1

STUDI PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH MANGGIS (Garcinia

mangostana L) TERHADAP KADAR MALONDIALDEHIDA DAN GAMBARAN

HISTOPATOLOGI BRONKUS PADA TIKUS (Rattus norvegicus) YANG

TERPAPAR ASAP ROKOK

THE STUDY OF ETHANOL EXTRACT OF MANGOSTEEN PEEL (Garcinia

mangostana L) TOWARD MALONDIALDEHIDA LEVELS AND BRONCHIAL

HISTOPATHOLOGIC PICTURES IN RATS (Rattus norvegicus)

EXPOSED TO CIGARETTE SMOKE

Berlya Putri Dwi Fidya Alvi, Aulanniam, Dyah Kinasih Wuragil Program Studi Pendidikan Dokter Hewan, Program Kedokteran Hewan

Universitas Brawijaya

berlyaputri@gmail.com

ABSTRAK

Bronkitis merupakan peradangan yang terjadi pada bronkus. Kandungan asap rokok

yang tergolong dalam Radical Oxygen Species (ROS) menjadi penyebab bronkitis. Penelitian

ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol kulit buah manggis

(Garcinia mangostana L) terhadap kadar malondialdehida (MDA) serta histopatologi

bronkus. Tikus yang dipakai dalam penelitian ini adalah tikus putih (Rattus norvegicus)

jantan berumur 3 bulan yang dibagi dalam 5 kelompok. Kelompok 1 adalah tikus sehat

(kontrol negatif), kelompok 2 adalah kelompok kontrol positif yang diberikan paparan asap

rokok, kelompok 3, 4 dan 5 adalah kelompok tikus yang dipapar asap rokok dan mendapat

terapi ekstrak etanol kulit buah manggis (Garcinia mangostana L) 200mg/Kg BB, 400mg/Kg

BB, dan 600mg/Kg BB. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol kulit

buah manggis (Garcinia mangostana L) berpengaruh signifikan terhadap kadar MDA

(p

2

influence the levels of MDA (p

3

yang tinggi menggambarkan kemampuan

xanthone dalam menyerap radikal bebas

secara cepat.

Penelitian ini dilakukan untuk

mengetahui pengaruh pemberian ekstrak

etanol kulit buah manggis (Garcinia

mangostana L) terhadap kadar MDA serta

gambaran histopatologi bronkus tikus

putih (Rattus norvegicus) yang telah

dipapar asap rokok.

MATERI DAN METODE

Persiapan Hewan Coba

Tikus diadaptasi selama tujuh hari

dengan pemberian pakan berupa ransum

basal dan minum ad libitum. Komposisi

ransum basal disusun berdasarkan standar

AOAC (2005) yaitu megandung

karbohidrat, protein, lemak, mineral, dan

vitamin. Hewan coba diperoleh dari UPHP

UGM Yogyakarta. Penggunaan hewan

coba telah mendapatkan persetujuan

Komisi Laik Etik UB dengan No: 183-

KEP-UB. Hewan coba yang digunakan

berumur 3 bulan dengan berat badan rata-

rata 150-200 gram.

Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Manggis

Kulit buah manggis (Garcinia

mangostana L) dicuci bersih menggunakan

air mengalir kemudian dipisahkan dari

buahnya setelah itu dipotong kecilkecil (0,5x1cm

2) agar ekstrak dapat keluar

maksimal kemudian dikeringkan semalam

dalam oven dengan suhu 45C, setelah itu dihancurkan dengan menggunakan blander

kering untuk membuat serbuknya

(Mansour, 2013). Penghilangan tanin

dilakukan sebelum maserasi.

Paparan Asap Rokok pada Hewan Coba

Paparan asap rokok dilakukan

selama satu bulan, dalam sehari hewan

coba tikus putih (Rattus norvegicus)

dipapar dengan 2 batang rokok (Mansour,

2013). Paparan asap rokok dilakukan

dengan menggunakan spuit 60ml

kemudian ujungnya diberi yellow tip.

