367 سوختگي پوشش زخم يهاي بنيادي برا آمنيون غني شده با سلولثرا

http://tumj.tums.ac.ir

Tehran Univ Med J (TUMJ) 2014 September;72(6):367-78

در اتولوگ ي چربيميهاي بنيادي مزانش استفاده از آمنيون غني شده با سلول يوانيمطالعه ح: درجه سهيپوشش زخم سوختگ

، امير اسداهللا 1محمد جواد فاطمي 2، بابك نيكومرام2خواجه رحيمي 3نيا ، شبنم مصطفوي3مريم سخائي

5، مير سپهر پدرام*4مير آتشيا 7، شيرين عراقي6حميدرضا آقايانمجيد مصاحبي ،3مجيد سلطاني

8محمدي مركز ،يمي و ترمكي پالستيجراحگروه -1

ران،ي اي دانشگاه علوم پزشك،ي سوختگقاتيتحق و كي پالستيگروه جراح -2 .رانيتهران، ا

واحد علوم ي دانشگاه آزاد اسالم،يميترم، يپزشك عموم -3 .رانيهران، تهران، ا تيپزشك

ي دانشگاه علوم پزشك،ي سوختگقاتيمركز تحق ،يگروه هماتولوژ -4 .راني تهران، اران،يا

مدرس، تي دانشگاه ترب،يدانشكده علوم پزشك ،يولوژي و راديگروه جراح -5 .رانيتهران، ا

دانشگاه تهران، تهران، يدانشكده دامپزشك مزمن و يها يماري باتقيمركز تحق -6 .رانيا

سم،يالعالج، پژوهشگاه علوم غدد و متابول صعب ي تهران و شركت پژوهشيدانشگاه علوم پزشك

گروه -7 .راني سل، تهران، اناي سيديتول، )س( حضرت فاطمه مارستاني ب،يپرستار

.راني تهران، اران،ي ايدانشگاه علوم پزشك مركز ،يادي بنيها سلوليولوژيگروه ب -8 .راني تهران، ااخته،ي بن ي فناورقاتيقتح

تقاطع بزرگراه جالل آل احمد تهران،: نويسنده مسئول*

دانشكده علوم ، مدرستي دانشگاه ترب،و چمران .ي گروه هماتولوژ،يپزشك

021-82883579: تلفنE-mail: atashia@modares.ac.ir

مختلـف بـدن قابـل يها كاربرد دارند و از بافت ها يماري از ب يعي وس في در درمان ط يادي بن يها سلول: زمينه و هدف ـ رشـد و ن يهـا و فاكتورهـا نيتوكياها به دو روش ترشح س سلول نيا. هستند يجداساز بـه درمـان ي افتـراق سـلول زي

يهـا باشند و ممكـن اسـت سـلول ي م يمي ترم ي از مشكالت جراح يكي ي سوختگ يها زخم. كنند ي كمك م ها يماريب .نديها كمك نما زخمني اعتري سرميد به ترم بتواننياديبن

در مركـز تحقيقـات 1392 ارديبهـشت تا 1391 ماه دي ازپژوهش حاضر از نوع مطالعه تجربي بوده و :روش بررسي .دند شـ مي به سه گروه تقـس يطور تصادف رت به 30 مطالعه در اين .سوختگي دانشگاه علوم پزشكي ايران انجام گرديد

عنوان آسلوالر بهونياز آمن. اتولوگ مورد استفاده قرار گرفتيادي سلول بنهي تهي برايي گروه ده تاكي نالينگوي ايچرب زخـم ساعت 24پس از . شد جادي ا ي زخم سوختگ كي رت 30در هر . استفاده شد يادي انتقال سلول بن ياسكافولد برا

ـ تـر پـيش والر و در گروه سـوم كـه آسل وني و در گروه دوم آمن ي و در گروه اول پانسمان معمول ونيزياكس آنهـا ي چرب زخـم و مشخـصات ميسـرعت تـرم . پوشش زخم استفاده شـد ي برا يادي آسلوالر با سلول بن ونيبرداشته شده بود آمن

.دي گردسهي در سه گروه با هم مقايپاتولوژcm روز،15ميانگين سطح تحت بررسي پس از استفاده از سلول بنيادي در طي :ها يافته

±23/2معيار با انحراف53/4 2cmترتيب و حداقل و حداكثر سطح به

cm و 82/0 2ميانگين سطح تحت بررسي پـس از اسـتفاده از . بوده است 5/10 2

cm روز،15در طي آمنيون آسلوالرcmترتيـب و حداقل و حداكثر سطح بـه ±52/4معيار با انحراف31/10 2

و 57/3 2cm

cm روز،15سطح تحت بررسي پس از استفاده از پمـاد سـيلور در طـي ميانگين ). 5شكل ( بود 9/21 2 بـا 06/9 2

cmترتيب و حداقل و حداكثر سطح به±37/1معيار انحرافcm و 5/5 2

ـ م . بوده اسـت 33/12 2 سـطح زخـم در نيانگيدار اطـور معنـ بـه ي بعد از جراح 15 سوم تا ي در روزها گري از هر دو گروه د يادي سلول بن ي آسلوالر دارا ونيگروه آمن

دار بهتر اطور معن به يادي سلول بن ي دارا يها در زخم ونيزاسيواسكوالر و يبروپالزي ف نيهمچن ).>01/0P(كوچكتر بود )>001/0P( بود گرياز دو گروه د

ميتوانـد بـه تـرم ي مـ ي با منشاء چرب يادي اسكافولد مناسب به همراه سلول بن كيعنوان آسلوالر به ونيآمن: گيري نتيجه . منجر شوديزودتر زخم سوختگ

.ي، سوختگي بافت چرب،يادي سلول بنون،يآمن :كليدي كلمات

كشف شدند1970هاي بنيادي مزانشيمي اولين بار در سال سلول

هـاي بنيـادي، سـلول . ها گـشودند و افق جديدي را در درمان بيماري

ــلول ــايي خود س ــا توان ــايي ب ــازي ه ــايز (Self-renewal)نوس و تم(Differentiation)1-4.هاي بدن هستند به انواع سلول

مقدمه

378 تا 367هاي ، صفحه6 شماره،72دوره،1393شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران، مقاله اصيل

20/06/1393: آنالين 25/05/1393: پذيرش 06/02/1393: دريافت چكيده

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

و همكاراني محمد جواد فاطم 368

378 تا 367، 6، شماره 72، دوره 1393 شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران،

شدند اما اكنـون ها ابتدا از مغز استخوان تهيه مي هرچند اين سلول هاي بدن انسان قابل ها از خيلي از بافت ثابت شده است كه اين سلول

در دهــه گذشــته توســعه قابــل تــوجهي در علــم. جداســازي هــستند Cell)وجود آمده است و درمان بـر پايـه سـلول هاي بنيادي به سلول

based therapy)العالج يافتـه هاي صعب نقش مهمي در درمان بيماري 4-6.است. هاي مناسب براي تهيه سلول بنيـادي چربـي اسـت كي از بافت ي

چربي به مقدار زيادي در بدن وجـود دارد، بـه راحتـي قابـل تهيـه از . ا جراحي است و مقـدار زيـادي سـلول بنيـادي دارد طريق ساكشن ي

سـلول چربـي يـك سـلول 1500 يا 1000طور معمول به ازاي هر بهبنيادي وجـود دارد كـه از ميـزان موجـود در مغـز اسـتخوان و خـون

عـالوه بـر ايـن روش تهيـه از مغـز اسـتخوان . محيطي بيـشتر اسـت 8،7،2.تر و با عوارض بيشتري همراه است تهاجميهاي حاد و مـزمن نقـش مهمـي هاي بنيادي در درمان زخم لسلو

هـاي بعد از سوختگي، تروما يا برداشتن تومـور ايجـاد زخـم . اند يافتههاي پوست، ترميم اوليـه هر چند درمان استاندارد زخم . شود وسيع مي

مهمتـرين دليـل . پذير نيـست يا پيوند پوست است، ولي هميشه امكان هـاي در اينگونه مـوارد، جـايگزين . استمحدودبودن پوست اتولوگ

ال نبوده و در نهايت نياز به پيونـد پوست كاربرد دارند ولي نتايج ايده 11و10و9و4و2و1.پوست اتولوگ دارند

