AKTUÁLNE INOVATÍVNE MARKERYV LABORATÓRNEJ DIAGNOSTIKE

Mgr. Michaela BílaOddelenie klinickej biochémie a hematológie,

Ústavný seminár - 4.júna 2014

� Kalprotektín

� SDS - proteinúria

� Cystatín C

� Homocysteín, ApoB

NOVÉ VYŠETRENIA NÁŠHO LABORATÓRIA

KALPROTEKTÍN

� leukocytárny cytosolový proteín (36 kDa),nachádza sa – v neutrofilnýchgranulocytoch , v monocytoch, makrofágoch

� uvoľňuje sa pri zápalových procesoch - pôsobí ako regulátor

�antimikrobiálna, antifungálna, antiproliferačná aktivita(vplyv na angiogenézu, stimuláciu migrácie neutrofilov do oblasti zápalu a zvýšenie fagocytárnej aktivity)

Ukazovateľ zápalu v plazme, moči , pote, v črevnej tekutine a v stolici

KALPROTEKTÍN V STOLICI

� stanovenie v stolici odráža influx neutrofilov do črevného lumenu� koncentrácia kalprotektínu koreluje s intenzitou zápal. procesu v čreve� koreluje s histologickými a endoskopickými nálezmi ochorenia

Rýchly , neinvazívny a citlivý markerčrevného zápalu.

Odber: stolica do jednorázovej odberovej nádobky, Možnosti skladovania: laboratórna teplota – okamžite spracovať

2-8°C – 3 dni, prípadne zmraziť

Možnosti stanovenia -kvantitatívny test /nákladný, časovo náročný/-semikvantitatívny test -CARTEST-Biotec, imunochromatografia, >50µg/g, 50-200 µg/g, >200µg/g-kvalitatívny test

KALPROTEKTÍN V STOLICI

Referenčné hodnoty u dospelých < 50 µg/g stolice

Indikácie a klinický význam:

� skríningové vyšetrenie pri podozrenína zápalové ochorenia čreva pre vhodné internistické odbory , pri pozitívnom výsledku je pacient indikovaný na špeciálne gastroenterologické vyšetrenie)� monitorovanie priebehu a liečby IBD - Inflammatory bowel disease(gastroenterológ)

� diferenciálna diagnostika na odlíšenie IBD ( chronických zápalov čreva –Crohnova choroba, ulcerózna kolitída ) a ISB (syndróm dráždivého čreva)

� zvýšená koncentrácia kalprotektínu v stolici aj pri:-bakteriálnej infekcii GIT-tumoroch: karcinóme hr. čreva, žalúdka, intestinálnom lymfóme, kolorektálnom adenóme-pri užívaní liekov: nesteroidné protizápalové lieky, inhibítory protónovej pumpy-neliečených potravinových alergiách, neliečenej celiakii, autoimúnnej enteropatii,

divertikulózečreva

ELEKTROFORÉZA BIELKOVÍN V MO ČI SDS ELFO

� elektroforetické rozdelenie močových bielkovín (podľa molekulovej hmotnosti),

získame kvalitatívny profil bielkovín v moči

� metóda typizácie proteinúrie (glomerulárna a tubulárna)

Bielkoviny sa v moči za normálnych okolností nachádzajú len nepatrnom množstve - Normálna proteinúria : 50 - 150 mg / 24 hod

Pri zvýšenej koncentrácii bielkovín v moči-Patologická proteinúria : >150 mg / 24 hod

Glomerulárna proteinúria - proteíny > 60 kDa - 2 typy podľa veľkosti proteínových molekúl prechádzajúcich glomerulárnou membránou:

• Selektívna:- Albumín 67 kDa- Transferín 80 KDa

• Neselektívna:- Albumín 67 kDa- Transferín 80 kDa- Imunoglobulíny 160 kDa

Tubulárna proteinúria - proteíny <60 kDa– ochorenie tubulov, do moču prechádzajú –β2-mikroglobulín, lyzozým, RBP, A1-mikroglobulín, ľahké reťazce monomér a dimér-BJB, zvyčajne KVP do 1g/24hod

Zmiešaná proteinúria - 60 kDa< proteíny < 60 kDa, ochorenie glomerulov a tubulov

Klasifikácia patologickej proteinúrie

ELEKTROFORÉZA BIELKOVÍN V MO ČI SDS ELFO GEL

Anode

12 Kdal

15 Kdal

23 Kdal33 Kdal45 Kdal67 Kdal77 Kdal0

150 Kdal

800 KdalApplication

Cathode

Tubu

lárn

a

Zm

ieša

ná

Nor

mál

na

Zm

ieša

ná

Glo

mer

ulár

naN

Zm

ieša

ná

Glo

mer

ulár

naS

� elfo profil bielkovín v moči hodnotíme prítomnosť bielkovín > 60 kDa,< 60 kDa

Nález bielkovín hodnotíme vzhľadom na kvantitatívne výsledky:

�kvantitatívnu proteinúriu KVP (presnejšie pomer ku kreatinínu)

� kvantitatívnu mikroalbuminúria

Kvalita – elfo profil bielkovín v moči – typ proteinúrie

Kvantita – kvantitatívne stanovenie KVP, µALB – intenzita poškodenia obličiek

Interpretácia výsledkov SDS elfo bielkovín moču :