Siapkan selang plastik sesuai dengan

ukuran rokok, setelah itu rokok dinyalakan

kemudian asap rokok disedot

menggunakan spuit yang ujungnya

dipasang dengan yellow tip. Asap rokok

kemudian ditransfer ke dalam kandang

khusus pengasapan hewan coba. Hal

tersebut dilakukan secara berulang hingga

rokok habis.

Terapi Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis

Terapi dilakukan dengan

memberikan ekstrak etanol kulit buah

manggis (Garcinia mangostana L)

sebanyak 1ml per ekor secara peroral

(sonde) selama tiga minggu dan diberikan

setiap hari (Mansour, 2013).

Pengukuran Kadar MDA

Jaringan bronkus diambil sebanyak

0,1 gram dipotong kecil-kecil lalu digerus

dalam mortar dingin yang diletakkan di

atas balok es. Ditambahkan 1ml NaCl

0,9%, kemudian homogenat dipindah ke

dalam microtube dan disentrifugasi dengan

kecepatan 8000 rpm selama 20 menit dan

diambil supernatannya. Setelah itu diambil

100L supernatan bronkus ditambah 550

L akuades. Lalu ditambahkan 100L

TCA, 250L HCl 1N, dan 100L Na-

Thio. Setiap penambahan reagen larutan

dihomogenkan dengan vortex. Sentrifugasi

dilakukan kembali dengan kecepatan 500

rpm selama 15 menit, setelah itu

supernatan dipisahkan dan dipindahkan

pada microtube baru. Kemudian larutan

diinkubasi dalam waterbath pada suhu

100C selama 30 menit, selanjutnya dibiarkan pada suhu ruang. Sampel diukur

absorbansinya pada max (532 nm) untuk uji TBA dan diplotkan pada kurva standar

yang telah dibuat untuk menghitung

konsentrasi sampel.

Pembuatan Preparat dan Pengamatan

Histopatologi Bronkus

Pengambilan organ bronkus pada

hewan coba tikus (Rattus norvegicus)

dilakukan dengan pembedahan tikus

terlebih dahulu. Sebagian organ yang akan

dibuat preparat disimpan dalam larutan

PFA (Paraformaldehid 4%). Pembuatan

4

preparat histopatologi menggunakan

metode pewarnaan HE (Hematoksilin-

Eosin). Pengamatan difokuskan pada

bagian silia dan otot polos jaringan

bronkus yang diamati menggunakan

mikroskop Olympus CX31 dengan

perbesaran 400x.

Analisa Data

Analisa data yang digunakan dalam

penelitian ini adalah analisa kualitatif

deskriptif untuk gambaran histopatologi

bronkus dan kuantitatif statistik untuk

pengukuran kadar MDA dengan uji

ANOVA, sedangkan untuk mengetahui

perbedaan antar perlakuan dilakukan

analisis lebih lanjut dengan uji BNJ.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol

Kulit Buah Manggis (Garcinia

mangostana L) Terhadap Kadar

Malondialdehida (MDA) Bronkus Tikus

(Rattus norvegicus) yang Terpapar Asap

Rokok

Hasil pengukuran kadar

malondialdehida (MDA) hewan coba

(Rattus norvegicus) pada jaringan bronkus

yang telah dipapar asap rokok tertera

dalam Tabel 1. MDA merupakan hasil

akhir dari peroksidasi lipid serta penanda

adanya stress oksidatif dalam tubuh.

Tabel 1. Perbandingan kadar MDA pada hewan coba setiap perlakuan.

Kelompok Perlakuan Rata-rata Kadar

MDA (g/ml)

Peningkatan Penurunan

Tikus Kontrol Negatif (P0) 0,1410 0,0396 a

0

0

Tikus Kontrol Positif (P1) 0,6030 0,0413 d

327

-

Tikus Paparan Asap Rokok dan

Terapi 200mg/Kg BB (P2)

0,4020 0,0359c

-

33

Tikus Paparan Asap Rokok dan

Terapi 400mg/Kg BB (P3)

0,2430 0,0224b

-

60

Tikus Paparan Asap Rokok dan

Terapi 600mg/Kg BB (P4)

0,1560 0,0268 a

-

74

Keterangan : Notasi yang berbeda menunjukkan adanya pengaruh yang berbeda nyata (p

5

menyerang asam lemak tidak jenuh ganda

dari membran sel yang dapat

menyebabkan kerusakan struktur dan

fungsi dari sel (Winarsi, 2007). Radikal

bebas di dalam tubuh dapat dinetralisir

oleh antioksidan endogen. Antioksidan

endogen utama pada sel-sel tubuh adalah

enzim SOD (Superoxside dismutase).