تواننـد در تـرميم و رژنراسـيون هاي بنيادي به دو روش مي سلولروش اول افتـراق . نقـش داشـته باشـد (Tissue regeneration)بافتي 5.هاي ديگر است به سلوليافتن

هـاي اسـتخوان، غـضروف، توانند به سـلول هاي بنيادي مي سلولهـاي چربـي و اپيتليـوم ميوكارد، عروق خـوني، فيبروبالسـت، سـلول

هــاي مــشابه نــورون، انــدوتليال، همچنــين بــه ســلول. افتــراق يابنــدهـاي پـانكراس امكـان تبـديل هاي خوني و سـلول هپاتوسيت، سلول

12-21.دارندها به كراتينوسيت هم وجود دارد هر چنـد امكان تبديل اين سلول

2و12-14و22.نظر وجود دارد در اين زمينه اختالفتواننـد هاي بنيادي است زيرا مي روش دوم اثرات پاراكرين سلول

افـزايش ايـن فاكتورهـا . توكين و فاكتور رشد را ترشح كننـد يانواع سا اپيتليزاسـيون و سـنتز الريزاسيون، دي وژنز، نئوواسكو يباعث ازدياد آنژ

23-25.شود كالژن و در نهايت ترميم بهتر زخم مي

هــاي مــزمن، اثــرات هــاي بنيــادي در زخــم در اســتفاده از ســلولها باعث تغيير محيط زخـم شـده و تـرميم اتفـاق پاراكرين اين سلول

6و26.افتد، هرچند كه افتراق سلولي هم ممكن است موثر باشد ميعنوان جايگزين پوسـت بـراي اولـين بـار در سـال آمنيون به پرده

اولـين 1913 تـا 1910 هـاي مورد توجه قرار گرفت و بين سال 1910آميـز اسـتفاده بـاليني از پـرده آمنيـون بـراي درمـان گزارش موفقيـت 27.هاي پوستي منتشر شد سوختگي و زخم

نـوان يـك ژنيسيته كمي دارد و زماني كـه از آن ع اليه آمنيون آنتي شود باعث كـاهش از دسـت پوشش بيولوژيك براي زخم استفاده مي

ها از بدن، كـاهش احتمـال عفونـت و ينيدادن آب، الكتروليت و پروت ــاكتري ــد ب ــوگيري از رش ــم جل ــرميم زخ ــرعت ت ــزايش س ــا، و اف ه

-ينيين، پـروت يوپروتكـ آمنيون داراي كـالژن، گلي يغشا 29و30.شود مي بـوده و ايـن (Lamellar) و المـالر (Integrin)ساكاريد، اينتگرين پلي

. كننـد مواد تغذيه مناسبي براي پروليزاسيون و افتراق سلولي فراهم مي هـا سلول Seedingهمچنين آسلوالر كردن آمنيون امكان جايگذاري يا

28و30-32.كند را بهتر ميبعد از سوختگي وسيع، مهمترين اقدام براي كاهش مـرگ و ميـر

اين روش باعـث خـارج شـدن نـسج . باشد سوخته مي فتبرداشتن با بايـد آنامـا پـس از . شود سوخته و مرده و كاهش احتمال عفونت مي

بهتـرين پوشـش در اينگونـه مـوارد . زخم بيمار را پوشش مناسب داد هاي وسيع بـه علـت در سوختگي . باشد پيوند پوست از خود بيمار مي

جا پوست بـراي پيونـد تهيـه توان از آن كم بودن وسعت مناطقي كه مي خـوك، پوست جسد، پوست گاو يا . پذير نيست كرد اين روش امكان

هاي صناعي و بيولوژيك يـا تركيبـي در ايـن زمينـه آمنيون و پانسمان ها موقتي بوده و در نهايت بيمـار همه اين پوشش با اين . كاربرد دارند

11و1.كند به پيوند پوست نياز پيدا ميي اين مطالعه بررسـي امكـان اسـتفاده از سـلول هدف ما از طراح

بنيادي با منشا چربي همراه با اسكافولد آمنيون جهـت تـسريع تـرميم . زخم سوختگي بود

اين مطالعه در مركز تحقيقـات .پژوهش از نوع مطالعه تجربي بود

تان حـضرت سوختگي دانشگاه علوم پزشكي ايران با همكاري بيمارس

بررسيروش

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

369 سوختگي پوشش زخم يهاي بنيادي برا آمنيون غني شده با سلولثرا

http://tumj.tums.ac.ir

Tehran Univ Med J (TUMJ) 2014 September;72(6):367-78

و آزمايشگاه حيوانات اين مركز و نيز موسسه بن ياخته و ) س(فاطمه . انجام شده است1392 و 1391موسسه هماپيوند ترميم در سال

زدايي شده به كار هاي آمنيون سلول پرده :تهيه آمنيون بدون سلول با توجه به معيارهاي . رفته در اين مطالعه از شركت هماپيوند تهيه شد

ــده و رد ا ــاليني اهداكنن ــابي پزشــكي و ب ــس از ارزي ــدگي و پ هداكننهاي قابل انتقال، جفت مادران سالم طي عمل غربالگري از نظر بيماري

شود و بالفاصله بـه جراحي سزارين و در شرايط آسپتيك برداشت مي . سرد منتقل گرديدRPMIكيسه استريل حاوي محلول

مكتـوب رضـايت آگاهانـه )مـادران بـاردار (از تمام اهداكنندگان زيـر هـود المينـار سـپس در شـرايط آسـپتيك و در . گرديـد دريافت

چنـدين مرحلـه . ، پرده آمنيون از جفت جدا شـد 100عمودي كالس ــول ــا محل ــشو ب ــاوي Phosphate buffered saline (PBS) شست ح

سيلين و استرپتومايسين تا زماني كه پرده كامال شفاف شـود انجـام پنياز سـمت ) cm4×4(هـاي ده آمنيون پس از برش بـه انـدازه پر. گرديد

,.Bio-Rad Laboratories, Inc)اســتروما بــر روي ورقــه ســلولزي

Gainesville, FL., USA) اي كـه اپيتليـوم بـه قرار داده شد بـه گونـه DMEM/Glycerolطرف باال باشد و به ويال حاوي مخلوط مـساوي

همـراه بـا . قرار گرفت -Cº 86 منتقل شده و براي نگهداري در فريزر اي از خون اهداكننده جهت ارزيـابي ماركرهـاي هر نمونه بافتي نمونه اين نمونه خون توسط يـك . شود وري منتقل مي آويروسي به واحد فر

,HBcAb آزمايشگاه مـستقل و معتبـر از نظـر كليـه ماركرهـاي زيـر

HBsAg, HTLV-1/2 Ab, HIV-1/2 Ab, HCVAb, RPR بررســيبه منظور افزايش ايمني بافت آمـاده شـده، بـر روي نمونـه . رديدگ مي

Polymerase Chainخـون اهداكننـده عـالوه بـر آزمايـشات فـوق،

Reaction (PCR)هاي براي ويروس HCV وHIVگردد نيز انجام مي .هـايي از بافـت و محلـول همچنين در هر مرحلـه از فـرآوري، نمونـه

مـورد ) هـوازي، بيهـوازي و قـارچ (شستشو از نظر آلودگي ميكروبي .گرفتآزمايش قرار

. زدايـي شـد براي تهيه داربست، پرده آمنيون به روش زير سـلول فراينـد Cº 37 ابتدا با قرار دادن ويال حـاوي پـرده آمنيـون در دمـاي

هربار PBSسپس سه مرحله شستشو با محلول . زدايي انجام گرديد يخ-Trypsin محلـول آمنيـون در دقيقه انجـام شـد و پـرده پنجبه مدت

EDTA . دقيقـه در 20ور گرديـد و بـه مـدت غوطه% 25/0با غلظت پس از پايـان هـضم آنزيمـي و شستـشو بـا . قرار گرفت Cº 37 دماي

Cell scraper) اليـه سـلولي سـست شـده و بـه كمـك PBS محلول

Sigma Aldrich, Steinheim, Germany) پـرده . به آرامي برداشته شدزدايـي در زيـر ميكروسـكوپ جهت اطمينـان از رونـد سـلول آمنيون بررسـي (Inverted Microscope, Olympus, Tokyo, Japan) اينورت زدايي شده بـه داخـل محـيط در اين مرحله پرده آمنيون سلول . گرديد

