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- Allgemeine Aspekte
- Spezielle Aspekte
Hämostasediagnostik
Hannover, November 2005
Allgemeine Aspekte
- Testsystematik
- Qualitätssicherung
- Befundinterpretation
Testsystematik
- Phänotyp-Analytik- Funktionelle Testverfahren- Strukturelle Testverfahren
- Genotyp-Analytik- DNA-basiert- RNA-basiert
Funktionelle Testverfahren
- Funktionelle Testverfahren bestimmen die biologische Aktivität eines Analyten.
- Testmatrix: Vollblut, plättchenreiches Plasmaoder plättchenarmes Plasma
- „Read-out-System“:- turbidometrisch- koagulometrisch- amidolytisch
Thromboplastinzeit
Messprinzip: koagulometrisch
Messparameter: Fibrinbildung
Messgröße: Gerinnungszeit in Sek.
Befundmitteilung: in Prozent bezogen auf Normalplasma
Prothrombin-Ratio
International normalized ratio (INR)
Prothrombin-Ratio = Patientenwert
Normalwert
INR = Prothrombin-RatioISI-Wert
ISI = International Sensitivity Index
0
1
2
3
4
5
6
0 25 50 75 100 125 150
Quick-Wert (%)
INR
Korrelation „Quick-Wert“ und INR
Koagulometrisches Testverfahren
Thrombin
Fibrinogen Fibrin
Messparameter: Fibrinbildung
Amidolytisches Testverfahren
H-D-Phe-Pip-Arg-pNA pNA
Thrombin
Messparameter: Hydrolyse eines Peptidsubstrats
0
50
100
150
200
250
0,001 0,01 0,1 1 10
Thrombinkonzentration (U/ml)
Ger
inn
un
gsz
eit
(s)
Thrombinbestimmung: koagulometrisch
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
0,001 0,01 0,1 1 10
Thrombinkonzentration (U/ml)
Del
ta O
D (
405
nm
)
Thrombinbestimmung: amidolytisch
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
0 2 4 6 8 10
Time after TF (min)
T-A
T c
om
ple
xes
(ng
/ml)
TF-induced thrombin formation
clot formation
Amidolytische Testverfahren
Amidolytische Testverfahren
- sind eine Alternative zu koagulometrischenVerfahren.
- ermöglichen kinetische Untersuchungen Endogene Thrombinbildungspotenzial.
Testsystematik
- Phänotyp-Analytik- Funktionelle Testverfahren- Strukturelle Testverfahren
- Genotyp-Analytik- DNA-basiert- RNA-basiert
Antigenteste
Definition:Antigenteste messen die Konzentration und/oder die molekulare Struktur eines Analyten.
Beispiele:ELISA-VerfahrenElektrophoresetechniken/Western-BlotHPLCDurchflusszytometrie
Sandwich-ELISA: Prinzip (1)
Fänger-Ak
Mikrotiterplatte
Sandwich-ELISA: Prinzip (2)
Fänger-Ak
Mikrotiterplatte
Antigen
Sandwich-ELISA: Prinzip (3)
Fänger-Ak
Mikrotiterplatte
* *Detektions-Ak
Antigen
Sandwich-ELISA: Prinzip (4)
Fänger-Ak
Mikrotiterplatte
* *Detektions-Ak
Antigen
Substrat Farbstoff
Allgemeine Aspekte
- Testprinzipien
- Qualitätssicherung
- Befundinterpretation
Testvalidität
- Eignung des Tests für die klinische Diagnostik.
Testvalidität: Parameter
- Präzision (RiLiBÄK)
- Spezifität
- Sensitivität
Testpräzision
Intra-assay Varianz: Schwankungen eines Messwertes innerhalbeiner Messserie.
Inter-assay Varianz: Schwankungen einesMesswertes von Seriezu Serie.
Testsensitivität: Definition
Die Testsensitivität ist definiert als die
Wahrscheinlichkeit mit der erkrankte
Personen vom Test als krank erkannt
werden.
Krankheits- Testergebnisstatus
positiv negativ
positiv richtig positiv falsch negativ
negativ falsch positiv richtig negativ
Testvalidität
Testsensitivität: Definition
Sensitivität =RP
RP + FN
RP = richtig positiv, FN = falsch negativ
D-Dimer und DVT-Diagnostik
Test Sensitivität Negativer prä-(%) diktiver Wert
Elisa 97 96Vidas-DD 98 98Latex-Assay 83 92Simplired 85 92
Perrier A, Bounameaux. Thromb Haemost 2001; 86: 475 - 487
Testspezifität: Definition
Die Testspezifität ist definiert als die
Wahrscheinlichkeit mit der gesunde
Personen vom Test als nicht krank
erkannt werden.
Krankheits- Testergebnisstatus
positiv negativ
krank richtig positiv falsch negativ
gesund falsch positiv richtig negativ
Testvalidität
Testspezifität: Definition
Spezifität =RN
RN + FP
RN = richtig negativ, FN = falsch positiv
Testvalidität
- Eignung des Tests für die klinische Diagnostik.
- Evidence-based diagnostics
EBD: Bewertungen
Das Ergebnis des diagnostischen Verfahrens ist ...
Level 1: diagnoseentscheidend und therapierelevant.
Level 2: diagnoseentscheidend oder therapierelevant.
Level 3: diagnosehinführend.
Level 4: zur Diagnostik und Therapie ungeeignet.