Antioksidan dapat menghambat pelepasan

H2O2 yang dihasilkan oleh neutrofil pada

hewan coba.

Paparan asap rokok berhubungan

dengan berbagai gangguan saluran nafas.

Zat berbahaya seperti sulfur dioksida,

nitrogen oksida dan partikel hasil paparan

asap rokok menyebabkan peningkatan

imunoglobulin E (IgE) dengan berbagai

mekanisme inflamasi pada saluran nafas,

hal ini sejalan dengan penelitian Santoso

dan Dahlan (2013) yang menyatakan

bahwa polusi udara dan asap rokok

merupakan faktor predisposisi peningkatan

kadar IgE. Paparan asap rokok sebagai

alergen akan memicu Antigen Presenting

Cells (APCs) kemudian didegradasi

menjadi peptida-peptida yang selanjutnya

dipresentasikan pada sel limfosit T atau

yang lebih dikenal dengan sel Th.

Pemaparan asap rokok selama 1 bulan

bertujuan untuk memberikan paparan

alergen secara langsung ke target utama

yaitu saluran pernafasan. Paparan asap

rokok akan mengaktivasi CD4+ dan sel

mast pada saluran pernafasan. CD4+ akan

berdiferensiasi menjadi Th2, saat proses

diferensiasi akan dihasilkan IL-4 dan IL-5.

Th2 yang bergabung dengan IL-5 dapat

mengaktivasi dan meningkatkan produksi

eosinofil. Aktivasi sel mast akan memicu

pelepasan mediator inflamasi seperti

histamin, prostaglandin, leukotrin, dan

sitokin.

Antioksidan merupakan senyawa

yang berfungsi untuk mencegah,

menurunkan reaksi oksidasi, memutus,

menghambat, menghentikan, dan

menstabilisasi radikal bebas (Prakash,

2001). Jumlah radikal bebas yang ada di

dalam tubuh berpengaruh terhadap kerja

antioksidan endogen. Paparan asap rokok

yang diberikan secara terus menerus dapat

meningkatkan radikal bebas dalam tubuh

sehingga akan memicu ketidakseimbangan

antara radikal bebas dan antioksidan

endogen yang akan menyebabkan stress

oksidatif. Tingginya stress oksidatif akan

memicu terjadinya peroksidasi lipid, hal

ini sama seperti yang dipaparkan dalam

penelitian Evans (2000). Peroksidasi lipid

merupakan proses oksidasi asam lipid tak

jenuh rantai panjang (Polyunsaturated

Fatty Acid atau PUFA) pada membran sel

yang menghasilkan radikal peroksidasi

lipid hidroperoksida dan produk aldehida

misalnya MDA.

Menurut Retno (2012) dalam

Prangdimurdi (2011), MDA merupakan

produk akhir yang dapat digunakan untuk

mengetahui derajat kerusakan oksidatif

yang disebabkan oleh peroksidasi lipid.

Peroksidasi lipid hasil dari radikal bebas

akan selalu membentuk reaksi berantai

yang terus berlanjut sampai radikal bebas

ini dihilangkan oleh sistem antioksidan

dari tubuh. Terapi antioksidan yang

digunakan adalah ekstrak etanol kulit buah

manggis (Garcinia mangostana L). Kulit

buah manggis memiliki kandungan

xanthone yang tinggi sehingga memiliki

kemampuan untuk menangkap radikal

bebas yang ada di dalam tubuh akibat

paparan asap rokok. Gugus hidroksi (OH)

yang dimiliki oleh xanthone efektif

mengikat radikal bebas karena elektron

yang tidak memiliki pasangan dapat

berikatan langsung dengan gugus OH yang

dimiliki oleh senyawa xanthone.

