2

-0,1

0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

1,0 1,2 1,4 1,6 1,8 2,0 2,2

Niveaux

Bia

is (

%)


20%

40%

60%

80%

100%

120%

140%

160%

180%

200%

0,0 20,0 40,0 60,0 80,0 100,0 120,0 140,0

Niveaux

Bia

is (

%)


β=80% and acceptability limits=0,4

β=90% and acceptability limits=0,4

β=80% and acceptability limits=70%

β=90% and acceptability limits=70%



CommentsThe accuracy profile obtained from the results of the reference method and the alternative method shows that the bias of REBECCA CF WATERS method for the enumeration of coliforms and Escherichia coli in drinking water is acceptable. The tolerance limits of the alternative method for a probability of 80% or 90%tolerance are included within the limits of acceptability of 70% or 0,4 log.

The data obtained by the collaborators are presented under the shape of two‐dimensional graphs in CFU/250 mL and in log CFU/250 mL in the figure below for a better appreciation of the data.

Figure 5: two‐dimensional graph for the interlaboratory study data

Graphique bidimensionnel (UFC/250 mL)

0

20

40

60

80

100

120

140

160

0 50 100 150

Méthode de référence (UFC/250 mL)

Mét

ho

de

alte

rnat

ive

(UF

C/2

50 m

L)

Graphique bidimensionnel (log UFC/250 mL)

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

Méthode de référence (log UFC/250 mL)

Mét

ho

de

alte

rnat

ive

(lo

g U

FC

/250

mL

)



4. Conclusion

The linearity and relative accuracy of the method REBECCA CF WATERS for the enumeration of Escherichia coli and coliforms in drinking water are satisfactory.

The bias between the two methods is acceptable. The limits of detection and quantification of the method are satisfactory.

REBECCA CF WATERS method for the enumeration of coliforms and Escherichia coli is specific and selective.

The bias of the alternative method is relatively stable from the low level of contamination to the high level of contamination. For all levels of contamination, the tolerance limits are between the limits of acceptability, meaning that at least 80% of the results will be between the limits of acceptability as defined at 70% or 0,4 log.

Massy, 12th July, 2016 Olivier Mathia

Research Engineer Unit Innovation Biology



APPENDIX 1 USER GUIDE DRAFT



bioMérieux SA Français - 1

AES 10/13 – 04/12 METHODES D’ANALYSE DE L’EAU

http://nf-validation.afnor.org/en

Méthode REBECCA™ CF waters (Dénombrement des E.coli et coliformes)

Pour tous échantillons d’eau de consommation humaine. La date de fin de validité de la certification NF VALIDATION est précisée sur le certificat.

REF AEB120031/ AEB520031 520031 C Draft 2 pour BT AFNOR- fr - 2016/03

REBECCA™ CF WATERS Pour contrôle microbiologique exclusivement

Milieu chromogénique pour le contrôle des eaux de consommation humaine

INTRODUCTION ET OBJET DU TEST

REBECCA™ CF WATERS est un milieu chromogénique pour le dénombrement direct sans confirmation dans les eaux de consommation humaine à faible Matière en Suspension.

PRINCIPE

Avec le milieu REBECCA™ CF WATERS le dénombrement de E.coli se fait par la détection de la –D-glucuronidase colorant les colonies en bleu avec ou sans halo bleu. Les Coliformes exprimant leur Bêta-Galactosidase seront colorés, par l’utilisation d’un substrat spécifique en rose à violet. Le mélange d’agents sélectifs inhibe la croissance de la flore interférente.

PRÉSENTATION

Milieu prêt à l’emploi

AEB120031 : Coffret de 10 boîtes 55 mm

REBECFW*

AEB520031 : Coffret de 120 boîtes 55 mm

* : Imprimé sur le contenant

COMPOSITION

Formule théorique.

Ce milieu peut être ajusté et/ou supplémenté en fonction des critères de performances imposés:

Peptone pancréatique de caséine ...................................... 1,00g

Extrait de levure ................................................................... 2,00g

NaCl ..................................................................................... 5,00g NaH2PO4 2H2O ............................................................... 2,20g

Na2HPO4 ...................................................................................................................... 2,70g

Pyruvate de sodium ........................................................ 1,00g

Sorbitol ............................................................................ 1,00g

Tryptophane .................................................................... 1,00g

Agents sélectifs .................................................................... 0,16g

Substrat chromogénique ..................................................... 0,40g

Agar ...................................................................................... 15,00g

Eau ................................................................................ 1000,00mL

pH : 6,8

MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI

Etuve bactériologique. Rampe de filtration

Unité de filtration ou membrane stérile de 45 µ

PRECAUTIONS D’UTILISATION

Pour contrôle microbiologique exclusivement. Pour usage professionnel uniquement Ce coffret contient des composants d'origine animale.

La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire desanimaux ne pouvant garantir de façon absolue que cesproduits ne contiennent aucun agent pathogènetransmissible, il est recommandé de les manipuler avecles précautions d'usage relatives aux produitspotentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pasinhaler).

Les prélèvements, cultures microbiennes et produitsensemencés doivent être considérés commepotentiellement infectieux et doivent être manipulés defaçon appropriée. Les techniques aseptiques et lesprécautions usuelles de manipulation pour le groupebactérien étudié doivent être respectées tout au long dela manipulation; se référer à " CLSI® M29-A, Protectionof Laboratory Workers From occupationally AcquiredInfections; Approved Guideline – Révision en vigueur".Pour informations complémentaires sur les précautionsde manipulation, se référer à "Biosafety inMicrobiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH- Dernière édition ", ou à la réglementation en vigueurdans le pays d'utilisation.

Les milieux de culture ne doivent pas être utiliséscomme matériau ou composant de fabrication.

Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption. Ne pas utiliser les réactifs dont l’emballage est

détérioré. Ne pas utiliser des boites contaminées ou exsudées. Le milieu doit être utilisé selon le mode opératoire

indiqué dans cette notice. Toute déviation deméthodologie peut modifier les résultats.

CONDITIONS DE STOCKAGE

Les boîtes se conservent entre 2°C et 8°C dans leurcoffret jusqu’à la date de péremption.

Conserver à l’abri de la lumière.

ECHANTILLONS

Suivre les recommandations des normes en vigueur pour la réalisation des prélèvements et la préparation des échantillons

MODE OPERATOIRE

Méthode alternative certifiée NF VALIDATION : Après filtration de l’échantillon selon les recommandations de la norme EN ISO 9308-1 (2000) déposer la membrane (quadrillage vers le haut) sur la gélose en veillant à ne pas emprisonner de bulle d’air dessous. (1)

Incuber les boîtes 21 heures 3 heures à 36°C 2°C.

RESULTATS

Retenir les boîtes contenant moins de 150 colonies caractéristiques. E. coli -D-glucuronidase +: colonies bleuesavec ou sans halo Coliformes autres que des E. coli -D-glucuronidase+: colonies roses à violettes.

Rendre le résultat en tenant compte du volume filtré

bioMérieux - REBECCA CF Waters

Summary report - v1 - July 2016


REBECCA CF WATERS 520031 C Draft 2 pour BT AFNOR- fr - 2016/03

BIOMERIEUX, le logo bleu et REBECCA sont des marques utilisées, déposées et/ou enregistrées appartenant à bioMérieux, ou à l'une de ses filiales, ou à l’une de ses sociétés. CLSI est une marque appartenant à Clinical Laboratory and Standards Institute Inc Les autres marques et noms de produits mentionnés appartiennent à leurs propriétaires respectifs.

bioMérieux SA 376 Chemin de l’Orme 69280 Marcy-l'Etoile - France

673 620 399 R.C.S LYON Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 www.biomerieux.com

LIMITES DU TESTS Il existe quelques souches d’E.coli -D-glucuronidase négative, par exemple E.coli O157. Certaines souches, autres qu’E.coli possèdentune -D-glucuronidase et sont susceptibles de donner des colonies bleues. Par exemple : certaines souches de Salmonella, shigella … Du fait du principe utilisé, le milieu REBECCA CFWATERS met en évidence les bactéries lactose négative mais - galactosidase positive.

CONTROLE DE QUALITE

Le REBECCA™ CF Waters est conçu et développé afin de répondre aux exigences de qualité les plus strictes. Les résultats des souches testées lors du contrôle d’activité bactériologique figurent sur le certificat de contrôle de qualité de chaque lot, disponible sur la bibliothèque technique de notre site internet institutionnel (www.biomerieux.com).

ELIMINATION DES DECHETS

Les réactifs non utilisés peuvent être éliminés comme déchets non dangereux. Eliminer les réactifs utilisés ainsi que les matériels à usage unique contaminés en suivant les procédures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectieux. Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et les effluents qu'il produit selon leur nature et leur dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le traitement et l'élimination selon les réglementations applicables.

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1. Norme NF EN ISO 9308-1 (T90-414) - Septembre 2000 /

ISO 9308-1 /AC1 - Juin 2007 – Qualité de l’eau – Recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes – Partie 1 : Méthode par filtration sur membrane.

1. Qualité de l’eau – Dénombrement des Escherichia coli etdes bactéries coliformes – Partie 1 : Méthode parfiltration sur membrane pour les eaux à faible teneur enbactéries. – EN ISO 9308-1 (2000)

TABLE DES SYMBOLES

Symbole Signification

Référence du catalogue

Fabricant

Limites de température

Utiliser jusque

Code du lot

Consulter les instructions d'utilisation

Contenu suffisant pour "n" tests

XXX/Y

Certificat de contrôle qualité Lot conforme au Protocole de Contrôle Qualité en vigueur

Conserver à l’abri de la lumière

HISTORIQUE DE REVISION

UCatégories de type de modification : N/A Non Applicable (première version) Correction Correction d’anomalies présentes dans la documentation Modification technique Ajout, révision et/ou retrait d’informations relatives au produit Administratif Modifications d’ordre non technique perceptibles par l’utilisateur

Remarque : Les modifications mineures de typographie, de grammaire et de mise en page n’apparaissent pas dans l’historique des révisions.

