第十五章     蛋白质的合成

蛋白质合成概述

DNA: ATGCATGCATGC

RNA: AUGCAUGCAUGC

PROTEIN: aa1 aa2 aa3 aa4

什么样的碱基序列决定什么样的氨基酸序列呢？

如何实现碱基序列到氨基酸序列的转变？

第一节               mRNA

mRNA 的概念首先是由 F.Jacob 和 J.Monod1965 年提出来的．因为当时已经知道编码蛋白质的遗传信息载体ＤＮＡ是在细胞核中，而蛋白质的合成是在细胞质中，于是就推测，应该有一种中间信使在细胞核中合成后携带上遗传信息进入细胞质中指导蛋白质的合成，后来经过众多科学家的实验，发现了除 rRNA 和 tRNA 之外的第三种 RNA, 它起着这种遗传信息传送的功能 , 称为信使 RNA(mRNA) 。 mRNA 的半衰期很短 , 很不稳定 , 一旦完成其使命后很快就被水解掉。

原核生物和真核生物 mRNA 的结构差异教大，尤其是在 5’ 端。

一、      原核生物mRNA的结构 （ 1 ） 5’ 端 SD 序列 P404-P405

在起始密码子 AUG 上游 9-13 个核苷酸处，有一段可与核糖体 16S rRNA 配对结合的、富含嘌呤的 3-9 个核苷酸的共同序列，一般为 AGGA ，此序列称 SD 序列。它与核糖体小亚基内 16S rRNA 的 3’ 端一段富含嘧啶的序列 GAUCACCUCCUUA-OH （暂称反 SD 序列）互补，形成氢键。使得结合于 30S 亚基上的起始 tRNA 能正确地定位于 mRNA 的起始密码子 AUG 。

（ 2 ） 原核 mRNA 分子，许多是多顺反子。

转译时，各个基因都有自己的 SD 序列、起始密码子、终止密码子，分别控制其合成的起始与终止，也就是说，每个基因的翻译都是相对独立的。如 E.coli ，一个 7000b 的 mRNA 编码 5 种与 Trp 合成有关的酶

二、      真核生物mRNA的结构（ 1 ） 真核生物 mRNA5’ 端均具有 m7GpppN

帽子结构，无 SD 序列。帽子结构具有增强翻译效率的作用。若起始 AU

G 与帽子结构间的距离太近（小于 12 个核苷酸），就不能有效利用这个 AUG ，会从下游适当的 AUG 起始翻译。当距离在 17-80 个核苷酸之间时，离体翻译效率与距离成正比。

（ 2 ） 真核生物 mRNA 通常是单顺反子。真核 mRNA 具有“第一 AUG 规律”，即当 5’

端具有数个 AUG 时，其中只有一个 AUG 为主要开放阅读框架的翻译起点。起始 AUG 具有二个特点：

（ 1 ） AUG 上游的 -3 经常是嘌呤，尤其是 A 。（ 2 ）紧跟 AUG 的 +4 常常是 G 。起始 AUG 邻近序列中，以 ANNAUGGN 的频

率最高。若 -3 不是 A ，则 +4 必须是 G 。无此规律的 AUG ，则无起始功能。

有关 mRNA 发现及其证实的细节看书 P391.

第二节               遗传密码我们已经知道 , 多肽上氨基酸的排列次序最终是由 DN

A 上核苷酸的排列次序决定的，而直接决定多肽上氨基酸次序的是 mRNA 上的核苷酸的排列次序 , 不论是 DNA还是 mRNA 都是由 4 种核苷酸构成，而组成多肽的氨基酸有 20 种 ,显然 , 必须是几个核苷酸的组合编码一个氨基酸才能应付局面 . 用数学方法很容易算出 , 如果每 2 个核苷酸编码 1 个氨基酸 ,那么 4 种核苷酸只有 16 中编码方式，显然不行 , 如果每 3 个核苷酸编码 1 个氨基酸 , 则有 64 种编码方式 , 很理想 ,如果 4 对 1 则有 256 种 , 太没必要也太复杂了 , 时刻记住生物体是一个最理想的体系 . 而且科学家们用生物化学实验已经证实是 3 个碱基编码 1 个氨基酸 , 称为三联体密码或密码子。那么让我们看一下遗传密码是如何破译的。

一、      遗传密码的破译在遗传密码的破译中 ,美国科学家 M.W.Nirenberg等人做出了重要贡献 ,并于 1968 年获得了诺贝尔生理医学奖 .早在 1961 年， M.W.Nirenberg等人在大肠杆菌的无细

胞体系中外加 poly(U)模板、 20 种标记的氨基酸，经保温后得到了多聚 phe-phe-phe ，于是推测 UUU编码 phe 。利用同样的方法得到 CCC 编码 pro ， GGG 编码 gly ， AAA 编码 lys 。

如果利用 poly （ UC ），则得到多聚 Ser-Leu-Ser-Leu ，推 测 UCU 编 码 Ser ， CUC 编 码 Leu ， 因 为 poly（ UC ）有两种读码方式： UCU——CUC 和 CUC——UCU采用这种方式，到 1965 年就全部破译了 64组密码子，见表 P394 。

二、      遗传密码的特点在 64 个密码子中有 61 个编码氨基酸， 3 个不

编码任何氨基酸而起肽链合成的终止作用，称为终止密码子，它们是 UAG 、 UAA 、 UGA ，密码子 AUG （编码 Met ）又称起始密码子。

密码子： mRNA 上由三个相邻的核苷酸组成一个密码子，代表肽链合成中的某种氨基酸或合成的起始与终止信号。

（ 1 ）方向性：从 mRNA 的 5’ 到 3’

（ 2 ）连读性编码一个肽链的所有密码子是一个接着一个地线形排

列，密码子之间既不重叠也不间隔，从起始密码子到终止密码子构成一个完整的读码框架（不包括终止子），又称开放阅读框架（ ORF ）。那么如果在阅读框中插入或删除一个碱基就会使其后的读码发生移位性错误（称为移码）。需要指出的是，两个基因之间或两个 ORF 之间可能会

互相部分重叠（共用部分序列）。（ 3 ）简并性几种密码子编码一种氨基酸的现象称为密码子的简并性。如 GGN （ GGA 、 GGU 、 GGG 、 GGC ）都编码 Gly ，那么这 4 种密码子就称为 Gly 的简并密码。只有 Met 和 Trp没有简并密码。一般情况下密码子的简并性只涉及第三位碱基。

     问题：简并性的生物学意义？A 、可以降低由于遗传密码突变造成的灾难性

后果试想，如果每种氨基酸只有一个密码子，那么剩下的 44 个密码子都了终止子，如果一旦哪个氨基酸的密码子发生了单碱基的点突变，那么极有可能造成肽链合成的过早终止。如 GUU 编码 Ala ，由于简并性的存在，不论第三位的 U 变成什么，都仍然编码 Ala

B 、可以使 DNA 上的碱基组成有较达的变化余地，而仍然保持多肽上氨基酸序列不变（意思基本同上）。

（ 4 ）摇摆性 密码子中第三位碱基与反密码子第一位碱基

的配对有时不一定完全遵循 A-U 、 G-C 的原则，也就是说密码子的碱基配对只有第一、二位是严谨的，第三位严谨度低， Crick把这种情况称为摇摆性，有人也称摆动配对或不稳定配对。显然，密码子的第三位和反密码子的第一位是摇摆位点。