Hasil analisis kadar MDA pada

penelitian ini menunjukkan bahwa kadar

MDA pada kelompok tikus yang terpapar

asap rokok (kontrol positif) berbeda nyata

dengan kelompok tikus yang tidak

diberikan paparan asap rokok (kontrol

negatif). Tingginya kadar MDA

disebabkan oleh tingginya peroksidasi

lipid yang secara tidak langsung

menunjukkan tingginya kadar radikal

bebas. Tingginya kandungan radikal bebas

dalam jaringan yang tidak diimbangi oleh

antioksidan akan menyebabkan stress

6

oksidatif. Penelitian lain menunjukkan

antioksidan berperan sebagai zat yang

mampu menetralisir radikal bebas dalam

tubuh (Praptiwi, dkk., 2006). Jadi semakin

tinggi kandungan radikal bebas dalam

jaringan akan berbanding lurus dengan

tingginya stress oksidatif yang dapat

memicu meningkatnya peroksidasi lipid

dengan produk akhir MDA yang

digunakan sebagai penanda (marker)

kerusakan seluler akibat adanya radikal

bebas. Prinsip pengukuran MDA adalah

reaksi satu molekul MDA dengan dua

molekul TBA (Thiobarbituric acid)

membentuk senyawa kompleks MDA-

TBA yang berwarna pink.

Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol

Kulit Buah Manggis (Garcinia

mangostana L) Terhadap Gambaran

Histopatologi Bronkus Tikus (Rattus

norvegicus) yang Terpapar Asap Rokok

Kerusakan jaringan bronkus pada

keadaan bronkitis dapat terjadi akibat

paparan asap rokok. Dinding saluran nafas

normal dilapisi oleh epitel semu berlapis

(pseudostratified) bersilia. Keadaan

bronkitis menyebabkan terjadinya

perubahan sel dan abnormalitas struktur

karena terjadinya inflamasi. Melalui

pemeriksaan histopatologi dari bronkus

didapatkan kerusakan epitel bronkus,

abnormalitas silia dan hipertropi otot

polos.

Gambar 1. Histopatologi jaringan bronkus tikus (Rattus norvegicus) dengan pewarnaan

Hematoksilin-Eosin (HE) (400x) Keterangan: (A) Tikus kontrol negatif, (B) Tikus kontrol positif, (C) Tikus yang diberi paparan asap

rokok dan terapi 200mg/kg BB, (D) Tikus yang diberi paparan asap rokok dan terapi

400mg/kg BB, (E) Tikus yang diberi paparan asap rokok dan terapi 600mg/kg BB.

Tanda panah merah : abnormalitas silia

Tanda panah biru : hipertropi otot polos

Tanda panah hijau : perbaikan silia

Tanda panah orange : penurunan ukuran otot polos

7

Kerusakan jaringan bronkus dapat

disebabkan oleh adanya radikal bebas dari

luar tubuh seperti paparan asap rokok yang

mengandung zat nitric oxide (NO). NO

merupakan senyawa toksik berupa molekul

gas yang diproduksi oleh inducible NO

synthase (iNOS) dengan cara mengubah

asam amino L-ariginin menjadi NO dan

citrulin (Yosida dan Tuder , 2007). NO

dalam saluran pernafasan dihasilkan oleh

berbagai sel termasuk epitel saluran

pernafasan, sel-sel inflamasi (makrofag,

neutrofil, dan sel mast) dan endotel

pembuluh darah. NO dapat terurai menjadi

oksida nitrogen lain yaitu nitrit (NO2) dan

nitrat (NO3). NO juga bereaksi dengan

anion superoksida untuk menghasilkan

peroxynitrite (ONOO-) yang merupakan

molekul sitotoksik dan dapat

menyebabkan kerusakan epitel serta

meningkatkan jumlah sel inflamasi.