DMEM هـا در يخچـال نگهـداري منتقل شد و تا زمان كاشتن سلول . گرديد

العـه توسـط كميتـه پژوهـشي انجـام ايـن مط :جراحي حيوانـات اصول كار با حيوانات آزمايشگاهي مصوب . دانشگاه تصويب شده بود

وزارت بهداشت، درمان و آموزش پزشـكي در طـي مطالعـه رعايـت بـا Sprague- Dawleyنـر از نـوع ) رت( موش صـحرايي 30 .گرديد

هر حيوان . گرم براي اين مطالعه استفاده شدند 300-350وزن تقريبي . فس جداگانه نگهداري شد و دسترسي آزاد به آب و غذا داشـتند در ق 12 سـاعت روشـنايي و 12 و Cº 21-18 ها در حرارت تقريبـي موش

براي تطابق با محيط سـه روز قبـل از . ساعت تاريكي نگهداري شدند . جراحي به محل آزمايشگاه منتقل گرديدند

رت جهـت 10: تهيه چربي اتولوگ براي تهيه سـلول بنيـادي -2همه رت ها با تزريق . طور تصادفي انتخاب شدند تهيه سلول بنيادي به

,mg/kg9((Alfasan lab ( %2 و زايالزيـن )kg/ mg90( %10 كتـامين

Woerden, Holland) به فرم داخل عضالني بيهوش شـده، و موهـايسپس پوست ناحيه عمل بـا بتـادين . ناحيه اينگوينال آنها تراشيده شد

رديد و موش بـه ميـز جراحـي انتقـال يافـت و پوشـش ضدعفوني گ چربي از ml 2با برش در ناحيه اينگوينال حدود . استريل انجام گرفت ها و چربي بـا دقـت گذاري موش شماره) 1 شكل( اين ناحيه تهيه شد

. انجام گرفت تا بتوان سلول بنيادي را بـه فـرم اتولـوگ اسـتفاده كـرد حاوي سالين نرمال قرارداده شد و در چربي تهيه شده در لوله استريل

بـه موسـسه بـن ياختـه جهـت جداسـازي و كـشت ظرف حاوي يخ .)2 شكل (اي بنيادي انتقال يافت سلول

در مركـز : هاي بنيادي مزانشيمي چربـي جداسازي و كشت سلول شستـشو بـه وسـيله سه بار تهيه سلول بنيادي ابتدا چربي خرد شده و

انجـام Penicillin/streptomycinهاي كبيوتي حاوي آنتي PBS محلول گـرم سـانتريفوژ 500بعد از هر بار شستشو به مدت سه دقيقه و . شد Sigma) %1/0 سپس تيمار بافت چربـي توسـط آنـزيم كالژنـاز . شد

Aldrich, Steinheim, Germany) به مدت سه ساعت و دمـاي Cº 37

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

و همكاراني محمد جواد فاطم 370

378 تا 367، 6، شماره 72، دوره 1393 شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران،

م شد و چربـي در مرحله بعد نوتراليزاسيون آنزيم انجا . صورت گرفت پلـت سـلولي آمـاده . گرم سانتريفوژ گرديـد 500به مدت ده دقيقه و

µm 250 (Becton Dickinson) هـاي شده از مش نـايلون بـا سـوراخ دقيقـه انجـام 10 به مـدت g 500سپس سانتريفيوژ با . عبور داده شد

مـايع كـه دقيقـه در يـك 10تهيه شـده بـه مـدت (Pellet) پلت .شدµmNH4CL160 هـاي قرمـز تخريـب شـوند ار داده شد تا گلبـول قر .

ـ دسـت آمـده از يـك مـش هسپس سانتريفيوژ تكرار شد و محصول ب Cº 37 ها در دماي سلول. عبور داده شد µm 100هاي نايلون با سوراخ

DMEM ،10اكـسيدكربن و يـك محـيط كـشت شـامل گاز دي % 5با ــد ــيFBS ،µm 2 Gluدرص ــي ســيلين و آنت ــامل پن ــك ش و بيوتي

بار عـوض سهمحيط كشت هر هفته . كشت داده شد B -آمفوتريسين نگـه داده شـدند و بـراي Sub-confluent levelهـا در سـلول . شد مي

. استفاده شد Trypsin- EDTAپاساژ از

ــين هويــت ســلول ــاي جداســازي شــده توســط دو روش تعي هــاي ــي ماركره ــت بررس ــيتومتري جه ، CD73 ،CD90 ،CD105فلوس

CD166 و CD34 و CD45ــايي تمــايزي ســلول هــاي و بررســي توانهاي استئوسـيتي و اديپوسـيتي و كندروسـيتي جداسازي شده به سلول

.انجام شد

هاي بنيادي مزانشيمي افزايش يافته سپس روي يـك قطعـه سلول 5×104هـا تعداد سلول . شدند (Seed) كاشته cm 4×4 آمنيون آسلوالر

هاي بنيـادي آمنيون حاوي سلول. بودمتر مربع سلول به ازاي هر سانتي با محيط كشت مشابه نگهداري Cº 37 به مدت دو روز ديگر در دماي

.شدند

ـ رشد و تكثير سلول صـورت روزانـه توسـط هها بـر روي غـشا بهمچنـين از . ها مورد بررسـي قـرار گرفـت بررسي مورفولوژي سلول

ها بـر سلول به منظور بررسي پروليفراسيون اين MTTروش استاندارد .روي غشا استفاده گرديد

شستشو داده شـد و بـه رت PBSدر روز عمل جراحي آمنيون با . انتقال يافت

عـدد 10 رت براي مطالعه انتخاب شـدند كـه 30: روش جراحي چربي اينگوينال آنها بـراي تهيـه سـلول تر پيشآنها گروهي بودند كه . نظر گرفته شدهر گروه ده عدد در . بنيادي استفاده شده بود

mg/kg90( Ketamin 10%, Alfasan (حيوانات با تزريق كتامين

Woerden, Holland و زايالزيـن ) mg/kg9( Xylazin 2%, Alfasan

ab, Woerden, Holland بيهوش شدند و موهـاي ناحيـه پـشت آنهـا ـ . تراشيده شد بـه ميـز اتسپس با بتادين ضد عفـوني انجـام و حيوان

بيوتيـك آنتـي . با شان اسـتريل پوشـانده شـدند و هفتجراحي انتقال يا بعـد از .شـد تـأمين mg/kg60 پروفيالكسي بـا سـفازولين عـضالني بـا Flexion withdrawal pinchاطمينان از عمـق بيهوشـي بـا تـست

.هاي استريل، عمل جراحي شروع شد رعايت روشدرجه ( در هر كدام از حيوانات يك زخم سوختگي تمام ضخامت

Cº 97 جـوش با استامپ مسي داغ شده در آب cm 2×3 به وسعت )3. ثانيه تماس در ناحيه پشت آنها داده شد ايجاد گرديـد 30كه به مدت

در گــروه اول . ســاعت زخــم ســوختگي اكــسيزيون شــد24پــس از اين زخم با پماد سيلور سولفاديازين و گاز اسـتريل پانـسمان ) كنترل(

در گروه دوم زخم با آمنيـون آسـلوالر . دگرديد و با استاپلر فيكس ش در گـروه . پوشانده شد و به روش مشابه گروه كنترل پانسمان گرديـد

منيـون آسـلوالر آ چربي آنها برداشته شده بود، زخم با تر پيشسوم كه در هـر . هاي بنيادي روي آن كاشته شده بودند پوشانده شـد كه سلول

ـ رت با دقت به شماره آن سـلول . ي اتولـوگ اسـتفاده شـد ادهـاي بني پـس . مشابه گروه كنترل انجام شد پانسمان در اين گروه نيز ) 3 شكل(

هـوش آمـدن، هـر حيـوان در قفـس جداگانـه نگهـداري شـد و هاز ب . دسترسي آزاد به آب و غذا داشت

ها به جز اليه آمنيون تعـويض گرديـد بار پانسمان هر سه روز يك بار تـا روز ها هر سه روز يك زخماز همه . ولي آمنيون دستكاري نشد

ها بـا نـصف رت. برداري انجام شد و قبل از انجام پانسمان عكس 15ي فلزي زيـر دوز قبلي بيهوش شدند و به ترتيب شماره، روي صفحه

