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ハーボニー®配合錠

第 2 部（モジュール 2）：CTD の概要（サマリー）

2.6.6 毒性試験の概要文

ギリアド・サイエンシズ株式会社

2.6.6 毒性試験の概要文ハーボニー®配合錠

目次

1. まとめ ............................................................................................................................................. 8

1.1. レジパスビル ................................................................................................................................. 8

1.2. レジパスビル／ソホスブビル ................................................................................................... 11

2. 単回投与毒性試験 ....................................................................................................................... 13

2.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 13

2.2. レジパスビル／ソホスブビル ................................................................................................... 13

3. 反復投与毒性試験 ....................................................................................................................... 14

3.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 14

3.1.1. マウス ..................................................................................................................................... 14

3.1.2. ラット ..................................................................................................................................... 15

3.1.3. イヌ ......................................................................................................................................... 17

3.2. レジパスビル／ソホスブビル ................................................................................................... 18

4. 遺伝毒性 ....................................................................................................................................... 20

4.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 20

4.1.1. In vitro ..................................................................................................................................... 20

4.1.2. In vivo ...................................................................................................................................... 20

4.2. レジパスビル／ソホスブビル ................................................................................................... 21

5. がん原性試験 ............................................................................................................................... 22

5.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 22

5.2. レジパスビル／ソホスブビル ................................................................................................... 23

6. 生殖発生毒性試験 ....................................................................................................................... 24

6.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 24

6.1.1. 受胎能及び初期胚発生試験に関する試験 .......................................................................... 24

6.1.2. 胚・胎児発生に関する試験 ................................................................................................. 25

6.1.3. 出生前及び出生後の発生並びに母体機能に関する試験 .................................................. 28

6.2. レジパスビル／ソホスブビル ................................................................................................... 29

2


7. 局所刺激性試験 ........................................................................................................................... 31

7.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 31

7.1.1. 眼刺激性試験 ......................................................................................................................... 31

7.1.2. 皮膚刺激性試験 ..................................................................................................................... 31

8. その他の毒性試験 ....................................................................................................................... 32

8.1. レジパスビル ............................................................................................................................... 32

8.1.1. 抗原性 ..................................................................................................................................... 32

8.1.2. 免疫毒性試験 ......................................................................................................................... 32

8.1.3. 代謝物に関する試験 ............................................................................................................. 32

8.1.4. 不純物に関する試験 ............................................................................................................. 32

8.1.5. その他の毒性試験 ................................................................................................................. 33

9. 考察及び結論 ............................................................................................................................... 35

9.1. 単回投与毒性 ............................................................................................................................... 35

9.2. 反復投与毒性 ............................................................................................................................... 35

9.2.1. レジパスビル ......................................................................................................................... 35

9.2.2. レジパスビル／ソホスブビル ............................................................................................. 35

9.3. 遺伝毒性 ....................................................................................................................................... 36

9.4. がん原性 ....................................................................................................................................... 36

9.5. 生殖発生毒性 ............................................................................................................................... 36

9.5.1. レジパスビル ......................................................................................................................... 36

9.5.2. レジパスビル／ソホスブビル ............................................................................................. 37

9.6. 局所刺激性 ................................................................................................................................... 37

9.7. 代謝物・不純物 ........................................................................................................................... 37

9.8. 光毒性 ........................................................................................................................................... 37

9.9. 結論 ............................................................................................................................................... 38

10. 図表 ............................................................................................................................................... 42

11. 参考文献 ....................................................................................................................................... 43

3


表目次

表 2.6.6- 1 レジパスビルの毒性試験プログラム .................................................................................... 9

表 2.6.6- 2 レジパスビル生殖能試験における母動物あたりの平均黄体数、着床数及び生存

胚数 .................................................................................................................................... 25

表 2.6.6- 3 レジパスビルの各種非臨床試験での NOAELにおける曝露量と HCV感染患者に

本剤（レジパスビル 90 mg 及びソホスブビル 400 mg 含有）を投与したとき

の曝露量に基づくレジパスビルの曝露量比 ................................................................ 40

表 2.6.6- 4 ソホスブビル又は GS-9851 の各種非臨床試験での NOAEL における曝露量と

HCV 感染患者に本剤（レジパスビル 90 mg 及びソホスブビル 400 mg 含有）

を投与したときの曝露量に基づくソホスブビル及び GS-331007 の曝露量比 ........ 41

4


レジパスビル並びにソホスブビル、そのジアステレオマー及び代謝物の説明

開発番号（旧開発番号）

一般名略称

構造式説明

GS-5885 レジパスビル

LDV NN

NO

O

O

N

N

NN

OFF

HH

H

H

N

H O

O

有効成分 methyl [(2S)-1-{(6S)-6-[5-(9,9-difluoro-7-{2-[(1R,3S,4S)-2-{(2S)-2-[(methoxycarbonyl)amino]-3-methylbutanoyl}-2-azabicyclo[2.2.1]hept-3-yl]-1H-benzimidazol-6-yl}-9H-fluoren-2-yl)-1H-imidazol-2-yl]-5-azaspiro[2.4]hept-5-yl}-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]carbamate

GS-7977 （PSI-7977）ソホスブビル

SOF O N

NH

O

O

OPO

HNO

O

O

FHO

有効成分ヌクレオチドプロドラッグ

GS-491241 （PSI-7976）

O N

NH

O

O

OPO

HNO

O

O

FHO

ヌクレオチドプロドラッグジアステレオマー

GS-9851 （PSI-7851）

O N

NH

O

O

OPO

HNO

O

O

FHO

ヌクレオチドプロドラッグ：ソホ

スブビル及びそのジアステレオマ

ー（GS-491241）の混合物（1：1）

GS-331007 （PSI-6206）

O N

NH

O

O

HO

FHO

代謝物ヌクレオシド誘導体

GS-606965 （PSI-7411）

O N

NH

O

O

OPO

-O

O-

FHO

代謝物ヌクレオシド誘導体一リン酸

GS-461203 （PSI-7409）

O N

NH

O

O

OPO

OO

-

FHO

PO

O-

OPO

-O

O-

活性代謝物ヌクレオシド誘導体三リン酸

5


略号一覧

略号日本語英語

8-MOP 8-メトキシプソラレン 8-methoxypsoralen

ALP アルカリフォスファターゼ alkaline phosphatase

AUC 濃度－時間曲線下面積 the area under the concentration versus time curve

AUClast 時間 0 から血漿中濃度定量可能最

終時点までの濃度－時間曲線下面

積

the area under the concentration versus time curve from time zero to the last quantifiable concentration

AUC0−xx 時間 0から xx時間までの濃度－時

間曲線下面積 partial area under the concentration versus time curve from time “0” to time “xx”

AUCtau 1 投与間隔当たりの濃度－時間曲

線下面積 area under the concentration versus time curve over the dosing interval

BCOP ウシ角膜混濁度及び透過性 bovine corneal opacity permeability

Cmax 最高血漿中濃度 the maximum plasma concentration of drug

CYP シトクロム P450 cytochrome P450

EC 欧州共同体 European Community

ECG 心電図 electrocardiogram

DMF ジメチルホルムアミド dimethylformamide

DMSO ジメチルスルホキシド dimethylsulfoxide

FDA 食品医薬品局 Food and Drug Administration

GD 妊娠 gestation day

GLP 医薬品の安全性に関する非臨床試

験の実施の基準 Good Laboratory Practice

HCV C 型肝炎ウイルス hepatitis C virus

HPMC ヒドロキシプロピルメチルセルロ

ース hydroxypropylmethylcellulose

ICH 日米 EU 医薬品規制調和国際会議 International Conference on Harmonisation

Kolliphor® HS-15 ポリエチレングリコール(15)-ヒド

ロキシステアリン酸 Polyethylene glycol 15-hydroxystearate

LLNA 局所リンパ節試験 local lymph node assay

MPCE 小核を有する多染性赤血球 micronucleated polychromatic erythrocyte

NCE 正染性赤血球 normochromatic erythrocyte

NOAEL 無毒性量 no observed adverse effect level

NS 非構造タンパク質 nonstructural protein

OECD 経済協力開発機構 Organisation for Economic Cooperation and Development

PCE 多染性赤血球 polychromatic erythrocyte

PG プロピレングリコール propylene glycol

6


略号一覧（続き）

PEG ポリエチレングリコール polyethylene glycol

RO 逆浸透 reverse osmosis

SD - Sprague-Dawley SI 刺激指数 Stimulation Index

Solutol® HS-15 ポリエチレングリコール(15)-ヒド

ロキシステアリン酸 polyethylene glycol 15-hydroxystearate

TK トキシコキネティクス toxicokinetics

US 米国 United States

UV 紫外 ultraviolet

7


1. まとめ

本剤は、1 錠中にレジパスビル（GS-5885）90 mg 及びソホスブビル（GS-7977）400 mg を有効

成分として含有する配合錠であり、C 型肝炎ウイルス（HCV）感染症の治療薬として開発された。

本剤の毒性学的プロファイルは、レジパスビル又はソホスブビルを用いた包括的毒性試験プロ

グラムにより評価した。本剤を用いた毒性試験並びにレジパスビル及びソホスブビル併用による

毒性試験は実施していない。

ソホスブビルは、ソバルディ®錠 400 mg として平成 26 年 6 月 27 日に承認申請した。

ソホスブビルの毒性試験に関する資料は、ソバルディ®錠 400 mg 申請時に提出済みであり、結

果は既提出のソホスブビルの CTD 2.4 及び CTD 2.6.6 に要約した。本 CTD では、レジパスビルの

一連の毒性試験について記載し、レジパスビル／ソホスブビル併用時の毒性について考察した。

併用時の毒性の考察のために、レジパスビルに加え、ソホスブビルの毒性試験の無毒性量（NOAEL）

におけるソホスブビル及び主要代謝物 GS-331007 の曝露量と、HCV 感染患者に本剤を投与したと

きのソホスブビル及び GS-331007 の臨床曝露量との曝露量比を算出した。

試験デザイン及び評価したパラメーターは、日米 EU 医薬品規制調和国際会議（ICH）、経済協

力開発機構（OECD）、当局の規制［米国食品医薬品局（US FDA）及び欧州共同体（EC）指令］

に示された原則及び実施手順に準拠した。特記しないかぎり、確定試験（反復投与毒性、遺伝毒

性、がん原性、生殖発生毒性）はUS FDAの医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準（GLP）

に準じて実施した。重要でない試験は、GLP を遵守した試験施設で実施するか、又は適切な試験

計画書及び文書に従って、GLP の精神に則り実施し、データの完全性を確保した。

1.1. レジパスビル

レジパスビルは HCV の複製［1］及び HCV 粒子の会合［2、3］に必須である非構造タンパク

質（NS）5A を標的とする新規の HCV 阻害剤である。NS5A は多数の宿主タンパク質と相互作用

し［4］、宿主の自然免疫応答を回避することで感染を促進すると考えられる［5］。レジパスビル

は、複数の細胞でのレプリコンアッセイにおいて優れた作用と選択性を示し、HCV に特異性を示

す。

レジパスビルの反復投与毒性、遺伝毒性、がん原性、生殖発生毒性、局所刺激性及び抗原性に

ついて、種々の in vitro 及び in vivo 試験により、その特徴を明らかにした（表 2.6.6- 1）。

8


表 2.6.6- 1 レジパスビルの毒性試験プログラム

試験の種類及び期間投与経路動物種 GLP 適否

被験物質

反復投与毒性

2 週間経口ラットイヌ

適レジパスビル

4 週間経口マウス適レジパスビルアセトン和

物

26 週間（13 週間中間評価含む）経口ラット適レジパスビル

39 週間（13 週間中間評価含む）経口イヌ適レジパスビル

遺伝毒性

細菌を用いた復帰変異原性試験 In vitro 細菌適レジパスビル

In vitro 染色体異常試験 In vitro ヒトリンパ球適レジパスビル

In vivo 小核試験経口ラット適レジパスビル

がん原性試験経口マウスラット a)

適適

レジパスビルアセトン和

物

生殖発生毒性試験

受胎能及び初期胚発生試験経口ラット適レジパスビルアセトン和

物

胚・胎児発生試験（用量設定試験）経口ラットウサギ

適適

レジパスビル

胚・胎児発生試験経口ラットウサギ

適適

レジパスビル

出生前及び出生後の発生並びに母体機能に関する試験

経口ラット適レジパスビルアセトン和

物

局所刺激性試験

眼刺激性試験 In vitro ウシ適レジパスビルアセトン和

物

皮膚刺激性試験経皮ウサギ適レジパスビルアセトン和

物

その他の毒性試験

皮膚感作性試験経皮マウス適レジパスビルアセトン和

物

不純物に関する試験 2 週間

経口

ラット

適

レジパスビルアセトン和

物

光毒性試験経口マウスレジパスビル

比較毒性試験経口

ラット適レジパスビル、レジパスビル

a：実施中

9


全ての in vivo 試験の投与経路は臨床投与経路である経口投与とした。ただし、皮膚感作性及び

皮膚刺激性試験は例外である。

試験には、レジパスビルのフリー体、 GS-5885- ）及びアセトン和物（GS-5885- ）

を使用した。フリー体は、重要な反復投与毒性試験並びに初期非臨床及び臨床試験で使用した。

アセトン和物は医薬品有効成分であり、これは製剤の製造工程で次にフリー体であるレジ

パスビル噴霧乾燥分散品へと変換される。及びアセトン和物を使用した各毒性試験に

用いた投与量は、眼刺激性試験及び皮膚刺激性試験を除き、レジパスビル（フリー体）に換算し

て示した。

レジパスビルの水溶液に対する溶解性は低い（pH 7.0 で＜1 μg/mL）。また、絶食状態（pH 6.5）

及び摂食状態（pH 5.0）を反映した人工腸液に対しても、同様に溶解性は低い（それぞれ 25 μg/mL

及び 230 μg/mL）。マウス、ラット、ウサギ及びイヌにおいて高用量で被験液を経口投与したとき、

曝露量増加は投与量比を下回った。この見かけ上の吸収飽和により、これらの動物種の毒性試験

での曝露量が制限された。毒性試験でレジパスビルの経口曝露量を最大限にするために、初期の

開発プログラムにおいて数種類の溶媒が検討された（2.6.4.3.1.2.1.2 項）。そのうち 2 つの溶媒は、

可溶化のために最適化した有機溶剤であった。ラット及びイヌ毒性試験では、最適化溶媒は 40%

逆浸透（RO）水（pH 2.5）で調製した 45%プロピレングリコール（PG）及び 15%Solutol® HS-15

から成る 60%有機溶媒ベースの溶液とした（v/v/v）。マウスでは、0.2%ポリソルベート 20（v/v）、

0.2%ヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC）（w/v）及び 0.9%ベンジルアルコール（v/v）