Date de version Référence du document Type de modification Résumé de la modification

2016/03 520031C

Administratif Création de l’historique des révisions

Modification technique

Présentation, Mode opératoire , Références bibliographiques , Table des Symboles



APPENDIX 2

ALTERNATIVE METHOD PROTOCOL

Water filtration

Filter 100 mL (or 250 mL for bottled water) of water sample on a sterile membrane

Place the membrane on the center of the Petri dish containing the REBECCA CF WATERS medium

Incubation

Incubate the Petri dish at (36± 2) °C for (21±3) hours

Reading

β‐D‐glucuronidase positive E. coli: blue colonies Coliforms other than E. coli: pink colonies Coliforms: pink colonies + blue colonies



APPENDIX 3

REFERENCE METHOD PROTOCOL

Filtration sur membrane Filtrer 100 mL *d’échantillon sur membrane stérile

Placer la membrane sur milieu TTC‐tergitol en boîte de Petri

Incubation Incuber la boîte de Petri à (36± 2) °C pendant (21 ± 3) heures

Et pendant (24 ± 2) heures de plus si les colonies ne sont pas caractéristiques

Lecture et Confirmation Les colonies caractéristiques sont les bactéries lactose positives.

A partir de 10 colonies isolées, effectuer les tests de confirmation : oxydase et production d’indole

Expression des résultats Nombres de coliformes (Oxydase‐) et d’Escherichia coli (Oxydase – et Indole +)/ 100mL*

d’échantillon

* : 250 mL dans le cas des eaux embouteillées



Code Souche Origine Stress appliqué Intensité du stress

CIT.2.4 Citrobacter koseri Effluent secondaire 72h à -80°C 1ESC.1.114 Escherichia coli Eau de puits 72h à -20°C 2,4ESC.1.115 Escherichia coli Eau de puits 4h à -80°C + 45 min à 37°C 0,5KLE.1.2 Klebsiella oxytoca Effluent secondaire Stress chloration 1,0

ESC.1.119 Escherichia coli Eau de distribution 4h à -80°C + 45 min à 37°C +20 min à 51 °C 1,1ENTB.3.3 Cronobacter muytjensii CIP 103581 7 min à 56°C 2,7ESC.1.124 Escherichia coli Eau de rivière (Tamise) 3 semaines à -20°C + 5 min à 56 °C 1,0

CIT.1.4 Citrobacter freundii Eau de puits 4h à -80°C + 45 min à 37°C 0,5ENTB.1.2 Enterobacter aerogenes CIP 60.86 T 4h à -80°C + 45 min à 37°C +20 min à 51 °C 1,0EWI.1.1 Kluyvera intermedia CIP 79.27 4h à -80°C + 45 min à 37°C +20 min à 51 °C 0,9

ESC.1.122 Escherichia coli Eau 4 j à 4°C + 30 min à 51 °C 0,6SER.4.1 Serratia rubidaea CIP 104261 72h à -80°C 0,8

ESC.1.112 Escherichia coli Effluent secondaire 4 j à 4°C + 30 min à 51 °C 0,9RAH.1.2 Rahnella aquatilis Eau (Seine) 4 j à 4°C + 30 min à 51 °C 0,5ENTB.2.5 Enterobacter cloacae Eau de rivière (Saint Oger) 3 semaines à -20°C + 5 min à 56 °C 1,3KLE.1.3 Klebsiella oxytoca Eau du robinet zone de plonge 3 semaines à -20°C + 5 min à 56 °C 0,7CIT.1.3 Citrobacter freundii Eau de puits 3 semaines à -20°C + 5 min à 56 °C 0,9

ESC.1.123 Escherichia coli Eau Stress chloration 0,5ENTB.2.4 Enterobacter cloacae Eau de rivière (Moselle) 1h à -80°C + 1h à 37°C +1h à -80°C + 1h à 37°C 0,5LEC.1.2 Leclercia adecarboxylata CIP 82.92 Stress chloration + 20 min à 50°C 0,7

ESC 1.111 Escherichia coli Eau de fontaine 1h à -20°C +30 min à 51 °C 1,0CIT.2.2 Citrobacter koseri (C. diversus) CIP 82.87 T 1h à -20°C +30 min à 51 °C 0,6CIT.1.5 Citrobacter freundii Eau de puits 1h à -20°C +30 min à 51 °C 0,7

ESC.1.113 Escherichia coli Eau de puits 3 semaines à 4°C 0,8ESC.1.121 Escherichia coli Eau 3 semaines à 4°C 0,6

Appendix 4 - Stress bactérienbioMérieux - REBECCA CF Waters Summary report - v1 - July 2016


UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log23 Eau minérale gazeuse 1 ESC.1.1 46 + 46 1,66 38 + 38 1,58 12 + 12 1,08 15 + 15 1,1826 Eau de source 1 ESC.1.111 29 + 29 1,46 42 + 42 1,62 40 + 40 1,60 34 + 34 1,5327 Eau de source naturelle 2 ESC.1.114 47 + 47 1,67 41 + 41 1,61 53 + 53 1,72 64 + 64 1,8128 Eau minérale naturelle 1 ESC.1.115 53 + 53 1,72 53 + 53 1,72 48 + 48 1,68 71 + 71 1,8538 Eau de source 2 ESC.1.119 14 + 14 1,15 16 + 16 1,20 17 + 17 1,23 25 + 25 1,4041 Eau minérale 2 ENTB.3.3 112 + 112 2,05 116 + 116 2,06 137 + 137 2,14 128 + 128 2,1148 Eau minérale gazeuse 2 ENTB.3.3 113 + 113 2,05 119 + 119 2,08 113 + 113 2,05 122 + 122 2,0964 Eau minérale 3 ESC.1.124 50 + 50 1,70 55 + 55 1,74 76 + 76 1,88 75 + 75 1,8867 Eau minérale naturelle 2 ENTB.3.3 29 + 29 1,46 42 + 42 1,62 30 + 30 1,48 28 + 28 1,4572 Eau minérale naturelle 3 CIT.1.4 67 + 67 1,83 76 + 76 1,88 68 + 68 1,83 71 + 71 1,8573 Eau minérale gazeuse 3 ENTB.1.2 35 + 35 1,54 30 + 30 1,48 38 + 38 1,58 41 + 41 1,6174 Eau de source 3 CIT.1.4 78 + 78 1,89 79 + 79 1,90 106 + 106 2,03 95 + 95 1,9876 Eau minérale gazeuse 4 EWI.1.1* 71 + 71 1,85 83 + 83 1,92 74 + 74 1,87 78 + 78 1,8977 Eau minérale naturelle 4 ENTB.1.2 33 + 33 1,52 37 + 37 1,57 22 + 22 1,34 40 + 40 1,6079 Eau de source gazeuse 1 ESC.1.122 46 + 46 1,66 46 + 46 1,66 54 + 54 1,73 53 + 53 1,7291 Eau minérale naturelle 5 SER.4.1 123 + 123 2,09 132 + 132 2,12 117 + 117 2,07 124 + 124 2,09124 Eau minérale naturelle 6 ENTB.1.2 122 + 122 2,09 145 + 145 2,16 103 + 103 2,01 128 + 128 2,11131 Eau de source naturelle 2 ESC.1.112 141 + 141 2,15 90 + 90 1,95 115 + 115 2,06 105 + 105 2,021 Fontaine publique Puy-de-Dôme RAH.1.2 120 + 120 2,08 94 + 94 1,97 121 + 121 2,08 107 + 107 2,033 Eau de fontaine Cergy ENTB.2.5 79 + 79 1,90 84 + 84 1,92 98 + 98 1,99 89 + 89 1,956 Eau de fontaine Trappes KLE.1.3 9 + 9 0,95 7 + 7 0,85 6 + 6 0,78 5 + 5 0,707 Eau de fontaine Clermont-Fd KLE.1.2 22 + 22 1,34 24 + 24 1,38 27 + 27 1,43 23 + 23 1,369 Eau de fontaine Roissy CIT.1.3 4 + 4 0,60 6 + 6 0,78 5 + 5 0,70 4 + 4 0,6033 Eau de forage Mitry-Mory ESC.1.123 31 + 31 1,49 42 + 42 1,62 29 + 29 1,46 33 + 33 1,5234 Eau de fontaine Trappes ENTB.2.4 30 + 30 1,48 19 + 19 1,28 24 + 24 1,38 37 + 37 1,57113 Eau de réseau Versailles ESC.1.124 113 + 113 2,05 130 + 130 2,11 128 + 128 2,11 113 + 113 2,05114 Eau de réseau Elancourt ESC.1.123 27 + 27 1,43 24 + 24 1,38 23 + 23 1,36 27 + 27 1,43111 Eau de réseau Montreuil ESC.1.124 145 + 145 2,16 148 + 148 2,17 138 + 138 2,14 141 + 141 2,1594 Eau de réseau Paris 16 ème LEC.1.2 112 + 112 2,05 79 + 79 1,90 148 + 148 2,17 127 + 127 2,1095 Eau de réseau Maison-Alfort LEC.1.2 79 + 79 1,90 79 + 79 1,90 94 + 94 1,97 56 + 56 1,7596 Eau de réseau Juvisy s/orge LEC.1.2 128 + 128 2,11 90 + 90 1,95 70 + 70 1,85 146 + 146 2,1698 Eau de réseau Colombes ESC 1.115 10 + 10 1,00 13 + 13 1,11 9 + 9 0,95 11 + 11 1,04100 Eau de fontaine Massy ESC 1.112 6 + 6 0,78 4 + 4 0,60 10 + 10 1,00 6 + 6 0,78101 Eau de réseau Breux ESC 1.111 124 + 124 2,09 100 + 100 2,00 120 + 120 2,08 121 + 121 2,08103 Eau de réseau Crosne ESC 1.111 135 + 135 2,13 135 + 135 2,13 148 + 148 2,17 147 + 147 2,17137 Eau de réseau Montreuil CIT.2.2 41 + 41 1,61 59 + 59 1,77 9 + 9 0,95 13 + 13 1,11138 Eau de réseau Saint-Chéron CIT.1.5 133 + 133 2,12 137 + 137 2,14 142 + 142 2,15 150 + 150 2,18

