7
a-Melanocyte-Stimulating Hormone Modulates Nitric Oxide Production in Melanocytes 1 Marina Tsatmali, Alison Graham,* Damian Szatkowski, 2 Janis Ancans, Philip Manning,² Calum J. McNeil,² Anne M. Graham, and Anthony J. Thody Department of Biomedical Sciences, University of Bradford, Bradford, U.K.; *Department of Dermatology, Medical School, University of Newcastle upon Tyne, U.K.; ²Department of Clinical Biochemistry, Medical School, University of Newcastle upon Tyne, U.K. We have previously observed that melanocytes pro- duce nitric oxide in response to ultraviolet radiation and lipopolysaccharide and in this study have exam- ined how these responses are affected by a-melano- cyte-stimulating hormone. Nitric oxide production by cultured cells was measured electrochemically in real time using an ISO-nitric oxide sensor probe. B16 mouse melanoma cells released nitric oxide in response to lipopolysaccharide and the effects were enhanced in cells that had been grown in the pre- sence of 10 ±11 ±10 ±9 M a-melanocyte-stimulating hor- mone prior to stimulation. At concentrations in excess of 10 ±9 M a-melanocyte-stimulating hormone decreased nitric oxide production. Preincubation with lipopolysaccharide, a well-known inducer of inducible nitric oxide synthase, also increased nitric oxide production but this response was reduced by a-melanocyte-stimulating hormone. a-Melanocyte- stimulating hormone also increased the levels of nitric oxide produced in response to ultraviolet radiation (20±100 mJ per cm 2 ) in B16 cells. The same effect was seen in human melanocytes and as this was inhibited by aminoguanidine would appear to involve an induction of inducible nitric oxide synthase. Reverse transcription±polymerase chain reaction showed that melanocytic cells express indu- cible nitric oxide synthase mRNA. Western blotting analysis and immunocytochemistry con®rmed the presence of inducible nitric oxide synthase protein in B16 cells and FM55 human melanoma cells and that the levels were increased in response to a-melano- cyte-stimulating hormone. a-Melanocyte-stimulating hormone, however, decreased inducible nitric oxide synthase protein expression, which occurred in response to lipopolysaccharide. These results suggest that a-melanocyte-stimulating hormone regulates nitric oxide production in melanocytic cells by mod- ulating the induction of inducible nitric oxide synthase. Additional experiments showed that nitric oxide increased melanin production by B16 cells and human melanocytes. This is in keeping with a mela- nogenic role for nitric oxide but whether its produc- tion by melanocytes in response to a-melanocyte- stimulating hormone is associated with such a role or whether it has some other signi®cance relating to melanocyte differentiation or in mediating immuno- modulatory actions of a-melanocyte-stimulating hormone remains to be seen. Key words: melanogen- esis/nitric oxide synthase/ultraviolet radiation. J Invest Dermatol 114:520±526, 2000 a -Melanocyte-stimulating hormone (a-MSH) is a tridecapeptide that is derived, together with numer- ous other peptides from the 31±36 kDa protein proopiomelanocortin (POMC) (Eipper and Mains, 1980). The main site of production of POMC is the pituitary, although it is now recognized that a-MSH and other POMC derivatives are produced at other sites including the skin (Thody et al, 1983). In the skin a-MSH is found in keratinocytes (Slominski et al, 1993; Schauer et al, 1994; Chakraborty et al, 1995; Liu et al, 1995), although there are greater concentrations of the peptide in melanocytes (Lunec et al, 1990; Wakamatsu et al, 1997). The molar concentrations of a-MSH in human skin are several magnitudes higher than those in the circulation and this is consistent with the view that in human skin the peptide acts locally through paracrine and/or autocrine mechanisms. a-MSH has numerous effects in the skin. For instance, it has been shown to stimulate sebaceous glands (for review see Thody and Shuster, 1989). It also interacts with different cytokines to have immunomodulatory and anti-in¯ammatory actions (Catania and Lipton, 1993; Bhardwaj and Luger, 1994). The peptide is, however, best known for its actions on melanocytes where it regulates melanogenesis through its activation of tyrosinase, the rate-limiting enzyme in the melanin pathway (Hunt et al, 1994; Abdel-Malek et al, 1995) and more speci®cally stimulates a Manuscript received May 13, 1998; revised November 3, 1999; accepted for publication November 11, 1999. Reprint requests to: Professor A.J. Thody, Department of Biomedical Sciences, University of Bradford, Richmond Rd, Bradford, BD7 1DP, U.K. Email: [email protected] Abbreviations: bNOS, brain nitric oxide synthase; cNOS, constitutive nitric oxide synthase; iNOS, inducible nitric oxide synthase; NO, nitric oxide; SNP, sodium nitroprusside. 1 Presented in part at the XVIth International Pigment Cell Conference, Anaheim, October 1996 and the European Society for Pigment Cell Research Meeting, Bordeaux, October 1997. 2 D. Szatkowski was a Socrates exchange student from the University of Gdansk, Gdansk, Poland. P. Manning is now at Department of Neurology, Medical School, University of Newcastle upon Tyne, Framlington Place, Newcastle upon Tyne, NE2 4HH, U.K. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 520

α-Melanocyte-Stimulating Hormone Modulates Nitric Oxide Production in Melanocytes1

Embed Size (px)

Citation preview

������������� ������ ��� ��� �������� ����� �������������� �� ����������

������ ������� ��� � ������� ����� ����� ������ ����� ������� ����� ��������� ��� �� ����������� �� ������ �� ���� �! �� �� !��������� " #� � ��� ��������� $��%�����! " #�� " � � #�� " � � $�&�' ���������� " ����� �!� �� ��� ��� � $��%�����! " ��������

�� � �!��� $�&�' ���������� " ������ #� �������!� �� ��� ��� � $��%�����! " �������� �� � �!��� $�&�

�� ���� ��������� �������� �� �������� �������� ����� ����� �� �������� � ��������� ����������� ����������������� ��� �� ��� ��� ���� ��� ����� ��� ���� ��������� ��� ������� � �� ����������� ������ ��� ��� ����� ����� ���������� ������� ����� ��� ������� ��������� ����� ������ � � ����� �� !�������� ����� ������ ����� "�# ���� ����� � ����� �������� ����� ����� ���������� � ����������������� ��� �� ������ ������������ �� ����� �� ��� ���� ����� �� �� ��������� �� �$%��%�$%& � �� ���������� ������ ���� ��� ����� � �� ������ ' ������������ �������� �� �$%&� �� ���������� ������ ��� ������������ ����� ����� ��������� ��������������� �����������������( � �����)���� ������� ����������� ����� ����� ������( ���� ��������� ���������� ��������� �� ��� �������� ��� ������� ��� ���������� ������ ��� ��� ������������� ������ ��� ��� ���� ��������� �� ������ ������� ����� �������� �� �������� � ����������������� *+$%�$$ , ��� � +- �� "�# ����� .�� �� ������ ��� ���� �� �� �� �������� ��� �� ������ �������� � � ������������ ����� ������ �������� �� �������� �� ��������� ����� ����������� /������ �����������%��� ����� �����

������� ������ �� �������� ����� ������� ���������� ����� ����� ������ /�' ������ ������������� ��� � �������� ��� ���0� �� ���������� �� ��������� ����� ����� ������ ������ ��"�# ����� ��� 1�22 �� �� ����� � ����� ��� ���� ������ ���� ��������� �� �������� � �� ����������� ������ ��� ��� ������������� ��������� ���( �������( ��������� ��������� ����� ����������� ������ ����������( ����� �������� ���������� � ����������������� .���� ������ �������� �� ���������� ������ ��� ��� ������������� ����� ��������� �� �������� ����� � ��������� �� �������� �� ��������� ����� ����������� '�������� ������ ��� ������ �� ���������� ��������� ������ ��������� � "�# ����� ����� �� �������� .��� �� �� )������ ��� � ����������� ���� ��� ����� ����� �� ������ �� ���������� � �������� �� �������� � �� ���������� ������ ��� ��� �� ��������� ��� ���� � ������ ������ � ��� �� � ���� �����0����� ������� � ������� ������������� �� �� ������� � ���� ������� ������ �� �� ���������� ��������� ��� �� ���� � �� ���� ��� ����� ��� ��� ������ ����� ����� �� ����������������� �������� � � � ����������� ����� !��"# �

� (���� �!��(��������� � � �� )�(��*+ �� ���� �������� � ���� �� ���%� � � ������ ���� ����( �� ���� ����� �� "� ��� ,-.,/ ��� �� ������ �� ��� � ���� )�0��+ )1����� �� ������-234+� ��� ��� ���� " �� ���� � " �0�� �� ���

��������!� ��� ��� �� �� � � ��� ����� ���� �(��* �� �����0�� ���%���%�� ��� �� ��� �� ���� ����� ���� ��� ��� ����)�� ! �� ��� -23,+� 5� ��� ���� �(��* �� " �� �� ������� �!���)� ����� �� ��� -22,' ������� �� ��� -226' ������7 ��! �� ��� -228'9�� �� ��� -228+� ��� ��� ����� ��� ������� � ��������� �� " �������� � �� ��� �!��� )9���� �� ��� -224' :������� �� ��� -22;+���� �� � ��������� �� " �(��* �� ���� ���� ��� ��%��������� �� ������ ���� �� �� �� ��� �������� � �� ���� ��� �������� ���� ��� %��� ���� �� ���� ���� ��� ����� � ���� ��! ��� ��� ��������� �� < � ��� ����� ���������

�(��* ��� ���� �� �""���� �� ��� ����� = � ��������� �� ���7��� �� �� � ������� ��7��� �� ��� � )" � ��%��� ��� �� !�� �������� -232+� 5� �� ��������� ���� �""����� �!� ����� � ��%���� ��� �! �� ����(��>��� �! ���� �� )������� �� 9��� �� -22,' #��� ��? �� 9����� -226+� ��� ����� � ���� ��%��� 7��� �� �� " � ��� ���� �� � ��� �!��� ����� ���������� ��� ������� ��� ��� ��� ����%��� � " �!� ������� �������(������ ���!� �� ��� ����� ������! )*��� �� ��� -226'�7 �(���� �� ��� -228+ �� �� �����@��! �������� �

���������� �����%� ��! -,� -223' ��%��� � %�7�� ,� -222' ������� " � ��7����� � � %�7�� --� -222�A������ ��B����� � C �� "��� � ���� �� !� ��������� " #� � ���

��������� $��%�����! " #�� " � � A��� � A � #�� " � � #�; -���$�&� 1��C ������ !D7�� " � �������77��%���� ��C 7�0�� 7���� ������ E� � �!������' ��0�� � ��������%�

������ E� � �!������' ��0�� �� ���7� ������ E� � �!������' �0� ������ E� �' ���� � �� ���� ������ ��

-�������� �� ���� �� ��� FG5�� 5�������� �� ������ �� � �"�������������� 0�� 7�� -22/ �� ��� 1�� ���� � ����! " � ������ ��A������� �������� # � ���E� 0�� 7�� -22;�

��� ����� ���� ��� � � ������ �E������ ��� ��� "� ��� $��%�����! "� ����� � ����� � �� � �� ������� �� � � �� ��������� " ���� �!��� ��� ��� � $��%�����! " �������� �� � �!��� =������ � ������������� �� � �!��� �1� 6**� $�&�

44��(�4�F<44<H-8�44 I � �!����� � �444 7! ��� � ����! " � 5�%��������%� ����� �!� 5���

2+$

���"������� �������� �� ��� �!������� " ������� )#����� �� ���-23/� -22,' *��� �� ��� -228+� ��� ��* ������ � ���� � ���������� �""���� ��� 7��� � �� �� �� �� � 7� � �7�� " ���7"��! " ��� � �� ����(� ��� ������ �� )����?��� �� :��7���� -22�' � ���? ! �� ��� -22�+� ��%��� ��7�!��� ��%� 7��������������� � �� ��� ���! ��� � ����(- )��(-+ ������ �� ��"����� �� �� ���� ��� �!��� )� ������ �� ��� -22�' �� 9����� ��� -22,+� ����%��� � " ���� ������ � �� ��� ���� �""���� �� ������ ��� �!��� " � ��������� ��� 7��� �� �� � �������� �� �����! �� ��������� � �E�������� ����E �� ����� )*����� ��� -22,� -226+�:� ��%� ������! 7���%� ���� �(��* �� ����� ��� �!���

"� E� ���%� ������ �� ���� �� ��%� �� � �� ���� ���� � � ��% %� �� ����%��� � " �!� ������ )G�%�� � �� ��� -22/�� 7+� ���������� �������� ��� ��� ������� � ���� ���� ���� ��� ����� ����� ����� ������� �!��� �� @7� 7����� ��� �!��� ����������! %�����7� � E� ���%� ������ )G�%�� � �� ��� -22/�+���� ���� �� " � ���� ��� � � �� ��� 7�� �� � � 7� ����� � ������7���! � �������� ������ E� � )�0+� ���� ������%� ���� �����! ��!�� ��� "����� �� )" � ��%���� ��� �J ����J� � -226' #����(������� �� ��� -223+� 7�� �� ��� ��( ������ �""���� ��� ��� ����7���! � ����� ���� ��� ����� E� � ��� � � �� ��� ��� ����!�!� � E�� �! � E! �� ���� 5� ��������! �E�������� �� ��%� 7���%� ���� ��� �!��� �� ��� � ��� �� ��� �0 ������ ��� � ����%� �� �� ���� � )$GA+ �� �� � !�������� �)9��+� 5� ���� ��� ! �� ��%� �E��� � ����� ��� ��� �� � � ��� ������ ��� �� ���� � " �0 7! ��� �!��� ��� �� ���� 7! �(��*�

���1A5�9� ��� �1�*0��

3��� ������ *��� ��� ��� ��� �!��� �� ������� �!��� ������ ��� "� ����� " ���� 7����� "� ��� ��� �� ! ��� � ����� ��� ��� ������! �� ������ �� ��������� ���# -8, � ��)����� � �� $�&�+ �� ���%� ��! �����7� )*��� �� �� !� -226+�*��� @7� 7���� ���� ������ �� ��7��� K� �@� 1���K� � ��)��1�+ )��7� #A9� �����!� $�&�+ � �������� -4L "��� 7 %��� ����)5�� = �� #������� ��� $�&�+ �� �������� )84 5$ ���+<������ !���)84�� ���+ )5�� = �+� #-/=- ��� ��� � ��� ���� �������� �� ��1� )��7� #A9+ � �������� -4L "��� 7 %��� ���� )5�� = �+�� �������� )84 5$ ���+<������ !��� )84�� ���+ )5�� = �+ �� ���� �@� 8L �0� �� ������ �� �����7� ���%� ��! )�� ! �� ���-233+� =�88 ���� ��� � ��� ���� �������� �� ��� ��� ��!�E���� A��5 -/64 � �� )��7� #A9+ ��� ��� �� ���� " ��1��

4����� ���� ���������� ��� ���� ��� � � � �6(�� �����)� ����� *��� :!� 7�� $�&�+ �� � �����! " �� -46 ��� �� �� ����7��� �� ��� �������� � �7����� " �(��* )#����� 1���E� $�&�+ ��� ��������� �� ������� "� -4.-- � -4.;� " � %��!��� ���� �� � ;� ��� ��� � ������� ���� ����7��� �� ��� �7����� " �(��*� ��� ������� ���� ������� ���� ������ $GA � 9�� )/4 �� ���+ � �������0� ����� ��� ������ �� �����7� 7� �� ��� � � ���� ���� � ��������� � �� ��� ������ 7! �� ������(7�""��� ������ ��� � ���� "$GA ��� � *����� 64: �� ): "" #-�4-+ ����� ������� �����! �� ��� $G# ������ � ��������! �E������� ��� ������ �� �� � �� � ������� ��� � ��������� � " 9�� ��B���� � ��������0 ������� ��� �� ���7� ������ E� � �!������ )��0�+ ����7�� ���� ����� ��� �! � �� �� � )����+ ��� ��� �� � � ��������� � "�8�' ���� ��� � � �� ��� ��� ��� �� �(��*���� �""��� " �0 � ��� ������� ��� �E���� �� #-/ ��� �

���� 5� ����� �E�������� ��� ��� ���� ��� � �� ��E(�� ����� �� � �����! " �� -48 ��� �� �� ������ �� ��� �������� " %��!���� ��������� �� " ��� �0 � � � �� ���� ������ � )���+ " � , �� ���� ���%���� " � ��� ��������� " ����� � ������

������� �� �� �� �0 �� ���� � ��� ������ �� ���(��� ������ � �����! �%���7� 5�0(�0 ���� � �� 7�� ��� �������� " ��� �0����� � )5�0(�0 ����� : � ������� � 5��������� 9� � ����� ��� =9+�� 7��� � E� ��� � " �0 � �0M �� � ������ �� � � %��� 7! ��0(������%� �7����� ��� ����� � ��� ���7���� �� � ������ � ��� � " � 4�-� &5� ��� �@� ���� 4�-� *��06 )��������� �� ��� -22,'#� ����� �� ����� -228+� �0 ��� �������� �� � ��� � 7! � ��� ��� �� % �� " -� &�0�� � ���� ������� ���� ��� " ,84 �� �� ����0 ����� � � ����� � � � ���� E����! ;8 �� �0� �����������

���� ������ �� ����! �"��� 7�������� ��� $GA � �"��� ��� � ��� � "9�� �� � ������ " � �� � ,4���

! �������� ���� ������� �� �� ��� ���� ��� � � � � 9�7(��� ���7�� �� � �� ��1�� � �� � ������ %������� �� ,;��� ��������7��� " � / � �� ��� �������� � �7����� " �(��* )-4.2�+ � 9��)/4 �� ���+� ��� ��� ���� ����� ����� ���� �� �� ������(7�""��� ����� 7�" �� @E��� �� -L ������ ��! � " � ,4�� �� ��� ������ ����� � !� �� ����7 ��� � ��0� )�"@���� 9�7 ��� ����� ����� �$�&�+ �� � ���� �� �%� ��.7� ��� � ����� ��� ��� E� ��� ������B���

������ ��� ������� �� !����� ���� ������� 7! � �7������ ��� ��!��� 7�""�� )�L � �� ��! ��"���� -4L �!��� � -44� ���� ������ � 4�4/,� ����.*�� �� � �� �!� �� ������� 8����!��� ����� ����������� ��� +� �� ���� � ��������� �� ���� ������� ���� �� ����! ���� 7��� � ��� 9 ��! ����! )#� A� � *�� *������ �$�&�+� ��B� �� " ��� !����� � �������� 34�� �� ���� ���� ��7?���� � � �� ��! ��"���.� !���!�� � �� ����� �� ����� �� -44G " �� �� �� �����"���� � � ���� ��� �� �7���� )������� 9�������" ��� $�&�+� �"��� �����"�� ��� �� ��� ������ ���� � ����� 7�� � %���"! �%�� � ��� �� �����"��� ��� �7����� ���� 7 ��� �� 4�48L����� �4.����(7�""��� ����� )-84� ���� �4� ���� 7���� �*;�6+� �������� ,L 7 %��� ���� �7���� ��0� ��� ������ ����� � � � �� ��� ����7 ! )�"@���� 9�7 ��� ����+ ���� �� -C-444 ��4�48L ����� �4.����(7�""��� ����� � �������� -L 7 %��� �����7��� �� � � ����� ��� ��� E� ���(����� ����� ���� ��� 5����� � ����7 ! )������+ " �� 7! ��� �� � �����! )*!���@1�9� ������+�

/������ �����������%��� ����� ����� ������� */.%�3/- � ��A�� ��� �E������ ����� ��� A������ ��� � ��� � ��� �������K���������� ��� = � A�.��A ����!� -.8�� � �� A�� ��� ��%������������7� ����� �� � �� ������ �� ����� ������ 55 ��%����������������� )��7� #A9+� ��� �� ���� ���� ���@� ����� ���������@� ������C )�+ ��0� ����� )8� ��������������������� ,�+ �� ��0�����(����� )8� ��������������������� ,�+' )��+ 7���� ������ E� � �!������)7�0�+ ����� )8� �������������������� ,�+ �� 7�0� ����(����� )8�������������������� ,�+� = � 7 �� ��0� �� 7�0� ����� � ������ -4 � " ���� ������ �44�� ���� �� ����� -� ��A 7�""���-$ ��� � !����� �� 6� ���� � � @�� % �� " 84�� ��������� ����� " � 8�� �� 26�� �� ���� ���@� " � 64 �!��� �� 26���/4�� " � ,4�� ����� �"��� � @�� �E����� � �� ;8�� " � ,4�� ��� ��A�� ���� ���� �������� � � -�8L ���� �� ��� ������ ���� ���� ��7� � � �� �� � ������ �� �� $G�

������� �� �� ������ ��� )8� -48+ ���� � �7���� �� -44�-� ��0* �� ���� �� 644� ����� ������ �7� �7���! ���� ���� ���� � ���� �� ���%� " �!������� ����� )����+ ������� ��� @�� ��0* � ��������� � " 4����

A1�$9��

����� ������� �� ��������� �� 5�� �� ����� ����� � ����� ��� � ��� � " 9�� � #-/ ��� �� ��� �� ���� � ��������� �(����� ��������� �� ��� ������ " �0�0� ��� 7���� " ����� @� ���� � � ��������� � " /4 �� ��� ������ �� ��7��B���� �E�������� �� � �� � ������� �0 ����������(����7��� � ���� �(��* " � ,� /� �6� � ;� � ������� ����%�� " �0 ������ 7! #-/ ��� �� ���� ��� � 9�� �� �� ����� �� � � ��������� �(����� ����� )1�� �+� ��� ���� �""������ ���� �� �6 � �� ���� ��� � -4.2� �(��*� ��� ���� ��������� � " �(��* �� �� ��� ��� �������� ���� ��� �� �� " ��� ���� ���� ��� �� � :��� ���������� � ��������� �� "�(��* ��� �%�� " �0 ������� �

����� ��������� �� �0 �� ���� � ���� 7���%� �� =�88���� ��� � ��� ���� �� 7��� �� �� �� ��� �������� "-4.-4� �� -4.2� �(��* " � / � �6 � ).���� !+� *������ ��������� �� " �(��* ���� � � �E���� �� ��� ���� ������

����� ��� 5�� ��� ����� ���������� �� ���� ������ ���� ��������� �� ����� � ����� ��� �7 %� �E�������� � ������� ���� �(��* ����� ��� �� ���� � " �0 ����� �!��� ���� ����� ��� ��� ��� ���� �� ���� ���� �������� ������ �(��* ���� � ����7�� 9��(�� ��� �0 �� ���� �

G09� --6� �0� , ��A�* �444 �5�A5� 0F5�1 �A0�$��50� 5� �19��0�N�1� 2+�

)���� �� ��� -228+� 5� � �� � ��� ������� �(��* ���� �� ��� �����! �� ��� " ��� �!�� ������ �E�������� ���� ������ ������� #-/ �� =�88 ���� �� 7�" �� ��� �� �� �� ��� �������� "-4.-4� �� -4.2� �(��* �� �� �������� �� ���� � " �0��������7��� � ���� 9�� )/4 �� ���+ " � / � �� �6 � �� �������� ��� �%�� " �0 7�� �� ��� �������� " �(��* ���� �""������ �� ��� ).���� !+� 5� ��� =�88 ��� ��� �%�� " �0�� ��� �� ���� ��� � �(��* �� 9�� � ������ ���� �����! ��� ���� �� �� "� ��� �� �� �� ��� �������� " �(��* �9�� � �� ).���� !+� ���� �������� ���� �(��* �� 9�� �������! ����� ������ �� ����� �""���� � �0 �� ���� � �� #-/ �� =�88 ����

4��������� �� ���� $���� A�.��A� ��0� A�� ��� ������ �� #-/ �� =�88 ��� )1�� ++� 5� ��������! �E����������0� ��� �� ������ �� ���� ��� �!����

�� ���� !����� "� #-/ �� =�88 ��� ���� " �� � � �������0� �� ���� �� ��� �%�� ���� ������ �� ��� ���� �� 7����E� �� � �(��* " � / � �6 �� ��� ���� �� 7��� �E� �� � 9�� " � ��� ��� ���� � " ��� �� �� ����� ������� �E������ � " ��0�� ��� ���� �� 7��� �E� �� � 9�� �� �(��* � ������� � ��%��� �� ����� � ��� �%�� " ��0�� ���� ���� �� �� �E� �� � 9�� � ��� ���� ��� ���������! 7%� �� �� =�88 ��� )1�� 6+�

5�� �������� � �@�� ��� �������� " ��0� �� #-/��� � ���� ��� �������� ����� ��� �!� ����� �� ������!���������� ��� ���� �� � ��� ��� �� ��� �������� �� ���� ���� �(��* � 9��� ��� ��������! " �������� %���� "� �� � ��

1����� � 4���� �� ����� �� �� ����������� 5����� ����� "�# ����� ������� )��+ ���� � ��� �� � �0 �� ��� � �(��* ��� � � � ��� ��� �� )�+ , �� )�+ / �� )�+ �6 �� �� )+ ;� ���� � � ������� � ���� 9��� ��� ������ ��� �E(������ �� ���� �1� " �� ���� ����� �����(���� ��� �� � ���� ��� ���� ������� ��������@����! ������� ���� ��� � ��� � O 4�4-�

.���� ! 4���� �� �����( ����� ��� �� �� �������� �� 5��(�� �� ��������� �� �� �� "�# ���� ��� 1�22 �� ��

����� � ������

�(��*

4 -4.-4 � -4.2 �

#-// � ���� ��� -4�3 � 4�6 62�- � ,�/� 82�8 � ��3�9�� /4 �� ��� �3�4 � /�4� 62�/ � 6�� /;�8 � 3�;

�6 � ���� ��� -8�4 � ��� 6/�, � 6�8� ;,�, � /���9�� /4 �� ��� ,4�4 � ��8� ,8�4 � ��, 6;�4 � 6����

=�88/ � ���� ��� �,�, � /�/ 88�4 � 8�4� /8�4 � -8�4�9�� /4 �� ��� 24�4 � 3�,� 64�4 � -4�4� ,8�4 � 8�4�

�6 � ���� ��� �/�/ � ,�, 6,�, � 3�3� ;8�4 � 8�49�� /4 �� ��� 28�4 � --�2� 64�4 � -4�4 �4�4 � -4�4

��0 ��� ������ �� �����7� �� ��� ������� �� ���� � ��� ������ ����� �� �� ���� ������� �� ��� ��� ��� " �� ���� ����� ��������� ��� �1����O 4�4- � � ��� ���' ���O 4�4- � ��� ������� ���� �(��*�

1����� + 4��������� �� ���� /�' �� ���� ����� ����� ������ � ����� ������ ����� )���� �+� ������%� � ��� )���� �+� =�88���� ��� � ��� )���� �+� #-/ ��� ��� � ��� )���� �+�

2++ ������95 �� �� �*1 �0$A��9 0= 5�G1��5���5G1 �1A���090�N

���� � � ��� �� ���� � ���������! ��� �� ������ �� �������! ������ ��� � �(��* )1�� 7+�A�.��A �� ��%��� ��� �������� " 7�0� A�� ��

��� � ��� �� ���� ��� �!��� 7�� � �� ���� � � 7� ������ 7! ������� ���!��� )������ � � �� ��+�

�� ��������� ������ ��������� �0 ��� 7��� �� �� � �������� ����� �� ���� � )A �P� (������ �� ��� -22;+� 5� � �� � �E���� ���� #-/ ��� �� ���� ��� �!��� ������ �� �� ��� �������� " ���� � �0 � �� " � , � ����� ��� � ��������� �(����� ��������� �� ��� ����� � ����� "��� #-/ ��� �� ���� ��� �!��� ).���� !!+� *����� �%�� "����� ���� " �� �� ���� ��� �!��� �� �� �� ��� #-/ �������� ���� �������� �� ���� ��� � ��� ).���� !!+� 5� ��� �������� " ��� ��� ��7��� " #-/ �� ���� ��� �!��� ���� ������� �� �� " � ��� � ).���� !!+� 7�� ������� ���� ��� ��7���������! ��� � � ����� � � ������� � �!� ������ �""��� " �0� ��� ��������� �� �� �E���� " -84�� ��� ��� �!� � E�� � #-/ ����� ���� ��� �!����

����� ��������� �� ��������� �� 89���������� ����� ���0 �! ���%� �� � � ��� � " ��� ������� �� �� �� ����� � ����7��� ������� $GA� ����� �� �� �� ����� ������ � "��� �������� �� ����7� " ���������� ��� �� ���� � 7!��� �!��� �� ������� ���� �� �""���� 7! �(��*��� �� �� �� 1�� 2� $GA� %�� ��� �� ����� " �4.-44�

��� ��� �������� ��� �%�� " �0 ������ "� #-/ ��� �� ��� ���� ���� ���� ������� �� ��� ���� �� 7��� �� �� ����� �������� " �(��* " � �6 �� ����� ������ ���� 7����� ���� ���� ��� �!��� )1�� #+� = � � ����� � ������E�������� ���� ������ �� ����� ���� ������� �!��� �� @7� 7����� $GA �� ��� �� �� ��� �%�� " �0 ������"� �� �� ��� 7�� �� 7 �� ����� ��� ���� ���� ���� ���""���� 7! �(��* ) �! ��� ������ " � ������� �!��� ��� �� ��' ���1�� #+��(��* �� � �""��� � �0 ������ ���� � � �� ����!

��� � � $GA �� �� �� ����� � � ��� �� "��� � � ��������$GA(�� ��� �0 �� ���� �� ���������� ���� ��� �""��� ��% %�

�� �� ���� �� ������ ���� � ������� � " �0�� =�������E�������� ����� ��� ����� ��� �! � �� �� �� � �����@�����7�� � " ��0�� � �@�� ���� ��� �������� " �0 �� ���� �7! �(��* �� ���� ��� �!��� ��� � ���� %�� ��0� )1�� :+����� �� 7�" �� �(��* �����@����! �������� �0 �� ���� ����� � � �6 � ��� � � $G ������� �' � ��%��� �� ����������� " ��� ����� ��� �! � �� �� � ���� �""��� ��� 7 ��� )1�� :+�

�5��$��50�

�0 �� �� ��� "� 9(�������� ��� ��� ��� ���� � " ��� ���!��0�� ��%��� �� " �� " ��� ���!� �E��� �� ��� �� �� �������� ��� � ��������%� " �� )��0�+ ����� ��� ������� �� �� �������� �� ���� �� �� ��0�� ����� �� " �� �� � %�����! " �������� ��� ��� ������ �� ����� ����� ��� ����� �� � � � ��!�E������ � 7�� �� �� ��� 7! ��>��� �! �!� ����� �� 7�������9��� ����� �� �%� ���� " ��0� �� ��0� �� ��� ���� ���� ���" ��� 7���� ������� �� ������� �!��� )#�� ��� �� ���� ��-22/+ �� ��� ����� �� 9��������� ��� )�������� -226' �������� F��� -226' Q������ �� ��� -22/+�

5� ���� ��� ! �� ��%� � ������� ���� ��� �!��� ��� ����7� " �� ����� �0 �� ���� ����� ���� ����� ��� �E����� �0������ �""��� ��� ���� �� ���� ��� � $GA �� ���� � �@�� �������� @� �����,�6 ��� �������� �� �0 �� ���� ��� � $GA ����� ���� �� ���� �������� �� ����%��� � " � ��������%�! �E������ �0�� 5� ���� ��� ! �� ������ 7�0� A�� �� ��� �!��� ���7�� " �� � �%� ���� " ���� � ��������%� " � " �0� �� ����� ���� �%��

��� ��0� ���� � ��%��� ������ �� ����� ��� �� 7 �� ���A�� �� �� ���� �%��� � �� %��� �E������ � ��� ���� ����������� ��� �� ���� � � ������� ���� � �����! � ���������� � �� �� �� �!���� ��0� �! 7� � ��������%�! �E������ �� ��� �!��� ���� 5� �� � 7� ���� �� � � ��%��� ����������� ��� ��� ������%� ��0� �� =�88 ��� �� � ��������� " -,4 ��� ����� �� � ����7� ���� ���� " �� �� ���� ���� �� ������ � � ������� ���� � �����! ���� " � " ��0� �E������ #-/ ����

5� ���� ��� ! �� � �@�� ���� �(��* ����� ����� ���� � " �0 7! ��� �!��� ��� �� �� ������ � � ������� ���� ��� ���� �� " �(��* ��� � ���� 7! ��0�� ���� ������� ��� 7! �� @� ���� ���� ��� �""��� " �(��* ��� 7 ��� 7!��� ����� ���� � ����� 7�� ������%� ����7�� � " ��0�� ����������� �� �0 �� ���� � �� ���� ��� � �(��* ��� �E�� ���6 � �� ���� �� � �������� ���� �� �� ���� � �� �����

=������ � �@���� � ���� �(��* ��� ������ 7! ������ ����� ���� � " ��0� ��� "� ��� ��� �!� ������ �E����(���� �� ������� 7 � ���!����

����� ������ "������ � ������� ���� �(��* ��� �� �""���� ��0 �� ���� � �� ����� ������ � 7� � ��������� � ���� �������� �� � ��������� �� �� � -4.2� �(��* �� ��� �� ����� ��������� �� �0 �� ���� � 7�� �� ������ � ��������� �� " �������� � ��� �� ���� � " �0 ������� � :�! �(��* ��� ������� �� ���� �""���� �� � � ���� 7�� ���� �� ���������� " ��! �(��* ���� ��� ����� ��� ������� )*��� �� ��� -226+ �� ��� �������� ���� ��� %��� ���� �(��* "����� �� �� � ��� �!����� ��

5� ��� 7��� ��� ��� ���� �(��* �� �7� � �""��� ��� �� ���� � "��0� �� ���� ���� ����� ��� ������ )���� �� ��� -228+� ���� �� �� 7���%� ���� �(��* ����7��� ��� �� ���� � " ��0� ����� ������ ���� 5=�(� � 9��� � ��� ������� �(��* � � ��%� ������ ����7�� �! ���� � �� ������ ��� �� �E���� ��� �""���� ����� �������� " 9��� 0�� ������ �� � ���� �� �� ����� � � ��� ���(��* ��� �� ����7�� �! �""��� �� 7 ��� ��� ������ �! ���� �

1����� 6 4��������� �� ���� ������ �� �� ����� ��� ���� ������ "�# ��� 1�22 ����� � ������ )�+ #-/ ��� � ���' )�+ =�88��� � ���� ��� ���� ����7��� ���� �(��* -4.2� " � / � )���� �+��6 � )���� �+� ���� 9�� /4 �� ��� " � / � )���� �+� ���� �(��* -4.2��� 9�� /4 �� ��� � ������ " � / � )���� �+� � ��� ��� ��� �� �� ������ ��

,G�%�� � �� ������� �� ����� ��� ����� ��� �� ! ��C���� �!��� �� ��� ����� E� � ��� � �� ������ E� � �� ���� ��� � � ��� " ����%� �� �� ���� �� � ���� � �������� -4;C842� -22/ )�7����+

6����� �� ������� �� ���" $� ����� ��� �� ! ��C �(��* �� ���������� E� � �� ���� � �� ��� �!���� ������� ��� !� -4C,�;� -22;)�7����+

G09� --6� �0� , ��A�* �444 �5�A5� 0F5�1 �A0�$��50� 5� �19��0�N�1� 2+6

" 9�� � �0 �� ���� �� 0�� ������� � ��%��� �� ����� ���� ��#-/ ��� 9�� �� ����7��� ��� ���� � " �(��*� 5� � � �����" �������� ���� �(��* �� 9�� ��� ����! ����� ������ �� ������""���� � �0 �� ���� � �� #-/ ���� * � ���� ����� �� � � !������ 7�� �� � � ������ ���� �(��* ��� �""����� �""���� � �0

1����� 7 ! �������� ���� ������� �� ���� �� "�# ����� #-/��� ���� ������ ���� ��0�� �"��� ����7��� � " � / � ���� �(��* -4.2�)�+ �� 9�� /4 �� ��� )�+� � ��� ��� ��� �� �� �� )�+� ����" �� �������� ��! � ����%� ���� #���� ���C -4�

.���� !! 4���� �� �� �� ������ ������� �� "�# ����� � ����� ��� �� �� ��������

��� ��7�� " %��7� ��� ������ � �����)��+ )�� -4/ ���.-+

#-/4 6�8 � 4�,, )�-4/+ ��3- � 4��3

-44 -�8� � 4�-- )�-4/+ 8�62 � 4��/-�8 4�/3 � 4�48 )�-4/+ 3�32 � 4�23-84 4��8 � 4�4/ )�-4/+ -,�3;

*��� ��� �!���4 -6�,/ � -�,2 )�-46+ 86�3 � ,�3

-44 -4�-4 � 4�23 )�-46+ 38�4 � /�--�8 6�-/ � 4�23 )�-46+ -2,�3

������� � ����� ��� ����!� �� �����7� �� ������� �� ���� � ����7��� ���� � ���� ����� ��� ��!��� 7�� �E���� � ����!� A����� ����E������ �� ��� � �1� " � ����� �E��������� �E���� " � ��� ����� � �������� ���� ��� � -84 �� ��� �� #-/ ��� �� -�8 �� �� ���� ��� �!��������� ��� ������ ��� ��� ��� " �� �E��������� ��O 4�48� ���O 4�4- ��� $ ����� � ����� �� ��� �7����� " ����

1����� 2 4���� �� ����� �� �� ��������� �� 89��� �����"�# ����� �' � ��� ' �� -4.2� �(��*' �� -4.3� �(��*' �� -4.;��(��*� ������� )��+ �� �� � ��� �� � �0 �� ��� � �(��* ���� � � ��� ��� �6 � ��� � � $G ���� ���� �� ���� �E������� ��� ������ �� ����� ���� ���� ����� ������� � ������������%� �E������� �� �� ���

1����� # 4���� �� ����� �� �� ��������� �� 89��� ������� �� �������� �� ��� �!���' �� ��� �!��� M�(��*�������� �� �� � ��� �� � ��� �0 �� ��� � �(��* -4.3� ��� � � � ��� ��� �6 � ��� � � $G ���� ���� �� ��� ������ ��� �E������ �� ������� �1� " ����� ��������� ��� ��O 4�4- ��� $ �0 �� ���� � 7!��� �!��� � ��� ��� �""���� �� ������� �!��� ��� �� �� " � � ����� ��� ������� �!���' �� ������� �!��� M�(��*�

2+7 ������95 �� �� �*1 �0$A��9 0= 5�G1��5���5G1 �1A���090�N

�� ���� � ���� ��� �� � ������� �� �� ������� � ��� �� �������� ���� �� ����� " ��0� ��� �� ��������* � �(��* ���� � �""��� ��� �� ���� � " ��0� ��

��� �!��� �� � � ����� 5� ���� ���� ��7� � ���� �� ���� ������� � �� � ���� 7! ��� ��� � ����(- )��(-+ ������ �� ������� �E������ 7! ��� �!��� �� ���� �� �!���� ���� ������ ������ )9���� �� ��� -22;+� ���� ������ � �� � ��� � ����!��� � �� ���� � �� ������ �������� ������! �� ����� ���%� ���� ���� ����%��� � " ���� ������! ��������� �0 �� ���� ��� ��� ������ �� �� ����� ��� )#��� �� ��� -22,+� ����� ���%� ���� ���� ��� ��(- ������ � � ���� � ���� ��������������!� �� ����� � � �� 7� ��% %� �� � ������ ��� ���� �� " �(��* � ��0�� �� �E��� � � 7� ��� �=�# ������! ������� �� ������ �%� ���� ���� ���� ������! �� �""���� 7! �(��*)*�!� �� �� ��� -222+� :� ���� � ��%��� ���7� � ��� �� ���� ���7���! ���� �(��* �""���� ��0� ��� ��� � ��������� ���� ��� " ��� ��(- ������ �� ����� ��� " � ��������� �%� �������� �(��* ��� ��� ����������! � ������� ��� ���������� ��� ��������� �� ���� ������! � 7� ������ )���������� �� ���-22;+� ������! � 7� ������ �� � � "��� � " � ��0� �� � �" ���������� � �(��* � ��E�� ���� ���� ������ ���� ���� � � ��%���� �""��� " �� ����� ��0� ����%��! �� ����� �0 �� ���� ��5� �� ��� � � ���� ��! ��� �!��� �� ��� �0� A �P� (

������ �� �� )-22;+ ��%� �� �� ���� �0 �������� ������� ���� � �� �� �� �� ������ "� ������� �!��� �� ���� ��� � $GA �������� ���� �� � � ���%� �� � ��������� "��� � �� $GA(�� ��� ��� �������� 0�� ������ � �@� ���� ������� �!����� ��� �0 �� ���� ��� � $G �� ���� �0 �� ����7� "��������� ����� �� ���� �� �� ��� �!��� ��� ����7� "�� ����� �0� �� ��������! �� ������� � ���� ���� ������� (�!���� � ��%��� �� ���� ���� ��7� � ���� �� ���� ��� �������� �� �� ��� ����� "��� � � ������� ��� ������� �� �"������ ��� �! � ���� ��� ��� ����� ���� �� " �(��*��� ��������%� � ���7���! �� ���� ��� �0 �� ��� 7!