含有 RO 水の水性懸濁液を用いて、より高い曝露量を達成した。ウサギ生殖発生毒性試験では、

最適化溶媒として 75%ポリエチレングリコール（PEG）及び 25%Solutol® HS-15 の 100%有機溶媒

ベースの溶液を使用した。In vitro 試験には溶媒にジメチルスルホキシド（DMSO）を使用した。

全ての試験で、溶媒を対照として使用した。

反復投与毒性試験、生殖発生毒性試験、in vivo 遺伝毒性試験及びがん原性試験でトキシコキネ

ティクス（TK）試験を実施した。曝露量比は、主な毒性試験でのレジパスビル未変化体の曝露量

（AUC）の、HCV 感染患者に 1 日 1 回本剤（レジパスビル 90 mg 及びソホスブビル 400 mg 含有）

を投与したときのレジパスビル臨床曝露量（AUCtau：8.53 µg∙h/mL、2.7.2.3.4.8 項）に対する比に

基づき算出した（表 2.6.6- 3）。

反復投与毒性試験では、レジパスビルはラットで 26 週間まで、イヌで 39 週間まで忍容性は良

好であった。毒性試験で使用された最高用量でも、標的臓器は認められなかった。いずれの試験

でも体重や摂餌量の軽度低下が主に投与開始後数週間に観察されたが、投与継続中に回復した。

長期反復投与試験における NOAEL はラットで 100 mg/kg/日、イヌで 30 mg/kg/日であった。この

ときのレジパスビル曝露量はラット及びイヌでいずれも臨床曝露量の約 7 倍であった。

レジパスビルは、細菌を用いる復帰突然変異試験で陰性、ヒト末梢血リンパ球を用いる染色体

異常試験で陰性、in vivo ラット小核試験で陰性であった。レジパスビルに遺伝毒性はないと考え

られる。トランスジェニックマウスを用いたがん原性試験では最高用量の 300 mg/kg/日までレジ

パスビルにがん原性は認められなかった。300 mg/kg/日投与時のレジパスビル曝露量は臨床曝露量

の 26 倍超であった。ラットを用いたがん原性試験は進行中である。

ラット受胎能及び初期胚発生試験では、レジパスビル 100 mg/kg/日群の雌で黄体数及び着床数

10


が軽度低値であった。雌雄の生殖能パラメーターに影響はなかった。ラット及びウサギ胚・胎児

試験では、母動物毒性が認められた用量で胚・胎児の生存に影響はなく、催奇形性も認められな

かった。ラット受胎能及び初期胚発生試験における雄及び雌の発生に関する NOAEL はそれぞれ

100 及び 30 mg/kg/日であり、このときのレジパスビル曝露量のヒトに対する曝露量比はそれぞれ

約 7 倍及び 3 倍であった。ラット及びウサギ胚・胎児発生試験の胚・胎児発生に関する NOAEL

は 100 及び 180 mg/kg/日であり、このときのレジパスビル曝露量は臨床曝露量のそれぞれ約 5 及

び 2 倍であった。ラット出生前及び出生後の発生試験では、母動物毒性が認められた 100 mg/kg/

日で、被験物質への胎盤通過及び授乳を介した曝露により、ラット F1出生児に体重減少及び体重

増加抑制が認められた。しかし、本用量で F1 の生存率、身体的発育及び行動、生殖能並びに F2

出生児の生存率に影響はなく、NOAEL は最高用量の 100 mg/kg/日であった。このときの母動物で

のレジパスビル曝露量は臨床曝露量の 4 倍であった。

レジパスビルは、皮膚感作性は陰性であり、皮膚・眼への刺激性もないと考えられた。レジパ

スビル原薬及び製剤中の不純物及び分解生成物が同定され、ラット反復投与毒性試験において毒

性が評価された。ラット比較毒性試験で、レジパスビル（フリー体）と初期開発試験で使用した

を比較したところ、二つの化合物間の毒性に差はなかった。投与 1 及び 14 日のいずれ

についても 100 mg/kg/日投与時の曝露量（雌雄合算 AUC0-24）は、レジパスビルと比

べてレジパスビル（フリー体）が 2～3 倍高値であった。レジパスビルは、ヘアレスマウスへの単

回経口投与で、光毒性を示さなかった。

1.2. レジパスビル／ソホスブビル

レジパスビル及びソホスブビルを併用した毒性試験は実施していない。ラット及びイヌ反復投

与試験では、レジパスビル及びソホスブビルの標的臓器パターンは異なり、重複する毒性を示さ

なかった。ソホスブビルの標的臓器は短期投与試験で致死量又は不耐用量投与時にのみ認められ

た消化管及び肝胆道系（イヌ）及び心血管系（ラット）であった。ソホスブビルのラット及びイ

ヌ長期反復投与毒性試験では、いずれも最高用量の 500 mg/kg/日まで肝臓及び心臓に毒性は認め

られなかった。このときの主要代謝物 GS-331007 の AUC0-24は、ラット及びイヌでそれぞれ 66 及

び 195 µg∙h/mL であり、臨床曝露量（AUCtau：12.5 µg∙h/mL、2.7.2.3.4.8 項）と比較して 5 倍以上の

曝露量比であった。レジパスビルも、ラット及びイヌ長期反復投与毒性試験で、いずれも最高用

量（ラットで 100 mg/kg/日、イヌで 30 mg/kg/日）まで、いずれの臓器にも有害な毒性を認めなか

った。このときのレジパスビル曝露量は臨床曝露量のいずれも約 7 倍であった。ソホスブビルの

短期反復試験で認められた毒性のいずれも、臨床では認められなかった。したがって、臨床的に

重要な薬物動態学的相互作用はないこと（2.5.3.6 項）及び標的臓器が異なることからレジパスビ

ル及びソホスブビルの併用は、既知の毒性を悪化させたり、新たな毒性を引き起こすことはない

と予想される。

レジパスビルの遺伝毒性試験は陰性で、マウスがん原性試験ではがん原性を示さなかった。ソ

ホスブビルの遺伝毒性試験は陰性で、ラット及びマウスがん原性試験ではがん原性を示さなかっ

た。ソホスブビルはラットの雌雄受胎能試験、胚・胎児発生毒性試験及び出生前及び出生後発生

試験で有害作用を示さなかった。レジパスビルは雌雄受胎能パラメーターに有害作用を示さなか

11


ったが、雌ラットの黄体数及び着床数を有意に低下させた。ラット受胎能試験での生殖能に関す

る NOAEL におけるレジパスビル曝露量のヒトに対する曝露量比は、それぞれ雄で約 7 倍及び雌

で約 3 倍であった。レジパスビルは胚・胎児発生試験で有害作用を示さなかった。出生前及び出

生後投与試験では、レジパスビルは母動物毒性の認められない用量で F1児の生存率、発達及び生

殖能に影響しなかった。レジパスビル及びソホスブビルの併用により個々の薬剤の遺伝毒性及び

生殖発生毒性のプロファイルが変わることはないと考えられる。

レジパスビル及びソホスブビルは皮膚に対し非刺激性であり、眼に対し強度の刺激性を示さず、

皮膚感作性は陰性であった。レジパスビルに光毒性は認められなかった。ソホスブビルは光毒性

の懸念がないことから光毒性試験は実施していない。

“「医薬品の臨床試験及び製造販売承認申請のための非臨床安全性試験の実施についてのガイ

ダンス」について”（平成 22 年 2 月 19 日薬食審査発 0219 第 4 号）（ICH ガイダンス M3(R2)）に

基づくと、本剤を用いた非臨床試験の実施は必要とされていない。レジパスビル及びソホスブビ

ルの毒性プロファイルはよく特徴づけられており、本剤を用いた第 2 相及び第 3 相試験の臨床成

績から、予定される HCV 感染症の治療におけるレジパスビル／ソホスブビルの併用に関して好ま

しいベネフィット・リスクプロファイルが裏付られた。レジパスビル及びソホスブビルによる全

ての非臨床試験で得られた情報は、両薬剤による多数の臨床使用経験に照らして検討される。

12


2. 単回投与毒性試験


レジパスビルを用いた正式な単回投与毒性試験は実施していない。しかし、ラットで実施され

た単回投与薬物動態試験（2.6.4.3.1.2.1.2.2 項）では、いくつかの安全性情報が得られている。当

該試験において、臨床曝露量と比較して約 4 倍の AUC 曝露量が得られた 600 mg/kg までのレジパ

スビル単回投与で、死亡は認められず、血液学的検査及び血液生化学検査に注目すべき変化はな

かった。また、ラット小核試験では雌雄ラットへの 450 mg/kg までのレジパスビル単回経口投与

で死亡は認められず、225 mg/kg 以上の用量で一般状態観察において透明な口腔内分泌物及び粗毛

が認められたのみであった（4.1.2.1 項）。


レジパスビル／ソホスブビル併用による単回投与毒性試験は実施していないが、レジパスビル

／ソホスブビルの併用投与は、単味での急性毒性を増悪させないと考えられる。

13


3. 反復投与毒性試験


3.1.1. マウス

3.1.1.1 マウス 4 週間経口投与用量設定試験

（試験番号 TX-256-2018、添付資料番号 4.2.3.2.1、評価資料）

CByB6F1-Tg（HRAS）2Jic トランスジェニック（rasH2）マウスの野生型（001178-W）同腹児（雌

雄各 10 匹／群）にレジパスビルを 1 日 1 回 29 日間強制経口投与し、毒性を検討した。本試験は

6 ヵ月間がん原性試験の用量設定試験として実施した。本試験の投与量は、マウス薬物動態試験

（2.6.4.3.1.2.1.2.1 項）で、レジパスビルを毒性試験最適化溶媒［0.2%HPMC E4M（w/v）、0.2%ポ

リソルベート 20（v/v）及び 0.9%ベンジルアルコール（v/v）含有 RO 水］を用いて投与したとき、

300 mg/kg/日を超える用量では曝露量の増加はほとんどみられなかったことから、0（溶媒）、20、

60 及び 300 mg/kg/日のレジパスビルを選択した。投与容量は 10 mL/kg とした。TK 評価のために

サテライト群のマウス（対照群雌雄各 6 匹及び投薬群雌雄各 39 匹／群）に同様に投与して、投与

1 及び 28 日に血漿中薬物濃度を測定した。死亡及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定、臨床検

査（血液学的検査及び血液生化学的検査）、臓器重量、剖検及び病理組織学的検査を実施した。

毒性評価群の動物に死亡は認められなかった。60 mg/kg/日群の TK 群の雌 1 匹が投与 15 日に死

亡したが、当該動物の一般症状及び剖検所見に異常は認められず、死亡は投薬に関連しない偶発

所見と判断した。一般症状、体重、摂餌量、臨床検査、臓器重量、剖検及び病理組織学的検査に、

投薬に関連した有害作用は認められなかった。全体を通して 300 mg/kg/日群の雄で対照群と比較

して 77%の体重増加量の高値が認められ、統計学的に有意であった。本所見は投与期間中の摂餌

量増加に関連した。雌の体重及び体重増加に対照群との差は認められず、20 及び 60 mg/kg/日群の

雄でも差がなかった。関連する臨床所見は観察されず、その差は小さかったことから、300 mg/kg/

日群の雄で観察された体重増加量の高値は有害とはみなさなかった。300 mg/kg/日群の雌雄で軽微

なアルカリフォスファターゼ（ALP）の高値（雌雄でそれぞれ 19%及び 52%）が観察され、300 mg/kg/

日群の雄で、肝臓／胆嚢重量の軽度増加（対照群と比較して 15%～23%）及び精巣重量の低下（対

照群と比較して 19%～25%）が認められたが、病理組織学的検査所見を伴わなかったことから有

害とはみなさなかった。

レジパスビルの曝露量は、20～300 mg/kg/日で投与量の増加に伴い増加した。20～60 mg/kg/日の

範囲で、Cmax及び AUC0-tは雌ではほぼ投与量に比例して増加したが、雄では投与量比を下回った。

さらに 300 mg/kg/日までの用量では、曝露量増加は雌雄ともに投与量比を下回った。血漿中レジ

パスビル濃度は概して雌と比較して雄で高値であったが、Cmax 及び AUC0-tともに性差はほぼ 2 倍

未満であった。反復投与後、レジパスビルに蓄積性は認められなかった。

以上の結果から、本試験の NOAEL は、300 mg/kg/日であった。NOAEL でのレジパスビルの投

与 28 日の Cmax 及び AUC0-tは、雌雄合算でそれぞれ 19.8 µg/mL 及び 217 µg∙h/mL であった。

14


3.1.2. ラット

3.1.2.1 ラット 2 週間経口投与試験


Sprague-Dawley（SD）ラット（雌雄各 10 匹／群）に 0（溶媒）、10、30 及び 100 mg/kg/日のレ

ジパスビルを 1 日 1 回 14 日間強制経口投与し、その毒性を検討した。溶媒は 45%PG 及び

15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）とし、投与容量は 5 mL/kg とした。TK 評価のた

めにサテライト群のラット（対照群雌雄各 3 匹及び投薬群雌雄各 9 匹／群）に同様に投与して、

投与 1 及び 14 日に血漿中薬物濃度を測定した。ラット薬物動態試験（2.6.4.3.1.2.1.2.2 項）で、レ

ジパスビルを毒性試験最適化溶媒を用いて投与したとき 100 mg/kg/日を超える用量で曝露量の増

加がほとんどみられなかったことから、高用量を 100 mg/kg/日とした。死亡及び一般状態観察、

体重及び摂餌量測定、眼科学的検査及び臨床検査（血液学的検査、血液生化学的検査及び尿検査）、

臓器重量、剖検、病理組織学的検査並びに肝ミクロソーム酵素分析を実施した。

全ての動物が計画屠殺時まで生存した。投薬に関連した一般症状及び眼科学的検査所見は認め

られなかった。対照群と比較して 100 mg/kg/日群の雄で投与 1 週の体重増加量に有意な抑制（対

照群の 68%）が観察された。体重減少は観察されず、投与 2 週及び投与期間中の増加量には有意

な抑制は認められず、摂餌量にも有意な変化は認められなかったため、この一過性の所見は有害

とはみなさなかった。

血液学的検査、血液凝固系検査、血液生化学的検査及び尿検査に有害作用は認められなかった。

投薬に関連した所見として、100 mg/kg/日群の雄及び 30 及び 100 mg/kg/日群の雌でコレステロー

ル値の軽微上昇（1.3 倍まで）が観察された。臓器重量、剖検及び病理組織学的検査に投薬に関連

した所見は認められなかった。

レジパスビルの曝露量は 10～100 mg/kg/日で投与量の増加に伴い増加したが、30～100 mg/kg/

日では投与量比を下回った。曝露量に明らかな性差は認められなかった。血漿中レジパスビル濃

度は、概して反復投与後、軽度高値を示した。ミクロソームタンパク質量、総シトクロム P450（CYP）

タンパク質量並びに CYP1A、CYP2B、CYP2E、CYP3A 及び CYP4A 活性に顕著な変化（≧2 倍）

は認められなかった。

以上の結果から、本試験では最高用量の 100 mg/kg/日まで忍容性は良好であり、NOAEL は

100 mg/kg/日であった。NOAEL でのレジパスビルの投与 14 日の Cmax 及び AUC0-24 は、雌雄合算

でそれぞれ 2.1 µg/mL 及び 29.8 µg∙h/mL であった。

3.1.2.2 ラット 26 週間経口投与試験及び 4 週間回復性試験（13 週間投与中間評価含む）


SD ラット（雌雄各 10 匹／群）に 0（溶媒）、10、30 及び 100 mg/kg/日のレジパスビルを 1 日 1

回 26 週間強制経口投与し、その毒性を検討した。本試験では、各群にラット（雌雄各 10 匹／群）

15


を追加し、13 週間同様に投与した後屠殺し、中間評価を実施した。対照群及び 100 mg/kg/日群に

は更に試験動物を追加して（雌雄各5匹／群）4週間休薬期間後の回復性を検討した。溶媒は45%PG

及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）とし、投与容量は 5 mL/kg とした。TK 評価

のためにサテライト群のラット（対照群雌雄各 3 匹及び投薬群雌雄各 9 匹／群）に同様に投与し

て、投与 1 日並びに 13 週及び 26 週に血漿中薬物濃度を測定した。死亡及び一般状態観察、体重

及び摂餌量測定、眼科学的検査並びに臨床検査（血液学的検査、血液生化学的検査及び尿検査）、

臓器重量、剖検及び病理組織学的検査を実施した。

毒性評価群の 100 mg/kg/日群雌 4 匹（投与 17、37、57 及び 134 日）、また、TK 群の対照群雄 1

匹（投与 63 日）及び 100 mg/kg/日群雌 1 匹（投与 87 日）が死亡又は切迫屠殺された。毒性評価

群 4 匹中 2 匹は強制経口投与、TK 群雌 1 匹（100 mg/kg/日群）の死亡は採血手技に関連した死亡

と考えられた。残りの毒性評価群雌 2 匹及び TK 群雄 1 匹（対照群）の死因は解明されておらず、

投与との関連性は不明である。

一般状態観察では、100 mg/kg/日群の雌で投与開始後数週間以内に悶えが認められ、30 mg/kg/

日群以上の雄及び 100 mg/kg/日群の雌で口、鼻又は口周辺部に他群と比較して被毛の赤色化の頻

度増加が認められた。被毛の赤色化は休薬期間中には観察されなかった。これらの所見は有害と

はみなさなかった。

第 26 週には、対照群と比較して 100 mg/kg/日群の雄で軽度の体重増加抑制及び体重増加量の減

少（16%）が観察された。休薬期間中は 100 mg/kg/日群の雄の体重増加は対照群とほぼ同じであっ

た。第 26 週の摂餌量は概して雌雄とも投薬群と対照群で同様であった。低用量群の雄及び全群の

雌に体重や摂餌量に顕著な変化は認められなかった。眼科学的検査に投薬に関連した所見は認め

られなかった。

血液学的検査では、100 mg/kg/日群で投薬に関連した所見として雄で網状赤血球数の軽度低値が

認められ、雌で好中球数の軽度高値が観察された。血液生化学的検査では、100 mg/kg/日群で投薬

に関連した所見として、雄でグルコース濃度の軽微低値が認められ、雌で尿素窒素の軽微低値、

グロブリンの軽微から軽度高値、アルブミン対グロブリン比の軽微から軽度低値、コレステロー

ルの軽微高値、トリグリセリドの中等度高値並びにカルシウムの軽微高値が認められた。これら

の所見は関連する病理組織学的検査所見を伴わなかったことから、有害とはみなさなかった。網

状赤血球数及びコレステロールに対する影響は軽微であったが、4 週間の休薬期間後に回復性は

認められなかった。その他の臨床検査値変動は、全て休薬期間後、回復性を示した。凝固系検査

及び尿検査に投薬の影響は認められなかった。

投薬に関連した剖検所見は認められなかった。投与 26 週に、有意な副腎の絶対及び／又は相対

重量増加が 100 mg/kg/日投与の雌雄に（相対重量は対照と比較して 24～25%増加）、また有意な肝

臓の絶対及び／又は相対重量増加が 30 mg/kg/日群以上の雌に（相対重量で対照と比べて 12～18%

増加）認められたが、関連する病理組織学的検査所見を認めなかったことから有害とはみなさな

かった。投薬に関連する可能性のある病理組織学的検査所見は、投与 13 週の中間評価群の

100 mg/kg/日群の雄に観察された腸間膜リンパ節傍皮質領域での軽微なリンパ球増殖及び前立腺

炎症の発生率増加のみであった。しかし、前立腺炎症はラットに頻発する所見であり、投与 26 週

に同様の所見が観察されなかったことから、これらの所見は有害とはみなされなかった。回復群

16


では、投薬に関連した剖検及び病理組織学的検査所見は認められなかった。

レジパスビルの曝露量は 10～100 mg/kg/日で投与量比を下回って増加した。性差は 2 倍未満で

あった。投与 26 週の曝露量は投与 13 週と比較して軽度（2 倍未満）高く、投与 1 日と比較して

約 2 倍であり、反復投与によりレジパスビルの蓄積が認められることを示している。


100 mg/kg/日であった。NOAEL でのレジパスビルの投与 26 週の Cmax 及び AUC0-24 は、雌雄合算

でそれぞれ 3.23 µg/mL 及び 56.0 µg∙h/mL であった。

3.1.3. イヌ

3.1.3.1 イヌ 2 週間経口投与試験


ビーグル犬（雌雄各 3 匹／群）に 0（溶媒）、3、10 及び 30 mg/kg/日のレジパスビルを 1 日 1 回

15 日間経口投与し、その毒性を検討した。溶媒は 45%PG 及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH

2.5）（v/v/v）とし、投与容量は 2 mL/kg とした。死亡及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定、

眼科学的検査、心電図（ECG）及び臨床検査（血液学的検査、血液生化学的検査及び尿検査）、臓

器重量、剖検、病理組織学的検査並びに肝ミクロソーム酵素分析を実施した。TK 評価のために投

与 1、14 及び 15 日に血漿中薬物濃度を測定した。

全ての動物が投与 17 日の計画屠殺時まで生存した。いずれの動物にも一般症状、眼科学的検査

及び ECG に、投薬に関連した所見は認められなかった。投薬に関連した体重減少（0.5～1.0 kg）

が 30 mg/kg/日群の雄 3匹及び雌 1匹の投与 1週に観察され、明らかな摂餌量低下に関連していた。

しかし、その後、30 mg/kg/日群において標準固形飼料に缶入り飼料を追加したところ、これらの

動物の体重減少傾向は回復し、投与 15 日の平均体重は対照動物とほぼ同じとなった。血液学的検

査、凝固検査、臨床化学及び尿検査パラメーターに、レジパスビルに関連した有害作用は認めら

れなかった。唯一の投薬に関連した可能性のある所見として、30 mg/kg/日群の雌雄でコレステロ

ールの軽度増加が観察された（それぞれ対照の 1.5 倍及び 1.3 倍）。試験終了時の体重及び臓器重

量、眼科学的検査及び ECG、剖検並びに病理組織学的検査に、投薬に関連した変化は認められな

かった。

レジパスビルの曝露量は 3～30 mg/kg/日の投与量の範囲でほぼ投与量に比例して増加した。曝

露量に性差は認められなかった。反復投与により、特に高用量群でレジパスビルの蓄積性が示唆

された。レジパスビル投与によるミクロソームタンパク質量、総 CYPタンパク質量並びに CYP1A、

CYP2B、CYP2E、CYP3A 及び CYP4A 活性に明らかな変化（＞2 倍）は認められなかった。

以上の結果から、本試験では 10 mg/kg/日の用量まで忍容性は良好であった。投薬に関連した有

害作用は、30 mg/kg/日群の動物数匹で投与 1 週に認められた体重減少及び摂餌量低下に限られた。

しかし、投与 2 週に本用量群に缶入り飼料を追加したことにより忍容性は改善した。これらの所

見に基づき NOAEL は 10 mg/kg/日と判断した。投与 14 日の Cmax 及び AUC0-24は、雌雄合算でそ

れぞれ 2.4 µg/mL 及び 36.4 µg∙h/mL であった。

17


3.1.3.2 イヌ 39 週間経口投与試験及び 4 週間回復性試験（13 週間投与中間評価含む）


ビーグル犬（雌雄各 4 匹／群）に 0（溶媒）、3、10 及び 30 mg/kg/日のレジパスビルを 1 日 1 回

39 週間経口投与し、その毒性を検討した。本試験では、各群にイヌ（雌雄各 3 匹／群）を追加し、

13 週間同様に投与した後屠殺し、中間評価を実施した。対照群及び 30 mg/kg/日群にはさらに試験

動物を追加して（雌雄各2匹／群）4週間休薬期間後の回復性又は遷延性を検討した。溶媒は45%PG

及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）とし、投与容量は 2 mL/kg とした。TK 評価

