14
INFOMATEK Volume 10 Nomor 4 Desember 2008 3 -HIDROKSI-STIGMASTAN- 5(6)-EN DAN 2-METILESTER-1-H-PIRROL-4-ASAM KARBOKSILAT BUAH SALAK (SALACCA EDULIS REINW.) VARIETAS BONGKOK DAN PENGHAMBATAN AKTIVITAS XANTIN OXIDASE Leni Herliani Afrianti *) , Elin Yulinah Sukandar **) , Slamet Ibrahim **) , I Ketut Adnyana **) . Jurusan Teknologi Pangan Fakultas Teknik - Universitas Pasundan Bandung Abstrak : Struktur komponen aktif yang berkhasiat antihiperurikemia serta menelaah mekanisme kerja menghambat xantin oksidase dari komponen aktif buah salak (Salacca edulis Reinw.) var. Bongkok. Metode penelitian yang digunakan meliputi tiga tahap. Tahap pertama, dilakukan isolasi meliputi maserasi, fraksinasi dan pemurnian yang melibatkan berbagai teknik kromatografi. Struktur senyawa hasil isolasi ditetapkan berdasarkan data spektroskopi, yang meliputi spektrum UV, IR, RMI 1-D, dan RMI 2-D. Tahap kedua dilakukan pengujian menghambat xantin oksidase oleh ekstrak dan senyawa hasil isolasi dilakukan secara in vitro dengan menggunakan metode inhibisi enzim xantin oksidase. Dari ekstrak etil asetat daging buah salak Bongkok diisolasi dua senyawa yaitu 3-hidroksi-stigmastan-5(6)-en dan 2-metilester-1-H-pirrol-4-asam karboksilat. Ekstrak etil asetat pada konsentrasi 0,01; 0,02; 0,2; 2; dan 2000 µg/mL menunjukkan penghambatan aktivitas enzim xantin oksidase masing-masing 49,24; 49,58; 50,28; dan 52,26 % dengan IC 50 24,75 µg/mL, sedangkan ekstrak etanol pada konsentrasi yang sama masing-masing dapat menginhibisi xantin oksidase sebesar 20,89; 32,78; 44,96; 50,30 dan 50,25 % dengan IC 50 44,95 µg/mL. Senyawa asam 2- metilester-1-H-pirol-4-karboksilat pada rentang konsentrasi yang sama mampu menginhibisi aktivitas xantin oksidase masing-masing 27,7; 30,5; 37,3; 50,27 dan 50,55% dengan IC 50 48,86 µg/mL. Sementara itu, pada konsentrasi yang sama pembanding alopurinol menunjukkan IC 50 0,92 µg/mL. Kata kunci : Buah Salak (Salacca edulis Reinw.) var. Bongkok, 3-hidroksi-stigmastan-5(6)-en,2-metilester-1-H- pirol-4-asamkarboksilat, IC 50, xantin oxidase. I. PENDAHULUAN Buah salak (Salacca edulis Reinw) var. Bongkok ditemukan di desa Bongkok *) Email :[email protected] **) Sekolah Farmasi Institut Teknologi

repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

  • Upload
    others

  • View
    4

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

INFOMATEKVolume 10 Nomor 4 Desember 2008

3 -HIDROKSI-STIGMASTAN- 5(6)-EN DAN 2-METILESTER-1-H-PIRROL-4-ASAM KARBOKSILAT BUAH SALAK (SALACCA EDULIS REINW.) VARIETAS BONGKOK

DAN PENGHAMBATAN AKTIVITAS XANTIN OXIDASE

Leni Herliani Afrianti *), Elin Yulinah Sukandar **), Slamet Ibrahim **), I Ketut Adnyana **).