具体说来，反密码子第一位的 G 可以与密码子第三位的 C 、 U 配对， U 可以与 A 、 G 配对，另外反密码子中还经常出现罕见的 I ，可以和密码子的 U 、 C 、 A 配对，这使得该类反密码子的阅读能力更强。见表 P396

     问题：细胞内有几种 tRNA ？当遗传密码破译后，由于有 61 个密码子编码氨基酸，

于是人们预测细胞内有 61 种，但事实上绝大多数细胞内只有 50 种左右， Crick 也正是在这种情况下提出了摇摆假说并合理解释了这种情况。根据摇摆性和 61 个密码子，经过仔细计算，要翻译 61

个密码子至少需要 31 种 tRNA ，外加 1 个起始 tRNA ，共需 32 种。但是，在叶绿体和线粒体内，由于基因组很小用到的密码子少，那么，叶绿体内就有 30 种左右 tRNAs ，线粒体只有 24 种。

（ 5 ）通用性：密码子在不同物种间几乎是完全通用的。目前只发现线粒体和叶绿体内有列外情况，这也是如火如荼的转基因的前提。但要注意的是不同生物往往偏爱某一种密码子。

第三节               核糖体核糖体又称核蛋白体，它是蛋白质合成的场所：标记各种 a.a ，注入大鼠体内，在不同时间取出肝脏，匀浆，离心分离各种亚细胞器，分析放射性蛋白的分布，证实蛋白质的合成是在核糖体上进行的。对于真核细胞来说，核糖体按其在细胞质中的位置分为游离核糖体（合成细胞质蛋白）和内质网核糖体（合成分泌蛋白和细胞器蛋白）。

不论原核细胞还是真核细胞，一条 mRNA 可以被同时几个核糖体阅读，把同时结合并翻译同一条 mRNA 的多个核糖体称为多核糖体。

一、      核糖体的结构与组成核糖体是由核糖核酸（称为核糖体核酸 , rRNA ）

和几十种蛋白质分子（核糖体蛋白）组成的一个巨大的复合体。不同类型生物中核糖体的结构高度保守，尽管其 rRNA 和核糖体蛋白的一级结构有所不同，但其三级结构却惊人的相似。

核糖体的大亚基上有两个重要的位点： P 位点是结合肽酰 tRNA 的肽酰基的位点， A 位点是结合氨酰 tRNA 的氨酰基的位点。

每个核糖体是由大小两个亚基组成，每个亚基都有自己不同的 rRNA 和蛋白质分子，表 P307

二、       rRNA与核糖体蛋白的结构与功能(一 )、               rRNA的结构与功能结构：有大量的茎环（发夹）结构，结构复杂，可能

是核糖体的钢筋骨架。功能：（ 1 ）蛋白质合成的施工平台（骨架）（ 2 ）催化肽键形成的转移酶活性存在于 23SrRNA 上有人小心的去掉细菌核糖体的蛋白质组分，保持 rRNA

的相对完整性，发现蛋白质的合成仍可进行。（ 3 ）参与 tRNA 与 mRNA 的结合可能的情况是： mRNA 先识别 rRNA 的特定序列并结

合固定下来 ,然后 tRNA再识别并固定到 rRNA 特定的部位，其反密码子才与 mRNA 密码子配对。已经知道 16SrRNA 上有一段序列与原核 mRNA 上的 SD序列相结合。

（ 4 ）在大小亚基的聚合中起重要作用（ 5 ）在翻译的校正和翻译的调控方面有重要

功能（如可结合调控因子）总的来说， RNA分子似乎是整个核糖体的活跃的活性中心。

(二 )、              核糖体蛋白的结构与功能结构：大多数核糖体蛋白呈纤维状（可能起骨

架作用），少数呈球状（可能起生物功能）。功能：(1)维持核糖体的结构(2)新发现：一些核糖体蛋白具有 DNA 结（ Hei

lix—turn—Heilix 模块）；还有些真核核糖体蛋白具有 DNA修复功能

问题：既然蛋白质是在核糖体中合成的，那么第一个核糖体

中的蛋白组分又是怎样合成的？第一个核糖体又是怎样出现的？

先有 DNA还是先有蛋白质？大多数科学家越来越支持 RNA 起源论，既然核糖体中既有蛋白质又有 RNA ，那么彻底搞清楚核糖体的结构与功能及其起源也许会弄清生命的起源和演化。

RNA 起源论：第一个生活细胞里出现的是 RNA 分子，他同时具有信

息储藏和生物演化的双重特性，也就是说既可以在一定程度上复制自己，又可以催化一些最初的生化反应，后来，随着活细胞的进化， DNA逐渐出现并成为更为稳定的遗传信息储存分子。

第四节               蛋白质合成的机理真核生物和原核生物在蛋白质合成方面有许多共同之

处，因此，我们先学习蛋白质合成的一般过程，然后分别看一下原核和真核蛋白质合成的具体过程。

游离氨基酸在掺入肽链以前必须活化以获得额外的能量，每一种游离氨基酸首须在专一的氨酰 tRNA 合成酶的帮助下与专一的 tRNA 相连（有人称装载， LOAD ），然后由 tRNA负责将它带到核糖体上的特定位点（ A 位点上）并添加到正在合成的肽链 C末端，这种从游离氨基酸到形成氨酰 tRNA 的过程既是氨基酸的活化过程，也是肽链每合成一步或延伸一步的必经准备阶段。下边我们先看一下这个过程是怎样完成的？

一、      氨酰 tRNA合成酶：氨基酸的活化和氨酰 tRNA的合成

基酸的活化和氨酰 tRNA 的合成是蛋白质生物合成的第一步，由氨酰 tRNA 合成酶催化。氨酰 tRNA 合成酶既能识别氨基酸，又能识别 tRNA 。

(一 )、              活化在 Mg2+ 的存在下，氨酰 tRNA 合成酶首先识别并结合专一的配体氨基酸，然后氨基酸的羧基与细胞环境中的 ATP 发生反应形成一个酸酐型的高能复合物（氨酰 AMP 中间复合物）。该中间复合物暂时结合在酶上。

 

酶 / Mg2+ 氨基酸 + ATP 氨酰 AMP- 酶 + PPI

(二 )、              连接由于氨酰 tRNA 合成酶上还存在专一的 tRNA识别位点，

因此特定的游离 tRNA 就会识别并结合到氨酰 AMP-酶复合物的活性部位，此时氨基酸就会被转移到 tRNA 的 3 端，其羧基与 tRNA 3 端的自由 -OH 形成氨酰酯键，从而形成氨酰 tRNA ，这也是一个高能化合物，其能量足以形成肽键。由于氨酰 tRNA 能量低于氨酰AMP ，所以这一过程是可以自发的。

tRNA 

氨酰 AMP- 酶 氨酰 tRNA + AMP + 酶 

氨基酸一旦与 tRNA 形成氨酰 tRNA 后进一步的去向就由 tRNA 来决定了， tRNA凭借自身的反密码子与 mRNA 上的密码子相识别，从而把所携带的氨基酸送到肽链的 一定位置上。每一个密码子对应的肽链位置上都能掺入正确的氨基酸。

