硕 士 研 究 生

开题报告

硕 士 研 究 生

开题报告

COX2 对鼻咽癌细胞粘附性的影响

广东医学院病理教研室

研究生 : 罗伟仁 导师 : 陈小毅 教授

LMP1

COX2 对鼻咽癌细胞 粘附性的影响

Ecadherin(Ecad)

主 要 内 容◈ 立题依据◈ 研究内容◈ 技术路线◈ 预期结果◈ 进度安排◈ 经费预算

一 立题依据◈ LMP1 与鼻咽癌之间的关系

◈ COX2 与鼻咽癌之间的关系

◈ ECAD 与鼻咽癌之间的关系

EBV 与鼻咽癌之间的关系 ◈ 几乎 100% 的 NPC 中有 EBV 基因组的

存在◈ NPC 患者及高危人群体内有高水平 的 EBV 抗体◈ 鼻咽癌上皮细胞中大多数是潜伏 感染

LMP1 与鼻咽癌之间的关系(1)

◈ 其被认为唯一与细胞转化相关的具 有瘤基因功能 ◈ 体内外实验显示 LMP1 对鼻咽癌细胞有促进生长作用 ◈ 大约 65 % 鼻咽癌组织中表达 LMP

1

LMP1 与鼻咽癌之间的关系 (2)