のために投与 1 日並びに 13 及び 39 週に血漿中薬物濃度を測定した。死亡及び一般状態観察、体

重及び摂餌量測定、眼科学的検査、ECG、血圧及び臨床検査（血液学的検査、血液生化学的検査

及び尿検査）、臓器重量、剖検並びに病理組織学的検査を実施した。

投薬に関連した死亡は認められなかった。3 匹が計画屠殺前に死亡した。30 mg/kg/日群の雄 1

匹は、投与 78 日に全身衰弱の症状（活動性低下、円背位、体重減少及び体温上昇など）を認めた

ため切迫屠殺した。当該動物は臨床及び解剖学的所見として全身性炎症を示したが、本所見は他

の対照群及び投薬群の動物では観察されなかった。死因は特定されなかったが、化膿性肝臓炎症

及び胆嚢炎症から細菌性感染症と推察された。したがって、当該動物の死亡は孤発性の所見であ

り、投薬に関連しないと考えられた。残る 2 匹（10 及び 30 mg/kg/日群の各雄 1 匹）は、それぞれ

投与 146 及び 211 日に死亡した。死因は投与手技に関連した偶発的な死亡であった。

体重、摂餌量、眼科学的検査、ECG、血圧、臨床検査、臓器重量、剖検及び病理組織学的検査

に、投薬に関連した所見は認められなかった。投薬に関連した所見は、一般状態観察において

30 mg/kg/日群で流涎の頻度増加が認められたのみであった。本所見は一過性で投与直前又は直後

に認められることが多かった。作用は一過性であり、回復期間中は認められなかったことから、

有害とはみなさなかった。

レジパスビルの曝露量は 3～10 mg/kg/日でほぼ投与量に比例して増加したが、10～30 mg/kg/日

では投与量比を下回った。曝露量は特に投与 39 週で雄より雌で高値であったが、性差は概して 2

倍未満であった。反復投与により軽度（2 倍未満）の蓄積性が認められた。


30 mg/kg/日であった。NOAEL でのレジパスビルの投与 39 週の Cmax 及び AUC0-t は、雌雄合算で

それぞれ 4.16 µg/mL 及び 62.6 µg∙h/mL であった。


レジパスビル／ソホスブビルの併用投与による反復投与試験は実施していない。レジパスビル

及びソホスブビルのそれぞれ単味によるラット及びイヌ反復投与毒性試験では、薬剤により標的

臓器が異なった。ソホスブビルの標的臓器とされる消化管及び肝胆道系（イヌ）と心臓血管系（ラ

ット）は、ラット及びイヌにおいてそれぞれ臨床曝露量の少なくとも 16 倍及び 71 倍の曝露量の

場合にのみ認められた（主要代謝物 GS-331007 に基づいて判定。AUClast はラット及びイヌでそれ

18


ぞれ 206 及び 882 µg∙h/mL）。ソホスブビル長期反復投与毒性試験では、最高用量（500 mg/kg/日）

まで肝臓や心臓に毒性は観察されず、ラット及びイヌにおける長期反復投与毒性試験で得られた

NOAEL（ラット：500 mg/kg/日、イヌ：100 mg/kg/日）での GS-331007 曝露量は、臨床曝露量のそ

れぞれ少なくとも 5 倍及び 7 倍であった。レジパスビルを用いた場合は、標的臓器は認められな

かった。ラット及びイヌにおける長期反復投与毒性試験から得られた NOAEL でのレジパスビル

曝露量は、臨床曝露量の少なくとも 7 倍であった。したがって、臨床的に重要な薬物動態学的相

互作用はないこと及び標的臓器が異なることからレジパスビル／ソホスブビルの併用投与により

既知の毒性が増悪したり、新たな毒性が引き起こされることはないと考えられる。

19


4. 遺伝毒性


4.1.1. In vitro

4.1.1.1 細菌を用いる復帰突然変異試験

（試験番号 TX-256-2005、添付資料番号 4.2.3.3.1.1、評価資料）

Salmonella typhimurium 株（TA1535、TA1537、TA98、TA100）及び Escherichia coli 株 WP2 uvrA

を用いてプレート法により、レジパスビルの 5000 µg/プレートまでの濃度範囲で、ラット由来肝

ホモジネート分画（S9mix）存在下又は非存在下で、細菌を用いる復帰突然変異試験を実施した。

レジパスビルに、全ての細菌株で S9mix の存在下及び非存在下のいずれにおいても復帰突然変異

体数の大幅な増加は認められず、レジパスビルは遺伝毒性を示さなかった。また、陽性対照及び

溶媒対照（DMSO）の結果から、本試験系の感度・妥当性や S9mix の活性が確認された。

4.1.1.2 哺乳類細胞を用いる染色体異常試験

（試験番号 TX-256-2006、添付資料番号 4.2.3.3.1.2.、評価資料）

ヒト末梢血リンパ球を用いて In vitro 染色体異常試験を実施した。

ヒト末梢血リンパ球は分裂するように刺激した後にレジパスビルで処理した。予備試験の結果

を考慮し、最初の試験ではラット由来 S9mix 存在下又は非存在下においてレジパスビル 47.1、67.2

及び 96.0 µg/mL で 3 時間処理し、また確認試験では 90.0、120 及び 150 µg/mL で、S9mix 存在下

及び非存在下でそれぞれ 3 時間及び 22 時間処理した。いずれも処理開始 22 時間後に評価した。

濃度 96.0、120 及び 150 µg/mL では、いずれも処理終了時に被験物質の沈殿が認められた。適切

な溶媒を用いたレジパスビル処理細胞及び各陽性対照処理細胞の分裂中期を対象として、光学顕

微鏡を用いて染色体異常の有無を詳細に検討した。

いずれの試験でも、レジパスビルは染色体の構造異常並びに倍数体及び核内倍加を含む細胞の

明らかな増加は観察されなかった。溶媒対照及び及び陽性対照の結果は予測どおりの応答をした。

以上のとおり、レジパスビルは染色体損傷誘発性を検討した本 in vitro 試験で遺伝毒性を示さな

かった。

4.1.2. In vivo

4.1.2.1 In vivo ラット小核試験


SD ラット（雌雄各 5 匹／群）にレジパスビルを単回経口投与し、骨髄赤血球小核試験を実施し

た。本試験の最高用量は溶媒中の溶解限界（22.5 mg/mL）で最大限可能な投与量である 450 mg/kg

とし、投与容量は 20 mL/kg とした。投与 24 時間後又は 48 時間後に骨髄標本を作製し、24 時間後

20


評価動物には、0、112.5、225 及び 450 mg/kg、48 時間後評価動物には 0 及び 450 mg/kg のレジパ

スビルを投与した。陽性対照群のラット（雌雄各 5 匹）にはシクロフォスファミド（60 mg/kg）

を経口投与した。サテライト群の動物（雌雄各 3 匹／群）にも投与し、投与 4 時間後の血漿中レ

ジパスビル濃度を測定した。

血漿中薬物濃度測定では、雌雄いずれのラットにも投与量増加に伴う明らかな曝露量増加はみ

られなかった。投与 4 時間後の血漿中薬物濃度は 709～2550 ng/mL であり、被験物質による曝露

が確認された。

全ての動物が計画屠殺時まで生存した。一般症状は、225 mg/kg 群の雄 5 匹中 1 匹で観察された

投与直後の透明な口腔内分泌物並びに 225 及び 450 mg/kg 群それぞれ雄 5 匹中 1 匹で観察された

投与 24 時間後の粗毛に限られた。

骨髄塗抹標本は、蛍光顕微鏡検査で各動物あたり合計 2000 個の多染性赤血球（PCE）について

小核の有無を判定した。さらに、各動物で少なくとも最初の 500 個の赤血球中の PCE 及び正染性

赤血球（NCE）を算出し、細胞毒性の可能性を評価した。

レジパスビルは、全投薬群の雌雄でいずれの時点でも、小核を有する多染性赤血球（MPCE）

の発現率に有意な増加を示さなかった。さらに、レジパスビルはいずれの用量でも、骨髄に対す

る細胞毒性を認めなかった（すなわち、PCE：NCE 比に統計学的に有意な低下は認められなかっ

た）。陽性対照群では有意な MPCE の発現率の増加が認められ、本試験系の感度が確認された。

結論として、本試験条件下ではレジパスビルはラット骨髄細胞に小核を誘導しなかった。


ソホスブビル及びレジパスビルは、いずれも一連の遺伝毒性試験で陰性であった。レジパスビ

ル／ソホスブビルの併用で、個々の薬剤の遺伝毒性プロファイルが変化することはないと考えら

れる。

21


5. がん原性試験


rasH2 マウスを用いた 26 週間経口投与がん原性試験を実施した。SD ラット［投与量：10、30

及び 100 mg/kg/日（雄）、3、10 及び 30 mg/kg/日（雌）］を用いた 104 週間経口投与がん原性試験

は現在進行中である。

5.1.1. RasH2 マウス 26 週間経口投与がん原性試験（試験番号 TX-256-2019、添付資料番号 4.2.3.4.1、評価資料）

rasH2 マウス（001178-T）にレジパスビルを 26 週間経口投与し、がん原性を検討した。TK 評価

には 001178-W（野生型）マウスを使用した。投与量は 4 週間経口投与試験（3.1.1.1 項）の結果に

基づき設定した。

雌雄マウスを 6 群に割り付け、0（RO 水）、0（溶媒）、20、60 及び 300 mg/kg/日のレジパスビ

ル又は陽性対照（N-メチル N-ニトロソ尿素）を投与した。溶媒は 0.2%HPMC E4M（w/v）、0.2%

ポリソルベート 20（v/v）及び 0.9%ベンジルアルコール（v/v）含有 RO 水とした。投薬群並びに

水及び溶媒投与群（雌雄各 25 匹／群）のマウスには、投与容量 10 mL/kg で、少なくとも 26 週間

連日経口投与し、陽性対照群（雌雄各 15 匹）のマウスには第 1 日に 1 回、75 mg/kg の N-メチル

N-ニトロソ尿素を腹腔内投与した（投与容量 10 mL/kg）。サテライト群のマウス（水及び溶媒対

照群雌雄各 6 匹／群並びに投薬群雌雄各 36 匹／群、陽性対照群設定せず）に同様に投与し、第 1

日及び第 26 週に TK 評価を実施した。死亡及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定並びに剖検及

び病理組織学的検査を実施した。

試験期間を通じて、溶媒及び水対照群の所見に差は認められなかった。陽性対照群では死亡率

及び腫瘍性病変の発現頻度増加が観察され、陽性対照群の反応性及びトランスジェニックマウス

がん原性試験の妥当性が示された。

レジパスビル投与群の生存率に投薬の影響は認められなかった。一般状態観察、摂餌量及び腫

瘤の発現頻度増加に投薬の影響はなかった。20、60 及び 300 mg/kg/日のレジパスビル投与群の雌

雄に、軽微かつ非有害性の体重増加量の高値が観察された。

レジパスビル投与に関連した剖検所見は観察されなかった。病理組織学的検査では、いずれの

用量でも対照群と比較してがん原性所見の頻度増加は観察されなかった。

TK 評価では、水及び溶媒対照群のすべての試料でレジパスビル濃度は定量下限未満

（<50.0 ng/mL）であった。レジパスビル曝露量（Cmax 及び AUC0-t）の増加は 20～300 mg/kg/日の

範囲で投与量比を下回った。性差は 2 倍未満（Cmax及び AUC0-t）であった。反復投与後に蓄積性

は認められなかった。

以上のとおり、rasH2 マウスに 300 mg/kg/日の用量まで少なくとも 26 週間連日反復経口投与し

た結果、レジパスビルにがん原性は認められなかった。300 mg/kg/日群での第 26 週のレジパスビ

ル曝露量（AUC0-t）は 225 μg•h/mL（雌雄合算）であった。

22



臨床曝露量を超える用量で実施した 2 年間のがん原性試験でソホスブビルはがん原性を示さな

かった。rasH2 マウスを用いたがん原性試験でレジパスビルはがん原性を示さなかった。SD ラッ

トを用いたレジパスビルがん原性試験は進行中である。レジパスビルに遺伝毒性はなく、ラット

及びイヌにおける長期反復投与試験にレジパスビル関連性の腫瘍性病変又は前がん病変は認めら

れなかった。ソホスブビルを用いたがん原性試験並びにレジパスビルを用いた遺伝毒性試験及び

がん原性試験の結果を考慮すると、レジパスビル／ソホスブビル併用によるがん原性試験の実施

は必ずしも必要ではないと判断した。

23


6. 生殖発生毒性試験


6.1.1. 受胎能及び初期胚発生試験に関する試験


SD ラット（雌雄各 22 匹／群）の雄には交配 28 日間前から交配期間を通じて剖検前まで、雌に

は交配 15 日前から交配期間を通じて妊娠 7 日まで、0（溶媒）、10、30 及び 100 mg/kg/日のレジパ

スビルを 1 日 1 回強制経口投与し、生殖機能及び着床までの初期胚発生に及ぼす影響について検

討した。溶媒は 45%PG 及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）とし、投与容量は 5 mL/kg

とした。妊娠 13 日に雌動物を剖検し、子宮内検査を実施した。全雄動物も剖検した。死亡及び一

般状態観察、体重、摂餌量、交配及び受胎能、子宮内検査、雄性生殖能（精子の運動性、濃度及

び形態）、臓器重量及び剖検により毒性を評価した。

試験期間中、投薬に関連した死亡はなかった。対照群及び 30 mg/kg/日群のそれぞれ雄 1 匹（計

2 匹）がいずれも投与過誤により切迫屠殺された。その他の動物は計画屠殺時まで生存した。雌

雄いずれのラットにも 100 mg/kg/日まで一般症状を認めなかった。30 mg/kg/日群以上の雄で有意

な一過性の体重増加抑制が観察された（投与 1～8 日で対照群と比較して 30 及び 100 mg/kg/日で

それぞれ 21%及び 80%抑制）。100 mg/kg/日群の雌では軽度であるが有意な体重減少が投与 1 週に

観察された。雌雄で認められたこれらの体重変動は一過性の摂餌量低下に関連した。体重の変動

は軽度かつ一過性であり、投与終了時には対照群の値と同様か又は上回っていたことから有害と

はみなさなかった。

14 日あたりの性周期数は投与前及び交配前期間中、群間に差を認めなかった。雌雄いずれのラ

ットでも交配及び生殖能パラメーターに投薬の影響はみられなかった。投薬に関連した剖検所見

は観察されず、生殖器の臓器重量にも影響はみられなかった。精子パラメーター（精子運動能、

精子数及び形態）に投薬の影響は認められなかった。黄体数、着床数及び生存胚数は、対照群と

比較して 100 mg/kg/日群では軽度低値であった（表 2.6.6- 2）。その他の子宮内検査値又は同腹児パ

ラメーター（すなわち、着床前胚損失数及び着床後胚損失数）に投薬の影響はなかった。

24


表 2.6.6- 2 レジパスビル生殖能試験における母動物あたりの平均黄体数、着床数及び生存胚数

LDV (mg/kg/day)

0 10 30 100

Mean No. Corpora Lutea 15.6 15.3 14.9 14.0** Mean No. Implantations 15.2 14.6 14.6 13.7* Mean No. Live Embryos 13.8 13.4 13.3 12.0

LDV=Ledipasvir, * = P ≤ 0.05; ** = p ≤ 0.01 [試験番号 TX-256-2017、Table 23 より抜粋]