结论：（ 1 ）氨基酸的活化和氨酰 tRNA 的合成是蛋白质生物

合成的第一步，每一种氨基酸在被掺入肽链之前都首先被活化和连接在专一 tRNA 上，活化和连接都发生在氨基酸的羧基上。

（ 2 ）载体 tRNA凭借自身的反密码子与 mRNA 上的密码子相识别而把所携带的氨基酸送到肽链的一定位置上

（ 3 ）遗传信息是通过 mRNA 上的密码子与 tRNA 上的反密码子间碱基配对作用翻译出来的 。

氨酰 tRNA 合成酶：每一种氨基酸都有至少一种专一的氨酰 tRNA 合成酶，

它即能识别氨基酸，又能识别 tRNA ，从而把特定的氨基酸连到对应的 tRNA 上，有人也把氨酰 tRNA 合成酶的双向识别功能称为第二遗传密码。

不同的氨酰 tRNA 合成酶在分子量、氨基酸序列、亚基组成上差异较大。它是如何识别氨基酸的呢？仍不甚清楚。一些氨基酸由于结构上的显著特征容易识别如大小不同（ Trp 与 Gly ），带正负电荷（ lys,asp ），而一些氨基酸结构极其相似，如 Ile 与 Val 仅差一个甲基。尽管如此 tRNAIle 合成酶也能正确识别，但有时也能错误的形成 Val –tRNAIle ，但是每一种氨酰 -tRNA 合成酶都有一个校正位点，由于大小原因，只有 Val –tRNAIle才能结合到校正位点，然后合成酶将 Val又从 tRNAIle 上将其水解下来。

氨酰 -tRNA 合成酶还能正确的识别和结合 tRNA ，对于一些酶来说， tRNA 上的反密码子是其识别特征，此外， tRNA 上的受体茎环（ acceptor stem ）也是识别特征。

tRNA 分子的突变与校正基因可以说 tRNA 是一个万能接头：（ 1 ）对氨酰 - tRNA 合成酶的识别位点（接头合成

酶）（ 2 ） 3 端 -CCA 上的氨基酸运载位点（接头氨基酸，装载）

（ 3 ）对核糖体的识别位点（将氨基酸运送到目的地）

（ 4 ）反密码子位点（接头MRNA ，验货并卸载）

同复突变：突变型生物有时重所获得其原有的性状，这是通过突变型遗传物质的化学变化而发生的。这种变化使遗传物质恢复到有功能的状态，重所获得原有的表型，这种过程称为回复，被回复的生物称为回复子。回复突变的原因很多，其中有一种回复突变是

由其在基因上发生一个突变引起的，这称为基因校正突变。大多数较正突变发生在 tRNA 基因上。举例：基因间校正突变图当有某种 tRNA突变分子出现时，必定还有可以识别正常密码子的该种 tRNA存在。

二、      蛋白质合成的一般过程蛋白质合成的一般过程如图 18.3 ，可以分为三个阶段：起始、延伸、终止，分别

由不同的起始因子、延伸因子和终止因子（释放因子）参与。

(一 )、              翻译起始（ 1 ）小亚基与 mRNA 结合（ 2 ）起始氨酰 tRNA 进入 P 位点，它的

反密码子与 mRNA 上的起始密码子 AUG碱基配对。

（ 3 ）大亚基与小亚基结合形成起始复合物。

(二 )、              延伸 方向： mRNA 5/ 3/

新生肽： N/ C/

（ 1 ）就位：第二个氨酰 tRNA 通过密码子—反密码子的配对作用进入核糖体的 A 位点（氨基位点）。

（ 2 ）转肽：在大亚基上肽酰转移酶（ peptidyl transferase ）的作用下， A 位点氨基酸的 A- 氨基亲核攻击P 位点氨基酸的羧基基团并形成肽键，结果两个氨基酸均连到了 A 位点的 tRNA 上，该过程称为转肽作用（ transpeptidation ），此时， P 位点上卸载的 tRNA 从核糖体上离开。

（ 3 ）移位（ translocation ，也可称转位）：核糖体沿着 mRNA移动 1 个密码子位置，携带肽链的 tRNA转位到 P 位点， A 位点空出以便接纳下一个氨基酸。

(三 )、              终止由于终止密码子不能结合任何氨酰 tRNA ，于是肽链合成

的终止因子（又称释放因子）识别并结合到终止密码子上，接着肽转移酶的酯化酶功能转变成水解功能，将肽链从 P 位点 tRNA 上水解掉，核糖体释放掉 mRNA并解体成大小亚基，翻译结束。

在翻译过程中除了核糖体大小亚基、 mRNA 和氨酰 tRNA 外，还需要 GTP 和许多蛋白辅助因子。这些辅助因子有的起催化作用，有的起改变和稳定构象作用。

(四 )、              翻译后加工不论原核生物还是真核生物，翻译完成后，一些肽链能直接折叠成最终的活性形式，不需要加工修饰，然而经常的情况是新生肽链需要加工修饰（称为翻译后加工或修饰）包括：（ 1 ）切除部分肽段（蛋白酶）、（ 2 ）在特定氨基酸残基的侧链上添加一些基团（共价修饰）、（ 3 ）插入辅因子，还有些单肽要聚合成多亚基蛋白。

翻译后加工有两方面目的：（ 1 ）功能需要（ 2 ）定向转运的需要（这在真核生物中尤为复杂，合成的蛋白要定向运输到细胞质、质膜、各种细胞器如叶绿体、线粒体、溶酶体、过氧化物酶体等）。尽管原核生物与真核生物在蛋白质合成方面有

许多相似之处，但也存在差异，这些差异正是一些抗生素治疗和研究应用的基础。见表 18.2

 

表 18.2 蛋白质合成的选择性抗生素抑制剂抗生素作用氯霉素与 50S 亚基结合，抑制原核肽转移酶cycloheximide抑制真核肽转移酶活性Erythromycin抑制原核肽链延伸链霉素、卡那霉素结合到原核 30S 亚基上引起读妈错误，导致合成的多肽连一级结构改变

Tetracycline与 30S 亚基结合，干扰氨酰 tRNA 的结合

三、      原核生物的蛋白质合成原核生物（大肠杆菌）每秒钟可翻译 20 个氨基

酸，比真核生物快得多，而真核生物每分钟才大约 50 个氨基酸。

(一 )、  翻译起始（图 18.5 ）翻译是从形成起始复合物开始的，在原核生物

中该过程需要三个起始因子参与： IF1 ， IF2 ，和 IF3 。（ IF1 的功能尚不清楚）。

（ 1 ） IF3 首先结合在 30S 亚基上，防止它过早地与 50S 亚基结合。

（ 2 ） mRNA 结合到 30S 亚基上。原核 mRNA 上在距起始密码子上游约 10bp 处有

一段很短的（约 10bp ）富含嘌呤的区域称为SD 序列，它能与 30S 亚基上的 16S rRNA 3 端的一段互补序列（不妨称反 SD 序列）配对结合， mRNA 正是通过其 SD 序列与 16S rRNA的配对结合而使它处于核糖体上的恰当的位置，并使起始密码子 AUG 处于 P 位点。 SD 序列与 16S rRNA 的配对还为识别起始密码子和 Met 密码子提供了一种机制。

原核多顺反子 mRNA 上的每一个基因都有自己的 SD 序列、起始密码子和终止密码子，每一个基因的翻译都是相对独立的。

（ 3 ） IF2 、 fMet-tRNAfmet 结合到 30S 亚基上IF2 是一个 GTP 结合蛋白，它先与 30S 亚基结合并促使起始氨酰 tRNA 的密码子与 mRNA 上的 AUG 结合（ P 位点）。原核生物的起始氨酰 tRNA 是 N—甲酰甲硫氨酰 tRNA （ fMet-tRNAfmet ）。