��� �!��� ���%�� �� � ��� � �������� �� ��������� ����� �""��������� � ��� � �� � ��� ������� � �� ���� ��� ��� �������� �� ���� � " �0� 7! ���%� �� ��� "��� � ��� 7��� �� �� � ����� �� ��� ������ �� �""��������� � )���� %� �� 1��� � %�-228+� �(��* ��� ����� �""���� �� ��� �!��� )17���� -233+ �� �� �� � ���7� ���� ����� �""���� ��� � ���� 7! �0�5� �� ������! � ��� ��� ���� ������� �0 ��� � � � �� ��

��������� ��� ����� � ���� ���� ��� �������� " ���� ����� ���� � " ��0� ��� ��% %� �� � �� �"���� )" � ��%���� ���

�R ����J� � -226 �� #����(������� �� ��� -223+� ���� � � � ���%� ��� �� ��� ������ ����� ��� ������ �0 � ����7���� � ������� �!��� �� ���� ��� ��� ��� ������� 7�� �� �!� � E�� ���� ������ �0 �� ��� 7! ��� �!��� � � ��%� � ����� � � ����� �!��� ��� ����7� " ���� �!� ��� )9� � � �� ��� -22,+������ �� �%� ���� ���� �0 ��� ���� ���� �� �� ��� ���� �!���)��� #����(������� �� ��� -223+ �� ��� �� ���� � 7! ��� ���� ��� 7��� ��� ����� ���� � ��������� � " �� ��������� �� ��������� )F�� �� ��� -228+� :������ ��� �0 ����� �� �� ��� 7!� �� ��� �!��� ���� � ������� ���� ���� ���� �� � ��� ��� 5� ���� �������� � ��%��� �� �� � ��� ������� ���� �(��*��� ��! ��� ��� �! ���� �� )������� �� 9��� �� -22,'#��� ��? �� 9����� -226+ �� �� �� ������� � ������� ���� �� ����� � " ����� ��� � ���� 7! �0 ������ "� ��� �!����

��� "��% "� $&&���� �' #���(�� ����������� ) ��* +� ����% ��* ���,�� -*

.��%�� (�� &������� ��� -�� �$��� �������� ���� *

A1=1A1��1�

�7 �(���� S� �� �� G#� ������ 5� �� ��C ��� ����� �� ��� ����� ������� � " � �� ���� ��� �!��� 7! ��� �� ��� ����� ��� ���� /��� ��� #��0#� 2�C-;32.-;2,� -228

�J ����J� 1C ������ E� �C � ��� �� �� ����� �� � ������ ������ ,6,C--22.-�4/�-226

#�� ��� �1� ���� � �C � ��������%� ������ E� � �!������ �� ������� �� � ������ ������� �!���� � ���� � �������� -4/C6�3.66,� -22/

#��� ��? A�� 9���� ��C �� �� ��� � ���� �� ���� � 7! ��� ��� ���C�%� ���� " � �� ���� ���� �� ����� ���� �� �� ��� ��� ����� ������������ !� �3;C38.24� -226

#� ����� ��� ���� SC ������ E� � ������ � ����� � � ���� ����� ���������� �T������ �������� �� �� ��� �%� ���� " � ��� �������� � " ����!�������%� �� ������%� �0 ��� ���� ��� #�������� #'�&� �$�) ��� �1!2 +��� ����� �( /�$�� ������) .'���) ��&��� -228

#����(������� �� A������ �� & 7(#��� "�� GC ������ E� � �� ��� ���� ����C������� ������ �� "����� �� ������� � ���� � �������� --4C-.;� -223

#��� G� ��%��� �� 9��� =NC ������ E� � �� ���� � 7! ����� ��� ������ ������7��� 7! �� ��� ��%��� � " ����� 1������ 1��&�' !� ���$�-28C--,6.--,3� -22,

#����� ��� �� ! ��� 5� �C ���� �!��(��������� � � ��� �!� ������ ����%��!�� ��� ������� � " ����� ������� �� ���� ��� ������� �� ��� ����" ����� ��� �!��� " ��� ���� � ��������� -42C-8.�-� -23/

#����� ��� 5� �� �� ! ��C 1""���� " ��� �!��(��������� � � �� ��!� ������ �E������ � �� ����� �!������� �� ���� " ����� ��� �!��� " ��� ���� � ��������� -,;C-32.-28� -22,

������� �� 9��� � ��C �(���� �!�� ��������� � � �� �� ��� ���� � " � �������� ��� ����� !�� -6C8/6.8;/� -22,

����?��� G� :��7��� �1�C � ����� � ���� �� �E������ � " ��� ������� �!�� ��������� � � �� ������ � ����� -�1# ���� ,42C6-;.6�4�-22�

������7 ��! �� � ����� �� 1��� �� *���� �� ������ �C $���%� �� # �� ��� �!��(��������� � � �� )��*+ ������� A�� �� ���� � " ����� ��* ������ �� �� �� �� ��� � ����( ���%� ����� �� �� ������ � ��� �� �����" �� ������� �!���� � ���� � �������� -48C/88./82�-228

�� 9��� �� �������� :� # � ����� �� ���� � �� ����� � A� 17��� ��C �(���� �!�� ��������� � � �� )�(��*+ �������� � �� ������� �!�� �� ��� 7! 7�� ��� � ����(�"@���! ������ ��� � ��� #��-48C-4;2.-436� -22,

� ������ ��� *��� �� ���� � �� 9���� �� ����7 �� �� ! ��C ��� �E������ � ""����� �� ��* ������ �� � ������ ���� ��� �!���� ���� �������� !� �36C6�6.6�/� -22�

17��� ��C ��� ��������&�$ � #���C &������ -2331����� #�� ����� A1C ��������� �� 7� �!������� " �� (� ��� � ���� ��� ���<

�� ����� �� ����� ����� ��� ����� !�� -C-.�;� -234*�!� �� �:� :����� �� � ��� ��� A� ����� �� A����� 5�� ������ �C �(

���� �!�� ��������� � � �� ����7��� �=(�# ����%��� � �� ������� �!��� �� ��� � ���� � ���� � �������� --,C8/4.8//� -222

*��� �� �� ! ��C ������ " ���� ��� ��� ��� �!��� �� �� ���("���� ��� 5�C ��� �� �� $� $��$��3 ���������' �����$�� � ����������C � ��:��! �� � �� 9� � -226� ������� --