Jurusan Teknologi Pangan Fakultas Teknik - Universitas Pasundan Bandung

Abstrak : Struktur komponen aktif yang berkhasiat antihiperurikemia serta menelaah mekanisme kerja menghambat xantin oksidase dari komponen aktif buah salak (Salacca edulis Reinw.) var. Bongkok. Metode penelitian yang digunakan meliputi tiga tahap. Tahap pertama, dilakukan isolasi meliputi maserasi, fraksinasi dan pemurnian yang melibatkan berbagai teknik kromatografi. Struktur senyawa hasil isolasi ditetapkan berdasarkan data spektroskopi, yang meliputi spektrum UV, IR, RMI 1-D, dan RMI 2-D. Tahap kedua dilakukan pengujian menghambat xantin oksidase oleh ekstrak dan senyawa hasil isolasi dilakukan secara in vitro dengan menggunakan metode inhibisi enzim xantin oksidase. Dari ekstrak etil asetat daging buah salak Bongkok diisolasi dua senyawa yaitu 3-hidroksi-stigmastan-5(6)-en dan 2-metilester-1-H-pirrol-4-asam karboksilat. Ekstrak etil asetat pada konsentrasi 0,01; 0,02; 0,2; 2; dan 2000 µg/mL menunjukkan penghambatan aktivitas enzim xantin oksidase masing-masing 49,24; 49,58; 50,28; dan 52,26 % dengan IC50 24,75 µg/mL, sedangkan ekstrak etanol pada konsentrasi yang sama masing-masing dapat menginhibisi xantin oksidase sebesar 20,89; 32,78; 44,96; 50,30 dan 50,25 % dengan IC50 44,95 µg/mL. Senyawa asam 2-metilester-1-H-pirol-4-karboksilat pada rentang konsentrasi yang sama mampu menginhibisi aktivitas xantin oksidase masing-masing 27,7; 30,5; 37,3; 50,27 dan 50,55% dengan IC50 48,86 µg/mL. Sementara itu, pada konsentrasi yang sama pembanding alopurinol menunjukkan IC50 0,92 µg/mL.

Kata kunci : Buah Salak (Salacca edulis Reinw.) var. Bongkok, 3-hidroksi-stigmastan-5(6)-en,2-metilester-1-H-pirol-4-asamkarboksilat, IC50, xantin oxidase.

I. PENDAHULUANBuah salak (Salacca edulis Reinw) var. Bongkok

ditemukan di desa Bongkok Kecamatan

Conggeang, Kabupaten Sumedang Jawa Barat.

Salak var. Bongkok mempunyai rasa asam,

sepat dan pahit, karena itu salak var. Bongkok

tidak diminati masyarakat dan menjadi produk

yang terbuang. Pada tahun 2003 hasil panen

buah salak var. Bongkok mengalami penurunan

hingga 24 persen, Anonimus [1], Untuk

memanfaatkan buah salak var. Bongkok supaya

memberikan nilai ekonomis dan dapat berdaya

guna maka kandungan senyawa kimianya

dilakukan kajian dan dicari kemungkinan untuk

dimanfaatkan sebagai obat atau pangan

fungsional dengan menguji khasiatnya secara in

vitro dan in vivo pada hewan percobaan. Kajian

terhadap senyawa aktif buah salak dari berbagai

*) Email :[email protected]**) Sekolah Farmasi Institut Teknologi Bandung

Page 2: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

Infomatek Volume 10 Nomor 4 Desember 2008 : 211 - 220

varietas masih belum banyak diketahui. Buah

salak var. Manonjaya mengandung beberapa

asam antara lain asam suksinat, asam askorbat,

asam adipat, asam malat dan asam sitrat.

Adanya senyawa tanin pada salak var. rata-rata

buah salak mengandung asam askorbat 2,4 ±

1,5 mg/100g.

Menurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh

mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan

senyawa-senyawa yang mudah menguap

seperti metil ester dari asam butanoat, 2-asam

metil butanoat, asam heksanoat, asam

pentanoat dan asam karboksilat lainnya. Salah

satu penyakit generatif adalah pirai, penyakit ini

ditandai dengan terjadinya hiperurikemia yaitu

kondisi asimtomatik dimana kadar asam urat

dalam darah melebihi normal. Kadar normal

asam urat dalam darah seorang pria adalah 3,4-

7,0 mg/dL, sedangkan wanita lebih rendah yaitu

2,4-5,7 mg/dL. Kelebihan asam urat dalam

darah seseorang ditandai dengan gangguan di

daerah persendian tulang dan timbul rasa

sangat nyeri bagi penderitanya. Penyakit radang

sendi dikenal sebagai penyakit pirai. Pirai

ditandai dengan serangan berulang dari arthritis

(peradangan sendi) yang akut, disertai

pembentukan kristal natrium urat yang

dinamakan tofi, deformitas (kerusakan) sendi

secara kronis, dan kelainan pada ginjal yang

meliputi glomerulus, tubulus, jaringan interstisial,

pembuluh darah, serta pembentukan batu urat ,

Katzung [3].