* colonies non caractéristiques sur milieu TTC (pas de décoloration du milieu), mais possédant une β-galactosidase)

Appendix 5

Relative accuracy- Coliforms

N°

d'échan-

tillon

Type d'eau Souche

Bottled waters

Non bottled

waters

Type d'eau

Méthode alternative REBECCA CF WATERS Méthode de référence ISO 9308-1 (24 h et 48 h)

R1 R2 R1 R2



UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log14 Eau de source naturelle 1 CIT.2.4 5 + 5 0,70 7 + 7 0,85 2 + 2 0,30 1 + 1 0,0036 Eau minérale 1 KLE.1.2 1 + 1 0,00 1 + 1 0,00 3 + 3 0,48 1 + 1 0,0039 Eau minérale 9 ESC.1.113 0 + 0 / 1 + 1 0,00 0 + 0 / 2 + 2 0,3089 Eau minérale gazeuse 5 ESC 1.115 0 + 0 / 2 + 2 0,30 0 + 0 / 1 + 1 0,0092 Eau minérale 10 SER.4.1 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /93 Eau minérale 8 ESC 1.111 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /117 Eau minérale 12 ESC.1.121 107 + 107 2,03 93 + 93 1,97 227 + 227 2,36 191 + 191 2,28110 Eau minérale 10 ESC.1.112 1 + 1 0,00 7 + 7 0,85 6 + 6 0,78 9 + 9 0,95127 Eau gazeuse 6 ESC.1.120 8 + 8 0,90 3 + 3 0,48 4 + 4 0,60 2 + 2 0,30128 Eau gazeuse 7 ESC.1.120 1 + 1 0,00 10 + 10 1,00 3 + 3 0,48 7 + 7 0,85129 Eau minérale 11 ESC.1.120 2 + 2 0,30 1 + 1 0,00 6 + 6 0,78 1 + 1 0,0062 Eau minérale 2 ESC.1.124 87 + 87 1,94 102 + 102 2,01 113 + 113 2,05 130 + 130 2,1190 Eau minérale 6 ESC 1.111 32 + 32 1,51 30 + 30 1,48 30 + 30 1,48 35 + 35 1,5488 Eau minérale naturelle 2 ESC 1.112 13 + 13 1,11 11 + 11 1,04 15 + 15 1,18 21 + 21 1,3237 Eau minérale 1 ESC.1.124 4 + 4 0,60 3 + 3 0,48 8 + 8 0,90 11 + 11 1,0480 Eau minérale gazeuse 2 ESC.1.122 36 + 36 1,56 50 + 50 1,70 68 + 68 1,83 66 + 66 1,8281 Eau minérale 4 ESC.1.122 57 + 57 1,76 78 + 78 1,89 69 + 69 1,84 53 + 53 1,7282 Eau de source 3 ESC.1.123 37 + 37 1,57 47 + 47 1,67 36 + 36 1,56 46 + 46 1,6684 Eau de source 4 ESC.1.123 15 + 15 1,18 12 + 12 1,08 14 + 14 1,15 20 + 20 1,3085 Eau minérale gazeuse 2 ESC.1.124 102 + 102 2,01 80 + 80 1,90 78 + 78 1,89 115 + 115 2,0686 Eau de source 5 ESC.1.124 70 + 70 1,85 73 + 73 1,86 72 + 72 1,86 75 + 75 1,8887 Eau minérale 5 ESC.1.124 107 + 107 2,03 107 + 107 2,03 144 + 144 2,16 136 + 136 2,13130 Eau minérale 7 ESC.1.112 76 + 76 1,88 111 + 111 2,05 93 + 93 1,97 109 + 109 2,04105 Eau de réseau Chelles ESC 1.112 3 + 3 0,48 1 + 1 0,00 5 + 5 0,70 7 + 7 0,85108 Eau de réseau Clamart ESC 1.115 3 + 3 0,48 2 + 2 0,30 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /97 Eau de réseau Saintry S/seine ESC 1.111 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /99 Eau de fontaine Colombes ESC 1.111 275 + 275 2,44 265 + 265 2,42 252 + 252 2,40 242 + 242 2,38102 Eau de réseau Crosne SER.4.1 210 + 210 2,32 265 + 265 2,42 257 + 257 2,41 257 + 257 2,41104 Eau de réseau Chelles SER.4.1 305 + 305 2,48 309 + 309 2,49 191 + 191 2,28 187 + 187 2,27106 Eau de réseau Clamart SER.4.1 283 + 283 2,45 186 + 186 2,27 194 + 194 2,29 187 + 187 2,27122 Eau de réseau Saint Chéron ESC.1.124 168 + 168 2,23 171 + 171 2,23 151 + 151 2,18 153 + 153 2,18107 Eau de réseau Paris ESC 1.115 2 + 2 0,30 2 + 2 0,30 8 + 8 0,90 12 + 12 1,0857 Eau reseau Yerres ESC.1.122 92 + 92 1,96 84 + 84 1,92 56 + 56 1,75 34 + 34 1,5353 Eau de réseau Massy ESC.1.122 74 + 74 1,87 47 + 47 1,67 74 + 74 1,87 90 + 90 1,95112 Eau de réseau Saint-Chéron ESC.1.124 138 + 138 2,14 141 + 141 2,15 121 + 121 2,08 123 + 123 2,09115 Eau de réseau Paris 12éme ESC.1.123 12 + 12 1,08 31 + 31 1,49 23 + 23 1,36 28 + 28 1,45116 Eau de réseau Aubervilliers ESC.1.121 55 + 55 1,74 53 + 53 1,72 82 + 82 1,91 85 + 85 1,93118 Eau de réseau Nogent ESC.1.121 36 + 36 1,56 39 + 39 1,59 68 + 68 1,83 69 + 69 1,84119 Eau de réseau Paris 12éme ESC.1.119 43 + 43 1,63 55 + 55 1,74 44 + 44 1,64 48 + 48 1,68120 Eau de réseau Paris 9éme ESC.1.121 35 + 35 1,54 34 + 34 1,53 87 + 87 1,94 94 + 94 1,97121 Eau de réseau Clamart ESC.1.121 13 + 13 1,11 11 + 11 1,04 37 + 37 1,57 49 + 49 1,69125 Eau de réseau Colombes ESC.1.121 4 + 4 0,60 12 + 12 1,08 17 + 17 1,23 25 + 25 1,40126 Eau de fontaine Massy ESC.1.119 82 + 82 1,91 104 + 104 2,02 74 + 74 1,87 63 + 63 1,80

* colonies non caractéristiques sur milieu TTC (pas de décoloration du milieu), mais possédant une β-galactosidase)

Bottled waters

Non bottled

waters

One or the other

method present a

result out of the

analysis range

Excluded, following

the requierements of

the Technical

committee, to

respect a correct

proportion between

coliform and of E.coli

One or the other

method present a

result out of the

analysis range

Excluded, following

the requierements of

the Technical

committee, to

respect a correct

proportion between

coliform and of E.coli

Relative accuracy- Coliforms

N°

d'échan-

tillon

Type d'eau Type d'eau Souche


R1 R2 R1 R2

Results excluded to statistical calculations



Sample Replicate 1 Replicate 2 M SD Sample Replicate 1 Replicate 2 M SD1 12,0 15,0 13,50 2,12 1 46,0 38,0 42,00 5,66 28,52 40,0 34,0 37,00 4,24 2 29,0 42,0 35,50 9,19 -1,53 53,0 64,0 58,50 7,78 3 47,0 41,0 44,00 4,24 -14,54 48,0 71,0 59,50 16,26 4 53,0 53,0 53,00 0,00 -6,55 17,0 25,0 21,00 5,66 5 14,0 16,0 15,00 1,41 -6,06 137,0 128,0 132,50 6,36 6 112,0 116,0 114,00 2,83 -18,57 113,0 122,0 117,50 6,36 7 113,0 119,0 116,00 4,24 -1,58 76,0 75,0 75,50 0,71 8 50,0 55,0 52,50 3,54 -23,09 30,0 28,0 29,00 1,41 9 29,0 42,0 35,50 9,19 6,510 68,0 71,0 69,50 2,12 10 67,0 76,0 71,50 6,36 2,011 38,0 41,0 39,50 2,12 11 35,0 30,0 32,50 3,54 -7,012 106,0 95,0 100,50 7,78 12 78,0 79,0 78,50 0,71 -22,013 74,0 78,0 76,00 2,83 13 71,0 83,0 77,00 8,49 1,014 22,0 40,0 31,00 12,73 14 33,0 37,0 35,00 2,83 4,015 54,0 53,0 53,50 0,71 15 46,0 46,0 46,00 0,00 -7,516 117,0 124,0 120,50 4,95 16 123,0 132,0 127,50 6,36 7,017 103,0 128,0 115,50 17,68 17 122,0 145,0 133,50 16,26 18,018 115,0 105,0 110,00 7,07 18 141,0 90,0 115,50 36,06 5,519 121,0 107,0 114,00 9,90 19 120,0 94,0 107,00 18,38 -7,020 98,0 89,0 93,50 6,36 20 79,0 84,0 81,50 3,54 -12,021 6,0 5,0 5,50 0,71 21 9,0 7,0 8,00 1,41 2,522 27,0 23,0 25,00 2,83 22 22,0 24,0 23,00 1,41 -2,023 5,0 4,0 4,50 0,71 23 4,0 6,0 5,00 1,41 0,524 29,0 33,0 31,00 2,83 24 31,0 42,0 36,50 7,78 5,525 24,0 37,0 30,50 9,19 25 30,0 19,0 24,50 7,78 -6,026 128,0 113,0 120,50 10,61 26 113,0 130,0 121,50 12,02 1,027 23,0 27,0 25,00 2,83 27 27,0 24,0 25,50 2,12 0,528 138,0 141,0 139,50 2,12 28 145,0 148,0 146,50 2,12 7,029 148,0 127,0 137,50 14,85 29 112,0 79,0 95,50 23,33 -42,030 94,0 56,0 75,00 26,87 30 79,0 79,0 79,00 0,00 4,031 70,0 146,0 108,00 53,74 31 128,0 90,0 109,00 26,87 1,032 9,0 11,0 10,00 1,41 32 10,0 13,0 11,50 2,12 1,533 10,0 6,0 8,00 2,83 33 6,0 4,0 5,00 1,41 -3,034 120,0 121,0 120,50 0,71 34 124,0 100,0 112,00 16,97 -8,535 148,0 147,0 147,50 0,71 35 135,0 135,0 135,00 0,00 -12,536 9,0 13,0 11,00 2,83 36 41,0 59,0 50,00 12,73 39,037 142,0 150,0 146,00 5,66 37 133,0 137,0 135,00 2,83 -11,0

q= 37 Mx= 70,6 My= 68,5 M= -2,08n= 2 MEDx= 69,5 MEDy= 53,0 MED= -1,50

N=qn= 74 SDbx= 47,6 SDby= 44,1 Bias

MEDwx = 4,2 MEDwy = 3,5SDwx= 12,0 SDwy= 10,9

rob. SDwx= 6,3 rob. SDwy= 5,2

Relative accuracy - Coliforms

Reference method Alternative methodDifference



Calculation method

GMFR Est. y Dev.