（ 4 ） 50S 大亚基结合到 30S 小亚基上，形成起始复合物。

GTP 水解成 GDP释放的能量引起 30S 亚基构象变化， 50S 亚基结合到 30S 亚基上，同时 IF2和 IF3释放。

因此，原核生物肽链合成的起始复合体由 mRNA 、 70S 核糖体、 fMet-tRNAfMet组成。

（ 1 ） IF3 首先结合在 30S 亚基上，防止它过早地与 50S 亚基结合。（ 2 ） mRNA 结合到 30S 亚基上。（ 3 ） IF2 、 fMet-tRNAfmet 结合到30S 亚基上（ 4 ） 50S 大亚基结合到 30S 小亚基上，形成起始复合物。

(二 )、              延伸肽链延伸分三步进行：（ 1 ）新的氨酰 tRNA 进入核糖

体的 A 位点；（ 2 ）肽键形成（转肽）；（ 3 ）核糖体移位（转位）。这三步构成了肽链延伸的一个循环。

1、           新氨酰 tRNA入位图 18.6

首先，在进入 A 位点之前，新氨酰 tRNA 必须与延伸因子 EF—TU—GTP 结合。延伸因子 EF—TU 是一个GTP 结合蛋白，参与氨酰 RNA 的就位。氨酰 RNA就位后， EF—TU—GTP 水解， EF—TU—GDP 从核糖体上释放下来，在第二个延伸因子 EF—Ts帮助下EF—Tu—GDP释放掉 GDP并重新结合一分子 GTP再生成 EF—Tu—GTP 。

2、           肽键形成（转肽）肽键是在肽酰转移酶催化下形成的，现在认为肽酰转移酶活性存在于 50S 亚基 23S rRNA 上。驱动肽键形成的能量由 P 位点上的氨基酸与它的 tRNA 的高能肽酰酯键提供。新肽键形成后P 位点卸载的 tRNA 就离开核糖体。

嘌呤霉素抑制肽键形成

3、           核糖体移位。移位需要另一 个 GTP 结 合 蛋 白 EF—G

（延伸因子Ｇ，又叫移位酶）的参与。现在认为， GTP 水解成 GDP 时释放出的能量促使核糖体构象发生变化，驱动肽酰 tRNA 从Ａ位点移动到Ｐ位点。空下的Ａ位点等待接纳下一个氨酰 tRNA 。

EF—Tu ：机动蛋白（ motor protein ） 多亚基的复合体（如核糖体）就象一个生化机器。它

由几个相互作用的工作部件组成。机械性的工作是力与距离的产物。每一个生化机器的设计都能非常准确地保证所施用的力的量、所产生运动的量与方向，最后完成一项特定的工作。其中的力通常由核苷酸结合蛋白提供，称为 NTPae ，实质上是机动蛋白（ motor protein ，或称机械化学转换器 mechanochemical transducers ）因为 NTP （ ATP 和 GTP ）的水解所造成的它自身构象的变化驱动了相连分子的构象向所需的方向转变。这种 NTP 水解驱动的构象变化主要定位于一个固定化的结构单元（称为开关）。 EF—Tu 就是一个广泛研究的 GTP 结合机动蛋白。

EF—Tu 有三个结构域（ domain ），域１含有一个 GTP 结合位点和二个开关区，域２通过一个柔软的肽段与域１相连。在结合 GTP 的活性状态下（ EF-Tu-GTP ）， EF-TU 有一个 aa-tRNA 结合位点。 aa–tRNA 与 EF-Tu-GTP 结合后的整个结构称为三元复合体。

EF-Tu 的三个域都参与 tRNA 的结合。域３的几个氨基酸残基与tRNA 的 TφC环相互作用。 aa-tRN Ａ的反密码子从三元复合物上突出来，以便与 mRNA 的密码子相互作用。

在蛋白质合成时， EF-Tu-GDP （非活性状态）与 EF-Ts 相互作用释放出 GDP ，随后域１的 GTP 结合位点结合一分子 GTP并改变域１的两个开关区的构象，结果使域１与域２靠近，形成１个 aa－ tRNA 结合缝（ binding cleft ）。一旦一个 aa–tRNA 结合到该裂缝中，三元复合物就进入核糖体， aa—tRNA 的反密码子与Ａ位点上 mRNA D 的密码子可逆结合，核糖体构象的变化触发 EF-Tu 的 GTP 结合位点的构象变化，随后GTP 水解使域１与域２分开， aa–tRNA 被释放下来， EF-TU-GDP 离开核糖体。

(三 )、              终止当终止密码子（ UAA, UAG,UGA ）进入Ａ位点

时肽链合成就进入终止期。原核生物有三个释放因子（ RF-1, RF-2, RF-3 ）参与终止。

RF1识别 UAA 和 UAG ， RF2识别 UAA 与 UGA,

RF3 作用尚不清楚，可能促进 RF1 与 RF2 结合。这种识别过程需要 GTP并改变了核糖体的构象，肽酰转移酶的功能发生瞬时变化，转变成酯酶功能，将连接肽链与 P 位点 tRNA 的肽酰酯键水解开，肽链从核糖体上释放， mRNA与 tRNA 解离，核糖体解体。

原核生物蛋白质合成中的能量计算（合成一个二肽） ATPA （ GTP ）高能键甲酰 -甲硫氨酰 -tRNA 合成ATP-AMP2起始（ IF-2 ）GTP-GDP1第二个 a.a-tRNA 合成ATP-AMP2第二个 a.a-tRNA 进入核糖体（EF-TU ）GTP-GDP1核糖体移位（ EF-G ）GTP-GDP1终止（？）GTP-GDP1合成二肽（形成一个肽链）需8 个高能键，其后每加一个 a.a需4 个高能键。例：合成 200 个 a.a残基的多肽8+198×4=8004n=4×200=800（真核：起始多1 个 ATP 和 1 个 GTP ）

(四 )、              原核生物的翻译后加工一些新生肽链从核糖体上释放下来后就直接折叠成最终的

三维结构。但多数情况下是新生肽要经过一系列的加工修饰，才具有功能。有关翻译后加工修饰的许多信息都来自真核生物中的研究，但是原核细胞中的多肽也要经过几种类型的共价修饰。

1、           切除加工包括去掉 N 端的甲酰甲硫氨酸和信号肽序列。信号肽（ Si

gnal peptide ），也叫引导肽（ leader peptide ），是决定多肽最终去向的一段序列，通常较短，典型情况下位于N 端。在细菌中的一个例子就是多肽要插入细胞质膜必须借助信号肽序列。

2、           糖基化尽管在原核生物中，绝大多数的复合糖是糖酯，但是，也

有少量的糖蛋白的报道，例如 Halobacterium 细胞表面的糖蛋白，有关原核生物糖基化的机制及其功能都还不知道。

3、           甲基化甲基转移酶利用硫酰苷甲硫氨酸对特定蛋白进行甲基化修饰。

在大肠杆菌和有关细菌中发现的一种甲基转移酶能甲基化膜结合的化学受体蛋白的谷氨酸残基。这种甲基转移酶和另外一种甲基酯酶催化的甲基化 /去甲基化过程在细菌趋化性的信号转导中起重要作用。

4、           磷酸化近年来，已经发现由蛋白激酶和蛋白磷酸化酶催化的

蛋白质磷酸化 /去磷酸化在原核生物中十分普遍。磷酸化 /去磷酸化的意义还不太清楚。目前只知在细菌趋化性和氮代谢调空中有瞬间的磷酸化作用。

(五 )、              原核生物的翻译调控蛋白质的合成是一个非常耗能的过程。每形成一个肽

键要消耗 4 个高能磷酸键（ tRNA装载 2 个， aa-tRNA 入位 1 个，移位 1 个）。在大肠杆菌中，用于合成的能量 90% 都给了蛋白质合成。因此，其合成必然要受到严格的调控。