雌雄ラットにおける体重及び摂餌量への影響は一過性であったことから雌雄親動物での一般毒

性に関する NOAEL は 100 mg/kg/日と判断した。雄ラットの交配及び生殖能に対する NOAEL も

100 mg/kg/日と判断した。雌ラットでは交配への影響は 100 mg/kg/日まで認められなかったが、黄

体数及び着床数が 100 mg/kg/日群において有意に低値であったことから、雌ラットの生殖能に関

する NOAEL は 30 mg/kg/日と判断した。

6.1.2. 胚・胎児発生に関する試験

6.1.2.1 ラット胚・胎児発生に関する用量設定試験


SD 妊娠ラットの器官形成期間にレジパスビルを 1 日 1 回強制経口投与し、胚・胎児発生試験の

ための用量設定試験を実施した。レジパスビルは妊娠が予測されるラット（8 匹／群）に 0（溶媒）、

10、30 及び 100 mg/kg/日の用量で投与容量 5 mL/kg/日で妊娠 6～17 日まで投与した。溶媒は 45%PG

及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）とした。サテライト群の動物（対照群：3

匹、投薬群：9 匹／群）にも同様に投与し、TK 評価のため妊娠 6 日及び 17 日に血漿中レジパス

ビル濃度を測定した。母動物は妊娠 21 日に剖検し、子宮内検査及び胎児の外表及び内臓検査を実

施した。また、死亡及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定を実施した。

全ての動物が計画屠殺時まで生存し、投薬に関連した一般症状は観察されなかった。投薬に関

連した母動物体重及び摂餌量への影響が 100 mg/kg/日群で認められた。投与期間中、対照群と比

較して 100 mg/kg/日群で、有意な母動物体重の低値（対照の 90%）、体重増加抑制（対照の 75%）

及び摂餌量低下（対照の 81%）を認めた。投与終了後（妊娠 18～21 日）、体重増加量及び摂餌量

は回復したが、妊娠 21 日の体重は対照群と比較して依然軽度低値（対照の 93%）であった。10

及び 30 mg/kg/日群の母動物体重及び摂餌量に影響はみられなかった。

剖検に特記所見はなく、子宮重量及び補正後の母動物体重は全投薬群と対照群で類似した。子

宮内パラメーターに所見はなく、胚・胎児の生存に投薬の影響は認められなかった。胎児体重並

びに胎児の外表及び内臓検査における変異及び異常に投薬の影響は認められなかった。

レジパスビルの曝露量は、10～30 mg/kg/日で投与量に比例して増加した。30～100 mg/kg/日の範

囲では投与量比を軽度下回った。妊娠ラットへの反復投与後、レジパスビルの蓄積（約 2 倍）が

25


認められた。

以上の結果より、本試験では、100 mg/kg/日群の母動物に有意な体重増加抑制及び摂餌量低下が

認められたことから、器官形成期投与における母動物毒性に関する NOAEL は 30 mg/kg/日と判断

した（NOAEL での妊娠 17 日の AUC0-24は、18.2 µg∙h/mL）。胚・胎児の生存、成長にレジパスビ

ル投与の影響は観察されず、胎児異常もなかった。したがって、胚・胎児の発生に関する NOAEL

は 100 mg/kg/日と判断した（NOAEL での妊娠 17 日の AUC0-24は、39.2 µg∙h/mL）。

6.1.2.2 ラット胚・胎児発生に関する試験


SD 妊娠ラット（25 匹／群）に 0（溶媒）、10、30 及び 100 mg/kg/日のレジパスビルを、投与容

量 5 mL/kg/日で 1日 1回妊娠 6～17日まで投与した。溶媒は 45%PG及び 15%Solutol® HS-15、40%RO

水（pH 2.5）（v/v/v）とした。母動物は妊娠 21 日に剖検し、子宮内検査及び胎児検査（胎児の外

表、内臓、骨格の評価）を実施した。また、死亡及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定を実施

した。

全ての動物が計画屠殺時まで生存し、投薬に関連した一般症状は観察されなかった。100 mg/kg/

日群の妊娠 10～18 日に母動物体重の軽度低値（対照の 96.5 から 97.8%）が認められたが、投与期

間中、母動物体重に有意な低値は認められなかった。体重増加は妊娠 6～8 日に有意に抑制された

（対照の 33%）。摂餌量は投与期間中（妊娠 6～18 日）、有意に低下した（対照の 79～89%）。これ

ら体重増加抑制及び摂餌量低下は投与終了後（妊娠 18～21 日）回復した。10 及び 30 mg/kg/日群

の母動物体重及び摂餌量に影響はみられなかった。

剖検に特記所見はなく、子宮重量及び補正後の母動物体重は全投薬群と対照群で類似した。子

宮内パラメーターに所見はなく、胚・胎児の生存に投薬の影響は認められなかった。胎児体重並

びに胎児の外表及び内臓検査における変異及び異常に投薬の影響は認められなかった。投薬に関

連した骨格異常は観察されなかった。しかし、100 mg/kg/日群では一般的な脊椎、胸骨分節及び肋

骨の骨格変異を有する胎児数及び母動物数が軽度ではあるが有意に増加した。その他に胎児毒性

又は奇形を示す所見は認められず、これら一般的な骨格変異は、レジパスビルの直接作用ではな

く、母動物の一般毒性（摂餌量低下及び体重増加抑制）に関連した二次的所見であると考えられ

た。

以上の結果より、本試験では、100 mg/kg/日群の母動物に有意な体重増加抑制及び摂餌量低下が

認められたことから、器官形成期投与における母動物毒性に関する NOAEL は 30 mg/kg/日と判断

した。胚・胎児の生存にレジパスビル投与の影響は観察されず、胎児に内臓及び骨格異常はなか

った。したがって、胚・胎児の発生に関する NOAEL は 100 mg/kg/日と判断した。

6.1.2.3 ウサギ胚・胎児発生に関する用量設定試験


New Zealand White 妊娠ウサギの器官形成期間にレジパスビルを 1 日 1 回強制経口投与し、胚・

26


胎児発生試験のための用量設定試験を実施した。レジパスビルは妊娠ウサギ（6 匹／群）に 0（水）、

0（溶媒）、30、60、100 及び 300 mg/kg/日の用量で妊娠 7～20 日まで投与容量 3 mL/kg で 1 日 1 回

強制経口投与した。溶媒は 75%PG 及び 25%Solutol® HS-15 とした。サテライト群の動物（雌 3 匹

／群）にも同様に投与し、TK 評価のため妊娠 7 及び 20 日に血漿中レジパスビル濃度を測定した。

母動物は妊娠 29 日に剖検し、子宮内検査並びに胎児の外表及び内臓検査を実施した。また、死亡

及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定を実施した。

300 mg/kg/日群の 1 匹に持続的な食欲不振（1 日 25g 未満）及び体重減少（妊娠 7～21 日で 351g

減少）が観察されたため妊娠 21 日に安楽死させた。その他の動物は計画屠殺時まで生存した。100

及び 300 mg/kg/日群で糞便の異常（ほとんどない／ない、形がない又は小さい）が散見され、

300 mg/kg/日で観察された摂餌量低下に関連すると考えられた。体重減少及び摂餌量低下とともに、

糞便異常は 300 mg/kg/日群で観察された投薬に関連した一般症状と考えられた。30 及び 60 mg/kg/

日に投薬に関連した一般症状は観察されなかった。300 mg/kg/日群では、母動物体重増加及び摂餌

量に有害作用が認められた。300 mg/kg/日群では、妊娠 9～13 日に体重減少が観察され、投与期間

中（妊娠 7～21 日）に有意な体重増加抑制及び摂餌量低下が観察された。30、60 及び 100 mg/kg/

日に投薬に関連した体重増加及び摂餌量への影響は観察されなかった。剖検に特記所見はなく、

子宮重量及び補正後の母動物体重は全投薬群と対照群で類似した。子宮内パラメーターに所見は

なく、胚・胎児の生存に投薬の影響は認められなかった。胎児体重並びに胎児の外表及び内臓検

査における変異及び異常に投薬の影響は認められなかった。

レジパスビルの曝露量は、30～60 mg/kg/日で投与量に比例して増加した。60～300 mg/kg/日の範

囲では投与量比を下回っており、60 及び 100 mg/kg/日投与時の曝露量は同程度であった。妊娠ウ

サギへの反復投与後、レジパスビルの蓄積が認められた。

以上の結果より、本試験では、300 mg/kg/日群の母動物 1 匹が早期死亡し、有意な体重増加抑制

及び摂餌量低下が認められたことから、器官形成期投与における母動物毒性に関する NOAEL は

100 mg/kg/日と判断した（NOAEL での妊娠 20 日の AUC0-24は、24.9 µg∙h/mL）。胚・胎児の生存、

成長にレジパスビル投与の影響は観察されず、胎児異常もなかった。したがって、胚・胎児の発

生に関する NOAEL は最高用量である 300 mg/kg/日と判断した（NOAEL での妊娠 20 日の AUC0-24

は、57.3 µg∙h/mL）。

6.1.2.4 ウサギ胚・胎児発生に関する試験


New Zealand White 妊娠ウサギ（20 匹／群）に 0（溶媒）、30、60 及び 180 mg/kg/日のレジパス

ビルを投与容量 3 mL/kg で妊娠 7～20 日に 1 日 1 回強制経口投与し、胚・胎児に対する影響を検

討した。溶媒は 75%PG 及び 25%Solutol® HS-15 とした。高用量（180 mg/kg/日）群にサテライト

動物（3 匹）を追加し、TK 評価のため妊娠 7 及び 20 日に血漿中レジパスビル濃度を測定した。

母動物は妊娠 29 日に剖検し、子宮内検査及び胎児検査（胎児の外表、内臓、骨格の評価）を実

施した。また、死亡及び一般状態観察、体重及び摂餌量測定を実施した。

投薬に関連した死亡は観察されなかった。計 7 匹（対照群並びに 30、60 及び 180 mg/kg/日群で

27


それぞれ 2、0、2 及び 3 匹）に早期死亡がみられたが、死亡動物は対照群及び投薬群に同様に分

布した。死亡は重度の体重減少、食欲不振、投与過誤又は妊娠転帰不良（早産／流産）に関連し

たが、発現に用量関連性は認められなかった。唯一 180 mg/kg/日群で観察された流産（動物番号

F73289）は、対照群にも同様の妊娠転帰不良を呈するウサギ（動物番号 F73238）で類似した一般

症状（重度の体重減少及び食欲不振）が観察されていることから、レジパスビル投与に関連しな

いと考えられる。その他の動物は計画屠殺時まで生存した。糞便の異常（ほとんどない／ない及

び軟便）が全群で観察されたが、180 mg/kg/日群で頻度が増加した。母動物の体重、体重増加、摂

餌量に投薬に関連した有害作用は認められなかった。180 mg/kg/日群の妊娠 9～11 日及び妊娠 18

～21 日で体重減少が認められたが投与期間全体（妊娠 7～21 日）の体重増加は対照群と同程度で

あった。180 mg/kg/日群で投与期間中（妊娠 7～21 日）に軽度の摂餌量低下（対照と比較して 8%

低値）が認められたが、有意差はなく試験期間全体（妊娠 4～29 日）では対照群と投薬群の摂餌

量は同程度であった。

妊娠率（早期死亡動物含む）は対照群並びに 30、60 及び 180 mg/kg/日群でそれぞれ 85%、100%、

95%及び 90%であった。剖検に特記所見はなく、子宮重量及び補正後の母動物体重は全投薬群と

対照群で類似した。子宮内パラメーターに所見はなく、胚・胎児の生存に投薬の影響は認められ

なかった。胎児体重並びに胎児の外表、内臓及び骨格検査における変異及び異常に投薬の影響は

認められなかった。

180 mg/kg/日群でのレジパスビルの曝露は投与 24 時間後まで認められた。妊娠ウサギへの反復

投与後、レジパスビルに軽度の蓄積が認められた（2 倍未満）。

以上の結果から、本試験では 180 mg/kg/日の投与まで母動物毒性及び胎児の生存及び成長への

影響は認められず、胎児異常も観察されなかった。母動物の体重増加抑制及び摂餌量低下は一過

性であったことから、母動物の NOAEL は 180 mg/kg/日と判断した。胚・胎児の発生に関する

NOAEL は最高用量である 180 mg/kg/日と判断した。これら NOAEL での妊娠 20 日の AUC0-24は、

20.8 µg∙h/mL であった。

6.1.3. 出生前及び出生後の発生並びに母体機能に関する試験


SD 妊娠ラット（25 匹／群）に妊娠 6 日から授乳 20 日まで、0（溶媒）、10、30、100 mg/kg/日

のレジパスビルを 1 日 1 回強制経口投与し、出生前及び出生後の発生並びに母体機能に及ぼす影

響を検討した。溶媒は 45%PG 及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）とし、投与容

量は 5 mL/kg とした。さらに、サテライト群の動物（対照群：3 匹、投薬群：9 匹／群）にも同様

に投与し、TK 評価のため妊娠 6 日及び授乳 10 日の血漿中レジパスビル濃度を測定した。また、

授乳 10 日に出生児ラット（同腹児から雌雄各 1 匹）からそれぞれ母動物と同一時点に採血し、血

漿中濃度を測定した。

F0 世代は、死亡、一般状態観察、体重、摂餌量、剖検により毒性を評価した。また、分娩中の

一般症状、妊娠期間、同腹児数、母動物の行動についても評価した。F1 出生児は生存率、体重、

一般症状を同腹児ごとに記録した。F1 世代の全動物につき、死亡、一般症状、体重、性成熟（出

28


生後 25 日からの膣開口、出生後 35 日からの亀頭包皮分離）を観察した。選抜した F1動物につい

て行動（出生後 21 及び 61 日の運動性、出生後 20 及び 60 日の聴覚性驚愕反射、出生後 22 及び

62 日の Biel 型水迷路）及び生殖能を評価した。生殖能検査に割り付けた各 F1 雌の発情期は同居

前 10 日間にわたり連日評価した。出生後約 85 日に、選抜した F1世代を 15 日間の同居期間に割

り付けた。全ての F1 雌を自然分娩させ、出生児は生後 4 日まで哺育した。F2 出生児は一般症状、

体重及び性比を記録した。全ての F1雌動物を授乳 4 日、交尾 25 日後又は交配 25 日後に剖検した。

F1 雄動物は最後の F1 雌動物の剖検終了後屠殺した。F2 出生児の死亡動物は全て剖検した。残る

F2 動物は生後 4 日に屠殺し、剖検は実施しなかった。

100 mg/kg/日群の F0雌 1 匹が妊娠 18 日に体重減少、摂餌量低下並びに、眼の蒼白化及び鼻周囲、

泌尿生殖器部の赤色物質を認め、切迫屠殺された。当該動物には剖検において、子宮及び腟に暗

赤色内容物並びに泌尿生殖器部の赤色皮膚が観察された。この早期死亡は投薬に関連すると考え

られた。その他いずれの群の F0動物にも死亡は認められず、投薬に関連した一般症状及び剖検所

見もなかった。100 mg/kg/日群の F0雌では、妊娠投与期間中、体重減少（投与初期）、体重増加抑

制及び摂餌量低下が認められた。授乳後期では、100 mg/kg/日群の F0 雌に体重増加量の高値が認

められたが、本所見は F1出生児の軽度の発育遅延が認められていることから摂乳量が低下したた

めと考えられた。30 mg/kg/日群の F0 雌では、一過性の体重増加抑制及び摂餌量低下が妊娠 6～9

日に認められたが、有害であるとはみなさなかった。

10 mg/kg/日では、体重及び摂餌量に影響はなかった。F0 妊娠期間、分娩及び着床部位の平均数

に影響はなかった。100 mg/kg/日群で出生後 4～7 日及び 17～21 日の F1動物に体重増加抑制が認

められた結果、出生後期間を通じて体重の低値が観察された。F0母動物へのレジパスビル投与は、

F1 世代の同腹児数、生存率、一般症状、身体的発育、行動及び生殖能並びに剖検所見などその他

の検査項目に影響しなかった。同様に、F2 世代に対しても子宮内発育及び生存率、身体的発育、

体重、死亡動物の剖検所見などに影響はなかった。

F0 世代のレジパスビル曝露量は、妊娠 6 日及び授乳 10 日のいずれの測定時点でも、10～100

mg/kg/日の範囲でほぼ投与量増加に比例した。F0 雌のレジパスビル曝露量は 10 及び 30 mg/kg/日

では妊娠 6 日と授乳 10 日でほぼ等しく、100 mg/kg/日では妊娠 6 日と比較して授乳 10 日の曝露量

がやや高値であった（2 倍未満）。F1世代における曝露量は、母動物への 10～100 mg/kg/日の投与

量比を上回る増加を認めた。性差は 2 倍未満であった。母動物対児動物の AUC0-t 比は、授乳 10

日では全投薬群で約 4 倍であった。

以上の結果より、100 mg/kg/日で母動物の死亡及び体重への影響並びに F1 世代の体重への影響

が観察されたことから、本試験の F0母動物の一般毒性、F1世代の発生・新生児に対する毒性に関

する NOAEL は、30 mg/kg/日と判断した（F0母動物の AUC0-tは 11.4 µg∙h/mL）。F1世代の身体的発

育、行動及び生殖能並びに F2 世代の生存に対する NOAEL は、100 mg/kg/日と考えられた（F0 母

動物 AUC0-tは 37.6 μg∙h/mL）。


レジパスビル及びソホスブビルのそれぞれ単味での生殖発生毒性試験で得られた NOAEL での

29


曝露量はいずれも臨床曝露量を超えていた。レジパスビル／ソホスブビル併用により予想される

毒性学的相互作用はなく、レジパスビル／ソホスブビルを用いた併用試験は実施していない。

30


7. 局所刺激性試験


7.1.1. 眼刺激性試験


OECD ガイドライン 437 に従い、ウシ角膜混濁度及び透過性（BCOP）試験を実施し、レジパス

ビルの潜在的な眼刺激性を評価した。レジパスビルの 20%w/w 生理食塩液懸濁液を角膜上皮に 4

時間添加した。レジパスビルが誘発した in vitro 刺激性スコアは 7.7 ± 1.1 であり、腐食性・強度の

眼刺激性物質ではないと予測された。イミダゾール（陽性対照）の in vitro 刺激性スコアは

163.6 ± 20.9 であり、本試験に腐食性・強度刺激性物質の検出力があることが確認された。

7.1.2. 皮膚刺激性試験


OECD ガイドライン 404 に従い、New Zealand White ウサギにおけるレジパスビルの皮膚刺激性

を評価した。雌ウサギ 3 匹の剃毛した正常皮膚を 0.5 mL の RO 水で湿らせ、半密封包帯を使用し

て約 0.5 g のレジパスビルを 4 時間単回貼付した。さらに対照部位には、レジパスビル無添加で同

様に貼付した。動物を 4 日間観察し、半密封包帯の除去後 1、24、48、72 時間に皮膚反応を観察

してスコア化した。全動物が生存し、特記すべき一般症状は観察されなかった。試験期間を通じ

て皮膚反応を示した動物はいなかった。一次刺激性指数は 0.0 と算出され、レジパスビルはウサ

ギの皮膚に対して「非刺激性」と判定された。

31


8. その他の毒性試験


8.1.1. 抗原性

8.1.1.1 マウス局所リンパ節試験


OECD ガイドライン 429 に従い、マウス局所リンパ節試験（LLNA）を実施し、レジパスビルの

潜在的な皮膚感作性を判定した。レジパスビルは、ジメチルホルムアミド（DMF）中 10%、25%、

50%（w/v）の濃度になるよう調製した。溶媒（25 μL）、陽性対照（25%ヘキシルシンナミックア

ルデヒド）又は各濃度のレジパスビルを CBA/Ca 雌マウス（5 匹／群）の両耳介の背面に 3 日間

連日塗布した。最終塗布から 3 日後に全動物に[3H]メチルチミジンを静脈内投与し、投与 5 時間

後に安楽死させ、耳介リンパ節の放射能を測定した。

試験期間中、死亡は認められず、一般症状に異常は観察されなかった。また、耳介に紅斑は観

察されなかった。

採取したリンパ節に取り込まれた放射能の試験群対対照群比（刺激指数、SI）は、1.1～1.5 の範

囲でレジパスビルは皮膚感作を誘発しないことが示された。陽性対照の SI は 10.3 であり、本試験

の妥当性が示された。

反復投与毒性試験にも関連する所見は認められなかったことから、レジパスビルはアレルギー

反応を誘発しないと判断し、独立した抗原性試験は実施なかった。

8.1.2. 免疫毒性試験

レジパスビルの免疫毒性試験は実施していない。レジパスビルを用いた反復投与毒性試験にお

いて免疫学的懸念を示唆する所見は認められなかった。

8.1.3. 代謝物に関する試験

レジパスビルはヒトに特異的な代謝物がないため（2.7.2.2.2.2.3 項）、独立したレジパスビルの

代謝物を用いた毒性試験は実施しなかった。

8.1.4. 不純物に関する試験

8.1.4.1 ラット 2 週間経口投与試験（レジパスビル-B：ロット番号）


32


レジパスビルの工程不純物の毒性をラット 2 週間強制経口毒性試験で評価した。SD ラット（雄

10 匹／群）に溶媒［45%PG 及び 15%Kolliphor® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）］又は 30 及