15,57 26,43R= 0,90 37,36 -1,86

rob. R= 0,83 57,30 -13,30Sx= 48,00 58,23 -5,23Sy= 44,51 22,52 -7,52

125,92 -11,92r= 0,96 112,01 3,99b= 0,93 Res. SEM= 13,06 73,06 -20,56a= 3,05 Res. SD= 18,46 29,94 5,56

67,50 4,0039,68 -7,18

S(b)= 0,05 p(t;b=1)= 0,11 t(b)= 1,60 96,25 -17,75S(a)= 2,66 p(t;a=0)= 0,25 t(a)= 1,15 73,53 3,47

31,80 3,2052,66 -6,66114,79 12,71110,16 23,34105,06 10,44

Repeatability 108,77 -1,77r 89,76 -8,26

rob. r 8,15 -0,1526,23 -3,237,22 -2,2231,80 4,7031,33 -6,83114,79 6,7126,23 -0,73132,41 14,09130,56 -35,0672,60 6,40103,20 5,8012,32 -0,8210,47 -5,47114,79 -2,79139,83 -4,8313,25 36,75138,44 -3,44

33,63 30,4017,61 14,68

Reference method Alternative method



0

20

40

60

80

100

120

140

0 20 40 60 80 100 120 140

Alt

ern

ativ

e m

eth

od

(C

FU

/100

or

250

mL

)

Reference method(CFU/100 or 250 mL)

Relative accuracy - Coliforms

Points represent the mean of the two replicates for each sampleThe right in dotted lines represents the right of equation y=x



Sample Replicate 1 Replicate 2 M SD Sample Replicate 1 Replicate 2 M SD1 1,08 1,18 1,13 0,07 1 1,66 1,58 1,62 0,06 0,492 1,60 1,53 1,57 0,05 2 1,46 1,62 1,54 0,11 -0,023 1,72 1,81 1,77 0,06 3 1,67 1,61 1,64 0,04 -0,124 1,68 1,85 1,77 0,12 4 1,72 1,72 1,72 0,00 -0,045 1,23 1,40 1,31 0,12 5 1,15 1,20 1,18 0,04 -0,146 2,14 2,11 2,12 0,02 6 2,05 2,06 2,06 0,01 -0,077 2,05 2,09 2,07 0,02 7 2,05 2,08 2,06 0,02 -0,018 1,88 1,88 1,88 0,00 8 1,70 1,74 1,72 0,03 -0,169 1,48 1,45 1,46 0,02 9 1,46 1,62 1,54 0,11 0,0810 1,83 1,85 1,84 0,01 10 1,83 1,88 1,85 0,04 0,0111 1,58 1,61 1,60 0,02 11 1,54 1,48 1,51 0,05 -0,0912 2,03 1,98 2,00 0,03 12 1,89 1,90 1,89 0,00 -0,1113 1,87 1,89 1,88 0,02 13 1,85 1,92 1,89 0,05 0,0014 1,34 1,60 1,47 0,18 14 1,52 1,57 1,54 0,04 0,0715 1,73 1,72 1,73 0,01 15 1,66 1,66 1,66 0,00 -0,0716 2,07 2,09 2,08 0,02 16 2,09 2,12 2,11 0,02 0,0217 2,01 2,11 2,06 0,07 17 2,09 2,16 2,12 0,05 0,0618 2,06 2,02 2,04 0,03 18 2,15 1,95 2,05 0,14 0,0119 2,08 2,03 2,06 0,04 19 2,08 1,97 2,03 0,07 -0,0320 1,99 1,95 1,97 0,03 20 1,90 1,92 1,91 0,02 -0,0621 0,78 0,70 0,74 0,06 21 0,95 0,85 0,90 0,08 0,1622 1,43 1,36 1,40 0,05 22 1,34 1,38 1,36 0,03 -0,0423 0,70 0,60 0,65 0,07 23 0,60 0,78 0,69 0,12 0,0424 1,46 1,52 1,49 0,04 24 1,49 1,62 1,56 0,09 0,0725 1,38 1,57 1,47 0,13 25 1,48 1,28 1,38 0,14 -0,1026 2,11 2,05 2,08 0,04 26 2,05 2,11 2,08 0,04 0,0027 1,36 1,43 1,40 0,05 27 1,43 1,38 1,41 0,04 0,0128 2,14 2,15 2,14 0,01 28 2,16 2,17 2,17 0,01 0,0229 2,17 2,10 2,14 0,05 29 2,05 1,90 1,97 0,11 -0,1630 1,97 1,75 1,86 0,16 30 1,90 1,90 1,90 0,00 0,0431 1,85 2,16 2,00 0,23 31 2,11 1,95 2,03 0,11 0,0332 0,95 1,04 1,00 0,06 32 1,00 1,11 1,06 0,08 0,0633 1,00 0,78 0,89 0,16 33 0,78 0,60 0,69 0,12 -0,2034 2,08 2,08 2,08 0,00 34 2,09 2,00 2,05 0,07 -0,0335 2,17 2,17 2,17 0,00 35 2,13 2,13 2,13 0,00 -0,0436 0,95 1,11 1,03 0,11 36 1,61 1,77 1,69 0,11 0,6637 2,15 2,18 2,16 0,02 37 2,12 2,14 2,13 0,01 -0,03

q= 37 Mx= 1,689 My= 1,699 M= 0,009n= 2 MEDx= 1,842 MEDy= 1,724 MED= -0,005




Relative accuracy log - Coliforms




Calculation method

GMFR Est. y Dev.

1,18 0,44R= 0,88 1,58 -0,04

rob. R= 1,08 1,77 -0,13Sx= 0,44 1,77 -0,05Sy= 0,40 1,35 -0,18

2,10 -0,04r= 0,93 2,05 0,01b= 0,93 Res. SEM= 0,151 1,87 -0,15a= 0,13 Res. SD= 0,214 1,49 0,05

1,84 0,011,61 -0,10

S(b)= 0,06 p(t;b=1)= 0,21 t(b)= 1,28 1,99 -0,09S(a)= 0,18 p(t;a=0)= 0,47 t(a)= 0,73 1,88 0,01

1,50 0,051,73 -0,072,06 0,042,04 0,082,02 0,03

Repeatability 2,04 -0,01r 1,96 -0,05

rob. r 0,82 0,081,43 -0,070,74 -0,051,51 0,041,50 -0,122,06 0,021,43 -0,022,12 0,052,11 -0,141,86 0,041,99 0,041,06 0,000,96 -0,272,06 -0,012,14 -0,011,09 0,602,14 -0,01

0,22 0,200,16 0,18




0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5

Alt

ern

ativ

e m

eth

od

(lo

g C

FU

/100

or

250

mL

)

Reference method (log CFU/100 or 250 mL)

Relative accuracy - ColiformsPoints represent the mean of the two replicates for each sampleThe right in dotted lines represents the right of equation y=x



UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log23 Eau minérale gazeuse 1 ESC.1.1 46 + 46 1,66 38 + 38 1,58 12 + 12 1,08 15 + 15 1,1826 Eau de source 1 ESC.1.111 29 + 29 1,46 42 + 42 1,62 40 + 40 1,60 34 + 34 1,5327 Eau de source naturelle 1 ESC.1.114 47 + 47 1,67 41 + 41 1,61 53 + 53 1,72 64 + 64 1,8128 Eau minérale naturelle 1 ESC.1.115 53 + 53 1,72 53 + 53 1,72 48 + 48 1,68 71 + 71 1,8538 Eau de source 2 ESC.1.119 14 + 14 1,15 16 + 16 1,20 17 + 17 1,23 25 + 25 1,4062 Eau minérale 2 ESC.1.124 87 + 87 1,94 102 + 102 2,01 113 + 113 2,05 130 + 130 2,1164 Eau minérale 3 ESC.1.124 50 + 50 1,70 55 + 55 1,74 76 + 76 1,88 75 + 75 1,8879 Eau de source gazeuse 1 ESC.1.122 46 + 46 1,66 46 + 46 1,66 54 + 54 1,73 53 + 53 1,7280 Eau minérale gazeuse 2 ESC.1.122 36 + 36 1,56 50 + 50 1,70 68 + 68 1,83 66 + 66 1,8281 Eau minérale 4 ESC.1.122 57 + 57 1,76 78 + 78 1,89 53 + 53 1,72 69 + 69 1,8482 Eau de source 3 ESC.1.123 37 + 37 1,57 47 + 47 1,67 36 + 36 1,56 46 + 46 1,6684 Eau de source 4 ESC.1.123 15 + 15 1,18 12 + 12 1,08 14 + 14 1,15 20 + 20 1,3085 Eau minérale gazeuse 2 ESC.1.124 102 + 102 2,01 80 + 80 1,90 78 + 78 1,89 115 + 115 2,0686 Eau de source 5 ESC.1.124 70 + 70 1,85 73 + 73 1,86 72 + 72 1,86 75 + 75 1,8887 Eau minérale 5 ESC.1.124 107 + 107 2,03 107 + 107 2,03 144 + 144 2,16 136 + 136 2,1388 Eau minérale naturelle 2 ESC 1.112 13 + 13 1,11 11 + 11 1,04 15 + 15 1,18 21 + 21 1,3290 Eau minérale 6 ESC 1.111 32 + 32 1,51 30 + 30 1,48 30 + 30 1,48 35 + 35 1,54130 Eau minérale 7 ESC.1.112 76 + 76 1,88 111 + 111 2,05 93 + 93 1,97 109 + 109 2,04131 Eau de source 6 ESC.1.112 141 + 141 2,15 90 + 90 1,95 115 + 115 2,06 105 + 105 2,0233 Eau de forage Mitry-Mory ESC.1.123 31 + 31 1,49 42 + 42 1,62 29 + 29 1,46 33 + 33 1,5253 Eau de réseau Massy ESC.1.122 74 + 74 1,87 47 + 47 1,67 74 + 74 1,87 90 + 90 1,9557 Eau reseau Yerres ESC.1.122 92 + 92 1,96 84 + 84 1,92 56 + 56 1,75 34 + 34 1,53113 Eau de réseau Versaille ESC.1.124 113 + 113 2,05 130 + 130 2,11 128 + 128 2,11 113 + 113 2,05114 Eau de réseau Elancourt ESC.1.123 27 + 27 1,43 24 + 24 1,38 23 + 23 1,36 27 + 27 1,43115 Eau de réseau Paris 12éme ESC.1.123 12 + 12 1,08 31 + 31 1,49 23 + 23 1,36 28 + 28 1,45116 Eau de réseau Aubervilliers ESC.1.121 55 + 55 1,74 53 + 53 1,72 82 + 82 1,91 85 + 85 1,93118 Eau de réseau Nogent ESC.1.121 36 + 36 1,56 39 + 39 1,59 68 + 68 1,83 69 + 69 1,84111 eau de réseau Montreuil ESC.1.124 145 + 145 2,16 148 + 148 2,17 138 + 138 2,14 141 + 141 2,15112 Eau de réseau Saint-Chéron ESC.1.124 138 + 138 2,14 141 + 141 2,15 121 + 121 2,08 123 + 123 2,0998 Eau de réseau Colombes ESC 1.115 10 + 10 1,00 13 + 13 1,11 9 + 9 0,95 11 + 11 1,04100 Eau de fontaine Massy ESC 1.112 6 + 6 0,78 4 + 4 0,60 10 + 10 1,00 6 + 6 0,78101 Eau de réseau Breux ESC 1.111 124 + 124 2,09 100 + 100 2,00 120 + 120 2,08 121 + 121 2,08103 Eau de réseau Crosne ESC 1.111 135 + 135 2,13 135 + 135 2,13 148 + 148 2,17 147 + 147 2,17119 Eau de réseau Paris 12éme ESC.1.119 43 + 43 1,63 55 + 55 1,74 44 + 44 1,64 48 + 48 1,68120 Eau de réseau Paris 9éme ESC.1.121 35 + 35 1,54 34 + 34 1,53 87 + 87 1,94 94 + 94 1,97121 Eau de réseau Clamart ESC.1.121 13 + 13 1,11 11 + 11 1,04 37 + 37 1,57 49 + 49 1,69125 Eau de réseau Colombes ESC.1.121 4 + 4 0,60 12 + 12 1,08 17 + 17 1,23 25 + 25 1,40126 Eau de fontaine Massy ESC.1.119 82 + 82 1,91 104 + 104 2,02 74 + 74 1,87 63 + 63 1,80

Relative accuracy - Escherichia coli

N°

d'échan-

tillon

Type d'eau Souche

Bottled waters

Non bottled

waters

Type d'eau


R1 R2 R1 R2



UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log

UFC /

boîte

Confir-

mation

Résultat

final

Résultat

final log37 Eau minérale 1 ESC.1.124 4 + 4 0,60 3 + 3 0,48 8 + 8 0,90 11 + 11 1,0489 Eau minérale gazeuse 5 ESC 1.115 0 + 0 / 2 + 2 0,30 0 + 0 / 1 + 1 0,00117 Eau minérale 12 ESC.1.121 107 + 107 2,03 93 + 93 1,97 227 + 227 2,36 191 + 191 2,28127 Eau gazeuse 6 ESC.1.120 8 + 8 0,90 3 + 3 0,48 4 + 4 0,60 2 + 2 0,30128 Eau gazeuse 7 ESC.1.120 1 + 1 0,00 10 + 10 1,00 3 + 3 0,48 7 + 7 0,85129 Eau minérale 11 ESC.1.120 2 + 2 0,30 1 + 1 0,00 6 + 6 0,78 1 + 1 0,00110 Eau minérale 10 ESC.1.112 1 + 1 0,00 7 + 7 0,85 6 + 6 0,78 9 + 9 0,9539 Eau minérale 9 ESC.1.113 0 + 0 / 1 + 1 0,00 0 + 0 / 2 + 2 0,3093 Eau minérale 8 ESC 1.111 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /105 Eau de réseau Chelles ESC 1.112 3 + 3 0,48 1 + 1 0,00 5 + 5 0,70 7 + 7 0,85107 Eau de réseau Paris ESC 1.115 2 + 2 0,30 2 + 2 0,30 8 + 8 0,90 12 + 12 1,0897 Eau de réseau Saintry ESC 1.111 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /99 Eau de fontaine Colombes ESC 1.111 275 + 275 2,44 265 + 265 2,42 252 + 252 2,40 242 + 242 2,38108 Eau de réseau Clamart ESC 1.115 3 + 3 0,48 2 + 2 0,30 > 150 + > 150 / > 150 + > 150 /122 Eau de réseau Saint Chéron ESC.1.124 168 + 168 2,23 171 + 171 2,23 151 + 151 2,18 153 + 153 2,18

One or the

other method

present a

result out of

the analysis

range

R2

Bottled waters

Non bottled

waters


N°

d'échan-

tillon

Type d'eau Type d'eau Souche


R1 R2 R1

Results excluded to statistical calculations



Sample Replicate 1 Replicate 2 M SD Sample Replicate 1 Replicate 2 M SD1 12 15 13,5 2,1 1 46 38 42,0 5,7 28,52 40 34 37,0 4,2 2 29 42 35,5 9,2 -1,53 53 64 58,5 7,8 3 47 41 44,0 4,2 -14,54 48 71 59,5 16,3 4 53 53 53,0 0,0 -6,55 17 25 21,0 5,7 5 14 16 15,0 1,4 -6,06 113 130 121,5 12,0 6 87 102 94,5 10,6 -27,07 76 75 75,5 0,7 7 50 55 52,5 3,5 -23,08 54 53 53,5 0,7 8 46 46 46,0 0,0 -7,59 68 66 67,0 1,4 9 36 50 43,0 9,9 -24,010 53 69 61,0 11,3 10 57 78 67,5 14,8 6,511 36 46 41,0 7,1 11 37 47 42,0 7,1 1,012 14 20 17,0 4,2 12 15 12 13,5 2,1 -3,513 78 115 96,5 26,2 13 102 80 91,0 15,6 -5,514 72 75 73,5 2,1 14 70 73 71,5 2,1 -2,015 144 136 140,0 5,7 15 107 107 107,0 0,0 -33,016 15 21 18,0 4,2 16 13 11 12,0 1,4 -6,017 30 35 32,5 3,5 17 32 30 31,0 1,4 -1,518 93 109 101,0 11,3 18 76 111 93,5 24,7 -7,519 115 105 110,0 7,1 19 141 90 115,5 36,1 5,520 29 33 31,0 2,8 20 31 42 36,5 7,8 5,521 74 90 82,0 11,3 21 74 47 60,5 19,1 -21,522 56 34 45,0 15,6 22 92 84 88,0 5,7 43,023 128 113 120,5 10,6 23 113 130 121,5 12,0 1,024 23 27 25,0 2,8 24 27 24 25,5 2,1 0,525 23 28 25,5 3,5 25 12 31 21,5 13,4 -4,026 82 85 83,5 2,1 26 55 53 54,0 1,4 -29,527 68 69 68,5 0,7 27 36 39 37,5 2,1 -31,028 138 141 139,5 2,1 28 145 148 146,5 2,1 7,029 121 123 122,0 1,4 29 138 141 139,5 2,1 17,530 9 11 10,0 1,4 30 10 13 11,5 2,1 1,531 10 6 8,0 2,8 31 6 4 5,0 1,4 -3,032 120 121 120,5 0,7 32 124 100 112,0 17,0 -8,533 148 147 147,5 0,7 33 135 135 135,0 0,0 -12,534 44 48 46,0 2,8 34 43 55 49,0 8,5 3,035 87 94 90,5 4,9 35 35 34 34,5 0,7 -56,036 37 49 43,0 8,5 36 13 11 12,0 1,4 -31,037 17 25 21,0 5,7 37 4 12 8,0 5,7 -13,038 74 63 68,5 7,8 38 82 104 93,0 15,6 24,5









Calculation methodGMFR Est. y Dev.