在原核生物中，蛋白质合成的调控多在转录的水平上（操纵子模型），有如下几个原因：

（ 1 ）转录与翻译直接偶联，转录后不久就开始翻译，图 18.7（ 2 ）原核生物 mRNA 的半衰期很短，大约 1~3 分钟，随着环境条件的改变，细胞内产生的 mRNA 种类会迅速改变。大多数 mRNA 被两种核酸外切酶降解：RNAaseII 和多核苷酸磷酸化酶。

除了转录调控机制外， mRNA 翻译速率也是调控位点。这种翻译速率的调控大多是由于 SD 序列的差异造成翻译起始效率的不同。因为 SD帮助识别 AUG 和启动翻译的起始，因此 SD 序列的变化能影响翻译的起始效率从而调控了 mRNA 的翻译速率。乳糖操纵子的基因产物有 3 个： β- 半乳糖苷酶，半乳糖透过酶，半乳糖苷转甲基酶，各个顺反子（即基因之间），常有一段非编码的间隔区。不同间隔区的长度变化，可以在 1-100 个之间，甚至可以重叠。但是它们的翻译量是不等的，硫代半乳糖苷转甲基酶的量只有 β-半乳糖苷酶的 1/5 （硫代半乳糖苷酶的功能不清楚。乳糖发酵通常都是在不能产生它的突变细胞中进行的）。

 

 

乳糖将纵子产物Z 基因产物：半乳糖苷酶1

Y 基因产物：半乳糖透性粉0.5

A 基因产物：半乳糖乙酰化酶0.2

 

除了 SD 序列的差异外，原核生物还有一种调控机制：相对过剩的蛋白质翻译产物对自身多顺贩子 mRNA翻译的负调控。也就是说，多顺贩子 mRNA 的其中一个产物相对过剩时能抑制整个多顺贩子 mRNA 的翻译。图 18.8

原核核糖体的 55 种蛋白质由 20 个操纵子编码。细菌的良好生长要求这些蛋白质的合成之间及其与 rRNA的合成之间协调起来。例如 PL11操纵子编码核糖体蛋白 L1 和 L11 ，如果 L1 相对过剩就会占用了可利用的 23SrRNA ，结果抑制 PL11mRNA 的翻译。在 23SrRNA缺乏的情况下， L1 蛋白也会结合在 PL11mRNA 的 5’ 端抑制自身操纵子的翻译。

结论：（ 1 ）原核生物蛋白质的合成相对较快，它需要起始因子

IF-1 、 IF-2 、 I-3 ，延伸因子 EF-TU 、 EF-TS 、 EF-G ，释放因子 RF-1 、 RF-2 、 RF-3 的参与。

（ 2 ）尽管原核生物基因的表达多在转录水平上进行调控，但翻译水平上的调控也时有发生，包括 SD 序列对翻译起始的调控和相对过剩的翻译产物对自身多顺反子 mRNA 翻译的负调控。四、      真核生物的蛋白质合成蛋白质合成的研究最早是在哺乳动物细胞内进行的（入氨酰 tRNA 合成酶和 tRNA 的发现），但到 60 年代后注意力却集中到了细菌。原因很简单，细菌细胞易于培养，细菌基因的表达较简单也易于操作。进入 70 年代后，真核细胞的蛋白质合成又变成了研究的热点。

真核细胞的蛋白质翻译需要大量的蛋白因子，翻译后加工和定向输送比原核复杂得多。

(一 )、              翻译起始真核的翻译起始比原核尤为复杂，原因如下：（ 1 ）真核 mRNA 的二级结构更为多样和复杂（ 2 ）真核 mRNA 是经过多重加工的，它被转录后首先要

经过各种加工才能从细胞核进入细胞质中，并形成各种各样的二级结构。一些mRNA 与几种类型的蛋白质结合在一起形成一种复杂的颗粒状，有时称核糖核蛋白粒（ ribonucleoprotein particle ） , 在翻译之前，它的二级结构必须改变，其中的蛋白质必须被去掉。

（ 3 ）核糖体需要扫描mRNA 以寻找翻译起始位点真核 mRNA没有 SD 序列来帮助识别翻译起点，因此核糖

体要扫描每一个 mRNA 。核糖体结合到 mRNA 的 5’ 端的帽子结构并向 3’ 端移动一寻找起始位点。这种扫描过程很复杂，知之甚少，

真核的翻译起始用到的起始因子（ eIF ）至少有 9 种 ，多数的功能仍需进步研究。

翻译起始物的形成过程如下：图 18.9 （ 1 ） 40S 小亚基 -(eIF-3) 结合到 (eIF-2-GTP)-

Met-tRNAi复合物上形成 40S 前起始复合物（ 40S preinitiation complex ）

这里， eIF-2-GTP介导了起始 tRNA 与 40S 小亚基的结合，然后 eIF-2-GDP 通过 eIF-2B （鸟苷酸释放蛋白）再生。

此时，由于 eIF-3 和 40S 小亚基相结合， eIF-6和 60S 大亚基相结合，所以小亚基暂时还不能与大亚基相结合。

（ 2 ） mRNA 结合到 40S前起始复合物上形成 40S 起始复合物。

该过程需要 ATP ，另外还需要一些起始因子（ eIF-4A 、 eIF-4B 、 eIF-4F 、 eIF-1 ）。

eIF-4F 结合在 mRNA5’ 端的帽子结构上， eIF-4A（一种 ATPase ）和 eIF-4B （一种 helicase ）改变 mRNA 的二级结构。对真核起始因子的鉴定发现一些起始因子是更大因子的组成亚基，如eIF-4E （也称 cap 结合蛋白或 CBPⅠ）就是由几个 eIF-4F 亚基组成。（ eIF-4F 常称为 CBPⅡ）

（ 3 ） 40S 起始复合物扫描 mRNA寻找适当的起始密码子（通常是 5’ 端附近的 AUG ）。

（ 4 ） 40S复合物与 60S 大亚基结合形成 80S 起始复合物。

该过程另需 1 个 GTP 。此时， 60S 大亚基上的 eIF-6 已经被释放。在形成复合物过程中，在 eIF-5参与下， eIF-2-GTP 水解成 eIF-2-GDP 。 eIF-2 ， eIF-3 ， eIF-4A ， eIF-4B ， eIF-4F ， eIF-1 从起始复合物上释放。

 

因此，真核生物肽链合成起始复合物由 mRNA 、80S 核糖体和 Met-tRNAiMet组成。与原核相比，真核起始多消耗了 1 个 ATP （形成 40S 起始复合物）、 1 个 GTP （形成 80S 起始复合物）。

（ 1 ） 40S 小亚基 -(eIF-3) 结合到 (eIF-2-GTP)-Met-tRNAi复合物上形成 40S前起始复合物（ 40S preinitiation complex ）（ 2 ） mRNA 结合到 40S前起始复合物上形成 40S 起始复合物。（ 3 ） 40S 起始复合物扫描 mRNA 寻找适当的起始密码子（通常是 5’ 端附近的 AUG ）。（ 4 ） 40S复合物与 60S 大亚基结合形成 80S 起始复合物。