CYSTATÍN C

�neglykolyzovaný jednoreťazcový proteín

�inhibítor cysteínových proteáz

�syntetizovaný vo všetkých jadrových bunkách konštantnou rýchlosťou –stála koncentrácia v sére (0,8-1,2 mg/l)

�voľne filtrovaný v glomeruloch

�kompletne reabsorbovaný a následne degradovaný v tubuloch

�v moči sa za normálnych okolností nenachádza (okrem stavu tubulárnehopoškodenia obličiek)

� koncentrácia CYS C neovplyvňujú infekcie, zápalové procesy, svalová hmota, telesná hmotnosť, vek, telesná výška- deti

CYSTATÍN C

Pre svoje vlastnosti:

� marker akútneho renálneho zlyhania (reaguje o 24 h skôr ako kreatinín)

� marker chronického renálneho zlyhávania - dg. a klasifikácia CHRI (podľa GF)

� alternatívny a citlivejší marker pre stanovenie GF v porovnaní s GF stanoveného pomocou kreatinínu

CYSTATÍN C

Vhodné skupiny pacientov – pre skorý záchyt, problémy so svalovou hmotou:� deti a seniory� diabetici a hypertonici� onkologickí pacienti� kriticky chorí pacienti� monitorovanie obličkových funkcií u transplantovaných pacientov

Kontraindikácie:�pri podávaní glukokortikoidov (↑ koncentrácia Cys C)�pri nekompenzovanej hypertyreóze (↑ koncentrácia Cys C)�pri nekompenzovanej hypotyreóze ( ↓koncentrácia Cys C)�pri progresívnom melanóme, pri lymfoprolyferatívnych procesoch,

kolorektálnom karcinóme (↑ koncentrácia Cys C)

HOMOCYSTEÍN

� aminokyselina, ktorá vzniká demetyláciou esen. AMK metionínu� k metabolizmu sú potrebné kofaktory – kys. listová, vitamínyB6, B12

poruchy metabolizmu AMK – zvýšenie koncentrácii HCY v krvi toxický – poškodzuje cievny endotel

HOMOCYSTEÍN

Referenčné hodnoty : 5-15 µmol/l

Podľa závažnosti poznáme hyperhomocysteinémiu:Mierne zvýšenú 15-30 µmol/lStredne zvýšenú 30-100 µmol/lŤažkú >100 µmol/l

Pre správny výsledok je dôležité – rýchly transport na ľade a rýchle spracovanie

(za každú hodinu skladovania pri izbovej teplote stúpa konc. o 10%)

HOMOCYSTEÍN

Príčiny zvýšenia koncentrácie HCY:

� vrodené defekty enzýmuMTHFR /transformuje HCY na metionín/

neprítomnosť cystatión beta-syntetáty /konvertuje HCY na cysteín/

� deficit kofaktorov – kys. listová, vitamínov B6, B12faktory životného štýlu – vegetariánstvo, fajčenie, alkoholmalnutričné stavy

� lieky

Nezávislý rizikový faktor srdcovo-cievnych ochorenítoxicita HCY naruší trombogénu rovnováhu, oxidačno-

redukčnú rovnováhu, tvorbu koagulačných faktorov, aterogénne zmeny

Indikácie - riziko vzniku alebo prítomnosť:

• kardiovaskulárnych ochorení• trombofilných stavov• diabetické komplikácie

• neuropsychiatrické poruchy/ HCY a jeho metabolické produkty sú neurotoxické, rizikový faktor vo vývoji a funkciách CNS /

• komplikácie v tehotenstve • vrodené vývojové vady plodu

HOMOCYSTEÍN

� hlavná bielkovinová zložka lipoproteínových častíc LDL( bohaté na CHOL)� zabezpečuje transport cholesterolu k bunkám� potrebný pre tvorbu lipoproteínov bohatých na TG (VLDL) a zároveň ligand LDL receptora (faktor pre tvorbu častíc rodiny LDL)

Apolipoproteín ApoB

ApoB

Referenčné hodnoty : ženy 0,75 – 1,5 g/lmuži 0,8 – 1,55 g/l

�odráža koncentráciu LDL-Cholesterolu ( LDL-Chol stanovujeme výpočtovo – menej spoľahlivé a presné)

� koncentrácia Apo B sa meria (turbidimetria)� zároveň dáva obraz o počte lipoproteínových častíc

ApoB

Doporučuje sa vyšetrovať:

� nie ako skríningové vyšetrenie lipidového metabolizmu� pri zvýšených hladinách LDL-Chol� pri hyperlipidémii� u pacientov so zvýš. kardiovaskulárnym rizikom a pozitívnou rodinnou anamnézou� sledovanie účinnosti liečby lipidového metabolizmu(LDL-Chol v norme, ↑ApoB)� vzácne diagnostika porúch tvorby ApoB

Zvýšená koncentrácia ApoB – rizikový marker kardiovaskulárneho ochorenia

�Kalprotektín – diagnostika zápalových procesov čreva

�SDS – proteinúria -diagnostika renálneho poškodenia

�Cystatín C -diagnostika funkčnosti obličiek

�ApoB, Homocysteín –rizikové faktory aterosklerózy

Ďakujem za pozornosť.