7,4 34,6R= 1,33 30,9 4,6

rob. R= 0,92 52,3 -8,3Sx= 41,01 53,3 -0,3Sy= 40,99 14,9 0,1

115,3 -20,8r= 0,90 69,3 -16,8b= 1,00 Res. SEM= 18,64 47,3 -1,3a= -6,12 Res. SD= 26,36 60,8 -17,8

54,8 12,734,9 7,1

S(b)= 0,07 p(t;b=1)= 0,99 t(b)= 0,01 10,9 2,6S(a)= 3,81 p(t;a=0)= 0,11 t(a)= 1,61 90,3 0,7

67,3 4,2133,8 -26,811,9 0,126,4 4,694,8 -1,3

Repeatability 103,8 11,7r 24,9 11,6

rob. r 75,8 -15,338,9 49,1114,3 7,218,9 6,619,4 2,177,3 -23,362,3 -24,8133,3 13,2115,8 23,73,9 7,61,9 3,1

114,3 -2,3141,3 -6,339,9 9,184,3 -49,836,9 -24,914,9 -6,962,3 30,7

22,17 29,5917,61 16,14




0

20

40

60

80

100

120

140

0 20 40 60 80 100 120 140

Alt

ern

ativ

e m

eth

od

(C

FU

/100

or

250

mL

)

Reference method(CFU/100 or 250 mL)


Points represent the mean of the two replicates for each sampleThe right in dotted lines represents the right of equation y=x



Echantillon Répétition 1 Répétition 2 M SD Echantillon Répétition 1 Répétition 2 M SD1 1,08 1,18 1,128 0,069 1 1,66 1,58 1,621 0,059 0,4942 1,60 1,53 1,567 0,050 2 1,46 1,62 1,543 0,114 -0,0243 1,72 1,81 1,765 0,058 3 1,67 1,61 1,642 0,042 -0,1234 1,68 1,85 1,766 0,120 4 1,72 1,72 1,724 0,000 -0,0425 1,23 1,40 1,314 0,118 5 1,15 1,20 1,175 0,041 -0,1396 2,05 2,11 2,084 0,043 6 1,94 2,01 1,974 0,049 -0,1097 1,88 1,88 1,878 0,004 7 1,70 1,74 1,720 0,029 -0,1588 1,73 1,72 1,728 0,006 8 1,66 1,66 1,663 0,000 -0,0669 1,83 1,82 1,826 0,009 9 1,56 1,70 1,628 0,101 -0,19810 1,72 1,84 1,782 0,081 10 1,76 1,89 1,824 0,096 0,04211 1,56 1,66 1,610 0,075 11 1,57 1,67 1,620 0,073 0,01112 1,15 1,30 1,224 0,110 12 1,18 1,08 1,128 0,069 -0,09613 1,89 2,06 1,976 0,119 13 2,01 1,90 1,956 0,075 -0,02114 1,86 1,88 1,866 0,013 14 1,85 1,86 1,854 0,013 -0,01215 2,16 2,13 2,146 0,018 15 2,03 2,03 2,029 0,000 -0,11716 1,18 1,32 1,249 0,103 16 1,11 1,04 1,078 0,051 -0,17117 1,48 1,54 1,511 0,047 17 1,51 1,48 1,491 0,020 -0,01918 1,97 2,04 2,003 0,049 18 1,88 2,05 1,963 0,116 -0,04019 2,06 2,02 2,041 0,028 19 2,15 1,95 2,052 0,138 0,01120 1,46 1,52 1,490 0,040 20 1,49 1,62 1,557 0,093 0,06721 1,87 1,95 1,912 0,060 21 1,87 1,67 1,771 0,139 -0,14122 1,75 1,53 1,640 0,153 22 1,96 1,92 1,944 0,028 0,30423 2,11 2,05 2,080 0,038 23 2,05 2,11 2,084 0,043 0,00324 1,36 1,43 1,397 0,049 24 1,43 1,38 1,406 0,036 0,00925 1,36 1,45 1,404 0,060 25 1,08 1,49 1,285 0,291 -0,11926 1,91 1,93 1,922 0,011 26 1,74 1,72 1,732 0,011 -0,18927 1,83 1,84 1,836 0,004 27 1,56 1,59 1,574 0,025 -0,26228 2,14 2,15 2,145 0,007 28 2,16 2,17 2,166 0,006 0,02129 2,08 2,09 2,086 0,005 29 2,14 2,15 2,145 0,007 0,05830 0,95 1,04 0,998 0,062 30 1,00 1,11 1,057 0,081 0,05931 1,00 0,78 0,889 0,157 31 0,78 0,60 0,690 0,125 -0,19932 2,08 2,08 2,081 0,003 32 2,09 2,00 2,047 0,066 -0,03433 2,17 2,17 2,169 0,002 33 2,13 2,13 2,130 0,000 -0,03834 1,64 1,68 1,662 0,027 34 1,63 1,74 1,687 0,076 0,02535 1,94 1,97 1,956 0,024 35 1,54 1,53 1,538 0,009 -0,41936 1,57 1,69 1,629 0,086 36 1,11 1,04 1,078 0,051 -0,55237 1,23 1,40 1,314 0,118 37 0,60 1,08 0,841 0,337 -0,47438 1,87 1,80 1,834 0,049 38 1,91 2,02 1,965 0,073 0,131


N=qn= 76 SDbx= 0,340 SDby= 0,379 Biais



Relative accuracy log - Escherichia coli

Méthode de référence Méthode alternativeDifférence



Choix de la méthodeGMFR Est. y Dév.

0,990 0,631R= 1,40 1,483 0,060

rob. R= 1,05 1,706 -0,063Sx= 0,34 1,707 0,017Sy= 0,38 1,199 -0,024

2,063 -0,089r= 0,87 1,832 -0,113b= 1,12 Res. SEM= 0,19 1,664 -0,002a= -0,28 Res. SD= 0,27 1,774 -0,146

1,724 0,1001,531 0,089

S(b)= 0,09 p(t;b=1)= 0,19 t(b)= 1,31 1,098 0,030S(a)= 0,23 p(t;a=0)= 0,24 t(a)= 1,19 1,943 0,013

1,819 0,0352,133 -0,1041,126 -0,0491,420 0,0711,973 -0,009

Répétabilité 2,015 0,037r 1,397 0,160

rob. r 1,870 -0,1001,565 0,3792,059 0,0241,292 0,1141,301 -0,0161,881 -0,1491,785 -0,2112,131 0,0342,066 0,0780,844 0,2130,722 -0,0322,060 -0,0132,159 -0,0281,590 0,0971,920 -0,3821,553 -0,4751,199 -0,3591,783 0,182

0,20 0,270,20 0,21

Méthode de référence Méthode alternative



0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5

Alt

ern

ativ

e m

eth

od

(lo

g C

FU

/100

or

250

mL

)

Reference method (log CFU/100 or 250 mL)

Relative accuracy - Escherichia coliPoints represent the mean of the two replicates for each sampleThe right in dotted lines represents the right of equation y=x



CFU / plate

Confir-mation

Final result CFU/100 or

250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

7 + 7 0,845 7 + 7 0,845 6 + 6 0,778 10 + 10 1,00031 + 31 1,491 32 + 32 1,505 40 + 40 1,602 21 + 21 1,32269 + 69 1,839 77 + 77 1,886 71 + 71 1,851 77 + 77 1,886120 + 120 2,079 123 + 123 2,090 133 + 133 2,124 129 + 129 2,1118 + 8 0,903 12 + 12 1,079 3 + 3 0,477 6 + 6 0,77835 + 35 1,544 39 + 39 1,591 40 + 40 1,602 38 + 38 1,58059 + 59 1,771 51 + 51 1,708 77 + 77 1,886 85 + 85 1,929132 + 132 2,121 138 + 138 2,140 130 + 130 2,114 137 + 137 2,137

Strain code Water type

Reference method*

CIT.1.4 Mineral water

CIT.1.4 Fountain water

Appendix 6 - Linéarité - Résultats bruts

Alternative method

Replicate 1 Replicate 2Replicate 1 Replicate 2



Level Rep.1 Rep.2 M SD Rep.1 Rep.2 M SD1 7 7 7,0 0,000 6 10 8,0 2,8282 31 32 31,5 0,707 40 21 30,5 13,4353 69 77 73,0 5,657 71 77 74,0 4,2434 120 123 121,5 2,121 133 129 131,0 2,828

Mx = 58,250 My = 60,875q = 4 MEDx = 52,250 MEDy = 52,250n = 2 SDbx = 50,200 SDby = 54,185

N = qn = 8MEDwx = 1,414 MEDwy = 3,536

SDwx = 2,151 SDwy = 5,178rob. SDwx = 2,097 rob. SDwy = 5,242

Calculation method Sx = 46,533OLS; x=réf Sy = 50,470

R = 2,408 r = 0,999rob.R = 2,500 b = 1,083

a = -2,234

M(Réf.) Alt. Est. y Déviation7,0 6,0 5,350 0,65031,5 40,0 31,894 8,106 Res.SD = 6,50473,0 71,0 76,855 -5,855121,5 133,0 129,401 3,5997,0 10,0 5,350 4,65031,5 21,0 31,894 -10,89473,0 77,0 76,855 0,145121,5 129,0 129,401 -0,401

Sb = 0,053Sa = 3,842

p(t;b=1) = 0,165p(t;a=0) = 0,582

t (b) = 1,579t (a) = 0,581

Linéarité

F = 2,734 p(F) = 0,179rob.F = 2,619 rob.p(F) = 0,187

Linearity - Coliforms - Mineral water - CFU/250 mL

Reference method* Alternative method

0

20

40

60

80

100

120

140

0 50 100 150

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(C

FU

/250

mL

)


Linearity - Escherichia coli - Spring water - CFU/250 mL

0

20

40

60

80

100

120

140

0 50 100 150

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(C

FU

/250

mL

)


Linearity - Coliforms - Mineral water - CFU/250 mL



Level Rep.1 Rep.2 M SD Rep.1 Rep.2 M SD1 0,845 0,845 0,845 0,000 0,778 1,000 0,889 0,1572 1,491 1,505 1,498 0,010 1,602 1,322 1,462 0,1983 1,839 1,886 1,863 0,034 1,851 1,886 1,869 0,0254 2,079 2,090 2,085 0,008 2,124 2,111 2,117 0,009