(二 )、              延伸图 18.10

与原核类似，也可分为 aa-tRNA 的入位、转肽、移位三步反应。

1、           入位50kD 的延伸因子 eEF-1α-GTP 与 aa-tRNA 结合，引导 aa-tRNA 进入 A 位点， aa-tRNA 的反密码子如果与 mRNA 的密码子正确配对后 eEF-1α-GTP 水解掉一个 P ，随后 eEF-1α-GDP 离开核糖体，留下 aa-tRNA 。在 eEF-1β 、 eEF-1γ的帮助下， eEF-1α-GDP 再生为 eEF-1α-GTP 。

在真菌（如酵母）中，需要另一个延伸因子 eEF-3 与 eEF-1α 共同引导 aa-tRNA 的入位。

2、           肽键形成（转肽）核糖体大亚基的肽酰转移酶活性催化 A 位

点 α- 氨基亲核攻击 P 位点的 aa 的羧基，在 A 位点形成一个新的肽键。 P 位点上卸载的 tRNA 从核糖体上离开

3、           移位移位需要一个 100kD 的延伸因子 eEF-2-GTP 。 eEF-2-

GTP 结合在核糖体未知的位置上， GTP 水解成释放的能量使核糖体沿 mRNA移动一个密码子的位置，然后 eEF-2-GDP 离开核糖体。

(三 )、              终止真核细胞中有两个释放因子 eRF-1 和 eRF-3 （ GTP 结

合蛋白）介导终止。当 GTP 结合到 eRF-3 后它的 GTPase活性就被激活， eRF-1 和 eRF-3-GTP 形成一个复合物，当 UAG ， UGA ， UAA 进入 A 位点时，该复合物就结合到 A 位点上，接着 GTP 水解促使释放因子离开核糖体， mRNA 被释放，核糖体解体成大小亚基，新生肽在肽酰转移酶催化下被释放。

真核生物蛋白质合成中的能量计算（合成一个二肽） ATPA （ GTP ）高能键甲硫氨酰 -tRNA 合成ATP-AMP2起始（ IF-2 ）2GTP-GDPATP-ADP3第二个 a.a-tRNA 合成ATP-AMP2第二个 a.a-tRNA 进入核糖体（ eEF-1α -GTP ）GTP-GDP1核糖体移位（ eEF-2-GTP ）GTP-GDP1终止（ eRF-3-GTP ）GTP-GDP1合成二肽（形成一个肽链）需10 个高能键，其后每加一个 a.a需4 个高能键。例：合成 200 个 a.a残基的多肽10+198×4=802（ 4n+2 ） =4×200+2=802

(四 )、              真核生物的翻译后加工许多新生肽要经过一种或几种共价键修饰，这

种修饰可以在正延伸着的肽链中进行。一般情况下，翻译后修饰一是为了功能上的需要，另一种情况是折叠成天然构象的需要。包括：

1、           切除加工典型的情况包括切除 N- 端甲硫氨酸、信号肽序列和切

除部分肽段将无活性的前体转变成活性形式。我们知道，一些酶的前体（称为前体酶 proenzyme ，或

酶原 zymegen ）只有切除特定的肽段后才能从无活性形式转变成活性形式。无活性的多肽前体称为前体蛋白（ proprotein ）图 18.11 是胰岛素的翻译后加工包含信号肽的胰岛素前体称为前胰岛素原（ pre-proinsu

lin ），去掉信号肽的胰岛素的前体称为胰岛素原 (proinsulin), 进一步切除称为 C链的肽段后才能形成活性形式的胰岛素（ insulin ）

   蛋白质内含子90 年代初，发现了两类新的内含子。一类是蛋白质内含子，其 DNA 序列与外显子一起转录和翻译，产生一条多肽链，然后从肽链中切除与内含子对应的 a.a 序列，再把与外显子对应的氨基酸序列连接起来，成为有功能的蛋白质。

另一类是翻译内含子， mRNA 中存在与内含子对应的核苷酸序列，在翻译过程中这一序列被“跳跃”过去，因此产生的多肽链不含有内含子对应的氨基酸序列。

2、           糖基化真核生物中糖基化修饰很普遍，但是糖基基团的功能还不是十

分清楚。通常情况下，分泌蛋白的寡糖链较复杂，而内质网膜蛋白含有较高的甘露糖。

图 18.12 是 N- 糖苷键型核心寡糖链的合成 , 它是在磷酸多萜醇上组装成的（多萜醇存在于所有细胞的细胞膜上，磷酸化多萜醇主要存在于内质网膜）。

3、           羟基化在结缔组织的胶原蛋白和弹性蛋白中 pro 和 lys 是经过羟基化的。此外，在乙酰胆碱酯酶（降解神经递质乙酰胆碱）和补体系统（参与免疫反应的一系列血清蛋白）都发现有 4- 羟辅氨酸。位于粗糙内质网（ RER ）上的三种氧化酶（脯氨酰 -4-羟化酶， prolyl-4-hydroxylase ，脯氨酰 -3-羟化酶和赖氨酰羟化酶，lysylhydroxylase ）负责特定脯氨酸和赖氨酸残基的羟化。脯氨酰 -4- 羟化酶只羟化 -Gly-x-pro- ，脯氨酰 -3-羟化酶羟化 Gly-pro-4-Hyp （ Hyp: hydroxyproline ），赖氨酸羟化酶只作用于 -Gly-X-lys- ，胶原蛋的脯氨酸残基和赖氨酸残基羟化需要 Vc ，饮食中 Vc 不足时就易患坏血症（血管脆弱，伤口难愈），原因就是胶原纤维的结构不力（ weak collagen fiber structure ）。

4、           磷酸化蛋白磷酸化参与代谢调控和信号转导以及蛋白与蛋白

之间的相互作用。例如， PDGF受体的酪氨酸残基经过自身磷酸化后才与细胞质定位蛋白质结合。

5、           亲脂修饰蛋白质亲脂修饰后可以改变膜结合能力和特定的蛋白

与蛋白之间的相互作用。最常见的亲脂修饰是酰化和异戊二烯化。尽管豆蔻酸在真核细胞中很罕见，但是豆蔻酰化却是最常见的酰化形式之一。 N-豆蔻酰化（豆蔻酸以酰酰氨键形式共价连在肽链 N 端的残基上）能增加特定 G 蛋白的 α 亚基对膜结合的 β 、γ 亚基的亲和力。

6、           甲基化通过甲基转移酶进行。天冬氨酸的甲基化能促进已破坏蛋白的修复或降解，在 2 ， 3- 二磷酸核酮糖羧化酶（ rihilose-2,3-biosphosphate carboxylase ）、钙调蛋白（ calmodulin ）、组氨酸（ histone ）、某些核糖体蛋白和细胞色素 C 中都有甲基化的赖氨酸残基。其它可甲基化的氨基酸残基还有 His （如组蛋白、视紫红质、 eEF-2 ）、 Arg （如休克蛋白、核糖体蛋白）。

7、           二硫键形成二硫键通常只发现于分泌蛋白（如胰岛素）和某些膜蛋白中，

在细胞质中由于有各种还原性物质（如谷胱甘肽 glutathione和硫氧还蛋白 thioredoxin ）所以细胞质蛋白没有二硫键。因为内质网腔是一个非还原性环境，所以粗糙内质网上的新生肽只暂时形成二硫键。当新生肽进入内质网腔时，一些肽链可能会按氨基酸次序依次暂时形成二硫键，但最终会通过交换二硫键位置的形式形成正确的结构，内质网中可能还有一种二硫键异构酶（ disulfide isomerase ）催化该过程。