كش مدرجي كنار زخم آنها قـرار خط ي دوربين قرار داده شدند و پايه ,.Nikon D80 (Nikon Incها توسـط دوربـين ديجيتـال عكس .داديم

Japan) و لنز ml 105 ي و فاصلهcm 80 سپس تـصاوير . گرفته شدندافـزاري ي نرم وتر منتقل و مساحت زخم هر رت توسط برنامه يبه كامپ

ImageJ v1.40g (Wayne Rasband, NIH, USA) (NIH, USA) پـس مجموع وسـعت زخـم . متر تعيين شد حسب سانتي از كاليبره كردن بر

. در هر رت مبناي تجزيه و تحليل آماري قرار گرفت روز15در طي

در ( رت در هـر گـروه سهطور تصادفي از به 15همچنين در روز تمام زخم با يك مارژين پوست نرمال براي بررسـي ) نمونه 9 مجموع

سـپس حيوانـات بـه روش اسـتاندارد و . هيستوپاتولوژي برداشته شد نمونه برداشته شـده در . داكسيدكربن معدوم شدن بدون درد با گاز دي

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

371 سوختگي پوشش زخم يهاي بنيادي برا آمنيون غني شده با سلولثرا

http://tumj.tums.ac.ir

Tehran Univ Med J (TUMJ) 2014 September;72(6):367-78

سـپس بـا . هاي پـارافيني تهيـه شـد درصد فيكس و بلوك 10فرمالين ــرش ــوم ب ــاي ميكروت ــگ 5-6ه ــده و رن ــي داده ش ــزي ميكرون آمي

ائوزين انجام شد و بـا ميكروسـكوپ نـوري بررسـي -هماتوكسيليناپيتليزاســيون، تعــداد عمــق گرانوالســيون، ميــزان ري. انجــام گرفــت

ــت، ــدهاي فيبروبالسـ ــيون در فيلـ cm 125×125نئوواسكوالريزاسـبـا در هر نمونـه تعـداد فيلـدهاي متعـدد بررسـي و . گيري شد اندازه

. در هر گروه گزارش شدميانگين و شـد ي بررسـ SPSS افـزار نرم توسط شدهي آور جمع اطالعات

ـ مقاي بـرا شـدند، محاسـبه meanSD صورت به اطالعات تمام سهي شـد استفاده ANOVAانسيوار زيآنال آزمون از گروه سهي ها نيانگيم .بود ارزشمندي آمار نظر از >05/0P و

در طـي Stem cell از استفاده ازپسميانگين سطح تحت بررسي

و حداقل و حداكثر سـطح +23/2معيار با انحرافcm2 53/4 روز،15 .)4 شكل( بودcm2 5/10 وcm2 82/0ترتيب هب

Acellular amnion از استفاده ازپسميانگين سطح تحت بررسي

و حــداقل و +52/4معيــار بــا انحــرافcm2 31/10 روز،15در طــي ــ ــودcm2 9/21 وcm2 57/3ترتيــب هحــداكثر ســطح ب . )5 شــكل( ب

15در طـي از استفاده از پماد سيلور پسميانگين سطح تحت بررسي

و حـداقل و حـداكثر سـطح +37/1يـار مع با انحـراف cm2 06/9،روز .)6 شكل( بودcm2 33/12 وcm2 5/5ترتيب هب

داري بـين نـوع روش اارتبـاط آمـاري معنـ ANOVAطبق آزمون داري اكـه ارتبـاط معنـ طوري هب. داشتدرماني با ميزان بهبودي وجود

بـا سـطح Stem cellبين گروه تحت درمان بـا پمـاد سـيلور و روش اختالف ميانگين سطح تحت درمان در دو گـروه (ديده شد سوختگي

cm2 5/4 00/0) ( بودP=( ميزان بهبـودي در گـروه تحـت درمـان بـا ،Acellular amnionداري با گروه ا ارتباط آماري معنStem cellشـت دا

ــروه ( ــان در دو گ ــانگين ســطح تحــت درم ــود cm2 6اخــتالف مي ب)00/0P=.( سـلول بنيـادي هر چند نتايج در گروه آمنيـون بـه همـراه دار از دو گروه ديگر بهتر بود اما بين گروه آمنيون آسـلوالر اطور معن به

همچنـين نتـايج پـاتولوژي .داري وجود نداشـت امعن و سيلور تفاوت طرفـه آزمـون آنـاليز واريـانس يـك . مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت

گـروه در متغيرهـاي نشان داد كـه تفـاوت معنـادار آمـاري بـين سـه . وجـود دارد >001/0P و نئوواسكوالريزاسيون >001/0P روپالژيفيب

ــيون ــاي ري اپيتليزاس ــا در متغيره ــيون و=57/0Pام ــق گرانوالس عم104/0P= هـاي مـورد با عنايت به تـساوي گـروه .دار نبودا تفاوت معن

معنادار آماري در مورد متغيرهاي فيبروپالزي پژوهش و وجود تفاوت )001/0P> ( ونيزاسيرنئوواسكوالو )001/0P>( از آزمـون ، Post hoc

مورد مطالعه استفاده شد هاي هاي دوگانه بين گروه مقايسه براي يتوك . خالصه شده است2نتايج در جدول كه

ها مقايسه اختالف ميانگين سطح سوختگي بين گروه:1جدول

%95 نانياطم فاصله

نييپا كران باال كران

P اختالف نيانگيم اريمع انحراف (I-J) گروه (J) (I) گروه

23289/0 00515/6

72620/2- 07517/3

117/0 000/0

624617/0 618474/0

246657/1-

*540159/4

آسلوالر ونيآمن ياديبن سلول

نقره

72620/2 23583/7

23289/0- 33781/4

117/0 000/0

624617/0 611726/0

246657/1

*786816/5

نقره ياديبن سلول

آسلوالر ونيآمن

07517/3- 33781/4-

00515/6- 23583/7-

000/0 000/0

618474/0 611726/0

*540159/4- *786816/5-

نقره آسلوالر ونيآمن

ياديبن سلول

هايافته

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

و همكاراني محمد جواد فاطم 372

378 تا 367، 6، شماره 72، دوره 1393 شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران،

برداشتن چربي اينگوينال براي تهيه سلول بنيادي: 1 شكل

نتايج پاتولوژي: 2جدول

معنادار گروه گروه

A S C

606/0 653/0

S A C

606/0 997/0

(mm2) ونيزاسيتلياپي ر

C A S

653/0 997/0

A S C

215/0 114/0

S A C

215/0 934/0

(mm) ونيگرانوالس عمق

C A S

114/0 934/0

A S C

796/0 001/0<

S A C

796/0 000/0

(NO/HDF)ي بروپالزيف

C A S

000/0 000/0

A S C

072/0 001/0

S A C

072/0 000/0

ونيزاسينئوواسكوالر(NO/HDF)

C A S

001/0 000/0

A: Acellular amnion C: Control S: Stem cell

آمنيون آسلوالر با سلول بنيادي مزانشيمي چربي روي زخم: 2شكل

در گروه آمنيون آسلوالر با سلول بنياديپانزدهمزخم در روز : 3شكل

هاي حاد و مزمن يك مـشكل اساسـي در جراحـي ترميمـي زخمهر چند درمان استاندارد زخم حاد ترميم اوليه، گرافت پوست . هستند

هـاي وسـيع ناشـي از سـوختگي، ترومـا و يا فلپ است، اما در زخـم محـدوديت منـابع پيونـد . رزكسيون تومور اين امكـان وجـود نـدارد

هاي بيولوژيـك و مـصنوعي ت اتولوگ و ناكارآمد بودن جايگزين پوس ورد در مژهـوي بهوع ـن موضـاي. تـود اسـالت موجـت از مشكـپوس

بحث

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

373 سوختگي پوشش زخم يهاي بنيادي برا آمنيون غني شده با سلولثرا

http://tumj.tums.ac.ir

Tehran Univ Med J (TUMJ) 2014 September;72(6):367-78

زخم در روز پانزدهم در گروه آمنيون آسلوالر: 4شكل

عفونت به علت از بـين رفـتن پوسـت . اي دارد سوختگي اهميت ويژه

ترين علـت مـرگ در بيمـاران شايع بدن و شكسته شدن سد دفاعي از در سـوختگي وسـيع بايـد نـسج سـوخته را . با سوختگي وسيع است