Paparan asap secara terus menerus yang

bersifat alergen mampu merangsang

terjadinya inflamasi pada saluran nafas

yang menimbulkan terjadinya remodelling

pada jalan nafas berupa terjadinya

kerusakan epitel dan hipertrofi otot polos,

hal tersebut sejalan dengan apa yang telah

dipaparkan oleh Palmans (2002).

Kerusakan epitel pada saluran

pernafasan terjadi karena adanya sel

mediator inflamasi yaitu eosinofil yang

dilepaskan saat proses inflamasi,

kebocoran mikrovaskuler, hipersekresi

mukus, dan adanya radikal bebas akibat

aktivasi sel. Pelepasan mediator inflamasi

dapat merusak membran biologis

penyusun sel-sel epitel (Supartini et al.,

1995). Proses inflamasi berperan penting

pada hiperreaktivitas bronkus. Peningkatan

produksi mukus dapat mengganggu fungsi

silia.

Paparan asap rokok akan

mengaktivasi CD4+ dan sel mast pada

saluran pernafasan. CD4+ akan

berdiferensiasi menjadi Th2, saat proses

diferensiasi akan dihasilkan IL-4 dan IL-5.

Th2 yang bergabung dengan IL-5 dapat

mengaktivasi dan meningkatkan produksi

eosinofil, sedangkan Th2 yang bergabung

dengan IL-4 akan menginisiasi

pembentukan IgE kemudian terjadi

aktivasi sel mast. Aktivasi sel mast akan

memicu pelepasan mediator inflamasi

seperti histamin, prostaglandin, leukotrin,

dan sitokin. Histamin dapat meningkatkan

terjadinya kontraksi otot polos, sedangkan

prostaglandin E2 (PGE2) dan leukotrin

berperan dalam produksi mukus sehingga

dapat menimbulkan bronkokonstriksi.

Pelepasan sitokin oleh sel mast seperti IL-

4 dan IL-13 akan meningkatkan produksi

IgE, sedangkan IL-5 berperan dalam

aktivasi eosinofil (Baratawidjaja dan

Rengganis, 2010). Eosinofil melepaskan

enzim proteolitik berupa Major Basic

Protein (MBP) yang dapat merusak epitel

karena memiliki daya destruksi terhadap

epitel sementara limfosit melepas limfokin

(IL-5) yang berperan terhadap inflamasi.

Menurut Donno et al., (2000) paparan

tersebut dapat mempengaruhi lama

inflamasi dan menyebabkan kerusakan

struktur epitel.

Nekrosis merupakan salah satu

pola dasar kematian pada sel. Nekrosis

dapat dikenali karena adanya perubahan

secara makroskopis maupun mikroskopis.

Kejadian nekrosis menyebabkan

perubahan pada inti sel yang terdiri dari

tiga proses, yaitu (Lestari dan Mulyono,

2011) piknosis merupakan pengerutan inti

yang terjadi akibat homogenisasi

sitoplasma dan peningkatan eosinofil,

kemudian DNA berkondensasi menjadi

massa yang padat. Selanjutnya terjadi

karioreksis yaitu keadaan inti yang

terfragmentasi (terbagi atas fragmen-

fragmen) yang piknotik kemudian terjadi

kariolisis yaitu pemudaran kromatin

basofil akibat aktivitas DNAse.

Pemberian ekstrak etanol kulit

buah manggis (Garcinia mangostana L)

berfungsi sebagai antioksidan karena

memiliki kandungan xanthone. Xanthone

memiliki gugus hidroksi (OH) efektif

untuk mengikat elektron bebas dari asap

rokok. Antioksidan yang terdapat pada

kulit buah manggis mampu meningkatkan

aktifitas antioksidan endogen (SOD)

8

sehingga dapat menstabilkan ikatan radikal

bebas yang ada di dalam tubuh. Dengan

demikian IgE dapat menurun kemudian

diikuti dengan penurunan aktivitas sel

mast dalam tubuh. Penurunan aktivitas sel

mast akan memicu terjadinya penurunan

pelepasan sel mediator seperti histamin,

prostaglandin, leukotrin, dan sitokin

sehingga terjadi penurunan kontraksi otot

polos. Kontraksi otot polos yang terjadi

akan memicu sel-sel otot untuk melakukan

metabolisme dan menghasilkan distrofin.