(五 )、              真核生物的翻译调控真核的翻译调控非常复杂，总结起来有以下几个方面：1、           mRNA向细胞质的运输核膜创造的转录与翻译的隔离为基因的表达提供了一个重要的调控机会。 mRNA 的加工（内含子切除）、 mRNA向细胞质的运输都是调控位点， mRNA向细胞质的运输是一个受到严格控制的过程，并且它至少需要 mRNA5’ 端的帽子和 3’ 端的poly A尾巴。

2、           mRNA的稳定性mRNA 的半衰期从 20 分钟到 24 小时。在 mRNA 上有一些去稳

定序列（ destablization sequence ） , 它们的二级结构是核酸酶的底物，也有些稳定序列（ stablization sequence ）。特定蛋白与 mRNA 上特定序列的结合能影响它的稳定性， 3’ 端的腺苷化核去腺苷化会影响它的稳定性核翻译活性。在核中， mRNA 被加工后运输到细胞质时含有 100~200 个 polyA尾巴，当polyA缩减到 30 个以下时整个 mRNA 就会被降解。在特定条件下 polyA 能被选择型地延长或缩短。

3、           翻译的负调控一些阻遏蛋白能结合在特定 mRNA 的 5’ 端阻止翻译的

进行，如铁蛋白的合成。铁蛋白是储铁的蛋白，主要发现于肝细胞中。铁蛋白 mRNA 上有铁应答元件（ IRE ），阻遏蛋白可以结合在上边，当细胞中铁浓度高时，那么大量的铁原子就结合到阻遏蛋白上，使它从IRE 上解离，铁蛋白 mRNA 就可以被翻译。

4、           起始因子磷酸化。当遭遇热休克、病毒感染、生长因子缺乏等逆境时，真

核细胞 eIF-2 就发生磷酸化，大部分蛋白质的合成降低，而一些 hsp 核其它蛋白的翻译增强，以应付热休克和其他胁迫条件，但其机理还不清楚。

5、            translational frameshifting一些 mRNA似乎含有结构信息，在阅读框内可以从 +1或 -1 出开始阅读，结果翻译出两条或多条多肽。这种情况常见于被反转录病毒翻然的细胞内。

(6) 真核生物双功能 mRNA

极少数真核 mRNA 上，可能从两个不同 AUG 起始合成蛋白质。若两个 AUG属于同一阅读框，则形成两个长短不同的蛋白质，其中有部分多肽完全相同。若两个 AUG 处于不同的阅读框中，则合成两个序列完全不同的蛋白质。一条 mRNA 可合成两种蛋白质，称双功能 mRNA 。

(7) 只有最后一个终止密码子的多基因 mRNA 的翻译真核生物的泛素蛋白基因。酵母有 5 个泛素基因，重复组成基因簇。人类有 9 个。每个基因编码 76 个 a.a的泛素。泛素羧端水解酶可识别泛素的空间构象，当翻译进行到一个单位出来后，泛素的控间构象形成，这种酶可切下泛素单位。

8 、蛋白质的选择性降解

五、      蛋白质合成后的定向转运由于真核细胞的结构和功能很复杂，所以蛋白

质合成后的定向转运（ targeting, translocation ）的机制也很复杂，转运的研究是从分泌蛋白开始的。现在比较清楚的有两种机制：转录本的区隔化（ transcript localization ）和信号肽机制。

★转录本的区隔化细胞质中蛋白质的分布是不对称的，如果蝇卵中的 bic

oid （对果蝇发育中的基因表达起调控作用），果蝇头部的正常发育（如头节）需要卵头部（ anterior ）高浓度的 bicoid ，卵尾部低浓度的 bicoid促进果蝇尾部的发育。将第一个卵的尾部细胞质取出并替掉第二个卵的头部，那么由受体卵发育出的幼虫就有两个尾部。现在认为细胞质中蛋白质的梯度是由转录本的取隔化造成的。所谓转录本的区隔化就是特定mRNA 与细胞质中特定位点的受体结合。 bicoid mRNA 是从附近的 nurse 细胞进入正发育的卵母细胞中，一旦进入卵母细胞， bicoid mRNA 通过其 3’ 端与顶部细胞骨架的特定组分结合。当成熟的卵发育时， bicoid mRNA 的翻译（与 bicoid 蛋白的扩散偶连）就造成了 bicoid 蛋白的浓度梯度。

现在看来多肽的转运有两种机制：（ 1 ）翻译转运同步机制（共转译， cotranslational transfer ）。分泌蛋白、质膜蛋白、溶酶体蛋白、内质网和高尔基体滞留蛋白，首先在游离核糖体上合成含信号肽的部分肽段后就结合到内质网上，然后边合成边进入内质网腔，经初步加工和修饰后，部分多肽以芽泡形式被运往高尔基体，再经进一步的加工和修饰后被运往质膜、溶酶体或被分泌到胞外。（ 2 ）翻译后转运机制（ posttranslational translocation ）。叶绿体蛋白和线粒体蛋白是在细胞质游离核糖体上被完全合成后通过新生肽的信号序列（引导肽 Leader peptide ）直接运往目的地并被加工。

(一 )、  信号肽 : 翻译转运同步机制信号肽是 Gunter Blobel1975 年提出的，用以解释多肽向内质网的跨膜转运。

含信号肽的多肽进入内质网的过程：当包含信号肽的多肽被合成一部分时，信号肽识别体（ SRP ）就识别信号肽并结合到核糖体上，翻 译 暂 时停止 ， SRP 与 内 质网膜上的受体（停泊蛋白， docking protein ）结合，核糖体与内质网结合， SRP 离开，延伸的肽链通过内质网上的肽移位装置（ translocon ）进入内质网，信号肽被切除。

新生肽的命运就取决于信号肽和其他的信号序列。

对于分泌蛋白来说，跨膜转运后要切除 N 端信号肽，多肽进入内质网腔，此后还要在高尔基体进行下一步的修饰加工。跨膜蛋白转运的起始阶段与分泌蛋白类似， N

端的信号肽作为起始信号结合在膜上，多肽链的其余部分线形穿过膜。单跨膜蛋白（ single pass membrane protein ）有一个终止转运信号（ stop transfer signal ） , 它阻止后续肽段的继续穿膜（图 18.14B ），多跨膜蛋白有一系列交替出现的起始和终止信号（图 18.14C ）。

被转运到内质网中的多肽多数还要运往它处。经过初步的翻译后修饰，可溶性蛋白和膜结合蛋白被运输到高尔基体，这种运输是经过运输泡进行的（图 18.15 ），

滞留内质网中的蛋白有滞留信号，在许多脊椎动物中它是 C 端的四肽： Lys-Asp-Glu-Leu （简称 KDEL ）。

在高尔基体中，多肽进一步被修饰，如 N- 糖苷键型寡糖链进一步被处理，特定 Ser 和 Thr残基进行 O- 糖苷键型糖基化修饰。溶酶体蛋白添加一个 6-磷酸甘露糖残基后被运往溶酶体。现在还不清楚下一步有什么信号指导分泌蛋白运往细胞表面（经过胞外分泌， exocytosis ），什么信号指导质膜蛋白的运输，有人提出一种默认机制（缺省机制， default mechanism ）：在缺失指导信号的情况下的一个特定的顺序事件。