در بيـشتر مـوارد . برداشت و زخم حاصله را با پوشش مناسب پوشاند هـاي صـناعي و بيولوژيـك بيمار پوست كافي ندارد و پانـسمان خود 11و1.شوند طور موقت استفاده مي به

هـاي بنيـادي در تـرميم زخـم ر سـلول اغلب مطالعات در مورد اث هـاي بنيـادي بـه سـلول .ها اسـت مربوط به اثرات پاراكرين اين سلول

تواننـد بـه تـرميم زخـم كمـك علت پاراكرين و نيز افتراق سلولي مي .بخشند ها افتراق و مهاجرت را بهبود مي اين سلول. نمايند

كـالژن، ، گرانوالسيون، سنتز ماتريكس خـارج سـلولي و آنژيوژنزيس 33-38و22.هند د اپيتليزاسيون را افزايش مي-ري

هـا توسـط يتوكيناثابت شـده اسـت كـه فاكتورهـاي رشـد و سـ اين فاكتورها مانند فاكتور . شوند هاي بنيادي مزانشيمي ترشح مي سلول

ــروق ــدوتليوم ع Vascular Endothelial Growth Factorرشــد ان

(VEGF) فاكتور رشد مشابه انسولين ،(Insulin- like growth factor) ،ــوم ــاكتور رشــد اپيتيل ــاكتور رشــد (Epithelail growth factor)ف ، ف

ور، فاكتTransforming Growth Factor (TGFB1)گ ـورمينـرانسفـت

زخم در روز پانزدهم در گروه سيلور سولفاديازين: 5 شكل

ــيت ــد كراتينوس ــوئتين، آ(Keratinocyte growth factor) رش نژيوپ

(Angiopoietin) 6 و اينترلوكين (IL-6) 2،6،22،37،39،40.باشد مي هـاي و همكاران ديده شد كه محيط كشت سلول Chenدر مطالعه

يتوكين و فاكتور ابنيادي مزانشيمي مغز استخوان داراي مقدار زيادي س هـاي توانـد باعـث مهـاجرت ماكروفـاژ و سـلول رشد است كـه مـي

41.و باعث تسريع ترميم زخم شوداندوتليال شده هاي بنيادي مزانشيمي و همكاران، سلول Kimهمچنين در مطالعه

هاي فيبروبالست را از طريـق پـاراكرين فعـال اند سلول چربي توانسته در مطالعـه ديگـر 42.وندشـ تـر نموده و باعث ري اپيتليزاسيون سـريع

در پـر شـدن هاي بنيادي مزانشيمي مغز استخوان باعث تـسريع سلولهاي فيبروبالست در ديش كشت سلول(Scratch wound)يك خراش

ها و فاكتورهاي رشـد يتوكيناهمچنين ميزان س . و كراتينوسيت گرديد افـزايش يافـت امـا در روشـني هاي بنيادي به در محيط حاوي سلول

22.وجود نيامد هپروليفراسيون سلولي تفاوت معناداري بس و زيهــا، آنژيــوژن مهــاجرت ســلول درTGF-B1فــاكتور رشــد

رسوب ماتريكس خارج سلولي نقـش مهمـي دارد و ديـده شـده كـه هاي بنيادي مزانشيمي باعث افزايش اين فاكتور رشد در محـيط سلول 44و43.شوند مي

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

و همكاراني محمد جواد فاطم 374

378 تا 367، 6، شماره 72، دوره 1393 شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران،

هاي بنيـادي از ترشـح فـاكتور همچنين ديده شده است كه سلول يتوكين ا كه يك س INF- Tumor Necrosis Factor- نكروز تومور

اين فـاكتور باعـث ايجـاد التهـاب در . كنند التهابي است جلوگيري مي هـاي بنيـادي شود و ممكن است اثر سـلول زخم و تاخير در ترميم مي

-B1 TGFهــاي مــزمن منــع ايــن فــاكتور و افــزايش ترشــح در زخــم 46و45و42و4.باشد

بنيـادي هـاي نـشان داده شـده اسـت كـه سـلول در يك مطالعـه كـه عامـل ترشـح M1مزانشيمي باعث كاهش فعاليـت ماكروفاژهـاي

كه عامل ترشح M2 و نيز افزايش فعاليت ماكروفاژهاي - INF كنندهTGF- B14.گردند باشند مي مي

توانند بـه كراتينوسـيت و هاي بنيادي مزانشيمي مي همچنين سلول يـق بـه تـرميم زخـم كمـك فيبروبالست افتـراق يابنـد و بـه ايـن طر

12-14.نمايند

هـاي بنيـادي در مطالعات متعدد نشان داده شده است كـه سـلول وجود آمدن اسكار، افزايش سرعت بسته شدن زخم و هباعث كاهش ب

47-49.شود افزايش قدرت زخم مي

. ما سعي كرديم وضعيت مشابه سـوختگي را در رت ايجـاد كنـيم ـ امكـان تـر سـه در زخم سـوختگي درجـه خـودي بـا ري هميم خودب

اپيتليزاسيون وجود ندارد زيرا تمـام اليـه زاينـده و غـدد عـرق، غـدد در بيماران سوخته عمقـي . اند هاي مو از بين رفته چربي و نيز فوليكول

وجـود آمـده هالزم است بافت سوخته اكسيزيون شده و سپس نقص ب ما با ايجـاد زخـم سـوختگي درجـه سـه و سـپس . پيوند پوست شود

.سازي كـرديم ساعت شرايط كلينيكي را شبيه 24ن بعد از آاكسيزيون هـاي بنيـادي مزانـشيمي چربـي كـه روي آمنيـون در مطالعه ما سلول

سـرعت تـرميم مـشخص طـور آسلوالر كاشته شده بودند توانستند به . دار بـود ازخم را افزايش دهند و تفاوت بـا هـر دو گـروه ديگـر معنـ

دار نداشت، اما گروه اديگر با هم تفاوت معن هرچند نتايج در دو گروه ممكن است در گـروه سـيلور سـولفاديازين . آمنيون آسلوالر بدتر بود

وتيك موضعي به پيـشگيري از عفونـت و تـرميم يب استفاده از اين آنتي هر چنـد . زخم كمك كرده باشد و به همين دليل نتايج بهتر شده باشد

هاي مخفـي ي احتمال عفونت ها نديديم ول ما عفونت واضحي در رت شـرايط .هـا وجـود دارد بـا توجـه بـه محـيط نگهـداري رت ويـژه به

نگهداري حيوانات و نيز تعامل آنها با زخم خود كامال با اين وضعيت .هاي انسان متفاوت است و نتايج به راحتي قابل تعميم نيستند در زخم

تغييرات پاتولوژي نيـز در گـروه آمنيـون داراي سـلول بنيـادي از ــروه ــن گ ــود و اي ــر ب ــر بهت ــاي ديگ ــهه ــژه ب ــدكسوي ــاي در اين ه

دار داشـت ولـي ري انئوواسكوالريزاسيون و فيبروپالژي تفـاوت معنـ .اپيتليزاسيون متفاوت نبود سلول بنيادي با آمنيون زخم زودتر ههاي گرو در مجموع در زخم

.و كيفيت ترميم هم بهتر بودخوب شد در . از اين نظر مطالعه ما مشابه ساير مطالعات در اين زمينه اسـت

Khosraviدر مطالعـه . مطالعه ما از سلول بنيادي اتولوگ استفاده شـد

Maharlooei هاي بنيـادي مزانـشيمي چربـي در و همكاران نيز سلولول بنيـادي زخم موش ديابتي اثـر مـشابهي داشـتند ولـي آنهـا از سـل

2.لوگرافت استفاده كردندآ. طور موضعي روي زخم استفاده كـرديم هاي بنيادي را به ما سلول

هاي بنيادي وجود دارد و ثابت امكان تزريق سيستميك يا لوكال سلول امـا تزريـق . كننـد ها به محل ضايعه مراجعه مـي شده است اين سلول

ك باشـد مهـاجرت كه اطراف زخم فيبروتي دردناك است و در صورتي استفاده موضعي از آنها باعث توزيـع يكـسان و . شود اختالل مي دچار