び 100 mg/kg/日のレジパスビル-B（添加不純物を含む、ロット番号、純度 98.3%）を１

日１回投与した。対照ロットとして 100 mg/kg/日のレジパスビル（ロット番号、純

度 99.3%）を同様に投与した。投与容量は 5 mL/kg とした。死亡及び一般状態観察、体重及び摂

餌量測定、臨床検査（血液学的検査、血液凝固系検査、血液生化学的検査及び尿検査）、剖検、臓

器重量及び病理組織学的検査を実施した。TK 評価のためにサテライト群のラット（対照群雄 3

匹及び投薬群雄 6 匹／群）に同様に投与して、投与 1 及び 14 日に血漿中薬物濃度を測定した。

投薬に関連した死亡はなく、投薬に関連した一般症状も認められなかった。投与 1 週に、溶媒

対照群と比較して、レジパスビル及びレジパスビル-B の 100 mg/kg/日投与群で、有意な体重増加

抑制及び摂餌量低下が認められた。体重減少は認められず、投与 2 週及び 2 週間の期間全体にわ

たって対照群と比較して有意な体重増加抑制は認められなかったため、上記の一過性の作用は有

害とはみなさなかった。レジパスビル又はレジパスビル-B の投与は、臨床検査値に有害作用を及

ぼさなかった。レジパスビル及びレジパスビル-B 投与群の全てで軽微なコレステロール高値並び

に、100 mg/kg/日のレジパスビル-B 投与群での軽度のトリグリセリド高値が観察されたのみであ

った。臓器重量、剖検及び病理組織学的検査に投薬に関連した所見はなかった。

レジパスビル-B の曝露量は、30～100 mg/kg/日の範囲で投与量比を下回る増加を認めた。

100 mg/kg/日投与時の全体的な濃度－時間プロファイルは、両被験物質で類似していた。両被験物

質の単回又は反復投与後の曝露量は全般的に類似していた。

以上の結果から、本試験では、レジパスビル及びレジパスビル-B の各ロットは同様の所見を示

し、NOAEL はいずれも 100 mg/kg/日であった。NOAEL での投与 14 日の AUC0-tはレジパスビル

及びレジパスビル-B でそれぞれ 47.7 及び 39.4 µg∙h/mL であった。

8.1.5. その他の毒性試験

8.1.5.1 ヘアレスマウスでの光毒性試験


Crl:SKH1-hr ヘアレスマウス（雌 6 匹／群）に 0（溶媒）、22.3、74.5、224 及び 300 mg/kg のレ

ジパスビルを強制経口投与し光毒性を検討した。溶媒は 0.2%HPMC E4M（w/v）、0.2% ポリソル

ベート 20（v/v）、0.9%ベンジルアルコール（v/v）含有 RO 水とし、投与容量は 10 mL/kg とした。

投与 4 時間後、マウスに紫外（UV）光（100 J/m2）を 0.5 時間照射した。陽性対照である 8-メト

キシプソラレン（8-MOP）を別のマウス（雌 6 匹／群）に 50 mg/kg の用量で経口投与した。サテ

ライト群のマウス（雌 3 匹／群）に同様に投与して、投与 4 時間後の血漿中レジパスビル濃度を

測定し、曝露を確認した。UV 光照射したレジパスビル投与群及び溶媒対照群のいずれの動物に

も紅斑及び浮腫は観察されなかった。陽性対照群のマウスは光毒性と一致する皮膚所見を示した

ことにより、本試験の妥当性が証明された。

以上の結果から、レジパスビルは 300 mg/kg までの単回投与で、光毒性はないと結論した。

33


8.1.5.2 ラット 2 週間経口投与によるレジパスビル（フリー体）とレジパスビル

の比較毒性試験


ラットにレジパスビル（フリー体）とレジパスビルの同用量を 1 日 1 回 14 日間経

口投与し、毒性及び TK プロファイルを比較した。SD ラット（雌雄各 10 匹／群）に溶媒 1［45%PG

及び 15%Solutol® HS-15、40%RO 水（pH 2.5）（v/v/v）］、溶媒 2［0.2%HPMC E4M（w/v）、0.2% ポ

リソルベート 20（v/v）、0.9%ベンジルアルコール（v/v）含有 RO 水］、溶媒 1 で調製したレジパ

スビル 100 mg/kg/日並びに溶媒 2 で調製したレジパスビル 30 及び 100 mg/kg/日（レジ

パスビルとして）を投与容量 5 mL/kg で投与した。死亡、一般状態観察、体重及び摂餌量測定、

眼科学的検査、臨床検査、臓器重量測定、剖検及び病理組織学的検査を実施した。TK 評価のため

にサテライト群のラット（対照群雌雄各 3 匹及び投薬群雌雄各 9 匹／群）に同様に投与して、投

与 1 及び 14 日に血漿中薬物濃度を測定した。

レジパスビル及びレジパスビルのいずれについても、投薬に関連した死亡は認めら

れず、有害な一般症状も認められなかった。100 mg/kg/日のレジパスビル投与群の雄に認められた

体重及び摂餌量の一時的変化は、有害とはみなさなかった。臨床検査値の軽微な変動は、溶媒対

照及び両被験物質投与群に認められたことからいずれも有害とはみなされなかった。眼科学的検

査、臓器重量、剖検及び病理組織学的検査に投薬に関連した所見は観察されなかった。

レジパスビルの曝露量は、30～100 mg/kg/日で投与量比を下回る増加を示した。投

与 1 及び 14 日のいずれについても 100 mg/kg/日投与時の曝露量（雌雄合算 AUC0-24）は、レジパ

スビルと比べてレジパスビル投与で 2～3 倍高値であった。いずれの被験物質投与も

Cmax 及び AUC0-24に性差はなかった（2 倍未満）。

以上の結果より、ラットにおける 100 mg/kg/日のレジパスビル又は 30 及び 100 mg/kg/日のレジ

パスビルの 2 週間経口投与は良好に忍容された。したがって、レジパスビル又はレジ

パスビルの NOAEL は 100 mg/kg/日と判断した（投与 14 日の AUC0-24値は雌雄合算で

それぞれ 34.6 µg∙h/mL 及び 11.0 µg∙h/mL）。

34


9. 考察及び結論

9.1. 単回投与毒性

レジパスビルを用いた正式な単回投与毒性試験は実施していない。しかし、ラットで実施され

た単回投与薬物動態試験では（2.6.4.3.1.2.1.2.2 項）、臨床曝露量と比較して約 4 倍の AUC 曝露量

が得られた 600 mg/kg までのレジパスビル単回投与で、死亡は認められなかった。レジパスビル

／ソホスブビル併用による単回投与毒性試験は実施していないが、レジパスビル／ソホスブビル

の併用投与は、単味での急性毒性を増悪させないと考えられる。

9.2. 反復投与毒性

9.2.1. レジパスビル

レジパスビルはマウスでは 4 週間まで、ラットでは 26 週間まで、イヌでは 39 週間までの試験

で忍容性は良好であった。各動物種の最長投与期間試験における NOAEL でのレジパスビル曝露

量（雌雄合算）は、臨床曝露量と比較してマウス、ラット及びイヌでそれぞれ約 25 倍、7 倍及び

7 倍であった。ラット及びイヌ 2 週間投与試験並びに長期試験において、レジパスビル投与に関

連した唯一の特記所見は、一過性の体重増加抑制及び摂餌量低下であった。標的臓器は特定され

なかった。ラット 26 週間投与試験で臓器重量のごく軽度の変化（副腎及び肝臓）が観察されたが、

これに関連した病理組織学的検査所見は認められなかった。投薬に関連する可能性がある病理組

織学的検査所見は、ラット 26 週間投与試験の 100 mg/kg/日群雄における投与 13 週の中間屠殺動

物で観察された腸間膜リンパ節傍皮質領域での軽微なリンパ球増殖及び前立腺炎の発生頻度増加

に限られていた。前立腺炎はラットでは頻発すること及び第 26 週に同様な所見がないことから、

これらの所見は有害とはみなさなかった。イヌ 39 週間投与試験では、体重、摂餌量、眼科学的検

査、ECG、血圧、臨床検査、剖検、臓器重量及び病理組織学的検査において、レジパスビルに関

連した所見はなかった。

9.2.2. レジパスビル／ソホスブビル

レジパスビル／ソホスブビルの併用投与での反復投与試験は実施していない。レジパスビル及

びソホスブビルの単味をラット及びイヌに反復投与したとき、薬剤により標的臓器が異なった。

ソホスブビルの標的臓器は、心臓血管系（ラット）並びに消化管及び肝胆道系（イヌ）であり、

ラット及びイヌでの曝露量が、臨床曝露量の少なくともそれぞれ 16 倍及び 71 倍（ソホスブビル

の主要代謝物 GS-331007 に基づき算出）のときにのみ認められた。ラット及びイヌの長期毒性試

験における NOAEL では、GS-331007 曝露量は、臨床曝露量の少なくともそれぞれ 5 倍及び 7 倍

であった。レジパスビルについては、標的臓器毒性は認められなかった。ラット及びイヌにおけ

る長期反復投与毒性試験から求めた NOAEL におけるレジパスビル曝露量は、臨床曝露量の約 7

倍であった。

レジパスビルとソホスブビルとの間に臨床的に重要な薬物動態学的相互作用はないこと、標的

35


臓器が異なることから、レジパスビル／ソホスブビル併用投与により個々の薬剤の既知の毒性が

増悪することはないと考えられる。

9.3. 遺伝毒性

レジパスビルの遺伝毒性を in vitro 復帰突然変異試験、in vitro 染色体異常試験並びに in vivo ラ

ット骨髄小核試験で検討した。これらの試験では、突然変異誘発性や遺伝毒性を示す所見は観察

されなかった。

レジパスビル及びソホスブビルの遺伝毒性試験はいずれも陰性であった。この 2 つの薬剤の併

用が、それぞれの薬剤の単味の遺伝毒性プロファイルを変化させることはないと考えられる。

9.4. がん原性

ソホスブビルは、臨床曝露量を超える用量で実施した 2 年間のがん原性試験でがん原性を示さ

なかった。レジパスビルに遺伝毒性はなく、ラット及びイヌにおける長期反復投与試験にレジパ

スビル関連性の腫瘍性病変又は前がん病変は認められなかった。レジパスビルを用いたマウスが

ん原性試験では、臨床曝露量の 26 倍超の曝露量までがん原性を示さなかった。ラットがん原性試

験は進行中であるが、併用投与によってそれぞれの薬剤のがん原性の潜在性が変わることはない

と考えられ、毒性の増悪も考えられない。

9.5. 生殖発生毒性

9.5.1. レジパスビル

レジパスビルを用いたラット受胎能試験では、雌雄とも交配及び生殖能パラメーターに影響は

なかった。しかし、黄体数及び着床数が 100 mg/kg/日群で有意に低下した。ラット 26 週間試験の

投与 26 週のデータで比較したとき、ラット受胎能試験での雄及び雌の生殖能に関する NOAEL で

のレジパスビルのヒトに対する曝露量比は雄で約 7 倍、雌で 3 倍であった。ラット及びウサギ胚・

胎児発生試験では、最高用量（臨床曝露量のぞれぞれ 5 倍及び 2 倍の曝露量）まで催奇形性は認

められなかった。出生前及び出生後発生毒性試験では、母動物毒性及び F1出生児の体重に影響を

認める用量（臨床曝露量の約 4 倍の曝露量）で、F1の生存率、身体的発育、行動及び生殖能並び

に F2出生児の生存率に影響は認められず、出生前から授乳期間中、母動物を通じてレジパスビル

に曝露された F1動物の生殖能にも影響は認められなかった。レジパスビルを用いた放射性リガン

ドを用いた受容体結合試験において、エストロゲン受容体との注目すべき非特異的結合はなかっ

た（2.6.2.3.1.3 項）。さらに、マウス、ラット及びイヌにおける反復投与毒性試験において、雌の

生殖能に対するレジパスビルの直接作用を示唆するような生殖臓器の変化はなかった。

36


9.5.2. レジパスビル／ソホスブビル

レジパスビル及びソホスブビルはいずれも単味で実施した胚・胎児発生毒性試験において有害

作用を示さなかった。ソホスブビルは、ラットにおける受胎能や出生前後の発育に有害作用を示

さなかった。レジパスビルは雄の生殖能に有害作用を示さなかったが、雌では黄体数及び着床数

の軽度低下を認めた。両薬剤の併用によりそれぞれ単味の生殖発生毒性プロファイルが変化する

とは考えられない。

9.6. 局所刺激性

ソホスブビルは、イヌ反復経口投与毒性試験において 100 mg/kg/日群以上で投与に関連した嘔

吐及び軟便・下痢の発現頻度上昇を認めた。500 mg/kg/日群の雄 2 匹に消化管に病理組織学的変化

（それぞれ胃幽門部の粘膜固有層の小出血及び特発性出血性胃腸炎）を認めたが、嘔吐又は軟便・

下痢が認められた他のイヌの消化管では組織学的変化が認められていないことから、当該動物に

認められた剖検・組織学的所見と一般症状との関連性は明確でない。ソホスブビルに皮膚刺激性

はなく、眼に対しては重度の刺激性を示さず、また感作性の可能性も示さなかった。

レジパスビルの消化管に対する局所刺激性をレジパスビルの反復経口投与毒性試験で評価した

結果、ラット及びイヌにおいて顕著な所見はなかった。レジパスビルに皮膚刺激性はなく、眼に

対しては重度の刺激性を示さず、また感作性の可能性も示さなかった。

両薬剤の併用による局所刺激性試験は実施していない。

9.7. 代謝物・不純物

レジパスビルはヒトに特異的な代謝物はなく、レジパスビル代謝物を用いた独立した毒性試験

は実施しなかった。レジパスビル及びソホスブビルの代謝物は、それぞれの一般毒性試験で評価

した。本剤で予想される不純物及び分解生成物は単味の毒性試験により評価した。レジパスビル

及びソホスブビルの代謝物及び不純物の毒性評価において、危惧される毒性は観察されなかった。

また、本剤中に、さらなる評価を必要とするような新たな不純物及び分解物はない。

9.8. 光毒性

ソホスブビルは 290～700 nm の範囲内の光を吸収せず、ソホスブビルに光毒性を示す非臨床又

は臨床所見はなかった。したがって、ソホスブビルについては光毒性試験を実施する必要はない

と判断した。

レジパスビルの光毒性をヘアレスマウスで評価したところ、最高用量の 300 mg/kg までレジパ

スビルに光毒性を示唆する所見はなかった。[14C]レジパスビル由来の放射能が低濃度であるが有

色ラットのブドウ膜に長く存在したが、有色及び白色ラットの皮膚への分布に顕著な違いはなく、

これはレジパスビルがメラニン含有組織に選択的に結合することはないことを示唆している

（2.6.4.4.1.1.2 項）。レジパスビルを用いた反復投与毒性試験では眼科学的検査並びに眼及び視神

37


経の病理組織学的検査を実施している。ラット 26 週間試験及びイヌ 39 週間試験では、眼科学的

検査で視覚異常は認められず、レジパスビルの臨床曝露量の 7 倍までの曝露量で眼や視神経に病

理組織学的変化は認められなかった。光毒性試験に影響は認められず、長期反復投与毒性試験で

眼科学的変化がなかったことから、眼における光毒性の可能性は低いと考えられる。

したがって、レジパスビル／ソホスブビル併用による光毒性試験は実施していないが、本剤の

光毒性の可能性は低いと考えられる。

9.9. 結論

レジパスビル及びソホスブビルのいずれの薬剤も、包括的非臨床毒性プログラムを実施してお

り、このプログラムにはマウス（ソホスブビルについては 13 週まで、レジパスビルについては 4

週まで）、ラット（26 週まで）、イヌ（39 週まで）における反復経口投与毒性試験、in vitro 及び in

vivo 遺伝毒性試験、並びに一連の生殖発生毒性プログラムが含まれる。ソホスブビルはマウス及

びラットでの経口投与がん原性試験が完了しており、レジパスビルではマウス経口投与がん原性

試験が完了、ラットがん原性試験が進行中である。これらのプログラムは、次のような考察に基

づいて配合剤である本剤の安全性を裏付けるのに適切であると考えられる。

レジパスビルを用いた各種毒性試験でのNOAELにおけるレジパスビル曝露量とHCV感染患者

に本剤を 1 日 1 回投与したときの臨床曝露量（レジパスビルの AUCtau：8.53 µg∙h/mL、2.7.2.3.4.8

項）とを比較し、曝露量比を算出した。これらの試験から得られた曝露量比の結果を表 2.6.6- 3

に示す。いずれの試験においても NOAEL での曝露量比は 1.3 倍以上であった。また、ソホスブビ

ル又は GS-9851（ソホスブビル及びそのジアステレオマーである GS-491241 の混合物）を用いた

毒性試験の NOAEL における未変化体及び主要代謝物 GS-331007 の曝露量と、HCV 感染患者に本

剤を 1 日 1 回投与したときの臨床曝露量（ソホスブビル及び GS-331007 の AUCtau：それぞれ 1.38

µg∙h/mL 及び 12.5 µg∙h/mL、2.7.2.3.4.8 項）との曝露量比を算出して、表 2.6.6- 4 に示した。いずれ

の試験においても NOAEL での曝露量比は 1.7 倍以上であった。

レジパスビル及びソホスブビルそれぞれの毒性プロファイルは異なり、臨床的に重要な重複し

た毒性はない。ソホスブビルについては、主要な標的臓器は、忍容性不良の高用量で、かつ臨床

曝露量の何倍もの曝露量で行った 7 日間の短期試験において観察されたのみである。これらの毒

性は、今日までに実施されたソホスブビル単味又はレジパスビル／ソホスブビル併用による臨床

試験で観察されていない。レジパスビルを用いた反復投与試験では、標的臓器や懸念すべき毒性

所見は特定されていない。

ソホスブビルには遺伝毒性もがん原性もない。レジパスビルは、遺伝毒性はなく、マウスがん

原性試験でがん原性は認められなかった。レジパスビル／ソホスブビル併用によりそれぞれの薬

剤の遺伝毒性及びがん原性のプロファイルが変わることはないと考えられる。

レジパスビル及びソホスブビルはいずれも胚・胎児発生毒性試験において有害作用を示さなか

った。ソホスブビルは、ラットにおける受胎能や出生前及び出生後の発育に有害作用を示さなか

った。レジパスビルは雌ラットで黄体数及び着床数の低値を認めたが、雌雄の生殖能に有害作用

を示さなかった。出生前及び出生後の発生に関する試験では、レジパスビルは、母動物毒性を認

38


める用量でも、児動物の発育や受胎能に影響を示さなかった。両薬剤の配合は、個々の薬剤と比

べて、生殖発生毒性プロファイルを変化させないと予測される。

これら 2 つの薬剤間に臨床的に重要な薬物相互作用はなく、標的臓器プロファイルが異なるこ

とから、本剤の投与により個々の薬剤の既知の毒性が悪化することはないと考えられる。それぞ

れ単味で実施した非臨床試験で認められた毒性は、臨床では観察されていない。ICH ガイダンス

M3(R2)に基づくと本剤による非臨床安全性試験の実施は必要とされておらず、これまでに得られ

たデータは、本剤の申請効能である HCV 感染症の治療薬として好ましいベネフィット・リスクプ

ロファイルを裏付けるものである。

39


表 2.6.6- 3 レジパスビルの各種非臨床試験での NOAEL における曝露量と HCV 感染患者に本剤

（レジパスビル 90 mg 及びソホスブビル 400 mg 含有）を投与したときの曝露量に基づくレジパ

スビルの曝露量比

Type of study NOAEL (mg/kg) Analyte

Cmaxa (µg/mL) (M / F)

AUC0-tlasta

(µg∙h/mL) (M / F)

Exposure Marginb (M / F)

Repeat Dose Toxicity Studies 4-Week in Mice 300 LDV 26.2/13.4 271/164 32/19 2-Week in Rats 100 LDV 2.20/1.95 41.4/29.6 4.9/3.5 26-Week in Rats 100 LDV 3.47/2.99 60.8/51.2 7.1/6.0 2-Week in Dogs 10 LDV 2.41/2.33 37.4/35.4 4.4/4.2 39-Week in Dogs 30 LDV 2.98/5.14 41.3/80.3 4.8/9.4

Carcinogenicity Studies 26-Week Carcinogenicity Study in Mice

300 LDV 15.2/18.6 225/225 26/26

Reproductive Development studies Fertility and Early Embryonic Development Study in Rats c

30 e LDV 2.14/2.08 36.2/23.6 4.2/2.8 100 f LDV 3.47/2.99 60.8/51.2 7.1/6.0

Embryo-Fetal Development Study in Female Rats d

30 g LDV 1.40 18.2 2.1 100 h LDV 2.58 39.2 4.6

Embryo-Fetal Development Study in Female Rabbits

180 LDV 1.40 20.8 2.4

Prenatal and Postnatal Developmental Toxicity including Maternal Function in Rats

30i LDV 0.846 11.4 1.3

100j LDV 2.61 37.6 4.4

LDV=Ledipasvir, NOAEL = No Observed Adverse Effect Level; ND = Not Determined; M = Male; F = Female a Reported values were obtained at steady state, or as specified. b Based on ledipasvir clinical AUCtau at 90 mg (Ledipasvir = 8.53 µg∙h/mL) c TK data (week 26) from TX-256-2008 d TK data from TX-256-2011 e Female reproductive toxicity f Parental toxicity and male reproductive toxicity g Maternal toxicity h Development toxicity i Maternal toxicity and F1 neonatal/developmental toxicity j F1 neurobehavior, F1 reproductive toxicity, and F2 neonatal toxicity

40


表 2.6.6- 4 ソホスブビル又は GS-9851 の各種非臨床試験での NOAEL における曝露量と HCV

感染患者に本剤（レジパスビル 90 mg 及びソホスブビル 400 mg 含有）を投与したときの曝露量

に基づくソホスブビル及び GS-331007 の曝露量比

Type of study NOAEL (mg/kg) Analytea

Cmaxb (µg/mL) (M / F)

AUC0-tlastb

(µg∙h/mL) (M / F)

Exposure Marginc (M / F)

Single Dose Toxicity Studies Rats 1800 GS-331007 15.0 / 15.2 205 / 176 16/14 Repeat Dose Toxicity Studies 14-Day in Mice M: 500

F: 1500 Toxicokinetic evaluation was not conducted

13-Week in Mice M: 100 F: 300

GS-331007 3.59 /16.1 23.7 /161 1.9/13

7-Day in Rats 250 GS-331007 2.74 / 1.35 41.4 / 20.9 3.3/1.7 28-Day in Rats 500 GS-9851 0.008 / 0.030 0.007 / 0.068 ND GS-331007 3.94 / 3.91 55.0 / 59.3 4.4/4.7 13-Week in Rats 500 GS-331007 4.30 / 5.05 74.1 / 62.0 5.9/5.0 26-Week in Rats 500 GS-331007 3.79 / 4.73 66.5 / 65.5 5.3/5.2 7-Day in Dogs 150 GS-9851 4.59 / 5.04 9.88 / 13.7 ND GS-331007 8.99 / 5.79 120 / 91.6 9.6/7.3 28-Day in Dogs 100 GS-9851 4.48 / 10.4 14.0 / 22.4 ND GS-331007 3.54 / 6.01 39.7 / 68.6 3.2/5.5 13-Week in Dogs 100 Sofosbuvir 12.3 / 8.98 24.4 / 19.9 18/14 GS-331007 6.83 / 8.32 86.8 / 90.2 6.9/7.2 39-Week in Dogs 100 GS-331007 6.60 / 9.89 76.3 / 104 6.1/8.3 Carcinogenicity Mice 200/600 GS-331007 5.15/30.5 48.0/214 3.8/17 Rats 750 GS-331007 7.60/9.32 96.6/125 7.7/10 Reproductive Development studies Fertility and Early Embryonic Development Study in Rats

500 Toxicokinetic evaluation was not conducted

Embryo-Fetal Development Study in Female Rats

500 GS-331007 3.50 72.1 5.8

Embryo-Fetal Development Study in Female Rabbits

300 Sofosbuvir 1.89 8.66 6.3 GS-331007 22.2 200 16

Prenatal and Postnatal Developmental Toxicity including Maternal Function in Rats

500 GS-331007 6.73 83.3 6.7

All studies listed in this table were submitted in the CTD for SOVALDI ® Tablets 400 mg. This table was modified to evaluate the exposure margin based on the clinical exposure after administration of Ledipasvir/Sofosbuvir combination. NOAEL = No Observed Adverse Effect Level; ND = Not Determined; M = Male; F = Female a GS-9851 and/or Sofosbuvir toxicokinetics were not determined for most rodent studies due to instability in rodent

plasma b Reported values were obtained at steady state, or as specified. c Based on Sofosbuvir and GS-331007 clinical AUCtau at 400 mg (Sofosbuvir =1.38 µg∙h/mL; GS-331007 =

12.5 µg∙h/mL)

41


10. 図表

表は文中に挿入した。

42


11. 参考文献

1 Pietschmann T, Lohmann V, Rutter G, Kurpanek K, Bartenschlager R. Characterization of cell lines carrying self-replicating hepatitis C virus RNAs. J Virol 2001;75 (3):1252-64. (4.3.6)

2 Tellinghuisen TL, Foss KL, Treadaway J. Regulation of hepatitis C virion production via phosphorylation of the NS5A protein. PLoS pathogens 2008;4 (3):e1000032. (4.3.8)

3 Hughes M, Griffin S, Harris M. Domain III of NS5A contributes to both RNA replication and assembly of hepatitis C virus particles. J Gen Virol 2009;90 (Pt 6):1329-34. (4.3.3)

4 Macdonald A, Harris M. Hepatitis C virus NS5A: tales of a promiscuous protein. J Gen Virol 2004;85 (Pt 9):2485-502. (4.3.5)

5 Freundt EC, Lenardo MJ. Interfering with interferons: Hepatitis C virus counters innate immunity. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102 (49):17539-40. (4.3.1)

43

ハーボニー®配合錠

第 2 部（モジュール 2）：CTD の概要（サマリー）

2.6.7 毒性試験概要表

ギリアド・サイエンシズ株式会社

2.6.7 毒性試験概要表ハーボニー®配合錠

目次

2.6.7.1 毒性試験一覧表：一覧表 ......................................................................................................... 4

2.6.7.2 トキシコキネティクストキシコキネティクス試験の一覧表 ............................................... 7

2.6.7.3 トキシコキネティクス：トキシコキネティクス試験成績の一覧表 ................................... 8

2.6.7.4 毒性試験：使用したロット ..................................................................................................... 9

2.6.7.5 単回投与毒性試験 ....................................................................................................................... 11

2.6.7.6 反復投与毒性試験：重要な試験以外の試験 ......................................................................... 12

2.6.7.7 反復投与毒性試験：重要な試験 ............................................................................................ 13

2.6.7.7.1 マウス 4 週間経口投与毒性試験 ............................................................................................. 13

2.6.7.7.2 ラット 2 週間経口投与毒性試験 ............................................................................................. 15

2.6.7.7.3 ラット 26 週間経口投与毒性試験 ........................................................................................... 18

2.6.7.7.4 イヌ 2 週間経口投与毒性試験 ................................................................................................. 23

2.6.7.7.5 イヌ 39 週間経口投与毒性試験 ............................................................................................... 26

2.6.7.8 遺伝毒性試験: In Vitro ................................................................................................................. 28

2.6.7.8.1 細菌を用いる復帰突然変異試験 ............................................................................................. 28

2.6.7.8.2 哺乳類細胞を用いる染色体異常試験 ..................................................................................... 30

2.6.7.9 遺伝毒性試験: In Vivo ................................................................................................................. 32

2.6.7.9.1 In Vivo 小核試験 ........................................................................................................................ 32

2.6.7.10 がん原性試験：重要な試験以外の試験 .................................................................................. 34

2.6.7.11 がん原性試験 ............................................................................................................................... 35

2.6.7.12 生殖発生毒性試験：重要な試験以外の試験 .......................................................................... 38

2.6.7.13 生殖発生毒性試験：受胎能及び初期胚発生に関する試験 ................................................... 39

2.6.7.14 生殖発生毒性試験：胚・胎児発生に関する試験 ................................................................... 43

2.6.7.14.1 ラット胚・胎児発生に関する試験 ......................................................................................... 43

2.6.7.14.2 ウサギ胚・胎児発生に関する試験 ......................................................................................... 47

2.6.7.15 生殖発生毒性試験：出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試

験 ................................................................................................................................................... 50

2


2.6.7.16 新生児を用いた試験 ................................................................................................................... 55

2.6.7.17 局所刺激性試験 ........................................................................................................................... 56

2.6.7.18 その他の毒性試験 ....................................................................................................................... 57

3


2.6.7 毒性試験概要表

2.6.7.1 毒性試験一覧表：一覧表

Test Article: Ledipasvir Type of Study/Species/Strain

Method of Administration

Duration of Dosing Dose (mg/kg)a GLPb Testing Facility

Gilead Study No. (CRO Study No.)