Enzim penting yang berperan dalam sintesis

asam urat adalah xantin oksidase yang sangat

aktif bekerja dalam hati, usus halus dan ginjal.

Tanpa bantuan enzim ini, asam urat tidak dapat

dibentuk. Xantin oksidase adalah kompleks

metalo-flavoprotein yang mengoksidasi

hipoksantin menjadi xantin, dan xantin menjadi

asam urat, Fields [4]. Untuk menghambat

terbentuknya asam urat digunakan alopurinol.

Alopurinol (4-hidroksipirazol [3,4-d] pirimidin)

adalah suatu analog purin yang menghambat

sintesis asam urat dengan jalan menghambat

secara kompetitif enzim xantin oksidase, [4].

Penelitian ini bertujuan untuk mengungkap

struktur komponen aktif yang berkhasiat

antihiperurikemia mekanisme kerja

menghambat xantin oksidase dari komponen

aktif buah salak (Salacca edulis Reinw.) varietas

Bongkok.

II. METODE PENELITIANPenelitian ini terbagi dalam dua tahap. Tahap

pertama, ekstraksi, fraksinasi, isolasi dan

pemurnian, kemudian karakterisasi struktur

senyawa. Tahap kedua dilakukan pengujian

menghambat xantin oksidase secara in vitro dari

ekstrak dan isolat, obat pembanding yang

digunakan adalah alopurinol.

Tahap pertama, buah salak Bongkok dilakukan

pengukusan dan pengeringan, kemudian

penggilingan untuk mendapatkan serbuk

simplisia buah salak Bongkok. Ekstraksi

simplisia dilakukan dengan maserasi

212

Page 3: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

3 -hidroksi-stigmastan- 5(6)-en dan 2-metilaster-1-H-Pirrol-4-Asam Karboksilat Buah Salak (Salacca Edulis Reinw.) Varietas Bongkok dan

Penghambatan Aktivitas Xantin Oxidase

menggunakan pelarut N-heksan, etil asetat,

etanol dan air. Selanjutnya difraksinasi dengan

kromatografi dengan kromatografi cair vakum

(KCV) menggunakan silica gel. Langkah awal

fraksinasi KCV adalah dengan analisis

komponen menggunakan KLT (kromatografi

Lapis Tipis) dengan mengamati bercak dari

golongan senyawa yang menjadi tujuan isolasi.

Pengamatan bercak dapat digunakan di bawah

lampu UV panjang gelombang 254 nm dan

bantuan pereaksi penyemprot yaitu serium

sulfat dan asam sulfat 10%.

Pemurnian dilakukan untuk memisahkan fraksi

yang mengandung hanya satu komponen utama

yaitu KCV, Kromatografi tekan (KT) dan KLT

preparatif; semuanya menggunakan silikia gel

sebagai adsorben. Elusidasi struktur

menggunakan instrumen spektrofotometri UV-

Visibel untuk menganalisis adanya gugus

kromofor dan gugus fungsi melalui profil

spektrum, posisi panjang gelombang absorpsi

maksimum dan absortivitanya pelarut tertentu,

juga didukung dari data spektrum infra merah,

dan NMR

Tahap kedua, pengujian efek menghambat

xantin oksidase dari isolat dan ekstrak secara in

vitro. Sampel uji diinkubasi dengan xantin

oksidase, EDTA dan bufer fosfat (pH 7,8) dan

xantin pada 37oC selama 15 menit. Bahan uji

dalam meredam aktivitas xanthin oksidase

menggunakan spektrofotometri dengan panjang

gelombang 293 nm. Larutan kontrol tanpa

sampel uji, larutan pembanding adalah

alopurinol. Penentuan inhibisi xantin oksidase

ditentukan terhadap larutan blanko, Zhu [5].

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

Pada penelitian ini telah berhasil diisolasi dua

senyawa dari ekstrak etil asetat. Satu senyawa

termasuk kelompok terpenoid yaitu 3-hidroksi-

stigmastan-5(6)-en (β-sitosterol) (1) dan dari

kelompok pirol yaitu asam metil-pirol-2,4-

dikarboksilat (2). Dua senyawa tersebut baru

pertama kalinya ditemukan dalam buah salak

Bongkok. Hal yang menarik adalah senyawa

asam metil-pirol-2,4-dikarboksilat (2) dari salak

Bongkok merupakan senyawa baru yang

berhasil diisolasi dalam tanaman buah salak

Bongkok. Struktur senyawa (1) ditunjukkan pada

Gambar V.7 dan senyawa (2) pada Gambar

V.15.