اثر بخشي را افـزايش احتمال بهها در سطح زخم شده و مستقيم سلول 4.دهد مي

عنـوان اسـكافولد انتقـال سـلول اسـتفاده ما از آمنيون آسلوالر بـه سـلول بـين اسـكافولد و Synergismثابت شده است كه اثـر . كرديم

اسكافولد بايد . تواند اثرات مفيد آنها را در ترميم زخم افزايش دهد مياثـر . ها را فراهم نمايد و از آنها حمايت كنـد امكان كاشته شدن سلول

هـا خـواص بنيـادي خـود را ها نداشته باشد و سلول منفي روي سلول راحتي از اسكافولد جـدا شـده و بـه ها به همچنين سلول . حفظ نمايند

ــرين، كيتوســان، . وي زخــم مهــاجرت كننــدر ــاكنون از كــالژن، فيب تــك، ــيد الكتي ــك، اس ــيد هيالوروني ــات، اس ــرا، آلژين ــيليكون، اينتگ سكاپروالكتون، تروپواالستين، كربوكسي متيل سلولز، هيدروكسي آپتيت،

عنوان اسكافولد استفاده شده اسـت و بـراي كيتين و پوست اتولوگ به 50-58، 10، 9، 6، 1 .شود ميبياني هر كدام مزايا و معايب

. عنـوان اسـكافولد اسـتفاده كـرديم ما در اين مطالعه از آمنيون بـه هـا روي پـرده آمنيـون بـه مطالعه ما نشان داد كه امكان كاشتن سـلول

عنـوان خوبي وجود دارد و اين پرده عالوه بر داربست انتقال سلول به آسـلوالر . زخـم كمـك كنـد تواند به بهبود يك پانسمان بيولوژيك مي

دهـد بلكـه كاشـته ژني آن را كاهش مـي كردن آن نه تنها خواص آنتي

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

375 سوختگي پوشش زخم يهاي بنيادي برا آمنيون غني شده با سلولثرا

http://tumj.tums.ac.ir

Tehran Univ Med J (TUMJ) 2014 September;72(6):367-78

نظر ما آمنيـون اسـكافولد به. گيرد تر صورت مي شدن سلول هم راحت بـا . هاي بنيـادي اسـت ارزان، در دسترس و مناسبي براي انتقال سلول

تـايج خـوبي دانيم چرا اين اليه به تنهايي در مطالعه مـا ن همه نمي ايننداشته و اين موضوع بر خالف ساير مطالعـاتي اسـت كـه از آمنيـون

28-32.اند استفاده كرده

هاي بنيادي مزانشيمي اتولوگ استفاده ما از چربي براي تهيه سلول هـا در اغلب مطالعات و با اسكافولدهاي مختلـف ايـن سـلول . كرديم

لول بنيادي با منشا و همكاران س Guدر مطالعه . اند اثرات خوبي داشته كـاپروالكتون توانـست -الكتيـك اسـيد چربي به همراه اسكافولد پلي

در دو 59.سرعت ترميم زخم رت به مقدار قابـل توجـه افـزايش دهـد مطالعــه ديگــر هــم همــين ســلول بــا اســكافولدهاي تروپواالســتين و

61و60.كربوكسي متيل سلولز اثرات مشابهي داشته استتـوان تهيـه هاي زيادي مي زانشيمي را از بافت هاي بنيادي م سلول

كرد اما چربي در انسان منبعي فراوان و در دسترس كه تهيه آن راحت هـاي بنيـادي آن عـالوه بـر آن نـسبت سـلول . و با عوارض كم است

در رت كه ما از چربي اتولوگ اسـتفاده كـرديم، چربـي زيـر . باالستامـا از . شن موجود نيـست جلدي وجود ندارد و امكان استفاده از ساك

ن ئچربي نواحي بين دو شـانه، ناحيـه اينگوينـال و ناحيـه رتروپريتـو به نظر ما حجم چربي ناحيه اينگوينـال بيـشتر و . توان استفاده كرد مي

هـاي بنيـادي بايـد بـه در اسـتفاده از سـلول . تر اسـت تهيه آن راحت

. كـرد خطرات آن شامل توانـايي محـدود و تغييـرات فنـوتيپي اشـاره : شتهايي هم دا مطالعه ما محدوديت

ها از پرده آمنيون به روي زخم ما سرعت و ميزان مهاجرت سلول . را بررسي نكرديم و اين خيلي مهم است كه بـه راحتـي انجـام شـود

تواند در اين زمينه كمك كننـده باشـد ولـي كـافي اثربخشي روش مي . نيست

ن يـا افتـراق سـلولي يك از اثـرات پـاراكري بررسي نشد كه كدام اند هـر چنـد كـه بـا توجـه بـه عامل اصلي اثر بخشي اين روش بوده

م عامـل حال انجام شـده تـاثير ايـن دو روش بـا هـ همطالعات كه تا ب هـاي با توجه به اينكه اثر سويي از سلول . تسريع در ترميم زخم است

بود يافـت و هبنيادي مشاهده نشد و كيفيت و سرعت ترميم زخم هم ب شـود فـاز يـك و دو ا توجه به مطالعات مثبت كلينيكي پيـشنهاد مـي ب

.ها انجام شود هاي بنيادي در درمان زخم كلينيكي استفاده از سلولاين مقاله حاصل بخـشي از طـرح تحقيقـاتي تحـت :سپاسگزاري

هاي بنيادي با منشا چربي بررسي اثر آمنيون غني شده با سلول "عنوان و زخـم بـا 3به عنوان پوشش زخم در ترميم زخم سـوختگي درجـه

مصوب دانـشگاه علـوم پزشـكي و خـدمات "ضخامت كامل در رت باشـد كـه بـا مـي 19239 به كد 1391رماني ايران در سال بهداشتي د

حمايت دانشگاه علوم پزشكي و خدمات بهداشتي درماني ايران اجـرا . شده شده است

1. Oshima H, Inoue H, Matsuzaki K, Tanabe M, Kumagai N. Per-manent restoration of human skin treated with cultured epithe-lium grafting: wound healing by stem cell based tissue engineer-ing. Hum Cell 2002;15(3):118-28.

2. Maharlooei MK, Bagheri M, Solhjou Z, Jahromi BM, Akrami M, Rohani L, et al. Adipose tissue derived mesenchymal stem cell (AD-MSC) promotes skin wound healing in diabetic rats. Diabetes Res Clin Pract 2011;93(2):228-34.

3. Friedenstein AJ, Deriglasova UF, Kulagina NN, Panasuk AF, Rudakowa SF, Luriá EA, et al. Precursors for fibroblasts in dif-ferent populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method. Exp Hematol 1974;2(2):83-92.

4. Jiang D, Qi Y, Walker NG, Sindrilaru A, Hainzl A, Wlaschek M, et al. The effect of adipose tissue derived MSCs delivered by a chemically defined carrier on full-thickness cutaneous wound healing. The effect of adipose tissue derived MSCs delivered by a chemically defined carrier on full-thickness cutaneous wound healing. Biomaterials 2013;34(10):2501-15.

5. Castilla DM, Liu ZJ, Tian R, Li Y, Livingstone AS, Velazquez OC. A novel autologous cell-based therapy to promote diabetic wound healing. Ann Surg 2012;256(4):560-72.

6. Kim H, Choi K, Kweon OK, Kim WH. Enhanced wound healing ef-fect of canine adipose-derived mesenchymal stem cells with low-level laser therapy in athymic mice. J Dermatol Sci 2012;68(3):149-56.

7. Song SH, Lee MO, Lee JS, Jeong HC, Kim HG, Kim WS, et al. Ge-netic modification of human adipose-derived stem cells for promot-ing wound healing. J Dermatol Sci 2012;66(2):98-107.

8. Meruane MA, Rojas M, Marcelain K. The use of adipose tissue-derived stem cells within a dermal substitute improves skin regenera-tion by increasing neoangiogenesis and collagen synthesis. Plast Re-constr Surg 2012;130(1):53-63.

9. Huang SP, Hsu CC, Chang SC, Wang CH, Deng SC, Dai NT, et al. Adipose-derived stem cells seeded on acellular dermal matrix grafts enhance wound healing in a murine model of a full-thickness defect. Ann Plast Surg 2012;69(6):656-62.