◈ LMP1 阳性的 NPC 较 LMP1 阴性的 NPC 更容易侵袭鼻咽旁的正常组织及淋巴结

◈ LMP1 通过各种诱导途径参与鼻咽癌的侵袭和转移

LMP1 主要的生物学功能

◈ 促进及维持 B 细胞转化和永生化 ◈ 使鼠类成纤维细胞发生转化 ◈ 上调 C33A 细胞中 EGFR 和 A20表达

◈ 活化核转录因子 NFκB

LMP1 的结构

◈ LMP1 是一种完整的跨膜蛋白 ◈ 包括 N 末端胞浆域 , 跨膜疏水结构域 , 羧基端胞浆域 三个不同功能的区域

◈ 羧基端胞浆域与 LMP1 的基本功能密切相关

CTAR1 介导大约 25 % 的 NFκB 激活羧 基 端 CTAR2 介导大约 75 % 的 NFκB 激活胞浆域 CTAR3 介导 ICAM1表达

NFκB 功能 ◈ 以 IκB 非活性 形式存在 , IκB α 的磷酸化 引起活化

◈ 上调 A20 、 bcl-2 、 VEGF 、MMP9 等 , 诱导端粒酶表达

◈ 有研究表明 NFκB 可以诱导COX2 的表达

COX2 与鼻咽癌之间的关系

◈ COX 的分类及功能

◈ COX2 与鼻咽癌的研究

COX 的分类及功能

◈ 有两种异构酶 COX1 和 COX2 ◈ COX1 是结构型表达蛋白，维持机体正常的生理功能

◈ COX2 是诱导型表达蛋白，在炎症、肿瘤的发生发展及转移中起重要作用

COX2 的结构和功能

◈ 基因长 8. 3kb, 含有 10 个外显子和

9 个内含子◈ 5′ 非翻译区含两个 NFκB 结合位点 ◈ 可以催化花生四烯酸产生多种 PG

COX2 与肿瘤 ◈ 许多癌前病变和恶性肿瘤中均有 COX2 的高表达

◈ 非甾体类抗炎药物可以抑制COX2 的表达

参 与 机 制 PGE2 肿瘤细胞增殖

Bcl2 抑制细胞凋亡 COX2

MMP2/ECAD? 肿瘤侵袭转移

VEGF 促进血管形成

COX2 与鼻咽癌

◈ 国内最近有研究表明在鼻咽癌组织中 COX2 呈高度表达

◈ 国外 Yoshizaki 研究结果：多数LMP1 阳性的鼻咽癌组织表达 COX2

COX2 与 LMP1

◈ Yoshizaki 等研究 : 随着 LMP1 浓度的增大，转染 LMP1的 422F6细胞系中 COX2 的表达也增强

◈ LMP1 通过 CTAR1 和 CTAR2 激活NFκB 及 AP1 来诱导 COX2 表达

CTAR1

LMP1 NFκB COX2

CTAR2

E-CAD 与鼻咽癌之间的关系

◈ E-CAD 的结构和功能

◈ E-CAD 与鼻咽癌的研究

E-CAD 的结构 细胞外区 ：介导同质细胞粘附

E-CAD 跨膜区 : 固定膜作用

细胞内区 ：“锚”定 ，发挥信号传递

和细胞稳定作用

E-CAD 的功能 ◈ 钙依赖性 ，以 Ecad - Cat 复合体 形式发挥作用

◈ 介导细胞与细胞之间的粘附

◈ 起细胞骨架作用

E-CAD 与肿瘤

◈ 其表达缺失导致肿瘤细胞接触性抑制丧失 ◈ 近年研究表明 : E-cad 与恶性肿瘤的分化程度、侵袭转移及预后密切相关

E-CAD 与鼻咽癌

◈ 有报道显示鼻咽癌组织中 Ecad表达缺失

◈ Huang 等报道 Ecad 的表达与鼻咽癌淋巴结转移呈负相关

LMP1 、 COX2 、 E-CAD

◈ Chi-NeuTsai 等最近研究发现 LMP1 可以通过诱导 Ecad启动子甲基化下调其表达

◈ BaileyT 发现在 COX2 高表达细胞中 , 细胞粘附因子 Ecad 缺失

本课题研究所在◈ 在鼻咽癌组织和细胞中 COX2和 Ecad 两者表达关系怎样

◈ LMP1 能否通过诱导 COX2从而下调 Ecad 的表达

◈ COX2 对鼻咽癌细胞的粘附性有何影响

思路简图

表达性

LMP1 COX2 ECAD 运动性

粘附性

COX2 抑制剂

COX2 抑制剂分类 ◈ 非选择性 COX 抑制剂 消炎痛 阿斯匹林 ◈ 选择性 COX1 抑制剂 SC560 氟布洛芬 ◈ 选择性 COX2 抑制剂 塞来昔布 尼美舒利

COX2 抑制剂抑癌作用

◈ 已有研究表明 COX2 抑制剂对多种实验肿瘤有预防和治疗作用

◈ 腺瘤性息肉、结肠癌等

COX2 抑制剂抑癌机制 ◈ 抑制肿瘤增殖 ◈ 诱导细胞凋亡 ◈ 抑制血管形成 ◈ 抑制侵袭转移 ◈ 调节细胞免疫

二 研究内容（ 1）

◈ 鼻咽癌原发灶及转移灶中 LMP1 、COX2 、 Ecad 的表达

◈ 鼻咽癌细胞系中检测 LMP1 、 COX2 、 Ecad 的表达

研究内容（ 2） ◈ 在体外细胞应用塞莱昔布 (COX

2特异抑制剂 ),观察 COX2 、 Ecad 的表达

◈ 检测瘤细胞运动和粘附性改变

三 技术路线 ◈ 分组

◈ 技术路线图

◈ 检测方法

分 组 (1)

◈ 临床标本：分慢性鼻咽炎、低分化鼻咽癌、鼻咽癌淋巴结转移灶三组，每组各 30例

◈ 鼻咽癌细胞系 : 分 CNE1 、 CNE1-G 、 CNE1-GL 、 CNE2Z 四组

分 组 (2)

◈ 塞莱昔布体外实验 : ♦ 分 CNE1 、 CNE1-G 、 CNE1-GL 、

CNE2Z 四组 ; 分别给予塞莱昔布 40 umol/L 的浓度

♦ 检测同一细胞系塞莱昔布（＋）/ （－）情况下，其运动性和粘附性的改变

 

技术路线图如下

体外实验

CNE1-G CNE1-GL CNE-2Z

塞莱昔布 (-) 塞莱昔布 (+)

免疫组 化 蛋白印迹 RT-PCR 细胞运动粘附实验

LMP1 COX2 ECAD ECAD 细胞运动、粘附性

慢性炎 原发灶 转移灶

免疫组 化

LMP1 COX2 ECAD

综合结果分析COX2 对细胞粘附的影响

CNE1

临床病理

检测方法 ◈ LMP1 的检测 免疫组织化学

Western blot◈ COX2 的检测 免疫组织化学 Western blot ◈ Ecad 的检测 免疫组织化学 RT-PCR法 Western

四 预期结果 (1)

◈ 在临床标本中 , LMP1 与 COX2表达成正相关 ; 与 Ecad 成负相关

◈ 在鼻咽癌细胞系中 ,LMP1 诱导下 ,COX2 表达升高及 Ecad 表达降低

预期结果 (2) ◈ 塞莱昔布体外抑制 COX2 作用下 , Ecad 表达升高 ,说明 LMP1 通过上调 COX2 来抑制 Ecad 的表达

◈ 细胞运动、粘附实验中 , 塞莱昔布 (+) /(-) 组的同一鼻咽癌细胞系的运动及粘附性有统计学意义

五 进度安排 2004.10---2004.12 收集资料、写综述、开 题报告2005.1---2005.3 培养和转染细胞 收集病理标本

2005.4---2005.10 体外、临床实验及完成相关 检测指标2005.11---2005.12 数据处理和统计2006.1---2006.4 撰写论文、答辩

六 经费预算◈ 细胞培养 2000 ◈ 免疫组化 3000

◈ 细胞运动 , 粘附实验 3000◈ Western blot 3000◈ RT-PCR 4000◈ 其他预算 2000◈ 合计 17000