Location

Repeat-Dose Toxicity

Mouse/Model 001178-W (Wild-Type), CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic

Oral Gavage 4 weeks 20, 60, 300 Yes US

TX-256-2018 (8265711)

4.2.3.2.1

Rat/Crl:CD® (SD) Oral Gavage 2 weeks 10, 30, 100 Yes US

TX-256-2003 (8216894)

4.2.3.2.2

Rat/Crl:CD® (SD) Oral Gavage 26 weeks 10, 30, 100 Yes US

TX-256-2008 (8229607)

4.2.3.2.3

Dog/Beagle Oral Gavage 2 weeks 3, 10, 30 Yes US

TX-256-2004 (8216895)

4.2.3.2.4

Dog/Beagle Oral Gavage 39 weeks 3, 10, 30 Yes US

TX-256-2009 (8229608)

4.2.3.2.5

Genotoxicity

In Vitro/S. typhimurium, E. coli

In Vitro 52 ± 4 hours 10 - 5000 µg/plate

Yes US

TX-256-2005 (8216885)

4.2.3.3.1.1

In Vitro/Human peripheral blood lymphocytes

In Vitro 3 hours (± S9) or 22 hours (–

S9 only)

Initial assay: 47.1- 96.0 µg/mL

Confirmatory assay: 90-150

µg/mL

Yes US

TX-256-2006 (8216914)

4.2.3.3.1.2

In Vivo Micronucleus/Rat/ Crl:CD® (SD)

Oral Gavage Single Dose 112.5, 225, 450 Yes US

TX-256-2007 (8216886)

4.2.3.3.2.1

4


2.6.7.1 毒性試験一覧表：一覧表（続き）

Type of Study/Species/Strain




Location

Carcinogenicity

Mouse/ RasH2 [001178-T (hemizygous), CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic]

Oral Gavage 26 weeks 20, 60, 300 Yes US

TX-256-2019 (8278278)

4.2.3.4.1.1

Rat/Hsd: SD Oral Gavage 104 weeks 10, 30, 100 (M); 3, 10, 30 (F)

Yes US

TX-256-2016 (8253526)

Study ongoing

-

Reproductive and Developmental Toxicity

Fertility/Rat/Crl:CD® (SD) Oral Gavage M: 28 days prior to mating and throughout the mating phase;

F: 15 days prior to mating

through GD 7

10, 30, 100 Yes US

TX-256-2017 (20018530)

4.2.3.5.1.1

Embryo-fetal development dose range finding/Rat/ Crl:CD® (SD)

Oral Gavage GD 6–17 10, 30, 100 Yes US

TX-256-2011 (8231641)

4.2.3.5.2.1

Embryo-fetal development/Rat/ Crl:CD® (SD)


TX-256-2012 (8236377)

4.2.3.5.2.2

Embryo-fetal development dose range finding/Rabbit/New Zealand White (NZW)

Oral Gavage GD 7–20 30, 60, 100, 300 Yes US

TX-256-2010 (8231635)

4.2.3.5.2.3

Embryo-fetal development/ Rabbit/NZW


TX-256-2013 (8236376)

4.2.3.5.2.4

5


2.6.7.1 毒性試験一覧表：一覧表（続き）

Type of Study/Species/Strain




Location

Prenatal and postnatal developmental toxicity/Rat/ Crl:CD® (SD)

Oral Gavage F0 females: GD 6–LD 20

10, 30, 100 Yes , US

TX-256-2020 (604030)

4.2.3.5.3.1

Local Tolerance

In Vitro/Bovine corneal opacity and permeability (BCOP)

In Vitro Opacity = 4 hours;

Permeability = 90 min

20% w/w Yes , ,

UK

TX-256-2029 (EUN0021)

4.2.3.6.1

Dermal irritation/ Rabbit/NZW

Dermal 4 hours 0.5 g/ 25 mm × 25 mm

Yes ,

, UK

TX-256-2030 (EUN0020)

4.2.3.6.2

Other Toxicity Studies

Antigenicity/Local lymph node assay (LLNA)/ Mouse/CBA/Ca

Topical 3 days 10, 25, 50% (w/v)

Yes , ,

UK

TX-256-2031 (EUN0022)

4.2.3.7.1.1

Impurities/Rat/ Crl:CD® (SD)

Oral Gavage 2 weeks 30, 100 Yes , US

TX-256-2035 (8286517)

4.2.3.7.6.1

In vivo phototox/Mouse/ Crl:SKH1-hr

Oral Gavage Single dose 22.3 c, 74.5 c, 224c, 300

Yes , US

TX-256-2015 (20011036)

4.2.3.7.7.1

Bridging/Rat/Crl:CD® (SD) Oral Gavage 2 weeks 30, 100 Yes , US

TX-256-2014 (8238694)

4.2.3.7.7.2

F = female; GD = gestation day; LD = lactation day; M = male a: Unless otherwise specified for repeat-dose toxicity, NOAEL is underlined. b: ‘Yes’, indicates study includes a GLP compliance statement. c: Formulations were incorrectly prepared due to use of an incorrect correction factor; intended doses were 30, 100, and 300 mg/kg.

6


2.6.7.2 トキシコキネティクストキシコキネティクス試験の一覧表

Test Article: Ledipasvir

Type of Study Test System Method of

Administration Dose

(mg/kg) GLPa Gilead Study No. (CRO Study No.)

4-Week Repeat Dose Tg Mouse Oral Gavage 0, 20, 60, 300 Yes TX-256-2018 (8265711) 2-Week Repeat Dose Rat Oral Gavage 0, 10, 30, 100 Yes TX-256-2003 (8216894) 26-Week Repeat Dose Rat Oral Gavage 0, 10, 30, 100 Yes TX-256-2008 (8229607) 2-Week Repeat Dose Dog Oral Gavage 0, 3, 10, 30 Yes TX-256-2004 (8216895) 39-Week Repeat Dose Dog Oral Gavage 0, 3, 10, 30 Yes TX-256-2009 (8229608) Carcinogenicity Tg Mouse Oral Gavage 0, 0, 20, 60, 300 Yes TX-256-2019 (8278278) Dose Range-Finding Embryo-Fetal Development

Rat Oral Gavage 0, 10, 30, 100 Yes TX-256-2011 (8231641)

Dose Range-Finding Embryo-Fetal Development

Rabbit Oral Gavage 0, 30, 60, 100, 300 Yes TX-256-2010 (8231635)

Embryo-Fetal Development Rabbit Oral Gavage 0, 30, 60, 180 Yes TX-256-2013 (8236376) Prenatal and Postnatal Development Rat Oral Gavage 0, 10, 30, 100 Yes TX-256-2020 (604030) 2-Week Repeat Dose Impurity Qualification

Rat Oral Gavage 0, 30, 100 Yes TX-256-2035 (8286517)

2-Week Repeat Dose Bridging Rat Oral Gavage 0, 30, 100 Yes TX-256-2014 (8238694) a: ‘Yes’, indicates study includes a GLP compliance statement.

7


2.6.7.3 トキシコキネティクス：トキシコキネティクス試験成績の一覧表


Steady State Ledipasvir AUC0-24 (µg•h/mL)

Species Mouse Rat Dog Rabbit

Method of Administration Oral Gavage Oral Gavage Oral Gavage Oral

Gavage

Gender Male Female Male Female Male Female Female

Dose (mg/kg/day)

3 10.2c, 5.67d 8.1c, 8.25d 10 6.5a, 16.1b 4.5a, 7.70b, 3.03/2.62f,

4.88j 37.4c, 15.9d 35.4c, 32.2d

20 38.4i, 58.1l 16.7i, 32.2l 30 18.2a, 36.2b, NA/17.2g,

NA/5.20h 12.1a, 23.6b, 8.58/11.4f,

NA/3.33h, 18.2j 121c, 41.3d 75.4c, 80.3d 6.85k

60 83.6i, 124l 56.3i, 66.2l 19.4k 100 34.5a, 60.8b, 47.7/39.4g,

42.5/11.4h 25.1a, 51.2b, 22.2/37.6f,

26.8/10.5h, 39.2j 24.9k

180 20.8e 300 271i, 225l 164i, 225l 57.3k

GD = Gestation Day; LD = Lactation Day a: Study TX-256-2003 (Day 14) b: Study TX-256-2008 (Week 26) c: Study TX-256-2004 (Day 14) d: Study TX-256-2009 (Week 39) e: Study TX-256-2013 (GD 20) f: Study TX-256-2020 (GD 6/LD 10)

g: Study TX-256-2035 (Day 14; Lot / Lot ) h: Study TX-256-2014 (Day 14; Lot /Lot ) i: Study TX-256-2018 (Day 28) j: Study TX-256-2011 (GD 17) k: Study TX-256-2010 (GD 20) l: Study TX-256-2019 (Week 26)

8


2.6.7.4 毒性試験：使用したロット


Batch No. Purity (%)

Observed Impurities (%)a

Type of Study

Proposed Spec: 97.5- 102.5

≤ ≤ ≤

≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤

90.8 0.54 n.d. n.d. n.d. n.d. 0.05 0.11 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 0.17 Safety Pharmacology; Repeat Tox; In Vivo Genetic Toxd

96.6 0.28 n.d. 0.11 n.d. n.d. 0.09 0.06 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 0.06 In Vitro Genetic Toxe

100.0 n.d. n.d. 0.12 n.d. n.d. 0.05 0.07 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. Repeat Tox; Repro Tox; Bridging Toxf

99.2 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 0.22 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. Bridging Tox; In vivo PhotoToxg

99.4 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 0.13 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. Worker Safetyh

99.3 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 0.11 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. Impurities Repeat Tox; Repro Tox; Carcinogenicity i

9

* 新薬承認情報提供時に置き換え

類緑物質Ｈ＊

類緑物質Ｉ＊

類緑物質Ｅ＊

類緑物質Ｆ＊

類緑物質Ｊ＊

類緑物質Ｇ＊

類緑物質Ｋ＊

類緑物質Ｄ＊

類緑物質Ｌ＊

類緑物質Ｍ＊

類緑物質Ｎ＊

類緑物質Ｏ＊

類緑物質Ｐ＊

類緑物質Ｃ＊

類緑物質Ａ＊

類緑物質Ｂ＊


2.6.7.4 毒性試験：使用したロット（続き）


Batch No. Purity (%)

Observed Impurities (%)a

Type of Study

Proposed Spec: 97.5- 102.5

≤ ≤ ≤

≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤ ≤

99.5 n.d. n.d. n.d. n.d. 0.09 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. 0.05 Repro Tox; Repeat Toxj

99.6 n.d. n.d. n.d. n.d. 0.08 n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. n.d. Repro Tox; Repeat Toxj 98.3 0.10 0.10 0.20 0.11 0.08 0.11 0.08 0.07 0.10 0.11 0.03 0.10 0.07 0.18 Impurities Repeat Toxi

n.d. = none detected or level is below 0.05% a: Purity is determined by external standard analysis and impurities measured by HPLC area normalization. b: For lots and , only compound was present. For sample the percentage of was 0.12% as determined using an alternative method

capable of resolving it from which was spiked into the sample. The proposed specification for is 0.50% and is 0.25%. c: The percentages of diastereomers and are reported based on separate method that provides resolution for each component for sample

. For all other samples, the combined peak area of and is reported as these compounds co-elute in the analysis method. d: Used for study numbers PC-256-2005, PC-256-2006, PC-256-2007, PC-256-2008, TX-256-2003, TX-256-2004, TX-256-2007. e: Used for study numbers TX-256-2005, TX-256-2006. f: Used for study numbers TX-256-2008, TX-256-2009, TX-256-2010, TX-256-2011, TX-256-2012, TX-256-2013, TX-256-2014. g: Used for study numbers TX-256-2014, TX-256-2015. h: Used for study numbers TX-256-2029, TX-256-2030, TX-256-2031. i: Used for study numbers TX-256-2020, TX-256-2035, TX-256-2019. j: Used for study number TX-256-2017, TX-256-2018. The sample was re-analyzed prior to start of TX-256-2018; both datasets are provided. k: Lot was prepared by directly spiking authentic samples of 15 potential impurities into Ledipasvir drug substance. A different analytical method was used in the analysis of this

sample, allowing for direct measurement of several components as noted below.

10 * 新薬承認情報提供時に置き換え

類緑物質Ｈ＊

類緑物質Ｉ＊

類緑物質Ｅ＊

類緑物質Ｆ＊

類緑物質Ｊ＊

類緑物質Ｇ＊

類緑物質Ｋ＊

類緑物質Ｄ＊

類緑物質Ｌ＊

類緑物質Ｍ＊

類緑物質Ｎ＊

類緑物質Ｏ＊

類緑物質Ｐ＊

類緑物質Ａ＊

類緑物質Ｂ＊

類緑物質Ｃ＊

類緑物質E*

類緑物質F*

類緑物質P* 類緑物質C* 類緑物質A* 類緑物質B*

類緑物質C* 類緑物質A* 類緑物質B*

類緑物質E*

類緑物質E* 類緑物質F*


2.6.7.5 単回投与毒性試験

該当する試験なし

11


2.6.7.6 反復投与毒性試験：重要な試験以外の試験


12


2.6.7.7 反復投与毒性試験：重要な試験

2.6.7.7.1 マウス 4 週間経口投与毒性試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: 4-Week Oral Gavage Dose Range-Finding Toxicity and Toxicokinetic Study with GS-5885 in Model

001178-W (Wild-Type), CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic Mice Gilead Study No. TX-256-2018 CRO Study No. 8265711

Species/Strain: Mouse / Model 001178-W (wild type), CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic

Duration of Dosing: 4 Weeks (29 Days) Location in CTD: 4.2.3.2.1

Initial Age: 7 weeks Duration of Postdose: Not applicable (NA) GLP Compliance: yes Date of First Dose: 05 July 2012 Method of Administration: Oral Gavage Lot Number: Vehicle: 0.2% Tween 20, 0.2% hydroxypropyl methylcellulose (Methocel, E4M Premium), and 0.9% benzyl alcohol in RO water Special Features: NA No Observed Adverse Effect Level: 300 mg/kg/day

Daily Dose (mg/kg/day) 0 (Control) 20 60 300

Gender:Number of Animalsa M: 10 (6) F: 10 (6) M: 10 (39) F: 10 (39) M: 10 (39) F: 10 (39) M: 10 (39) F: 10 (39)

Toxicokinetics: AUC(0-24) (µg∙h/mL) Day 1 ND ND 48.7 28.0 85.0 69.2 198 161 Day 28 ND ND 38.4 16.7 83.6 56.3 271 164

Toxicokinetics: Cmax (µg/mL) Day 1 ND ND 4.06 2.60 6.70 6.55 13.4 11.0 Day 28 ND ND 3.77 2.61 6.71 7.54 26.2 13.4

13


2.6.7.7.1 マウス 4 週間経口投与毒性試験（続き） TX-256-2018


Gender:Number of Animalsa M: 10 (6) F: 10 (6) M: 10 (39) F: 10 (39) M: 10 (39) F: 10 (39) M: 10 (39) F: 10 (39)

Noteworthy Findings Died or sacrificed moribund b 0 0 0 0 0 0 0 0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Body Weight - Day 29 (%)c 26.8 g – – – – – ↑5% – Body Weight Change - Days 1 to 29 (%)c 2.2 g – – – – – ↑77%* – Food Consumption - Days 8 to 15 (%)c 28.0 g – – – – – ↑18%* – Food Consumption - Days 22 to 29 (%)c 28.1 g – – – – – ↑15% – Hematology No Treatment-Related Findings Serum Chemistry

Alkaline Phosphatase (U/L) c - Day 30 77 118 - - - - ↑52%* ↑19%* Organ Weights

Absolute Liver/Gall Bladder Weight c 1.35 – – – – – ↑23%* – Liver/Gall Bladder to Body Weight Ratio c 5.26 – – – – – ↑15% – Liver/Gall Bladder to Brain Weight Ratio c 281.3 – – – – – ↑21%* – Absolute Seminal Vesicle Weight c 0.292 – – – – – ↓19%* – Seminal Vesicle to Body Weight Ratio c 1.14 – – – – – ↓25%* – Seminal Vesicle to Brain Weight Ratio c 61.0 – – – – – ↓21%* –

Macroscopic Observations No Treatment-Related Findings Microscopic Observations No Treatment-Related Findings

F = female; M = male; ND = none detected a: Toxicokinetic evaluation conducted on satellite animals designated in ( ). b: One 60 mg/kg/day toxicokinetic female was found dead on Day 15; this death was considered incidental. c: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. − = Comparable to control animals or no treatment-related findings; ↑ = increased; ↓ = decreased; * = p ≤ 0.05 (Dunnett’s test)

14


2.6.7.7.2 ラット 2 週間経口投与毒性試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: 2-Week Oral Gavage Toxicity and Toxicokinetic Study with GS-5885 in Rats Gilead Sciences Ref. No. TX-256-2003

CRO Study No. 8216894 Species/Strain: Rat/Crl:CD® (SD) Duration of Dosing: Daily through Day 14 Location in CTD: 4.2.3.2.2 Initial Age: 6 to 8 weeks old Duration of Postdose: NA GLP Compliance: Yes Date of First Dose: 03 December 2009 Method of Administration: Oral gavage Lot Number: Vehicle / Formulation: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH-adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid) (v/v/v)

Special Features: Hepatic Microsomal Enzyme Analysis, Urine Chemistry No Observed Adverse Effect Level: 100 mg/kg/day


Gender: Number of Animals a M: 10 (3) F: 10 (3) M: 10 (9) F: 10 (9) M: 10 (9) F: 10 (9) M: 10 (9) F: 10 (9)


Toxicokinetics: AUC0-24 (µg·h/mL) Day 1 ND ND 4.6 3.7 12.4 9.0 23.2 17.1 Day 14 ND ND 6.5 4.5 18.2 12.1 34.5 25.1

15


2.6.7.7.2 ラット 2 週間経口投与毒性試験（続き） TX-256-2003



Noteworthy Findings Died or sacrificed moribund 0 0 0 0 0 0 0 0 Body Weight No Treatment-Related Findings Body Weight Changeb

Day 1 to 8 47 – – – – – 32* – Day 8 to 14 36 – – – – – 37 –

Food Consumption No Treatment-Related Findings Clinical Observations No Treatment-Related Findings Ophthalmoscopy No Treatment-Related Findings

16





Hematology No Treatment-Related Findings Coagulation No Treatment-Related Findings Clinical Chemistryc

Cholesterol (mg/dL) 56 65 － – – ↑1.22x* ↑1.32x* ↑1.23x*

Urinalysis/ Urine Chemistry No Treatment-Related Findings Organ Weights No Treatment-Related Findings Macroscopic Observations No Treatment-Related Findings Microscopic Observations No Treatment-Related Findings Hepatic Microsomal Enzyme Analysis No Treatment-Related Findings

↑ = increased; – = comparable to control animals or no treatment-related findings; F = female; M = male; ND = none detected a: Toxicokinetic evaluation conducted on satellite animals designated in ( ). b: Actual group means (grams) are shown. c: For controls, group means are shown. For treated groups, fold change (x) from controls are shown. Statistical significance is based on actual data. * = p ≤ 0.05 (Dunnett’s test)

17


2.6.7.7.3 ラット 26 週間経口投与毒性試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: 26-Week Oral Gavage Toxicity and Toxicokinetic Study of GS-5885 in Rats with a 13-Week Interim

Necropsy and a 4-Week Recovery Phase Gilead Study No. TX-256-2008 CRO Study No. 8229607

Species/Strain: Rat / Crl:CD® (SD) Duration of Dosing: 26 Weeks Location in CTD: 4.2.3.2.3 Initial Age: 6 to 7 Weeks Duration of Postdose: 4 Weeks GLP Compliance: Yes Date of First Dose: 14 July 2010 Method of Administration: Oral Gavage Lot Number: Vehicle: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH-adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid)( v/v/v) No Observed Adverse Effect Level: 100 mg/kg/day Special Features: none

Dose (mg/kg/day) 0 (Control) 10 30 100

Gender: Number of Animals a

13-week interim/26-week + recovery M: 10/10

+5 (3) F: 10/10 +5 (3)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +5 (9)

F: 10/10 +5 (9)