3.1. 3-Hidroksi-stigmastan-5(6)-en (β- sitosterol)

Data spektrum IR senyawa (1) menunjukkan

adanya serapan yang kuat pada maks 3430 cm-1

yang berasal dari regang ulur gugus O-H, diikuti

dengan serapan pada maks 1063 cm-1 dari gugus

C-O alkohol sekunder. Pada maks 2937 cm-1

terdapat serapan yang sangat kuat dari regang

ulur gugus C-H alifatik gugus CH2 dan CH3

diikuti dengan serapan pada maks 1465 dan

1382 cm-1 yang berasal dari tekukan C-H alifatik

dari gugus CH2 dan CH3 yang khas untuk

golongan terpenoid. Adanya serapan dengan

intensitas lemah pada maks1732 cm-1

213

Page 4: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

Infomatek Volume 10 Nomor 4 Desember 2008 : 211 - 220

menunjukkan adanya regangan ulur C=C dari

gugus C-H rangkap dua (-C=C-H) siklik.

Spektrum 1H-RMI senyawa (1) (Gambar 1),

menunjukan adanya enam sinyal gugus metil

yang terdiri dari; dua sinyal singlet pada δH 0,67

(H-18) dan 1,00 (H-19) ppm, tiga sinyal

doblet pada δH 0,92 (H-21); 0,80 (H-26) dan

0,82 (H-27) ppm, serta satu sinyal triplet pada

δH 0,83 (H-29) ppm.

Selain itu, nampak juga adanya satu sinyal

dobel-doblet yang berasal dari proton vinilik

pada δH 5,35 (J=4,90; 3,05 Hz, H-6) ppm dan

satu sinyal tripel-triplet dari proton alifatik

teroksigenasi pada δH 3,52 (J=11,0; 4,25 Hz, H-

3) ppm. Unit-unit sinyal proton tersebut

mengindikasikan adanya unit kerangka struktur

terpenoid.

Gambar 1. Spektrum 1H-RMI senyawa (1)

Berdasarkan data spektrum COSY (Gambar 2),

nampak adanya korelasi antara proton δH 1,66

(H-25) ppm dengan proton H-24, H-26 dan H-

27; antara proton δH 0,91 (H-24) ppm dengan

proton H-23, H-25 dan H-28; antara proton δH

1,25 (H-28) ppm dengan proton H-24 dan H-29,

serta antara proton δH 1,34 (H-20) ppm dengan

proton H-17, H-21 dan H-22, yang khas untuk

kerangka karbon alifatik bebas dari kelompok

steroid stigmastan. Selanjutnya, spektrum

COSY juga menunjukkan korelasi antara proton

vinilik δH 5,35 (H-6) ppm dengan proton H-7;

antara proton H-8 (δH 1,49 ppm) dengan proton

H-7, H-9 dan H-14, serta antara proton δH 0,90

(H-9) ppm dengan proton H-8 dan H-11, yang

berasal dari unit cincin B dan C kerangka steroid

dan menetapkan posisi ikatan rangkap tersebut

berada pada cincin B.

214

Page 5: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

3 -hidroksi-stigmastan- 5(6)-en dan 2-metilaster-1-H-Pirrol-4-Asam Karboksilat Buah Salak (Salacca Edulis Reinw.) Varietas Bongkok dan

Penghambatan Aktivitas Xantin Oxidase

Gambar 2. Spektrum H-H COSY 2D senyawa (1)

Spektrum 13C-RMI senyawa (1) (Gambar 3),

nampak adanya 28 sinyal yang mewakili 29

atom karbon dan terdistribusi ke dalam 27 atom

karbon sp3 (δC 12,2-80,0 ppm) dan dua atom

karbon sp2 (δC 121,9-140,9 ppm). Berdasarkan

analisis sinyal karbon DEPT 135, sinyal-sinyal

karbon sp3 tersebut antara lain terdiri dari, enam

atom karbon metil, sebelas atom karbon

metilen, delapan atom karbon metin dan dua

atom karbon kuartener.

Sedangkan dua sinyal karbon sp2 yang muncul

adalah satu karbon etilen vinilik pada δC 140,9

ppm dan satu karbon kuartener vinilik pada δC

121,9 ppm. Data spektrum 13C-RMI tersebut

telah memperkuat data spektrum 1H-RMI untuk

kerangka triterpen dari kelompok steroid.