信号肽： P412

信号识别体： P412

(二 )、 翻译后转运机制（ posttranslational translocation）线粒体和叶绿体蛋白是在细胞质游离核糖体上

完全合成后运输来的，同样，这种运输也需要信号序列。图 18.16 是细胞色素 C1向线粒体的运输。细胞色素 C1 合成要被转运到线粒体的内膜空间

（它是 ETC 复合物Ⅲ的一个组分），细胞色素 C1 的转运需要两个序列（ N 端），第一个指导它运往线粒体基后质被切除，第二个指导它运往内膜空间后被切除，细胞色素 C1肽链折叠并结合一个血红素辅基后与内膜上的复合物Ⅲ结合。

Uptake of proteins into the mitochondrial matrix

★问题：质体蓝素（ plastocyanin ）是一种在叶绿体光合作用中作为电子传递体的含铜蛋白，定位于类囊体腔，和类囊体膜的内表面相连，它的转运需要 N 端的两段转运信号，假设其转运与线粒体相似，那么它是如何被转运的呢？

转膜机制

六、      蛋白质的折叠蛋白质的一级结构和它的三维构象以及生物功能的直接

关系一直是现代生物化学研究的重点。这方面的一个重要的经典的范例是 Christuian Anfinsen 在 1950 年后期做的一系列实验（ 1972 年获得诺贝尔化学奖）。图 18.17变性的牛胰 RNase 在适当的条件下能重新折叠成天然的

生物活性的状态。这暗示如果多肽的 aa 的物理、化学性质以及驱动折叠过程的力（如键的旋转、自由能氨基酸在多水环境中的特性）都已知的情况下应该可以预测一个蛋白的三维结构，然而尽管用尽各种先进的技术，进展仍然缓慢。总的说来，蛋白质的折叠是一个楼梯式的（ stepwise ）过程，在这个过程中，二级结构的形成是早期的特征，疏水作用似乎是很重要的驱动力。因为表面氨基酸残基的替代很少影响蛋白质的结构和构象，相反，疏水核中氨基酸残基的替代常常导致严重的结构变化。

传统的蛋白质折叠模式（仅仅靠氨基酸残基侧链之间的相互作用驱使蛋白质折叠成最终的形式）有很大的不可解释性：

（ 1 ）时间性。蛋白质的合成通常只需要几秒到几分钟，如果一个新

生肽要尝试完各种可能的构象直到最稳定的构象，那么计算一下每个键旋转到最终的生物活性形式所用的时间至少要用年来衡量，甚至是一个天文数字。

（ 2 ）复杂性如果基于物理数据（如键角、旋转的角度）来折叠，那么要计算折叠的数学模型显然太复杂了，在这么短的时间内完成这么快、这么精巧的一个过程似乎不可能。

近年来，已经确定，生活细胞中蛋白质的折叠和转运是在分子伴侣的帮助下进行的。其中大部分是 hsp 。它存在于所有的 生物中，从细菌到高等动植物已发现了几种类型的分子伴侣。此外，它们还存在于原核性质的细胞器中，如线粒体、叶绿体和内质网。到目前为止发现所有的分子伴侣在序列同源性上都很高。图 18.18分子伴侣在蛋白折叠方面的作用表现在两方面：（ 1 ）从多肽开始合成到折叠的这段时间里，分子伴侣可以保护多肽链不受其他蛋白的攻击，一些线粒体和叶绿体蛋白在插入细胞器膜之前必须保持未折叠状态。

（ 2 ）帮助蛋白质正确快速地折叠或组装成多亚基蛋白。

★在蛋白质折叠中有两类分子伴侣：（ 1 ） Hsp70s 。Hsp70s 是在折叠的早期阶段起作用的分子伴侣家族。大量

的 Hsp70s 。大量的 Hsp70s 单体结合在未折叠的疏水的正延伸肽段上。每一个 Hsp70s 有两个结合位点：未折叠多肽结合位点和 ATP 结合位点。多肽从 Hsp70s 上释放需要能量。内质网的 Hsp70s还是多肽跨膜转运所必须的。

（ 2 ） Hsp60s 。一旦未折叠的多肽从 Hsp70s 上被释放，它就结合到一些

Hsp60s 上（也称 chaparonins,cpn60s ）。 Hsp60s 形成一个巨大的桶状结构，它有两个盖，位折叠蛋白进入桶中，Hsp60s帮助它形成正确的结构。

分子伴侣还能帮助因各种胁迫而部分去折叠蛋白的重新折叠，如果不能重新折叠的话，分子伴侣就促进它的降解。

★本章要点 mRNA 上密码子与 tRNA 上反密码子的碱基配对是遗

传信息翻译的基本机制。翻译包括三个阶段：起始、延伸、终止。每个阶段都

有相应的翻译因子的参与。蛋白质合成后还要一系列的翻译后修饰、折叠和定向

转运。翻译后修饰包括切除、共价修饰、插入辅因子。真核与原核的翻译后调控不同，原核有 SD 序列调控和

翻译的自身负调控，真核较复。蛋白质的折叠可以发生在肽链合成中或合成后，它是

在分子伴侣的作用下进行。 

★本章问题1.        不同生物间 rRNA 和核糖体蛋白的三维结构极其

相似，为什么？2.        遗传密码的特性3.        怎样理解氨酰 tRNA 合成酶的作用是第二遗传密

码？4.        叙述发生在氨酰 tRNA 合成酶上的两个反映5.        氨酰 tRNA 合成酶有时也会出错，它是如何检测

和校正的？6.        叙述蛋白质合成三个阶段的主要事件7.        翻译因子在原核和真核的翻译过程中个起什么

功能？8.        写出下列多肽的密码子，有几种可能？

9.        判断下列过程发生在蛋白质合成的哪个阶段 /A 核糖体亚基与 mRNA 结合B 多肽被正确合成C 核糖体沿着 mRNA移动D 核糖体解离成亚基10.    估计一下合成 200 个 AA需要多少个 ATP 和 GTP ？11.    翻译因子中 GTP 的作用12.    原核和真核翻译的主要区别13.    举例说明翻译后修饰的意义14.    SD 序列和 30S 亚基的配对为原核提供了识别起始

密码子和 Met 密码子的机制，那么真核如何办呢？15.    每一个延伸循环的三步反应16.    原核与真核翻译调控的主要区别17.    描述 SRP 的结构和功能

18.    描述 translocon 在共翻译转运中的作用19.    mRNA 的结构如何影响翻译的调控20.    假设一个典型的分泌蛋白要被分泌到胞外，描述一下细胞内的加工过程。

21.    要用一个多肽的一级结构来预测它的高级结构，主要的困难和问题在那里？

22.    叙述分子伴侣在蛋白质折叠中的作用。23.    多核糖体：一条 mRNA 上同时有多个核糖体与之结合，它们以不同进度进行多肽连的合成。

24 遗传密码如何编码？有那些特点？mRNA 上每三个相邻的核苷酸编成一个密码子，代表肽链合成种的某种氨基酸或合成的起始和终止信号， 4 种核苷酸共组成 64 种密码子。

特点：①方向性；编码方向： mRNA 的 5’ 到 3’②连续性：密码子之间连续排列，即无间隔也无重叠。③兼并性：除了 Met 、 Trp 只有一个密码子之外，其余每种氨基酸都有 2~6 个密码子④摆动性：在密码子与反密码子相互识别的过程种，密码子的第一个核苷酸起决定性的作用，第二个尤其是第三个核苷酸能在一定的范围内进行变动。⑤通用性：不同生物功用一套密码。

25 保证准确翻译的关键是什么？ ①氨基酸与 tRNA 的特异性结合依靠氨酰 tRNA 合成酶

的特异识别作用。②密码子与反密码子特异结合，依靠互补碱基配对结合实现，也有赖于核糖体的构象正常而实现正常的装配功能。