Distrofin merupakan protein otot yang

dapat mengikat satu sel otot dengan otot

lainnya sehingga apabila kontraksi otot

polos sering terjadi maka akan terjadi

peningkatan ukuran otot polos. Sebaliknya

jika kontraksi otot polos berkurang maka

akan terjadi penurunan distrofin yang

dapat mengurangi ikatan antara sel-sel otot

yang dapat menyebabkan penurunan

ukuran otot polos. Paparan asap rokok

yang mengaktivasi CD4+ berdiferensiasi

menjadi Th2 yang dapat bergabung dengan

IL-5 dapat mengaktivasi dan peningkatan

produksi eosinofil. Proses perbaikan epitel

terjadi melalui penurunan jumlah

kerusakan epitel saat elektron bebas dari

paparan asap rokok diikat dengan

antioksidan dari xanthone berupa gugus

OH. Xanthone akan memicu peningkatan

aktivitas SOD dalam tubuh untuk

menstabilkan radikal bebas. Dengan

demikian akan terjadi penurunan aktivasi

IL-5 yang akan diikuti dengan penurunan

enzim proteolitik berupa Major Basic

Protein (MBP) sehingga akan terjadi

penurunan jumlah kerusakan epitel.

Hasil penelitian menunjukkan

bahwa pemberian terapi ekstrak etanol

kulit buah manggis (Garcinia mangostana

L) terhadap organ bronkus yang

mengalami bronkitis mampu memperbaiki

kerusakan jaringan akibat inflamasi dari

paparan asap rokok dengan adanya

perbaikan epitel silindris berlapis semu,

silia, dan penurunan ukuran otot polos.

Hasil terbaik ditunjukkan pada (Gambar 1

E) yang mengalami penurunan ukuran otot

polos dan terjadi perbaikan silia, serta

terjadi perbaikan epitel silindris berlapis

semu.

KESIMPULAN

1. Pemberian ekstrak etanol kulit buah manggis (Garcinia mangostana L)

memberikan pengaruh nyata terhadap

kadar malondialdehida (MDA) jaringan

bronkus tikus (Rattus norvegicus).

Penurunan kadar MDA terbaik

ditunjukkan pada pemberian dosis

600mg/Kg BB yang mendekati tikus

kontrol negatif.

2. Pemberian terapi ekstrak etanol kulit buah manggis (Garcinia mangostana L)

terhadap hewan coba tikus (Rattus

norvegicus) yang telah terpapar asap

rokok mampu memperbaiki kerusakan

jaringan bronkus yang ditunjukkan

dengan perbaikan silia dan sel epitel

silindris berlapis semu, serta penurunan

ukuran otot polos.

UCAPAN TERIMAKASIH

Peneliti mengucapkan terimakasih

kepada Nabel Ahmed A Mansour yang

telah mengijinkan penulis mengikuti

penelitian ini. Kepada seluruh staf

Laboratorium Biokimia dan Laboratorium

Fisiologi Hewan Fakultas MIPA,

Universitas Brawijaya atas bantuan dan

kerjasama dalam penyelesaian penelitian

ini.

DAFTAR PUSTAKA

AOAC, International. 2005. Officials

Methods Of Analysis Of AOAC

International. 2 Vols. 16 edition.

Arlington VA. USA. Association

of Analytical Community.

Baratawidjaja , K.G dan I. Rengganis.

2010. Imunologi Dasar, 9th ed,

Fakultas Kedokteran Universitas

Indonesia. Jakarta: p.479.

Departemen Kesehatan RI. 2004. Kawasan

Tanpa Rokok. Pusat Promkes

Depkes RI. Jakarta.

Donno, M.D., D. Bittesnich., A. Chetta.,

D. Olivieri., and M.T. Lopez-

Vidriero. 2000. The Effect of

9

Inflammation on mucocilliary

clearence in asthma. Chest; 118:

1142-9.