Korelasi antara karbon dan proton selanjutnya

akan dijelaskan berdasarkan korelasi karbon-

proton dari spektrum HMBC.

215

Page 6: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

Infomatek Volume 10 Nomor 4 Desember 2008 : 211 - 220

Gambar 3.Spektrum 13C-RMI senyawa (1), (a) sinyal tunggal dan (b) DEPT 135

Dari spektrum HMBC nampak adanya korelasi

antara karbon pada δC 140 (C-5) ppm dengan

proton H-1, H-4 dan H-19, serta korelasi antara

korbon δC 36,3 (C-10) ppm dengan proton H-9,

H-6 dan H-19, yang menetapkan posisi ikatan

rangkap dua berada pada cincin B yaitu C5-C6.

Spektrum HMBC juga menunjukkan adanya

korelasi antara karbon pada δC 29,3 (C-25), 26,2

(C-23) dan 45,9 (C-24) ppm dengan proton H-26

dan H-27, yang mengindikasikan adanya satu

unit isopren bebas. Unit isopren ini telah

mengalami modifikasi, dimana berdasarkan data

spektrum HMBC data COSY, atom karbon pada

δC 45,9 (C-24) ppm berkorelasi dengan proton

H-28, sedangkan proton pada δH 0.91 (H-24)

ppm berkorelasi dengan proton H-28, yang

merupakan gugus substituen tambahan khas

untuk kelompok senyawa steroid dari golongan

stigmastan. Selain itu nampak juga satu unit

isopren yang telah terikat dengan unit isopren

yang lain berdasarkan korelasi antara karbon

pada δC 18,9 (C-21) ppm dengan proton H-17,

H-20 dan H-22. Data lengkap spektrum

COSY/HMBC senyawa (1) dan korelasi

spesifiknya berturut-turut ditunjukkan pada

Gambar 4.

Gambar 4.

Korelasi spesifik spektrum COSY dan HMBC senyawa (1).

216

Page 7: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

3 -hidroksi-stigmastan- 5(6)-en dan 2-metilaster-1-H-Pirrol-4-Asam Karboksilat Buah Salak (Salacca Edulis Reinw.) Varietas Bongkok dan

Penghambatan Aktivitas Xantin Oxidase

3β-hidroksi-stigmastan-5(6)-en (1) atau yang

sering dikenal sebagai sitosterol, struktur

senyawa ditunjukkan pada berikut.

Gambar 5. 3-hidroksi-stigmastan-5(6)-en (β-sitosterol) (1)

3.2. Asam metil-pirol-2,4-dikarboksilat Data spektrum UV senyawa (2) menunjukkan

serapan maksimum pada daerah panjang

gelombang max 217 dan 270 nm yang

mengindikasikan adanya kromofor.

Penambahan pereaksi NaOH menyebabkan

pergeseran batokromik ke panjang gelombang

yang lebih tinggi yaitu pada max 227 dan 314

nm. Ester metil pada senyawa tersebut bereaksi

dengan NaOH terjadi peristiwa hidrolisis yang

membentuk ion karboksilat.

Dari Spektrum IR adanya serapan pada daerah

max 3100-2500 cm-1 yang berasal dari gugus OH

asam dan serapan pada max 3260 dan 3474 cm-

1 berasal dari gugus N-H amina sekunder.

adanya serapan pada max 1659 dan 1582 cm-1,

dari dua gugus C=C alifatik. Pada daerah max -

1612 cm-1 adanya sinyal doblet dari) gugus

karbonil asam dan ester. Adanya serapan dari

gugus C-N yang muncul pada max 1283 cm-1

dan gugus C-O-C ester ansimetri dan simetri

berturut-turut pada max 1228 dan 1142 cm-1.

Spektrum 1H-RMI senyawa (2) (Gambar 6)

menunjukkan adanya tiga sinyal proton singlet

yang terdiri yaitu, satu sinyal proton singlet

teroksigenasi yang berasal dari gugus metoksi

pada H 4,41 (OCH3) ppm dan dua sinyal proton

singlet vinilik pada H 6,49 (H-3) dan 7,94 (H-4)

ppm. Selain itu, dari spektrum 1H-RMI nampak

adanya sinyal singlet yang berasal dari proton

amina (NH) pada H 5,60 (NH) ppm.