10. Natesan S, Zamora DO, Wrice NL, Baer DG, Christy RJ. Bilayer hydrogel with autologous stem cells derived from debrided human burn skin for improved skin regeneration. J Burn Care Res 2013;34(1):18-30.

11. Leonardi D, Oberdoerfer D, Fernandes MC, Meurer RT, Pereira-Filho GA, Cruz P, et al. Mesenchymal stem cells combined with an

References

Fatemi M.J. et al.

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

376

378 تا 367، 6، شماره 72، دوره 1393 شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران،

artificial dermal substitute improve repair in full-thickness skin wounds. Burns 2012;38(8):1143-50.

12. Wu Y, Chen L, Scott PG, Tredget EE. Mesenchymal stem cells enhance wound healing through differentiation and angiogene-sis. Stem Cells 2007;25(10):2648-59.

13. Nie C, Yang D, Xu J, Si Z, Jin X, Zhang J. Locally administered adipose-derived stem cells accelerate wound healing through dif-ferentiation and vasculogenesis. Cell Transplant 2011;20(2):205-16.

14. Kataoka K, Medina RJ, Kageyama T, Miyazaki M, Yoshino T, Makino T, et al. Participation of adult mouse bone marrow cells in reconstitution of skin. Am J Pathol 2003;163(4):1227-31.

15. Badiavas EV, Abedi M, Butmarc J, Falanga V, Quesenberry P. Participation of bone marrow derived cells in cutaneous wound healing. J Cell Physiol 2003;196(2):245-50.

16. Kataoka K, Medina RJ, Kageyama T, Miyazaki M, Yoshino T, Makino T, et al. Participation of adult mouse bone marrow cells in reconstitution of skin. Am J Pathol 2003;163(4):1227-31.

17. Cherubino M, Rubin JP, Miljkovic N, Kelmendi-Doko A, Marra KG. Adipose-derived stem cells for wound healing applications. Ann Plast Surg 2011;66(2):210-5.

18. Ho Jeong J. Adipose stem cells and skin repair. Curr Stem Cell Res Ther 2010;5(2):137-40.

19. Trottier V, Marceau-Fortier G, Germain L, Vincent C, Fradette J. IFATS collection: Using human adipose-derived stem/stromal cells for the production of new skin substitutes. Stem Cells 2008;26(10):2713-23.

20. Lau K, Paus R, Tiede S, Day P, Bayat A. Exploring the role of stem cells in cutaneous wound healing. Exp Dermatol 2009;18(11):921-33.

21. Liu ZJ, Zhuge Y, Velazquez OC. Trafficking and differentiation of mesenchymal stem cells. J Cell Biochem 2009;106(6):984-91.

22. Walter MN, Wright KT, Fuller HR, MacNeil S, Johnson WE. Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: an in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays. Exp Cell Res 2010;316(7):1271-81.

23. Kado M, Lee JK, Hidaka K, Miwa K, Murohara T, Kasai K, et al. Paracrine factors of vascular endothelial cells facilitate car-diomyocyte differentiation of mouse embryonic stem cells. Bio-chem Biophys Res Commun 2008;377(2):413-8.

24. Kofidis T, de Bruin JL, Yamane T, Tanaka M, Lebl DR, Swi-jnenburg RJ, et al. Stimulation of paracrine pathways with growth factors enhances embryonic stem cell engraftment and host-specific differentiation in the heart after ischemic myocar-dial injury. Circulation 2005;111(19):2486-93.

25. Nomura T, Ashihara E, Tateishi K, Ueyama T, Takahas-Hi T, Yamagishi M, et al. Therapeutic potential of stem/progenitor cells in human skeletal muscle for cardiovascular regeneration. Curr Stem Cell Res Ther 2007;2(4):293-300.

26. Zografou A, Papadopoulos O, Tsigris C, Kavantzas N, Michalopoulos E, Chatzistamatiou T, et al. Autologous trans-plantation of adipose-derived stem cells enhances skin graft sur-vival and wound healing in diabetic rats. Ann Plast Surg 2013;71(2):225-32.

27. Faulk WP, Matthews R, Stevens PJ, Bennett JP, Burgos H, Hsi BL. Human amnion as an adjunct in wound healing. Lancet 1980;1(8179):1156-8.

28. Lineen E, Namias N. Biologic dressing in burns. J Craniofac Surg 2008;19(4):923-8.

29. Tobita M, Orbay H, Mizuno H. Adipose-derived stem cells: cur-rent findings and future perspectives. Discov Med 2011;11(57):160-70.

30. Delo DM, De Coppi P, Bartsch G Jr, Atala A. Amniotic fluid and placental stem cells. Methods Enzymol. 2006;419:426-38.

31. Kim SS, Song CK, Shon SK, Lee KY, Kim CH, Lee MJ, et al. Effects of human amniotic membrane grafts combined with mar-row mesenchymal stem cells on healing of full-thickness skin defects in rabbits. Cell Tissue Res 2009;336(1):59-66.

32. Ju X, Pan F, Bai S, Tian X, Tong H, Wang J. An experimental study on repairing full-thickness skin wound by human acellular amniotic membrane loaded with adipose-derived stem cells in rats. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi 2010;24(2):143-9.

33. Kehe K, Abend M, Kehe K, Ridi R, Peter RU, van Beuningen D. Tissue engineering with HaCaT cells and a fibroblast cell line. Arch Dermatol Res 1999;291(11):600-5.

34. Kwon DS, Gao X, Liu YB, Dulchavsky DS, Danyluk AL, Bansal M, et al. Treatment with bone marrow-derived stromal cells accelerates wound healing in diabetic rats. Int Wound J 2008;5(3):453-63.

35. Javazon EH, Keswani SG, Badillo AT, Crombleholme TM, Zoltick PW, Radu AP, et al. Enhanced epithelial gap closure and increased angiogenesis in wounds of diabetic mice treated with adult murine bone marrow stromal progenitor cells. Wound Repair Regen 2007;15(3):350-9.

36. Estrada R, Li N, Sarojini H, An J, Lee MJ, Wang E. Secretome from mesenchymal stem cells induces angiogenesis via Cyr61. J Cell Physiol 2009;219(3):563-71.

37. Kim WS, Park BS, Sung JH. The wound-healing and antioxidant ef-fects of adipose-derived stem cells. Expert Opin Biol Ther 2009;9(7):879-87.

38. Nambu M, Kishimoto S, Nakamura S, Mizuno H, Yanagibayashi S, Yamamoto N, et al. Accelerated wound healing in healing-impaired db/db mice by autologous adipose tissue-derived stromal cells com-bined with atelocollagen matrix. Ann Plast Surg 2009;62(3):317-21.

39. Hata N, Shinojima N, Gumin J, Yong R, Marini F, Andreeff M, et al. Platelet-derived growth factor BB mediates the tropism of human mesenchymal stem cells for malignant gliomas. Neurosurgery 2010;66(1):144-56; discussion 156-7.

40. Rattigan Y, Hsu JM, Mishra PJ, Glod J, Banerjee D. Interleukin 6 mediated recruitment of mesenchymal stem cells to the hypoxic tu-mor milieu. Exp Cell Res 2010;316(20):3417-24.

41. Chen L, Tredget EE, Wu PY, Wu Y. Paracrine factors of mesen-chymal stem cells recruit macrophages and endothelial lineage cells and enhance wound healing. PLoS One 2008;3(4):e1886.

42. Kim WS, Park BS, Sung JH, Yang JM, Park SB, Kwak SJ, et al. Wound healing effect of adipose-derived stem cells: a critical role of secretory factors on human dermal fibroblasts. J Dermatol Sci 2007;48(1):15-24.

43. Postlethwaite AE, Keski-Oja J, Moses HL, Kang AH. Stimulation of the chemotactic migration of human fibroblasts by transforming growth factor beta. J Exp Med 1987;165(1):251-6.

44. Li Y, Fan J, Chen M, Li W, Woodley DT. Transforming growth fac-tor-alpha: a major human serum factor that promotes human kerati-nocyte migration. J Invest Dermatol 2006;126(9):2096-105.

45. Yu JM, Jun ES, Bae YC, Jung JS. Mesenchymal stem cells derived from human adipose tissues favor tumor cell growth in vivo. Stem Cells Dev 2008;17(3):463-73.