Evans, W. J. 2000. Vitamin E, vitamin C,

and exercise. Am J Clin Nutr, 72,

647S-52S.

Fidrianny, I., I. Supradja., dan A.

Soemardji. 2004. Analisis nikotin

dalam asap dan filter rokok. Acta

Pharmaceutica Indonesia;

29(3):100-4.

Halliwell, B. and M. Whiteman. 2004.

Measuring reactive species and

oxidative damage in vivo and in

cell culture: how should you do it

and what do the results mean Br J

Pharmacol, 142, 231-55.

Kumalaningsih. 2006. Antioksidan Alami

Penangkal Radikal Bebas Sumber,

Manfaat, Cara Penyediaan dan

Pengolahan. Surabaya: Trubus

Agrisarana.

Lestari, S.P. Ajeng dan A. Mulyono.

2011. Analisis Citra Ginjal untuk

Identifikasi Sel Piknosis dan Sel

Nekrosis. Jurnal Neutrino Vol.4,

No.1, p:48-66.

Mackay, J and M. Eriksen. 2002. The

tobacco atlas. Switzerland:

Myriad: 18-36.

Mansour, N. A. A. 2013. Antioxidant

Activity of Crude Extract from

Mangosteen (Garcinia mangostana

Linn) Pericarp on The Lung Rat

Wich Exposure by Cigarette

[Thesis]. Master of Agriculture

Product Technology. Faculty of

Agricultural Technology.

Brawijaya University.

Mardiana, L. Tim Penulis PS. 2012.

Ramuan dan Khasiat Kulit

Manggis. Jakarta: Penebar

Swadaya.

Noverina, A. 2011. Kasiat Fantastis Kulit

Manggis, Anti Kanker, Anti

Diabetes, Anti Kolesterol. Ed.

Cetakan 1. Gramedia Widiasarana

Indonesia. Jakarta.

Palmans, E., N.J. Vanacker., R.A.

Pauwels., and J.C. Kips. 2002.

Effect of Age on Allergen Induced

Structural Airway Change in

Brown Norway Rats. Am J Respir

Crit Care Med Vol 165: 1280-

1284.

Prakash, A. 2001. Antioxidant Activity.

Medallion Laboratories: Analytical

Progress Vol 19 No 2: 1-4.

Praptiwi, P. Dewi, M. Harapini. 2006.

Nilai peroksida dan anti radikal

bebas diphenyl pycryl hydrazil

hidrate DPPH ekstrak methanol

Knema laurina. Majalah Farmasi

Indonesia, (17)1: 32-36.

Retno, T. 2012. Pengaruh Pemberian

Isoflavon terhadap Peroksidasi

Lipid pada Hati Tikus Normal.

Indonesia Medicus Veterinus 1(4) :

483-491. ISSN : 2301-784.

Santoso, P dan Z. Dahlan. 2013.

Diferensiasi Asma Atopik dengan

Nonatopik pada Pasien Rawat Jalan

di Klinik Paru-Asma. Fakultas

Kedokteran. Universitas

Padjajaran.

Supartini, N., D.I. Santoso dan T. Kardjito.

1995. Konsep Baru Patogenesis

Asma Bronkial. J. Respire Indo;

15:156-162.

WHO., 2007. Tuberculosis.

http://who.int/mediacentre/factshee

ts//fs104/en/ index.html. Fact sheet

No. 104. Diakese pada 21

Desember 2013.

WHO., 2008. Global Tuberculosis

Control. Geneva: World Health

Organization.

http://www.who.int/tb/publications/

global_report/2008/en/index.html.

Diakese pada 21 Desember 2013.

Winarsi, H. 2007. Antioksidan Alami dan

Radikal Bebas Potensi dan Aplikasi

dalam Kesehatan. Yogyakarta.

Kanisius.

Yoshida, T., and R.M., Tuder. 2007.

Pathobiology of cigarette smoke-

induced chronic obstructive

pulmonary disease. Physiol. Rev.

87 (3), 10471082.

10