Berdasarkan analisis spektrum COSY, nampak

bahwa ketiga sinyal proton tersebut tidak

menunjukkan korelasi antara satu dengan yang

lain, sehingga dapat disimpulkan bahwa proton-

proton tersebut tidak bertetangga.

217

Page 8: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

Infomatek Volume 10 Nomor 4 Desember 2008 : 211 - 220

Gambar 6.Spektrum 1H-RMI senyawa (2

Dari data spektrum 13C-RMI (Gambar 7) nampak

adanya enam sinyal yang mewakili tujuh atom

karbon yaitu, satu karbon sp3 dan enam karbon

sp2. Satu sinyal karbon sp3 yang muncul pada

C 61,1 ppm berasal dari sinyal atom karbon

metoksi (OCH3), sedangkan enam sinyal karbon

sp2 muncul antara lain berasal dari, dua sinyal

atom karbon metin vinilik pada C 110,7 (C-3)

dan 140,9 (C-5) ppm, dua sinyal atom karbon

kuartener vinilik pada C 110,69 (C-4) dan 147,3

(C-2) ppm; serta dua sinyal atom karbon

karbonil pada geseran kimia C 176,8 (C=O

asam) dan 170,3 (C=O ester) ppm. Berdasarkan

data-data tersebut dan data spektrum IR yang

mengindikasikan adanya gugus amina, maka

dapat diduga bahwa keempat karbon vinilik dan

satu gugus amina tersebut membentuk suatu

cincin pentasiklik. Korelasi antara proton dan

karbon yang terjadi pada senyawa (2)

selanjutnya akan dijelaskan berdasarkan

spektrum HMBC.

Gambar 7.Spektrum 13C-RMI senyawa (2)

Berdasarkan spektrum HMBC, nampak adanya

korelasi antara atom karbon pada δC 170,3

(C=O ester) ppm dengan proton H-3, dan H-

metoksi, yang menetapkan posisi gugus

metoksi terikat pada atom C-karbonil ester,

sedangkan korelasi antara proton δH 6,49 (H-3)

ppm dengan atom karbon C-2, C-metoksi dan

C-karbonil ester, serta korelasi antara atom

karbon C-2 dengan proton H-3, telah

menetapkan posisi gugus karbonil ester terikat

pada atom C-2. Penetapan posisi gugus

karbonil ester pada C-2 tersebut berdasarkan

korelasi antara atom karbon C-metoksi dengan

proton H-3 yang memiliki posisi paling dekat

dengan gugus C-metoksi. Selain itu, korelasi

antara atom karbon pada δC 176,8 (C=O asam)

ppm dengan proton H-3 dan H-5, telah

menetapkan posisi atom karbon karbonil asam

tersebut terikat pada C-4 (Gambar 8).

Gambar 8. Korelasi spesifik spektrum C-H HMBC 2D

senyawa (2)

Data tersebut sesuai dengan kerangka struktur

senyawa siklik lima amina yang mempunyai dua

pasang ikatan rangkap dua dari golongan pirol.

Berdasarkan data-data tersebut dan hasil

penelusuran data base dari Chemfinder dapat

218

Page 9: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

3 -hidroksi-stigmastan- 5(6)-en dan 2-metilaster-1-H-Pirrol-4-Asam Karboksilat Buah Salak (Salacca Edulis Reinw.) Varietas Bongkok dan

Penghambatan Aktivitas Xantin Oxidase

disimpulkan bahwa, senyawa 2 adalah senyawa

turunan pirol yang baru pertama kali diisolasi

dari tumbuhan yaitu asam metil-pirol-2,4-

dikarboksilat, dan kerangka strukturnya

ditunjukkan pada Gambar 9.

Gambar 9. Asam metil-pirol-2,4-dikarboksilat

3.3. Penghambatan xantin oksidase

Persen penghambatan ekstrak yang mampu

menghambat 50% enzim xantin oksidase adalah

pada ekstrak etil asetat konsentrasi 0,01; 0,02;

0,2; 2; dan 2000 µg/mL masing-masing adalah

36,27; 49,24; 49,58; 50,28; dan 52,26 %

dengan IC50 24,75 µg/mL, ekstrak etanol pada

konsentrasi yang sama masing-masing dapat

menghambat xantin oksidase sebesar 20,89;

32,78; 44,96; 50,30 dan 50,25 % dengan IC50

44,95 µg/mL, sedangkan senyawa asam metil-

pirol-2,4-dikarboksilat mampu menghambat

aktivitas xantin oksidase masing-masing yaitu

27,7; 30,5; 37,3; 50,27 dan 50,55% dengan

IC50 48,86 µg/mL. Sementara itu, pada

konsentrasi yang sama pembanding alopurinol

dapat menginhibisi aktivitas enzim xantin

oksidase masing-masing yaitu 38,02; 41,72;

44,30; 65,31; dan 67,70 % dengan IC50 0,92

µg/mL.