N = qn = 8MEDwx = 0,009 MEDwy = 0,091


Choix méthode Sx = 0,502OLS; x=réf Sy = 0,506

R = 7,077 r = 0,998rob.R = 10,488 b = 1,006

a = 0,003

M(Réf.) Alt. Est. y Deviation1,167 1,279 1,177 0,1021,462 1,544 1,473 0,071 Res.SD = 0,0851,848 1,863 1,861 0,0022,031 1,940 2,046 -0,1061,167 1,230 1,177 0,0541,462 1,580 1,473 0,1061,848 1,813 1,861 -0,0482,031 2,049 2,046 0,004

Sb = 0,064Sa = 0,105

p(t;b=1) = 0,932p(t;a=0) = 0,980

t (b) = 0,089t (a) = 0,026

Linéarité

F = 0,683 p(F) = 0,556rob.F = 0,809 rob.p(F) = 0,507

Linearity - Coliforms - Mineral water - log CFU/250 mL


0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(lo

g C

FU

/250

mL

)


Linearity - Coliforms - Mineral water - log CFU/250 mL





N = qn = 8MEDwx = 3,536 MEDwy = 3,536


Calculation methodGMFR

R = 0,977rob.R = 1,000

Res.SEM = 17,496Res.SD = 24,743

Sx = 49,885 Est y DeviationSy = 51,589 13,568 -9,068

41,490 -2,49060,105 20,895

r = 0,967 142,838 -9,338b = 1,034a = 3,226

Sb = 0,202 p(t;b=1) = 0,872 t (b) = 0,169Sa = 14,848 p(t;a=0) = 0,835 t (a) = 0,150

Linearity

F = 231,228 p(F) = 0,000rob.F = 64,846 rob.p(F) = 0,001

Linearity - Coliforms - Fountain water - CFU/100 mL


0

20

40

60

80

100

120

140

0 50 100 150

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(C

FU

/100

mL

)


Linearity - Coliforms - Fountain water - CFU/100 mL





N = qn = 8MEDwx = 0,039 MEDwy = 0,023



R = 1,577rob.R = 0,596

Res.SEM = 0,183Res.SD = 0,258


1,508 0,0831,748 0,160

r = 0,975 2,295 -0,170b = 1,399a = -0,686

Sb = 0,239 p(t;b=1) = 0,146 t (b) = 1,670Sa = 0,395 p(t;a=0) = 0,133 t (a) = 4,270

Linearity

F = 32,271 p(F) = 0,003rob.F = 166,791 rob.p(F) = 0,000

Linearity - Coliforms - Fountain water - log CFU/100 mL


0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(lo

g C

FU

/100

mL

)


Linearity - Coliforms - Fountain water - log CFU/100 mL



CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

CFU / plate

Confir-mation


250 mL

Final result log

CFU/100 or 250 mL

18 + 18 1,255 12 + 12 1,079 19 + 19 1,279 17 + 17 1,23029 + 29 1,462 29 + 29 1,462 35 + 35 1,544 38 + 38 1,58068 + 68 1,833 73 + 73 1,863 73 + 73 1,863 65 + 65 1,813108 + 108 2,033 107 + 107 2,029 87 + 87 1,940 112 + 112 2,0496 + 6 0,778 8 + 8 0,903 6 + 6 0,778 7 + 7 0,84545 + 45 1,653 29 + 29 1,462 37 + 37 1,568 33 + 33 1,51983 + 83 1,919 90 + 90 1,954 83 + 83 1,919 70 + 70 1,845118 + 118 2,072 124 + 124 2,093 120 + 120 2,079 131 + 131 2,117

Strain code Water type

ESC.1.111 Tap water

Reference method*

ESC.1.111 Spring water

Appendix 6 - Linéarité - Résultats bruts

Alternative method

Replicate 1 Replicate 2Replicate 1 Replicate 2





N = qn = 8MEDwx = 2,121 MEDwy = 3,889



R = 3,365rob.R = 1,833

Res.SEM = 3,480Res.SD = 4,921


32,526 3,97468,896 0,104

r = 0,997 101,322 -1,822b = 0,876a = 7,110

Sb = 0,052 p(t;b=1) = 0,054 t (b) = 2,391Sa = 3,355 p(t;a=0) = 0,078 t (a) = 1,821

Linearity

F = -0,344 p(F) = 0,728rob.F = 0,185 rob.p(F) = 0,838



0

20

40

60

80

100

120

140

0 50 100 150

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(C

FU

/250

mL

)







N = qn = 8MEDwx = 0,012 MEDwy = 0,035


Choix méthode Sx = 0,362OLS; x=réf Sy = 0,303

R = 0,754 r = 0,997rob.R = 2,832 b = 0,835

a = 0,303

M(Réf.) Alt. Est. y Deviation1,167 1,279 1,278 0,0011,462 1,544 1,525 0,019 Res.SD = 0,0471,848 1,863 1,847 0,0172,031 1,940 2,000 -0,0601,167 1,230 1,278 -0,0481,462 1,580 1,525 0,0551,848 1,813 1,847 -0,0342,031 2,049 2,000 0,049

Sb = 0,049Sa = 0,081

p(t;b=1) = 0,015p(t;a=0) = 0,010

t (b) = 3,371t (a) = 3,731

Linéarité

F = 3,800 p(F) = 0,119rob.F = 0,462 rob.p(F) = 0,660

Linearity - Escherichia coli - Spring water - log CFU/250 mL


0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(lo

g C

FU

/250

mL

)


Linearity - Escherichia coli - Spring water - log CFU/250 mL





N = qn = 8MEDwx = 4,596 MEDwy = 5,303



R = 0,943rob.R = 1,154

Res.SEM = 7,326Res.SD = 10,361

Sx = 47,251 Est y DeviationSy = 48,177 3,906 2,594

34,493 0,50784,963 -8,463

r = 0,993 120,138 5,362b = 1,020a = -3,231

Sb = 0,090 p(t;b=1) = 0,834 t (b) = 0,219Sa = 6,716 p(t;a=0) = 0,647 t (a) = 0,630

Linearity

F = 14,785 p(F) = 0,014rob.F = 3,209 rob.p(F) = 0,147

Linearity - Escherichia coli - Tap water - CFU/100 mL


0

20

40

60

80

100

120

140

0 50 100 150

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(C

FU

/100

mL

)


Linearity - Escherichia coli - Tap water - CFU/100 mL





N = qn = 8MEDwx = 0,057 MEDwy = 0,041



R = 0,508rob.R = 0,728

Res.SEM = 0,035Res.SD = 0,049


1,537 0,0071,919 -0,037

r = 0,999 2,066 0,032b = 1,009a = -0,035

Sb = 0,039 p(t;b=1) = 0,825 t (b) = 0,231Sa = 0,065 p(t;a=0) = 0,608 t (a) = 15,990

Linearity

F = 6,399 p(F) = 0,057rob.F = 0,051 rob.p(F) = 0,950

Linearity - Escherichia coli - Tap water - log CFU/100 mL


0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 0,5 1 1,5 2 2,5

Alt

ern

ati

ve m

eth

od

(lo

g C

FU

/100

mL

)


Linearity - Escherichia coli - Tap water - log CFU/100 mL



Résultats bruts

1 2 3 4 5 6Détection coliforme

(UFC/ 100mL)

Détection coliforme

(UFC/ 100mL)


(UFC/ 100mL)


(UFC/ 100mL)


(UFC/ 100mL)


(UFC/ 100mL)

0 0 0 0 0 0 0 00,3 0,4 0 0 1 0 0 00,6 0,7 1 1 2 0 0 01 1,2 2 0 1 1 2 12 2,2 3 2 0 1 0 13 3,2 3 3 3 1 4 1

1 2 3 4 5 6

Détection E.coli (UFC/

100mL)


100mL)


100mL)


100mL)


100mL)


100mL)

0 0 0 0 0 0 0 00,3 0,4 1 0 0 0 1 20,6 0,6 1 0 0 1 0 01 1,1 1 1 1 0 3 12 2,1 2 0 0 1 3 03 2,8 4 1 2 4 1 2

(a): taux calculé à partir de 30 dénombrements

Souche: Escherichia coli

Appendix 7 - Limite de détection (LOD) et Limite de quantification (LOQ)

Réplicats

taux visé (UFC/

100mL)

taux réel (UFC/

100mL) (a)

taux visé (UFC/

100mL)

taux réel (UFC/

100mL) (a)

RéplicatsSouche : Citrobacter freundii



Calculs statistiques

Niveau (UFC/100mL)Nombre

d'échantillons positifs

Ecart-type (So) Biais (Xo)

0 0 0,000 00,4 1 0,408 00,7 3 0,816 0,51,2 5 0,753 12,2 4 1,169 13,2 6 1,225 3

Formules Valeur obtenueNiveau critique (LC) 1,65 So +Xo 1,85

Limite de détection (LOD) 3,3 So+Xo 3,19Limite de quantification

(LOQ) 10 So + Xo 8,66

Niveau (UFC/100mL)Nombre

d'échantillons positifs

Ecart-type (So) Biais (Xo)

0 0 0,000 00,4 3 0,816 0,50,6 2 0,516 01,1 5 1,000 12,1 3 1,265 0,52,8 6 1,366 2

Formules Valeur obtenueNiveau critique (LC) 1,65 So +Xo 1,85

Limite de détection (LOD) 3,3 So+Xo 3,19Limite de quantification

(LOQ) 10 So + Xo 8,66

Citrobacter freundii

Escherichia coli

Limite de détection (LOD) et Limite de quantification (LOQ)



Inclusivité - Escherichia coli

N° Code Microorganisme OrigineColonies

caractéristiques Résultat1 ESC.1.1 Escherichia coli CIP 54127 oui 202 ESC.1.111 Escherichia coli Eau de fontaine oui 243 ESC.1.112 Escherichia coli Effluent secondaire oui 154 ESC.1.113 Escherichia coli Eau de puits oui 165 ESC.1.114 Escherichia coli Eau de puits oui 116 ESC.1.115 Escherichia coli Eau de puits oui 167 ESC.1.116 Escherichia coli Eau de puits oui 198 ESC.1.117 Escherichia coli Eau de puits oui 289 ESC.1.119 Escherichia coli Eau de distribution oui 1210 ESC.1.120 Escherichia coli Eau (Angleterre) oui 811 ESC.1.121 Escherichia coli EPA QC, 031591 oui 812 ESC.1.122 Escherichia coli EPA QC, 082688 oui 913 ESC.1.123 Escherichia coli ERA, 4921:40 oui 1814 ESC.1.124 Escherichia coli Eau de rivière (Tamise) oui 715 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 2616 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 4217 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 3718 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 2219 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 2120 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 1921 / Escherichia coli Souche issue d’un environnement aquatique oui 16