Toxicokinetics: Cmax (µg/mL) Day 1 ND ND 0.408 0.209 0.917 0.765 1.70 1.32 Week 13 ND ND 0.936 0.444 1.72 1.53 3.90 2.74 Week 26 ND ND 1.01 0.669 2.14 2.08 3.47 2.99

Toxicokinetics: AUC0-24 (µg·h/mL) Day 1 ND ND 4.67 2.70 12.6 10.4 26.8 19.3 Week 13 ND ND 11.7 5.26 26.9 16.8 51.1 43.7 Week 26 ND ND 16.1 7.70 36.2 23.6 60.8 51.2

18






+5 (3) F: 10/10 +5 (3)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +5 (9)

F: 10/10 +5 (9)

Noteworthy Findings: Dosing Phase Died or sacrificed moribund 0 0 0 0 0 0 0 4b Clinical Observationsc

Animal Struggled Excessively 0 2 0 0 0 2 0 8 Struggled During Dosing 1 0 0 0 0 0 1 7 Red Haircoat, Mouth 0 0 0 0 0 0 0 1 Red Haircoat, Nose 0 0 0 0 0 0 1 6 Red Haircoat, Perioral 0 0 1 0 7 1 10 6

Mean Body Weightd (g) Day 8 313 221 0.0 -0.9 -1.9 0.5 -8.0* -2.3 Day 43 476 297 0.0 -0.7 -1.7 0.0 -6.1* 3.0 Day 85 570 338 -0.4 -0.6 -2.5 0.3 -7.0* 2.1 Day 92 581 342 -0.3 -0.3 -2.6 1.5 -7.4* 2.6 Day 183 671 408 3.6 -2.7 -4.8 -1.0 -8.8 2.9

Mean Body Weight Change (g) Days 1-8 49 28 49 26 46 28 27* 20* Days 8-15 43 21 43 24 40 25 46 28* Days 78-85 11 1 12 3 8 1 4* 5 Days 1-183 408 212 431 205 381 215 341* 225

19






+5 (3) F: 10/10 +5 (3)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +5 (9)

F: 10/10 +5 (9)

Mean Food Consumptiond (g) Days 1-7 199 145 -1.5 0.0 -8.0 +1.4 -26.1* -13.1*

Ophthalmic Examinations No Treatment-Related Findings Hematologyd

Reticulocyte count (E3/uL): Day 93 229.1 175.1 -23.1* -7.0 -17.7 -16.2 -30.4* -16.5 Reticulocyte count (E3/uL): Day 184 193.9 144.1 16.9 -3.8 -11.2 -3.5 -25.5* -5.1 Neutrophil count (E3/uL): Day 184 1.76 0.88 27.8 10.2 40.9 19.3 33.5 67.0*

Clinical Chemistryd Glucose (mg/dL): Day 184 120 110 -4.2 -10.9* -5.0 -6.4 -10.0* -7.3 Urea nitrogen (mg/dL): Day 93 15 20 -6.7 -15.0 0 -15.0 -13.3 -25.0* Urea nitrogen (mg/dL): Day 184 14 17 -7.1 -11.8 -7.1 0 -14.3 -17.6* Globulin (g/dL): Day 184 2.9 2.7 6.9 0 6.9 3.7 6.9 11.1* Albumin/Globulin ratio: Day 93 1.8 2.4 -5.6 -8.3 -11.1 -12.5* -11.1 -12.5* Albumin/Globulin ratio: Day 184 1.6 2.2 -6.3 0 -6.3 -4.5 -6.3 -13.6*

20






+5 (3) F: 10/10 +5 (3)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +5 (9)

F: 10/10 +5 (9)

Cholesterol (mg/dL): Day 184 101 101 24.8 21.8 5.9 12.9 0 31.7* Triglycerides (mg/dL): Day 184 167 88 9.6 36.4 26.3 56.8 -16.8 120.5* Calcium (mg/dL): Day 184 12.1 12.4 0 1.6 -0.8 0 -0.8 4.0*

Coagulation No Treatment-Related Findings Urinalysis No Treatment-Related Findings Organ Weightsd (Terminal Sacrifice)

Liver (g) 18.2 10.2 6.86 -1.79 5.48 9.95 -4.04 22.1* Liver/Body Weight 2.87 2.63 2.28 2.34 9.69 11.8* 5.42 17.5* Liver/Brain Weight 783.9 479.7 9.65 -1.16 5.29 10.8 -5.18 22.1

Adrenal (g) 0.0548 0.0678 2.74 -3.24 3.65 14.3 13.0 28.3* Adrenal/Body Weight 0.0088 0.0177 -3.41 1.69 7.95 16.4 23.9* 25.4*

Macroscopic Observations No Treatment-Related Findings Histopathology (Interim Sacrifice)

Mesenteric Lymph Node: Paracortical Lymphocyte Hyperplasia

0 1 0 3 0 3 4 2

Prostate: Inflammation 1 NA 1 NA 2 NA 4 NA

21






+5 (3) F: 10/10 +5 (3)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +0 (9)

F: 10/10 +0 (9)

M: 10/10 +5 (9)

F: 10/10 +5 (9)

Recovery Phase

Clinical Observations No Treatment-Related Findings Mean Body Weight (g) No Treatment-Related Findings Mean Body Weight Change (g) No Treatment-Related Findings Mean Food Consumption No Treatment-Related Findings Clinical Pathologyd

Reticulocyte count (E3/uL): Day 29 257 142 NA NA NA NA -32.1* 1.40 Cholesterol (mg/dL): Day 29 127 122 NA NA NA NA -3.94 37.7

Organ Weightsd Adrenal/Body Weight 0.0082 0.0180 NA NA NA NA 36.6* 6.67

Macroscopic Observations No Treatment-Related Findings Histopathology No Treatment-Related Findings.

F = female; M = male; NA = not applicable; ND = none detected a: 10 animals/sex/group for the interim and terminal phase sacrifices and 5 animals/sex for the recovery phase sacrifice in the control and high dose groups Toxicokinetic evaluation

conducted on satellite animals designated in ( ). b: Four toxicity females given 100 mg/kg/day were sacrificed at an unscheduled interval. Two were gavage-related and two were considered undetermined and of uncertain relationship to

the test article due to lack of any correlative anatomic or clinical pathology findings. c: Indicates the number of animals for which a condition was observed without regard to the specific nature, severity, reversibility, number of incidences/animal, or the length of time the

condition persisted. d: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. * = p ≤ 0.05 (Dunnett’s or two-sample t-test)

22


2.6.7.7.4 イヌ 2 週間経口投与毒性試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: 2-Week Oral Gavage Toxicity and Toxicokinetic Study with GS-5885 in Beagle Dogs Gilead Sciences Ref. No. TX-256-2004

CRO Study No. 8216895 Species/Strain: Beagle dogs Duration of Dosing: Daily through Day 15 Location in CTD: 4.2.3.2.4 Initial Age: 7 to 8 months old Duration of Postdose: Not applicable GLP Compliance: Yes Date of First Dose: 01 December 2009 Method of Administration: Oral gavage Lot Number: Vehicle / Formulation: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH-adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid) (v/v/v) Special Features: Hepatic Microsomal Enzyme Analysis, Urine Chemistry No Observed Adverse Effect Level: 10 mg/kg/day


Gender: Number of Animals M:3 F:3 M:3 F:3 M:3 F:3 M:3 F:3


Toxicokinetics: AUC0-24 (µg·h/mL) Day 1 ND ND 7.8 8.1 21.6 24.6 67.6 50.6 Day 14 ND ND 10.2 8.1 37.4 35.4 121 75.4

23


2.6.7.7.4 イヌ 2 週間経口投与毒性試験（続き） TX-256-2004



Noteworthy Findings Died or sacrificed moribund 0 0 0 0 0 0 0 0 Body Weight No Treatment-Related Findings Body Weight Changea Day 1 to 8 0.0 -0.1 – – – – -0.8* -0.3 Day 8 to 11 0.2 0.3 – – – – 0.6* 0.6* Day 11 to 15 -0.1 -0.1 – – – – 0.1 0.0 Food Consumptionb,c Day 1 to 8 1588 1514 – – – – -53.7 -7.0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Ophthalmoscopy No Treatment-Related Findings Electrocardiography No Treatment-Related Findings

24





Hematology No Treatment-Related Findings Coagulation No Treatment-Related Findings Clinical Chemistry (Day 16 of the dosing phase) d

Cholesterol (mg/dL) 170 134 – – – – ↑1.3x* ↑1.5x* Urinalysis/Urine Chemistry No Treatment-Related Findings Organ Weights No Treatment-Related Findings Macroscopic Observations No Treatment-Related Findings Microscopic Observations No Treatment-Related Findings Hepatic Microsomal Enzyme Analysis No Treatment-Related Findings

↑ = increased; – = Comparable to control animals or no treatment-related findings; F = female; M = male; ND = none detected a: Actual group means (kilograms) are shown. b: For controls, group means (grams) are shown. For treated groups, percent change from controls is shown. Statistical significance is based on actual data. c: Food consumption was not assessed for high-dose animals (30 mg/kg/day) on Days 8 through 15. Animals received canned food on Days 8 through 15 in addition to their standard dry diet. d: For controls, group means are shown. For treated groups, fold change (x) from controls are shown. Statistical significance is based on actual data * = p ≤ 0.05 (Dunnett’s test)

25


2.6.7.7.5 イヌ 39 週間経口投与毒性試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: 39-Week Oral Gavage Toxicity and Toxicokinetic Study of GS-5885 in Dogs with a 13-Week Interim

Necropsy and a 4-Week Recovery Phase Gilead Study No. TX-256-2009 CRO Study No. 8229608

Species/Strain: Dog / Purebred Beagle Duration of Dosing: 39 Weeks Location in CTD: 4.2.3.2.5 Initial Age: 6 to 7 months old Duration of Postdose: 4 Weeks GLP Compliance: Yes Date of First Dose: 13 July 2010 Method of Administration: Oral Gavage Lot Number: Vehicle Control Article: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH-adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid)(v/v/v) No Observed Adverse Effect Level: 30 mg/kg/day Special Features: None



(13-week interim/ 39-week + recovery) M: 3/4 + 2 F: 3/4 + 2 M: 3/4 F: 3/4 M: 3/4 F: 3/4 M: 3/4 + 2 F: 3/4 + 2

Toxicokinetics: Cmax (µg/mL) Day 1 ND ND 0.457 0.405 1.17 1.29 2.05 1.82 Week 13 ND ND 0.516 0.400 1.33 2.11 2.95 3.78 Week 39 ND ND 0.577 0.743 1.57 3.19 2.98 5.14

Toxicokinetics: AUC0-t (µg·h/mL) Day 1 ND ND 4.60 4.26 13.1 16.8 25.2 19.2 Week 13 ND ND 5.24 4.46 15.1 25.3 35.2 45.7 Week 39 ND ND 5.67 8.25 15.9 32.2 41.3 80.3

Noteworthy Findings - Dosing Phase Died or sacrificed moribundb 0 0 0 0 1 0 2 0

26





(13-week interim/ 39-week + recovery) M: 3/4 + 2 F: 3/4 + 2 M: 3/4 F: 3/4 M: 3/4 F: 3/4 M: 3/4 + 2 F: 3/4 + 2

Gender: Number of Animals M: 9 F: 9 M: 7 F: 7 M: 7 F: 7 M: 9 F: 9

Clinical Observationsc Excessive salivation 0 0 2 3 2 2 6 5 Body Weight Change (kg) No Treatment-Related Findings Food Consumption No Treatment-Related Findings Ophthalmic Examinations No Treatment-Related Findings Electrocardiographic Examinations No Treatment-Related Findings Blood Pressure Determinations No Treatment-Related Findings Clinical Pathology No Treatment-Related Findings Organ Weights No Treatment-Related Findings Macroscopic Observations No Treatment-Related Findings Histopathology No Treatment-Related Findings Noteworthy Findings - Recovery Phase No Treatment-Related Findings

F = female; M = male; ND = none detected a: Three/sex/group for the 13-week interim sacrifice, four/sex/group for the terminal 39-week sacrifice, and two/sex/control and high-dose groups for recovery b: One male given 30 mg/kg/day was sacrificed in moribund condition on Day 78 with clinical signs of general debilitation (including mucoid feces, hypoactivity, hunched posture, body

weight loss, and increased body temperature). Clinical and anatomic pathology findings showed generalized inflammation, which was not observed in any control or treated animals. An etiologic agent was not identified, but suppurative liver inflammation was indicative of a bacterial infection. Therefore, the death of this animal was considered an isolated event and not Ledipasvir-related. Two other males given 10 or 30 mg/kg/day had accidental gavage-related deaths on Days 146 and 211, respectively.

c: Indicates the number of animals for which a condition was observed without regard to the specific nature, severity, reversibility, number of incidences/animal, or the length of time the condition persisted.

27


2.6.7.8 遺伝毒性試験: In Vitro

2.6.7.8.1 細菌を用いる復帰突然変異試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: Bacterial Reverse Mutation Assay with a Confirmatory Assay with GS-5885 Gilead Sciences Ref. No. TX-256-2005

CRO Study No. 8216885 Test for Induction of: Reverse mutation in bacterial cells No. of Independent Assays: 2 Location in CTD: 4.2.3.3.1.1 Strains: Salmonella typhimurium and Escherichia coli No. of Replicate Cultures: 3 GLP Compliance: Yes Metabolizing System: Aroclor-induced rat liver S9 No. of Cells Analyzed/Cultured: NA Lot Number: Vehicle: Dimethylsulfoxide (DMSO) Vehicle for Positive Controls: water (sodium azide only); DMSO (all other positive controls) Treatment: Plate incorporation for 52 ± 4 hours Date of Treatment: 18 Dec 2009 Cytotoxic Effects: Reduction in mean revertant counts as indicated below. Genotoxic Effects: None.

Metabolic Activation Treatment Dose Level (µg/plate)

Plate Incorporation – Confirmatory Assay Revertants/Plate (Mean ± SD)

TA98 TA100 TA1535 TA1537 WP2uvrA Without Activation DMSO 50 µL/plate 11 ± 2 73 ± 10 11 ± 1 3 ± 2 10 ± 2 Ledipasvir 10.0 8 ± 1 64 ± 21 11 ± 4 4 ± 2 12 ± 3 50.0 6 ± 1 79 ± 6 8 ± 1 2 ± 2 9 ± 5 100 7 ± 5 82 ± 9 12 ± 5 2 ± 2 11 ± 1 500 10 ± 1 P 78 ± 11 9 ± 2 P 2 ± 1 P 9 ± 3 P 1000 7 ± 1 P 86 ± 7 P 14 ± 2 P 4 ± 1 P 12 ± 2 P 5000 6 ± 2 PO 82 ± 13PO 13 ± 4 PO 2 ± 0PO 10 ± 0PO 2-nitrofluorene 1 100 ± 29 sodium azide 2 775 ± 84 648 ± 51 ICR-191 2 142 ± 37 4-nitroquinoline-N-oxide 1 212 ± 25

O: Obscured background bacterial lawn; P: Precipitation of test article observed,

28


2.6.7.8.1 細菌を用いる復帰突然変異試験（続き） TX-256-2005

Metabolic Activation Treatment Dose Level (µg/plate)

Plate Incorporation – Confirmatory Assay Revertants/Plate (Mean ± SD)

TA98 TA100 TA1535 TA1537 WP2uvrA

With Activation DMSO 50 µL/plate 16 ± 5 129 ± 27 12 ± 1 9 ± 2 12 ± 5

Ledipasvir 10.0 20 ± 1 108 ± 17 10 ± 2 9 ± 2 16 ± 1

50.0 25 ± 3 114 ± 12 11 ± 5 13 ± 4 15 ± 4

100 22 ± 2 111 ± 14 9 ± 2 9 ± 1 17 ± 6

500 22 ± 1 115 ± 5 9 ± 4 7 ± 3 14 ± 4

1000 16 ± 4 P 134 ± 5 P 7 ± 1 P 4 ± 1 P 13 ± 6 P

5000 16 ± 4 PO 124 ± 6 PO 8 ± 2 PO 4 ± 1 PO 9 ± 3 PO

benzo[a]pyrene 2.5 243 ± 11

2-aminoanthracene 2.5 1758 ± 202 223 ± 24 102 ± 15

2-aminoanthracene 25 500 ± 83 O: Obscured background bacterial lawn; P: Precipitation of test article observed,

29


2.6.7.8.2 哺乳類細胞を用いる染色体異常試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: Chromosomal Aberrations in Cultured Human Peripheral Blood Lymphocytes with GS-5885 Gilead Sciences Ref. No. TX-256-2006

CRO Study No. 8216914 Test for Induction of: Chromosome aberrations No. of Independent Assays: 2 Location in CTD: 4.2.3.3.1.2 Strains: Primary Human Blood Lymphocytes No. of Replicate Cultures: 2 GLP Compliance: Yes Metabolizing System: Aroclor-induced rat liver S9 No. of Cells Analyzed/Culture: 100 (or ≥25 if >25% of cells with aberrations) Vehicle for Test Article: Dimethylsulfoxide (DMSO) Vehicle for Positive Controls: Water Lot Number: Treatment: 22 h without S9; 3 h with S9 Date of Treatment: 17 Dec 2009 Cytotoxic Effects: None; precipitate at the end of treatment period Genotoxic Effects: None

Initial Assay Date of Treatment: 02 Dec 2009

Metabolic Activation

Test Article

Concentration (µg/ml)

Cytotoxicity (% of Control)a

% Aberrant Cells (Mean -g)

% Aberrant Cells (Mean +g)

# Polyploid Cells

# Endoreduplicate Cells

Without Activation DMSO 10 µL/mL 100 0.5 1.5 0.0 0.0

GS-5885 47.1 100 0.5 1.5 0.0 0.0 67.2 96 0.5 1.0 0.0 0.0 96.0b 94 0.0 1.5 0.0 0.0 Mitomycin C 1.00 − 48.0* 50.0 0.0 0.0 With Activation DMSO 10 µL/mL 100 0.0 0.5 0.0 0.0

GS-5885 47.1 100 0.0 1.0 0.0 0.0 67.2 99 0.5 2.0 0.5 0.0 96.0b 94 1.0 3.5 0.0 0.0 Cyclophosphamide 25.0 − 36.0* 42.0 0.0 0.0

30


2.6.7.8.2 哺乳類細胞を用いる染色体異常試験（続き） TX-256-2006

Confirmatory Assay Date of Treatment: 17 Dec 2009

Metabolic Activation

Test Article

Concentration (µg/ml)

Cytotoxicity (% of Control)a

% Aberrant Cells (Mean -g)

% Aberrant Cells (Mean +g)

# Polyploid Cells

# Endoreduplicate Cells

Without Activation DMSO 10 µL/mL 100 0.0 3.0 0.0 0.0

Ledipasvir 90.0 100 0.0 2.0 0.0 0.0 120b 100 0.0 0.5 0.0 0.0 150b 82 0.0 0.5 0.0 0.0 Mitomycin C 0.300 − 44.0* 52.0 0.0 0.0 With Activation DMSO 10 µL/mL 100 0.0 0.0 0.0 0.0

Ledipasvir 90.0 100 0.0 0.5 0.0 0.0 120b 100 0.0 0.0 0.0 0.0 150b 100 0.0 1.5 0.0 0.0 Cyclophosphamide 25.0 − 34.4* 43.2 0.0 0.0

－= not applicable; -g = % of cells with chromosome aberrations; +g = % of cells with chromosome aberrations + % of cells with gaps a: Based on mitotic index. b: Precipitate present at termination of treatment. * Significantly greater in -g than the vehicle control, p ≤ 0.01 (Cochran-Armitage test for linear trend and Fisher's Exact Test)

31


2.6.7.9 遺伝毒性試験: In Vivo

2.6.7.9.1 In Vivo 小核試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: In Vivo Rat Bone Marrow Micronucleus Assay with GS-5885 Gilead Sciences Ref. No. TX-256-2007

CRO Study No. 8216886 Test for Induction of: Micronuclei in Bone Marrow Erythrocytes

Treatment Schedule: Single dose Location in CTD: 4.2.3.3.2.1

Species/Strain: Rat/ Crl:CD (SD) Sampling Time: 24 and 48 hours after dosing GLP Compliance: Yes Age: 9 weeks Method of Administration: Oral gavage Lot Number: Vehicle for Test Article: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH-adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid) (v/v/v)

Vehicle for Positive Controls: Water Date of Treatment: 01 December 2009

No. of Cells Evaluated/Animal: 2000 Toxic/Cytotoxic Effects: None. Special Features: Plasma sample collected from satellite animals 4 hours post dose (n = 3/sex/dose group) for evidence of exposure. Genotoxic Effects: None

Evidence of Exposure:

Dose (mg/kg) 0 (Control) 112.5 225 450


4 hour concentration (ng/mL) < 2.00 a < 2.00 a 1520 998 1720 1350 2080 1680 a: Value below the lower limit of quantitation.