46. McIntosh K, Zvonic S, Garrett S, Mitchell JB, Floyd ZE, Hammill L, et al. The immunogenicity of human adipose-derived cells: temporal changes in vitro. Stem Cells 2006;24(5):1246-53.

47. Wu Y, Chen L, Scott PG, Tredget EE. Mesenchymal stem cells en-hance wound healing through differentiation and angiogenesis. Stem Cells 2007;25(10):2648-59.

48. Stoff A, Rivera AA, Sanjib Banerjee N, Moore ST, Michael Num-num T, Espinosa-de-Los-Monteros A, et al. Promotion of incisional wound repair by human mesenchymal stem cell transplantation. Exp Dermatol 2009;18(4):362-9.

49. McFarlin K, Gao X, Liu YB, Dulchavsky DS, Kwon D, Arbab AS, et al. Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells accelerate wound healing in the rat. Wound Repair Regen 2006;14(4):471-8.

50. Liu S, Zhang H, Zhang X, Lu W, Huang X, Xie H, et al. Synergistic angiogenesis promoting effects of extracellular matrix scaffolds and adipose-derived stem cells during wound repair. Tissue Eng Part A 2011;17(5-6):725-39.

Amniotic membrane seeded with mesenchymal stem cell for coverage of burn wound

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

377 در بخشهاي جراحي عمومي كارايي دو روش پايش براي تشخيص عفونت محل جراحي

http://tumj.tums.ac.ir

Tehran Univ Med J (TUMJ) 2014 September;72(6):367-78

51. Orbay H, Takami Y, Hyakusoku H, Mizuno H. Acellular dermal matrix seeded with adipose-derived stem cells as a subcutaneous implant. Aesthetic Plast Surg 2011;35(5):756-63.

52. Nambu M, Kishimoto S, Nakamura S, Mizuno H, Yanagibaya-shi S, Yamamoto N, et al. Accelerated wound healing in healing-impaired db/db mice by autologous adipose tissue-derived stro-mal cells combined with atelocollagen matrix. Ann Plast Surg 2009;62(3):317-21.

53. Zong C, Qian X, Tang Z, Hu Q, Chen J, Gao C, et al. Biocom-patibility and bone-repairing effects: comparison between po-rous poly-lactic-co-glycolic acid and nano-hydroxyapatite/poly(lactic acid) scaffolds. J Biomed Nanotech-nol 2014;10(6):1091-104.

54. Kim KO, Lee Y, Hwang JW, Kim H, Kim SM, Chang SW, et al. Wound healing properties of a 3-D scaffold comprising soluble silkworm gland hydrolysate and human collagen. Colloids Surf B Biointerfaces 2014;116:318-26.

55. De Kok IJ, Jere D, Padilla RJ, Cooper LF. Evaluation of a colla-gen scaffold for cell-based bone repair. Int J Oral Maxillofac Implants 2014;29(1):e122-9.

56. Navone SE, Pascucci L, Dossena M, Ferri A, Invernici G, Acerbi F, et al. Decellularized silk fibroin scaffold primed with

adipose mesenchymal stromal cells improves wound healing in dia-betic mice. Stem Cell Res Ther 2014;5(1):7.

57. Zeinali R, Biazar E, Keshel SH, Tavirani MR, Asadipour K. Regen-eration of full-thickness skin defects using umbilical cord blood stem cells loaded into modified porous scaffolds. ASAIO J 2014;60(1):106-14.

58. Biazar E, Keshel SH. The healing effect of stem cells loaded in nan-ofibrous scaffolds on full thickness skin defects. J Biomed Nanotechnol 2013;9(9):1471-82.

59. Gu J, Liu N, Yang X, Feng Z, Qi F. Adiposed-derived stem cells seeded on PLCL/P123 eletrospun nanofibrous scaffold enhance wound healing. Biomed Mater 2014;9(3):035012.

60. Machula H, Ensley B, Kellar R. Electrospun tropoelastin for delivery of therapeutic adipose-derived stem cells to full-thickness dermal wounds. Adv Wound Care (New Rochelle) 2014;3(5):367-375.

61. Rodrigues C, de Assis AM, Moura DJ, Halmenschlager G, Saffi J, Xavier LL, et al. New therapy of skin repair combining adipose-derived mesenchymal stem cells with sodium carboxymethylcellu-lose scaffold in a pre-clinical rat model. PLoS One 2014;9(5):e96241.

Fatemi M.J. et al.

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019

378

378 تا 367، 6، شماره 72، دوره 1393 شهريورمجله دانشكده پزشكي، دانشگاه علوم پزشكي تهران،

Amniotic membrane seeded with mesenchymal adipose-derived stem

cell for coverage of wound in third degree burn: An experimental study

Mohammad Javad Fatemi M.D.1 Amir Asadollah Khajerahimi M.D.2 Babak Nikoumaram M.D.2 Maryam Sakhaei M.D.3

Shabnam Mostafavi M.D.3

Amir Atashi Ph.D.4* Mir sepehr Pedram DVM-DVSc.5

Seyed Hamid Reza Aghayan M.D.,Ph.D.6

Shirin Araghi B.Sc.7

Majid Soltani M.D.3

Majid Mossahebi Mohammadi M.Sc.8 1- Department of Plastic & Recon-structive Surgery, Burn Research Center, Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. 2- Department of Plastic & Recon-structive Surgery, Islamic Azad University, Tehran Medical Sci-ences Branch, Tehran, Iran. 3- General Practitioner, Burn Re-search Center, Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. 4- Department of Hematology, Fac-ulty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. 5- Department of Surgery and Ra-diology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Te-hran, Iran. 6- Chronic Diseases Research Cen-ter, Endocrinology and Metabolism Research Institute, Tehran Univer-sity of Medical Sciences & SinaCell knowledge Based company, Tehran, Iran. 7- Department of Nursing, Hazrat Fatima Hospital, Burn Research Center, Tehran, Iran. 8- Department of Stem cell Biology, Stem cell Technology Research cen-ter, Tehran, Iran. *Corresponding author: Department of

Hematology, Faculty of Medical Sci-ences, Tarbiat Modares University, Jalale Ale Ahmad Highway, Tehran, Iran. Tel: +98- 21- 82883579 E-mail: atashia@modares.ac.ir

Background: Stem cells are applied in the treatment of wide range of diseases and can

be separated from different tissues of the body. These cells can treat diseases by cyto-

kine and growth factor secretion and also cell differentiation. Burn wound is a challeng-

ing problem of reconstructive surgery and stem cells may help wound healing process.

We designed this study to evaluate the beneficial effect of fat derived stem cells for

coverage of 3rd degree burn wound. Methods: This study was experimental and has been done in Burn Research Center of

Iran University of Medical Sciences during January 2012 to April 2013. Thirty rats ran-

domly divided to three equal groups. Inguinal fat of 10 rats (one group) were used for

preparation of autologous adipose-derived mesenchymal stem cells. Acellular amnion

was used as a scaffold for stem cell transfer. Each of the thirty rats had been exposed to

a cm deep 3rd degree burn on back area. 24 hours after surgery, the wound was excised

and it had been covered by three methods: conventional dressing in the first group,

acellular amnion in the second group and acellular amnion seeded with adipose-derived

stem cell in the third group. The rate of wound healing and pathologic characteristics

was compared in all three groups.

Results: Healing rate and decrease in wounds size was significantly better in acellular

amnion seeded with adipose- derived stem cells compared with other two groups at 3rd

and 15th days after surgery P<0.01.

Also in histopathology examination, fibroplasia and neovascularization of wounds were

significantly better in stem cells group than the other two groups P<0.001.

Conclusion: Acellular amnion seeded with adipose-derived stem cell can result in faster wound healing and better histopathology characteristic. The amnion as a scaffold and the fat derived stem cells as healing accelerator are recommended for coverage of the 3rd degree burn wounds after excision and it may reduce the need for skin graft. Keywords: adipose tissue, amnion, burn, stem cell, wound.

Abstract Received: 26 Apr. 2014 Accepted: 16 Aug. 2014 Available online: 11 Sep. 2014

Original Article Tehran University Medical Journal, September 2014; Vol. 72, No. 6: 367-378

Dow

nloa

ded

from

tum

j.tum

s.ac

.ir a

t 10:

05 IR

ST

on

Tue

sday

Dec

embe

r 31

st 2

019