Qualitätssicherung: Ziele
- Erkennen von Einflüssen, die unab-hängig von dem Messparameter dasTestergebnis beeinflussen.
- Sicherung einer gleichbleibendenErgebnisqualität.
Einflussgrößen
Einflussgrößen beeinflussen das Messergebnis
unabhängig von der eigentlichen Messgröße.
Einflussgrößen
- Physiologische Einflussgrößen
- Methodische Einflussgrößen(Analytische Störgrößen)
Analytische Störgrößen
- Präanalytische Fehler
- In-process Fehler
- Interpretationsfehler
Präanalytische Störgrößen
- Art der Blutabnahme
- Verhältnis Blut : Antikoagulanz
- Art des Antikoagulanz
Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0 0,5 1 1,5 2 2,5
CTAD-antikoaguliertes Plasma
Cit
rat-
an
tik
oa
gu
liert
es
Pla
sm
a
Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz
0
0,5
1
1,5
2
2,5
0 0,5 1 1,5 2 2,5
CTAD-antikoaguliertes Plasma
Cit
rat-
an
tik
oa
gu
liert
es
Pla
sm
a
Analytische Störgrößen: Beispiel aPTT
Präanalytische Fehler: Abnahme in SerumröhrchenAbnahme aus Heparinzugang
In-process Fehler:Fehlende Zugabe von CalciumchloridVerzicht auf Präzisionskontrollen
Interpretationsfehler:Interpretation bei fehlendem Referenz-bereich
Physiologische Einflussgrössen
- Alter
- AB0-Blutgruppe
- Akute-Phase-Reaktion
- Geschlecht
Parameter BlutgruppenA/B 0
vWF-Ag: 64 – 150 % 46 – 125 %
RiCof: 65 – 165 % 50 – 130 %
CBA: 69 – 116 % 61 – 121 %
vWF-Parameter: Referenzbereiche*
* IHT Uniklinikum Bonn
Referenzintervall*: Definition
- Das Referenzintervall bildet die bio-logische Streuung eines Messpara-meters in einer definierten Popula-tion ab.
- Die obere und untere Grenze des Referenzintervalls wird durch das 95% Konfidenzintervall bestimmt.
* Synonym: Referenzbereich
X
- 2s + 2s95 %
Referenzgrenzen: Bewertung
Referenzwerte
- Referenzstichprobe
- Referenzintervall
- Referenzgrenzen
Referenzstichprobe: Selektion
Induktiv:Ausgewählte Population ohne Krankheits-merkmale (Blutspender, Krankenhausper-sonal)
Deduktiv:Unselektierte Patienten bilden das Basis-material. Durch Ausschlusskriterien wirddas Kollektiv der „nicht kranken“ ermittelt.
Mathematisch:„Bhattacharya Plot“
Referenzstichprobe: induktiv
Population: 100 gesunde Blutspender50 Frauen/ 50 Männer
Berechnung: 95 % Konfidenzintervall*
* Fast alle Hämostaseparameter sind nicht normalverteilt.
Referenzstichprobe: Deduktiv
Parameter: D-Dimer als Thrombose-indikator
Basiskollektiv: Patienten mit thrombose-typischer Symptomatik
Selektionskriterium: bildgebende Diagnostik
Allgemeine Aspekte
- Testprinzipien
- Qualitätssicherung
- Befundinterpretation
Transversalbeurteilung
Wert in Bezug zum Referenzintervall:
- innerhalb: gesund?
- außerhalb: pathologisch?
Entscheidungsgrenzen
- Entscheidungsgrenzen korrelieren eine klinische Symptomatik mit ein-em Messwert.
- Entscheidungsgrenzen können nur an einem Kollektiv von erkrankten Personen ermittelt werden.
- Entscheidungsgrenzen und Referenz-grenzen sind nicht deckungsgleich.
Entscheidungsgrenzen: Beispiel
Parameter: FVIII-Aktivität
Referenzintervall: 60 – 150 %
Entscheidungsgrenze:
- Hämophilie: < 30 %
- Thrombophilie: > 250 %
Messwert
Bewertungsalgorithmus: Laboranalytik
laborinterne Qualitätskontrolle
fehlerfrei
Freigabe Fehlersuche
Arzt informierenWiederholung
ärztliche Befundung
ja nein
Qualitätskontrolle & Referenzintervall
Unpräzision von Tag zu Tag:- höchstens 1/8 des Referenzintervalls- besser 1/12 des Referenzintervalls
Beispiel: aPTT (26 – 34 s)- 1/8 1 s- 1/12 0,7 s
freigegebener Messwert
Bewertungsalgorithmus: Laboranalytik
Innerhalb des
Referenzbereichs
Verlaufs-kontrolle
Krankheits-bezug
ja nein
Bezug zu Vorwerten
Normal-wert
ja nein
Klinisch-relevant
Klinisch-nichtrelevant
ja nein
180.000/µl
Beispiel: Thrombzytenzahl
Referenzbereich:150.000 – 300.000/µL
Verlaufs-kontrolle
Krankheits-bezug
ja nein
Bezug zu Vorwerten
Normal-wert
ja nein
Klinisch-relevant
Klinisch-nichtrelevant
ja nein
Beispiel: Thrombozytenzahl
Klinischer Verlauf:- Beginn Heparintherapie vor 5 Tagen
Ausgangswert: 290.000/µl
Aktueller Messwert: 180.000/µl
Bewertung: V. a. relative Thrombozytopenie
- Allgemeine Aspekte
- Spezielle Aspekte
Hämostasediagnostik