Appendix 8 - Sélectivité



Inclusivité - Coliformes


caractéristiques Résultat1 BUT.1.1 Buttiauxella agrestis Eau de puits oui 212 CIT.1.2 Citrobacter freundii ATCC 8090 oui 363 CIT.1.4 Citrobacter freundii Eau de puits oui 64 CIT.1.5 Citrobacter freundii Eau de puits oui 125 CIT.2.1 Citrobacter koseri CIP 72.11 oui 286 CIT.2.2 Citrobacter koseri (C. diversus) CIP 82.87 T oui 27 ENTB.1.2 Enterobacter aerogenes CIP 60.86 T oui 108 ENTB.1.3 Enterobacter aerogenes Eau de rivière (Tamise) oui 139 ENTB.2.1 Enterobacter cloacae Eaux usagées oui 3710 ENTB.3.2 Enterobacter sakazakii CIP 57.33 oui 2211 ENTB.3.3 Enterobacter sakazakii CIP 103581 oui 2612 ESC.2.1 Escherichia hermanii CIP 103176 oui 1913 ESC.3.1 Escherichia vulneris CIP 103177T oui 4114 EWI.1.1 Ewingella americana Environnement aquatique oui 3215 HAF.1.2 Hafnia alvei CNRZ 713 oui 5916 / Klebsiella oxytoca Environnement aquatique oui 3717 KLE.1.2 Klebsiella oxytoca Effluent secondaire oui 1418 / Klebsiella spp Environnement aquatique oui 2119 KLU.1.1 Kluyvera sp. Eau oui 6520 KLU.2.1 Kluyvera intermedia CIP 79.27 oui 1521 KLE.2.2 Klebsiella pneumoniae CIP 82.91 oui 2622 LEC.1.1 Leclercia adecarboxylata Environnement aquatique oui 1623 LEC.1.2 Leclercia adecarboxylata CIP 82.92 oui 1524 PAN.1.1 Pantoea agglomerans A181 oui 925 PAN.2.1 Pantoea spp Robinet compteur oui 2326 RAH.1.1 Rahnella aquatilis CIP 78.65 oui 2927 SER.1.1 Serratia ficaria CIP 79.23 oui 1128 SER.2.1 Serratia fonticola CIP 103580 oui 6729 SER.3.1 Serratia marcescens Eau de rivière (Tamise) oui 2030 SER.4.1 Serratia rubidaea CIP 104261 oui 30



Exclusivité - Souches non cibles


caractéristiques Résultat1 SHI.1.1 Shigella flexneri CIP 82.48T non /2 ENTC.1.3 Enterococcus faecalis CIP 103214 non /3 ENTC.3.1 Enterococcus hirae CIP 58.55 non 04 PRO.1.1 Proteus mirabilis CIP 103181 non 235 PSE1.4 Pseudomonas aeruginosa Eau de fontaine non /6 PSE.1.5 Pseudomonas aeruginosa Eau de fontaine non /7 PSE.2.1 Pseudomonas fluorescens CIP 69.13T non /8 SAL.1.80 Salmonella London Escargot de mer décortiqué non 239 STA.1.5 Staphylococcus aureus Eaux superficielles non /10 XAN.1.1 Xanthomonas campestris Evaporateur de climatisation automobile non /11 AER.1.1 Aeromonas hydrophyla Eau de puits non /12 AER.1.2 Aeromonas hydrophyla/sobria1 Eau de puits non /13 MIC.2.1 Micrococcus spp boîte de contact in non /14 PROV.1.1 Providencia stuartii HPA RM non 6915 BAC.4.2 Bacillus subtilis CIP 52.65 T non /16 PROV.1.1 Providencia stuartii HPA RM non /17 STA.2.2 Staphylococcus epidermidis 2 boîte de contact in non /18 PSE.1.6 Pseudomonas aeruginosa Eau de fontaine non /19 STA.4.1 Staphylococcus piscifermentans Evaporateur de climatisation automobile non /20 PSE.1.1 Pseudomonas aeruginosa ATCC 19429 non /21 ENTC.1.2 Enterococcus faecalis ATCC 33186 non /22 STA.3.1 Staphylococcus haemolyticus boîte de contact in non /23 AER.1.4 Aeromonas hydrophila Eau (Japon) non /24 ENTC.4.1 Enterococcus avium Eau (Allemagne) non /25 ENTC.1.4 Enterococcus faecalis Eau de rivière (Tamise) non /26 ENTC.2.2 Enterococcus faecium Environnement aquatique non /27 ENTC.5.1 Enterococcus gallinarum Eau non /28 PRO.1.2 Proteus mirabilis Eau non 8029 STA.1.6 Staphylococcus aureus Eau non /30 PSE.1.7 Pseudomonas aeruginosa Eau d’effluent non /31 SHI.2.1 Shigella sonnei ATCC 9290 oui 7



Laboratoire Résultat (UFC/mL) à 22°C

Résultat (UFC/mL) à 36°C

A >100 9

B 250 <1

C ND ND

D 525 4

E 260 <1

F 234 <1

G 263 <1

H <300 6

I 334 <1

J 230 <1

K 0 2

L 380 70

M 263 <1

N <1 <1

O 306 3

Appendix 9 - Dénombrement des microorganismes revivifiables



Résultats en UFC/250 mL

Lecture Lecture48 h 48 h

A 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1B 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1C 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1D 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1E 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1F 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1G 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1H 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1I 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1J 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1K 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1L 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1M 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1N 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1O 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1

Expert 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1


A 14 14 19 19 23 23 13 13B 22 22 12 12 19 19 11 11C 16 16 18 18 18 18 10 10D 16 16 13 13 21 21 10 10E 26 26 15 15 13 13 13 13F 19 19 18 18 21 21 8 8G 13 13 17 17 9 9 6 6H 18 18 20 20 10 10 10 10I 16 16 14 14 14 14 15 15J 17 17 14 14 11 11 15 15K 26 26 13 13 15 15 8 8L 14 14 5 5 15 15 11 11M 17 17 22 22 14 14 9 9N 14 14 20 20 16 16 18 18O 21 21 16 16 20 20 13 13

Expert 12 12 15 15 20 20 7 7

Résultat après conf.


Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes

Nbre de coliformes

Méthode alternative - Echantillons4 5


Nombre d'E. coli

8

Appendix 10 - Résultats bruts

Niveau 0



Méthode de référence - Echantillons4 5

1

Laboratoire

Laboratoire

Méthode de référence - EchantillonsNiveau 1

Nombre d'E. coli

Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes

Nbre de coliformes





Expert 66 66 44 44 41 41 42 42



Expert 125 125 117 117 135 135 98 98

Nbre de coliformes

2 7Résultat

après conf.Résultat

après conf.Nombre d'E.

coliNbre de

coliformesNbre de

coliformesNombre d'E.

coli

Méthode de référence - Echantillons Méthode alternative - Echantillons3 6 3 6

Niveau 2

Nbre de coliformes

Niveau 3Méthode de référence - Echantillons Méthode alternative - Echantillons

2 7

Nombre d'E. coli

Laboratoire



Nombre d'E. coli

Laboratoire



Résultats en log UFC/250 mL


A 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1B 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1C 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1D 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1E 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1F 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1G 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1H 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1I 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1J 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1K 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1L 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1M 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1N 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1O 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1

Expert 0 <1 0 <1 <1 <1 <1 <1


A 14 1,146 19 1,279 1,362 1,362 1,114 1,114B 22 1,342 12 1,079 1,279 1,279 1,041 1,041C 16 1,204 18 1,255 1,255 1,255 1,000 1,000D 16 1,204 13 1,114 1,322 1,322 1,000 1,000E 26 1,415 15 1,176 1,114 1,114 1,114 1,114F 19 1,279 18 1,255 1,322 1,322 0,903 0,903G 13 1,114 17 1,230 0,954 0,954 0,778 0,778H 18 1,255 20 1,301 1,000 1,000 1,000 1,000I 16 1,204 14 1,146 1,146 1,146 1,176 1,176J 17 1,230 14 1,146 1,041 1,041 1,176 1,176K 26 1,415 13 1,114 1,176 1,176 0,903 0,903L 14 1,146 5 0,699 1,176 1,176 1,041 1,041M 17 1,230 22 1,342 1,146 1,146 0,954 0,954N 14 1,146 20 1,301 1,204 1,204 1,255 1,255O 21 1,322 16 1,204 1,301 1,301 1,114 1,114

Expert 12 1,079 15 1,176 1,301 1,301 0,845 0,845

Nombre d'E. coli

Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes

Nbre de coliformes

1

Laboratoire

Laboratoire

Méthode de référence - EchantillonsNiveau 1

Nombre d'E. coli

8

Appendix 10 - Résultats bruts - Valeurs logarithmiques

Niveau 0



Méthode de référence - Echantillons4 5





Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes

Nbre de coliformes





Expert 66 1,820 44 1,643 1,613 1,613 1,623 1,623



Expert 125 2,097 117 2,068 2,130 2,130 1,991 1,991

2 7 2 7

Laboratoire Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes

Niveau 3Méthode de référence - Echantillons Méthode alternative - Echantillons

Laboratoire

Niveau 2



Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes

Méthode de référence - Echantillons Méthode alternative - Echantillons3 6 3 6

Nbre de coliformes

Nombre d'E. coli



Nombre d'E. coli

Nbre de coliformes



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2016 07 AES REBECCA CF WATERS Summary Reportnf-validation.afnor.org/en/wp-content/uploads/sites/2/2014/03/Synt... · The method REBECCA CF WATERS has been validated by AFNOR Certification