*��� �� � ������ ��� ������� �1� �� ! ��� ��� �""��� " �(��* � ������������ " ���� ��� �!��� � ����� �� @7� ������C �%� ���� " ������@� �(��* ������ �� � ����� ���� 5�C G�� �! *� 17��� �� )� �+� �����������&�� ��&��� * ��� /�" 4��% ��� #�� /34C862.884� -22,

*��� �� � �� ������� �1� �� ! ��C �(���� �!�� ��������� � � �� �� ��� ��� ��� ��6����; �(��* �""��� ��� �!� �!� ������ ����%��! �� ��� ������� �� ������ ���� ��� �!���� � ��� #�� -4;C�48.�--� -226

*��� �� &!�� �� :������� &� 5� �� �� ! ��C ��6����; �(���� �!��(

1����� : 4���� �� ���� �������� �� �� ��������� � �� �� �������� ��� ��0� ����7�� � ��� ����� ��� �! � �� �� � )��+�8�� ��� � � � ��� ��� � �� ���� �(��* -4.3� �6 � ��� � � $G���� ���� �� ������� )��+ �� �� � ��� �� � �0 �� ��� � ��� ������ ����� �� �� ��� ���� ������� �� ��� ��� ���� �1� " ����� �������(�� ��� ��O 4�448 ��� $ � ��� �

G09� --6� �0� , ��A�* �444 �5�A5� 0F5�1 �A0�$��50� 5� �19��0�N�1� 2+2

��������� � � �� ��������� ��� �������C ���� ����� ���� �� ������ ���� ��� �!���� � ���� � �������� -46C3,.38� -228

9� � � 5�� %�� �� :�?����� A����� :����� " :� G��������� A�� ������E A���������� &�� ��� �&C ���� �!� ��� 7! � �� ���� ��� �!��� �� %��� ��,& ��� !� �48C,33.,28� -22,

9�� �N� 9 ��� :� # � ��� � 9� � ����� � 0C ��� � ���7� � � " �(� �( �� �,(���� �!�� ��������� � � �� �� ��� �������� � " %����� %������� �$� ��������� 8C/�8./,4� -228

9���� ��� ��� ��� �� ���77� �C ��� � � " �(��� �!�� ��������� � � �� �������� �� 7� �!� � ���� � �������� #'�& ���� �C3;.2,� -22;

9���� �� ���� � �� ����7�� �G� �� ! ��C ����(��� �!��(��������� � � ����� ������%��! �� ��� � ���� �����������' 83C-2,.-2;� -224

������� ��C ���� ����� � ��� ������%� ����7��� � " ������ E� � �!������� � � ��� ,;C-322.-24;� -226

� ���? ! &�� A 77��� 9�� � ���� �� � �� A�C ��� � ���� " � "��! " ��������� ��� � ��� ��� � ���� ������ ��� #������ �8;C-�63.-�8-� -22�

������ �� F�� Q:C ������ E� � �!�������� A ��� � � �� � ��� �� ��� ;3C2-8.2-3� -226

���� %� �� 1��� � % �C ������ E� � �������� � ������ � �� ��� ������ ����� �""��������� � " ���� �� ���� /��$�� ,;8C/3.;,� -228

Q������ ��� * � � �� F� �� �������� ��������� A�� 9����� 1�C 9��������� ����E����� �� ���7� ������ E� � �!������ �� �� ��� ������ E� �� � ���� ��������� -4;C3-8.3�-� -22/

A �P� (������ �� �7�� � 1� ��P��� �� 0�� ��� ��� #� ��� AC ������ E� ��� ��� 7! ����%� ��(���� ���� ������� �!��� �������� ��� �������� � ��� ���� � 22C/,8./6�� -22;

������� 1� ���������� =� & R�� �� �� ��C �� �� ��� � ����( ���%� ����� �� ����!�������� �� ������ 7! ���� ������� �!���� � ��� ���� � 2,C��83.��/��-226

���������� &$� ������(� ���� G� #��� �� #����! :� & ���� �C ����� ���� ����� � ��� " ��������� �� � ���� � �������� -42C,-.,8� -22;

� ����� �� ���� A� : ����� �C 0� ��� � ������ � � " �� �� ��� � ���� ������ ��!�� �! �� ���� �!� �� ��� ��������� 2,C�-.�/� -22,

���� A�� A�? �� �� *���� �� �� �� A�� ������� �� 9��� � ��C 1%� ���� "��� ����� ���� � " ��� ����� ������ E� � �!������ 7! �(��� �!����������� � � ��� ���� /��� ��� #�� 0#� 2�C34-/.34�4� -228

�� ! ��� ������� �C � ��� �� "����� � " ��7��� �� ��� �� ��' ��� !�� /2C,3,.6-/� -232

�� ! ��� A� �! &� ����! A�� ������ A� =����� �� ������� �C ��* ����� �� ���������� �� ����� ����� ��&��� 6C3-,.3-/� -23,

�� ! ��� 0�%�� 5� ����7�� �GC �!� � E����! " 6(�! � E!���� � �� �!� ����������%��! �� %������ �� ���� " #-/ ��� �� �$� � ����� ��� 2���� �6C-3;2.-336� -233

��������� *� � � ���� �G� � �� ���! ��C � ����� �� ��� ���� " ������ E� � ������ "� ���� �7���� %��� �� ����� ���� 1������ 1��&�' !� ���$� -2,C;��.;�2� -22,

G�%�� � �� ������� �� ������ ��� �� ! ��C ����%��� � " �!� ������ �� ���� ����!� � E�� �""���� " ��� ����� E� � ��� � �� #-/ ��� ��� � ���� ������� ��� !� 2C;;.36� -22/�

G�%�� � �� ������� �� � �� ����� ��� �� ! ��C �!� ������ �! �� �������� ��� �!��� "� ��� �!� � E�� �""���� " ��� ����� E� � ��� �� �,&�������� /C�6;.�8,� -22/7

:������� &� ����� �� � � �� �� ! ��C �������������� � " ���* ����� ���� ���� ���� �� ����� ����%��� � " ��� ��� � ����(- ������ �� ������� ���!� -4C�33.�2;� -22;

F�� &� *���� �� � �� S� ����� �*� ����� �� F�� Q:� ������ �� =� �� 5�C�����"���� � ���� ��� �� ���7� ������ E� � �!������ ���������� �� ���������!�� �7� ����� ��������� 7! &(-;,8 ����� ��� � ���� � �,& ��������-3-C-,,,.-,6,� -228

2+# ������95 �� �� �*1 �0$A��9 0= 5�G1��5���5G1 �1A���090�N