Gambar 10.Persen penghambatan xantin oksidase oleh

ekstrak dan isolat dengan pembanding alopurinol

Tabel 1.IC50 ekstrak dan isolat buah salak Bongkok

(Salacca edulis Reinw) dalam menghambat xantin oksidase

Sampel IC50 (µg/mL)Ekstrak n-heksanEkstrak etil asetatEktrak etanolEkstrak airAlopurinolβ-sitosterolAsam metil-pirol- 2,4-dikarboksilat

ta24,75±5,7544,95±3,95ta0,92±0,79ta48,86±6,72

ta = tidak aktif (konsentrasi zat uji tidak mampu menghambat 50 % xantin oksidase)

219

Page 10: repository.unpas.ac.idrepository.unpas.ac.id/29296/3/2). LENI HERLIANI (TP)211... · Web viewMenurut, Supriyadi [2], salak var. Pondoh mengandung sukrosa, glukosa, fruktosa dan senyawa-senyawa

Infomatek Volume 10 Nomor 4 Desember 2008 : 211 - 220

Pada tabel 1 ekstrak etil asetat dan ekstrak

etanol buah salak var. Bongkok mempunyai

aktivitas menghambat xantin oksidase, hal ini

terlihat dengan nilai IC50 ekstrak etil asetat

adalah 25,75 µg/mL dan IC50 ekstrak etanol

adalah 44,95 µg/mL Mekanisme kerja ekstrak

etil asetat dan ekstrak etanol sebagai

antihiperurikemia diduga menghambat aktivitas

enzim xantin oksidase yang pada akhirnya

menghambat pembentukan produksi asam urat.

Lebih lanjut, senyawa 3-hidroksi-stigmastan-

5(6)-en(-sitosterol) tidak mempunyai aktivitas

menghambat xantin oksidase sedangkan asam

metil-pirol-2,4-dikarboksilat mempunyai aktivitas

menghambat xantin oksidase dengan

ditunjukkan dengan nilai IC50 48,86 µg/mL.

IV. KESIMPULAN

Isolasi ekstrak etil asetat buah salak Bongkok

terdapat dua senyawa yaitu 3-hidroksi-

stigmastan-5(6)-en (β-sitosterol) dan asam

metil-pirol-2,4-dikarboksilat. Senyawa asam

metil-pirol-2,4-dikarboksilat merupakan senyawa

baru dalam tanaman salak var. Bongkok yang

mempunyai aktivitas menghambat xantin

oksidase dengan IC50 48,86 µg/mL, sedangkan

senyawa 3-hidroksi-stigmastan-5(6)-en (β-

sitosterol) tidak memiliki aktivitas menghambat

xantin oksidase.

V. DAFTAR RUJUKAN

[1] Anonimus., (2003). Laporan tahun 2003,

Departemen Pertanian Jawa Barat.

[2] Supriyadi, Suhardi, Suzuki M., Yoshida K.,

Muto T., Fuujita A.dan Watanabe N.,

(2002), Changes in the volatile compounds

and in the chemical and physical properties

of snake fruit (Salacca edulis Reinw.)

cv. Pondoh during maturation.

Agric.chem.,50;7627-7633.

[3] Katzung, B.G., (2002), Farmakologi Dasar

dan Klinik, terjemahan Bagian Farmakologi

Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia,

Salemba Medika, Jakarta, 487-493.

[4] Fields M., Charles G.L., dan Mark D.L.,

(1996), Allopurinol, an inhibitor of xanthine

oxidase, reduces uric acid levels and

modifies the signs associated with copper

deficiency in rats fed fructose, Free Radical

Biol & Med, Vol 20, No 4, pp.595-600.

[5] Zhu, J.X., Ying W, Kong L.D., Yang C.,

dan Zhang X., (2004), Effects of Biota

orientalis extract and its flavonoid

constituents, quercetin and rutin on serum

uric acid levels in oxonate-induced mice

and xanthine dehydrogenase and xanthine

oxidase activities in mouse liver,

Ethnopharm. 93:133-140.

220