32


2.6.7.9.1 In Vivo 小核試験（続き） TX-256-2007

Test Article Dose (mg/kg) Number of

Animals Sampling

Time (Hours)

Mean Ratio PCE:NCE (±SD)

Male

Mean Ratio PCE:NCE (±SD)

Female

Mean % MN PCEs (±SD)

Males

Mean % MN PCEs (±SD)

Females

Vehicle Control 20 mL/kg 5 M + 5 F 24 0.67 ± 0.06 0.91 ± 0.13 0.04 ± 0.04 0.02 ± 0.04 5 M + 5 F 48 0.63 ± 0.10 0.77 ± 0.18 0.01 ± 0.02 0.05 ± 0.04

Ledipasvir 112.5 5 M + 5 F 24 0.78 ± 0.12 0.76 ± 0.15 0.03 ± 0.04 0.03 ± 0.04

225 5 M + 5 F 24 0.81 ± 0.15 0.87 ± 0.09 0.06 ± 0.05 0.01 ± 0.02

450 5 M + 5 F 24 0.77 ± 0.01 0.81 ± 0.13 0.02 ± 0.03 0.02 ± 0.03

5 M + 5 F 48 0.76 ± 0.16 0.81 ± 0.16 0.02 ± 0.03 0.06 ± 0.05

Cyclophosphamide 60 5 M + 5 F 24 0.57 ± 0.07* 0.64 ± 0.14** 1.89 ± 0.64*** 1.26 ± 0.34*** F = female; M = male; MN PCE = micronucleated PCE; NCE = normochromatic erythrocyte; PCE = polychromatic erythrocyte * Significantly less than the corresponding vehicle control, p ≤ 0.05 (ANOVA with Dunnett’s t-test) ** Significantly less than the corresponding vehicle control, p ≤ 0.01 (ANOVA with Dunnett’s t-test) *** Significantly greater than the corresponding vehicle control, p ≤ 0.01 (ANOVA with Dunnett’s t-test)

33


2.6.7.10 がん原性試験：重要な試験以外の試験

該当資料なし

34


2.6.7.11 がん原性試験

2.6.7.11.1 マウスがん原性試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: 26-Week Oral Gavage Carcinogenicity and Toxicokinetic Study with GS-5885 in RasH2 [001178-T

(hemizygous), CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic] Mice Gilead Study No. TX-256-2019 CRO Study No. 8278278

Species/Strain: RasH2 [001178-T (hemizygous), CByB6F1-Tg(HRAS)2Jic] Mice

Duration of Dosing: 26 Weeks Location in CTD: 4.2.3.4.1.1

Initial Age: 8 weeks Duration of Postdose: Not applicable (NA) GLP Compliance: yes Date of First Dose: 07 March 2013 Method of Administration: Oral Gavage Lot Number: Vehicle: 0.2% Tween® 20 (v/v), 0.2% (w/v) hydroxypropyl methylcellulose (E4M), and 0.9% (v/v) benzyl alcohol in reverse osmosis water Basis for High Dose Selection: The high dose level in this study was based on anticipated >25 fold exposure multiples of ledipasvir at the maximum recommended human dose of 90 mg GS 5885 and saturation of absorption in mice. Special Features: A sixth group of animals (15 animals/sex) received one intraperitoneal dose of N-methyl-N-nitrosourea on Day 1 of the dosing phase. Animals were included as positive controls to ensure animals supplied appropriately responded to carcinogenic insult. Increased mortality and incidence of neoplastic lesions in positive control animals demonstrated an effective positive control response and a valid transgenic mouse carcinogenicity study.

Daily Dose (mg/kg/day) 0 (Water) 0 (Control) 20 60 300

Gender:Number of Animalsa M: 25

(6) F: 25 (6)

M: 25 (6)

F: 25 (6)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

Toxicokinetics: AUC(0-t) (ng∙h/mL) Day 1 ND ND ND ND 43800 33600 98000 82000 187000 137000 Week 26 ND ND ND ND 58100 32200 124000 66200 225000 225000

Toxicokinetics: Cmax (µg/mL) Day 1 ND ND ND ND 3110 3040 7130 7900 11500 12300 Week 26 ND ND ND ND 4050 3260 7360 6830 15200 18600

35


2.6.7.11.1 マウスがん原性試験（続き） TX-256-2019



(6) F: 25 (6)

M: 25 (6)

F: 25 (6)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

Number of Animals At Study Start 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 Died/Sacrificed Moribund 2 1 4 2 1 1 2 5 0 0 Terminal Sacrifice 23 24 21 23 24 24 23 20 25 25 Survival, Week 26 (%) 92 96 84 92 96 96 92 80 100 100

Body Weight (g)a Day 183 NA NA 27.9 22.0 +4.3 +4.1 +3.6 +4.5 +4.3 +4.5

Body Weight Change (g)a Days 1-183 NA NA 5.3 4.0 +17.0 +25.0* +17.0 +27.5* +21.0 +27.5*

Food Consumption - - - - - - - - - - Histopathology (Neoplastic Lesions)b Body, Whole/Cavity

Benign Hemangioma 0 0 0 0 2 0 0 0 0 2 Malignant Hemangiosarcoma 3 0 0 0 2 1 0 1 0 2 Malignant Lymphoma 1 0 1 0 0 0 0 1 1 0

Lung Benign Adenoma, Bronchioloalveolar 1 1 3 0 1 3 2 0 2 0

Malignant Carcinoma, Bronchioloalveolar 0 1 0 0 1 1 1 0 2 0

36


2.6.7.11.1 マウスがん原性試験（続き） TX-256-2019



(6) F: 25 (6)

M: 25 (6)

F: 25 (6)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

M: 25 (36)

F: 25 (36)

Harderian Gland Benign Adenoma 1 0 1 0 0 0 0 1 0 1

Skin/Subcutis Benign Papilloma, Squamous Cell 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 Malignant Sarcoma 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0

Bone Benign Chondroma 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0

Nonglandular Stomach Malignant Carcinoma, Squamous Cell 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Thymus Malignant Thymoma 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0

Macroscopic Observations - - - - - - - - - - Histopathology (Non-neoplastic Lesions) - - - - - - - - - -

a: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences or fold change from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. Water control animals were not included in the calculation. b: No GS-5885-related effects on neoplastic microscopic findings were noted. A variety of incidental neoplasms occurred in animals from the water and vehicle control article groups and groups administered GS-5885. − = Comparable to control animals or no treatment-related findings; AUC0-t = Area under the concentration time curve from hour 0 to the last measurable concentration; ND = none detected; Cmax = Maximum observed concentration; F = Female; M = Male; NA = Not applicable; * = p <0.05 (ANOVA and Dunnett's, Rank transformed data).

2.6.7.11.2 ラットがん原性試験

ラットを用いた 104 週間がん原性試験（試験番号 TX-256-2016）実施中

37


2.6.7.12 生殖発生毒性試験：重要な試験以外の試験


Species/Strain


(Vehicle / Formulation)

Dosing Period Doses (mg/kg) No. Per Group Noteworthy Findings

Gilead Study No.

(CRO Study No.)/

Location

Rats / Crl:CD® (SD)

45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH

adjusted RO water [(pH 2.5 ± 0.1

adjusted with dilute hydrochloric acid)

v/v/v]

GD 6 to 17 0, 10, 30, 100 8 F/group (For TK:

3 F/control group and 9 F/treatment

group)

Significantly decreased maternal body weight, body weight gain, and food consumption at the 100 mg/kg/day dose. No effects on embryo/fetal viability and no fetal anomalies were observed up to 100 mg/kg/day. Fetal NOAEL=100 mg/kg/day Maternal NOAEL=30 mg/kg/day, corresponding to Ledipasvir GD 17 Cmax value of 1.4 µg/mL and AUC0-24 value of 18.2 µg·h/mL.

TX-256-2011a (8231641)

/ 4.2.3.5.2.1

Rabbits /NZW 75% PG and 25% Solutol® HS-15[v/v]

GD 7 to 20 0, 0, 30, 60, 100, 300

6 F/group (3 F/group TK)

Significantly decreased maternal body weight gain and food consumption at 300 mg/kg/day. No effects on embryo/fetal viability and growth and no anomalies up to 300 mg/kg/day. Fetal NOEL=300 mg/kg/day Maternal NOAEL=100 mg/kg/day, corresponding to Ledipasvir GD 20 Cmax value of 1.74 µg/mL and AUC0-24 value of 24.9 µg·h/mL.

TX-256-2010a (8231635)

/ 4.2.3.5.2.3

F = female; GD = Gestation day a: Indicates GLP compliant.

38


2.6.7.13 生殖発生毒性試験：受胎能及び初期胚発生に関する試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: Study of Fertility and Early Embryonic Development to Implantation of GS-5885

Administered by Oral (Gavage) in Rats Gilead Study No. TX-256-2017 CRO Study No. 20018530

Species/Strain: Rat/ Crl:CD(SD) Duration of Dosing: M: 28 days prior to mating through the day before euthanasia F: 15 days prior to mating through GD7

Location in CTD: 4.2.3.5.1.1 Initial Age: Males Approximately 72 Days old Females Approximately 67 Days old

GLP Compliance: yes Lot Number:

Date of First Dose: 14 Dec 2011 Day of Mating: GD 0 Design Similar to ICH 4.1.1: yes No-Observed-Adverse-Effect Level Day of C-Section: GD 13 F0 Males: Paternal: 100 mg/kg/day Reproductive: 100 mg/kg/day

Method of Administration: Oral gavage

F0 Females: Maternal: 100 mg/kg/day Reproductive: 30 mg/kg/day

Vehicle: 45% PG and 15% Solutol®HS-15 prepared in pH-adjusted RO membrane-processed deionized water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid)(v/v/v)

Special Features: none


Males No. Evaluated 22 22 22 22 No. Died or Sacrificed Moribund 1a 0 1a 0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Body Weight (%)b Day 49 547.4 g -1.5 -0.7 -4.4

39


2.6.7.13 受胎能及び初期胚発生に関する試験（続き） TX-256-2017


Males Body Weight Changes (%)b (continued) Days 1-8 +43.0 g -14.9 -20.9* -80.2** Days 8-15 +32.0 g +6.6 +17.5 +49.4** Days 1-49 +183.6 g -4.7 -2.5 -13.7 Food Consumption (%)b Days 1-8 24.4 g/day -4.1 -9.8** -30.3** Days 1-49 25.1 g/day -3.2 -3.6 -6.8 Necropsy Observations No Treatment-Related Findings Organ Weights No Treatment-Related Findings Mean Days Prior to Mating 2.8 3.3 2.5 3.4 No. of Males that Mated 22 22 22 22 No. of Fertile Males (as determined by cohabitation) 22 22 20 22 Sperm Motility, Count and Density No Treatment-Related Findings Sperm Morphology Detached Head 3.9 9.7** 5.3 6.6*

40




Females No. Evaluated 22 22 22 22 No. Died or Sacrificed Moribund 0 0 0 0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Premating Body Weight (g) Day 1 265.4 263.9 263.3 262.7 Day 8 270.0 272.0 269.0 262.0 Day 15 275.2 276.5 275.0 269.9 Premating Body Weight Change (%)b Days 1-8 4.6 g 73.9 23.9 -113.0* Days 8-15 5.2 g -11.5 15.4 50.0 Gestation Body Weight (%)b GD13 341.8 g -0.8 -0.4 -1.3 Gestation Body Weight Change (%)b GD 0-13 63.4 g -3.9 -1.3 1.1 Premating Food Consumption (%)b Days 1-8 16.1 g/day -1.2 -5.6 -20.5** Day 8-15 15.5 g/day -1.9 -1.9 -14.2** Days 1-15 15.8 g/day -1.3 -3.8 -17.1**

41




Females Gestation Food Consumption (%)b (continued) GD 0-13 20.5 g/day -2.0 +0.5 +0.5 Necropsy Observations No Treatment-Related Findings Mean No. Estrous Cycles/14 days 3.3 3.3 3.4 3.5 Mean No. Days Prior to Mating 2.8 3.3 2.5 3.4 No. of Females Sperm-Positive 21 22 22 21 No. of Pregnant Females 22 22 20 22 No. Aborted or with Total Resorption of Litter 0 0 0 0 Mean No. Corpora Lutea 15.6 15.3 14.9 14.0** Mean No. Implantations 15.2 14.6 14.6 13.7* Mean % Preimplantation Loss 2.6 4.2 1.6 2.1 Mean No. Live Embryos 13.8 13.4 13.3 12.0 No. Dead Embryos 1.3 1.2 1.4 1.7 Mean % Postimplantation Loss 8.7 8.8 9.1 12.8

GD = gestation day; M = males; F = females a: Rat 3814 (0 mg/kg/day) was euthanized on Day 39 and rat 3847 (30 mg/kg/day) was euthanized on Day 40 due to gavage error. b: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. * = p ≤ 0.05; ** = p ≤ 0.01 (Dunnett’s or Dunn’s test)

42


2.6.7.14 生殖発生毒性試験：胚・胎児発生に関する試験

2.6.7.14.1 ラット胚・胎児発生に関する試験

Test Article: Ledipasvir Report Title:

Oral Gavage Study for Effects on Embryo-Fetal Development with GS-5885 in Rats Gilead Study No. TX-256-2012 CRO Study No. 8236377

Species/Strain: Rats / Crl:CD®(SD) Duration of Dosing: GD 6 - 17 Location in CTD: 4.2.3.5.2.2 Initial Age: 12 weeks at initiation of treatment Day of Mating: GD 0 (day of confirmation) GLP Compliance: Yes Date of First Dose: 22 November 2010 Day of C-Section: GD 21 Lot Number: NOEL: F0 Females: 30 mg/kg/day Method of Administration: Oral Gavage Design Similar to ICH 4.1.3: Yes NOAEL: F1 Litters: 100 mg/kg/day Vehicle: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with

dilute hydrochloric acid)(v/v/v) Daily Dose (mg/kg/day) 0 (Control) 10 30 100

Dams: No. of Animals Evaluated 25 25 25 25 No. Pregnant at Cesarean Section 25 24 25 25 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Body Weight Changes – GD 6-8a 8.8 g 4.5 -18.2 -67.0** Body Weight Changes – GD 18-21a 28.9 g 10.4 5.9 49.1** Food Consumption – GD 6-8a 28.0 g/day 0.4 -2.9 -15.7** Food Consumption – GD 8-10a 29.4 g/day 0.3 - -21.1** Food Consumption – GD 10-12a 31.2 g/day 3.2 - -17.0** Food Consumption – GD 12-14a 32.2 g/day 2.2 1.2 -10.6* Food Consumption – GD 18-21a 29.3 g/day 3.4 2.4 23.2** Food Consumption – GD 6-18a 31.1 g/day 1.9 -0.3 -11.9**

43


2.6.7.14.1 ラット胚・胎児発生に関する試験（続き） TX-256-2012


Dams: Necropsy Observations No Treatment-Related Findings (continued) Dams with nonviable fetuses 1 0 0 0 Mean No. Corpora Lutea 14.4 13.2 13.6 13.8 Mean No. Implantations 13.3 12.2 12.8 12.8 Mean % Preimplantation Loss 7.4 6.9 4.9 6.5 Litters: Litters Evaluated 24 24 25 25 Live Fetuses 297 287 312 313 Dead Fetuses 1 0 0 0 Mean No. Resorptions 0.6 0.3 0.3 0.3 Mean % Postimplantation Loss 5.2 2.4 2.6 2.5 Mean Fetal Body Weight (g) 5.53 5.73 5.58 5.67 Covariate Adjusted Mean Fetal Body Weight (g) 5.54 5.69 5.59 5.68 Fetal Sex Ratios (Live No. of M:F) 50:50 50:50 47:53 49:51 Gross External Anomalies No Treatment-Related Findings

44




Litters: (continued)

Visceral Anomalies No. Litters Evaluated No. Fetuses Evaluated

24

151

24

145

25

156

25

159 V-Dilated Ureter(s)

No. Fetuses (%) + No. Litters (%)

1 (0.7) 1 (4.2)

1 (0.7) 1 (4.2)

1 (0.6) 1 (4.0)

5 (3.1)

3 (12.0) Total Fetal Soft Tissue Variations

No. Fetuses (%) No. Litters (%)

3 (2.0)

3 (13.0)

2 (1.4) 2 (8.3)

3 (1.9)

3 (12.0)

6 (3.8)

3 (12.0) Total Fetal Soft Tissue Malformations

No. Fetuses (%) No. Litters (%)

1 (0.7) 1 (4.2)

1 (0.7) 1 (4.2)

0 (0.0) 0 (0.0)

1 (0.6) 1 (4.0)

Skeletal Anomalies No. Litters Evaluated No. Fetuses Evaluated

24

147

24

142

25

156

25

154 V-Bipartite Vertebral Centrum(a)

No. Fetuses (%) + No. Litters (%)

1 (0.7) 1 (4.2)

0 (0) 0 (0)

0 (0) 0 (0)

5 (3.2) 4 (16)

V-5th/6th Sternebra(e) Incomplete Ossification No. Fetuses (%) + No. Litters (%) +

9 (6.1) 6 (25)

3 (2.1) 3 (13)

7 (4.5) 6 (24)

16 (10) 10 (40)

45





V-5th Sternebra Unossified No. Fetuses (%) + No. Litters (%) +

3 (2.0) 2 (8.3)

1 (0.7) 1 (4.2)

1 (0.6) 1 (4.0)

7 (4.5) 7 (28)

V-14th Rudimentary Rib(s) No. Fetuses (%) + No. Litters (%)

3 (2.0) 3 (13)

4 (2.8) 3 (13)

11 (7.1)*

6 (24)

10 (6.5) 5 (20)

V-7th Cervical Rib(s) No. Fetuses (%) + No. Litters (%)

0 (0.0) 0 (0.0)

1 (0.7) 1 (4.2)

0 (0.0) 0 (0.0)

4 (2.6) 2 (8.0)

Total Fetal Skeletal Variations No. Fetuses (%) + No. Litters (%) +

18 (12) 14 (58)

13 (9.2) 9 (38)

24 (15) 13 (52)

47 (31)** 22 (88)*

Total Fetal Skeletal Malformations No. Fetuses (%) No. Litters (%)

2 (1.4) 2 (8.3)

0 (0.0) 0 (0.0)

0 (0.0) 0 (0.0)

1 (0.6) 1 (4.0)

Total Affected Fetuses (Litters) 19 (14) 13 (9) 24 (13) 47 (22) - = no change; + = positive trend; GD = gestation day; V = variation a: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences or fold change from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. * = p ≤ 0.05; ** = p ≤ 0.01 (Dunnett’s test) .

46


2.6.7.14.2 ウサギ胚・胎児発生に関する試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: Oral Gavage Study for Effects on Embryo-fetal Development with GS-5885 in Rabbits Gilead Study No. TX-256-2013

CRO Study No. 8236376 Species/Strain: Rabbits / NZW Duration of Dosing: GD 7 through 20 Location in CTD: 4.2.3.5.2.4 Initial Age: Approximately 5.5-6 months old at initiation of treatment

Day of Mating: GD 0 (day of confirmation) GLP Compliance: Yes

Date of First Dose: 19 January 2011 Day of C-Section: GD 29 Lot Number: No Observed Adverse Effect Level Method of Administration: Oral Gavage Design Similar to ICH 4.1.3: Yes F0 Females: 180 mg/kg/day Vehicle: 75% PG and 25% Solutol® HS-15 (v/v) F1 Litters: 180 mg/kg/day Special Features: TK


Maternal: No. of Animals (TK) 20 20 20 20 (3) GD 7 Cmax (µg/mL) / AUC0-24 (µg•h/mL) NA NA NA 1.1 / 13.1 GD 20 Cmax (µg/mL) / AUC0-24 (µg•h/mL) NA NA NA 1.40 / 20.8 Clinical Observations - Few or No Feces 7 8 8 12 Body Weight Change (g) – GD 7-21 (%)a 158.9 -2.7 17.8 21.7 Body Weight Change (g) – GD 9-15 (%)a 72.6 55.8 14.9 -13.6 Body Weight Change (g) – GD 21-29 (%)a 149.7 -5.4 35.5 7.5 Food Consumption (g) – GD 7-21 (%)a 104.4 -2.9 3.6 -8.1 Food Consumption (g) – GD 8-15 (%)a 114.0 4.3 -2.5 -13.5 Food Consumption (g) – GD 21-29 (%)a 114.5 -3.7 6.3 6.4 Early Deathsb 2 0 2 3 Necropsy Observations - - - - Pregnant at Cesarean Section 15 20 17 16

47


2.6.7.14.2 ウサギ胚・胎児発生に関する試験（続き） TX-256-2013


Maternal: Dams with nonviable fetuses 0 0 0 0 Mean No. Corpora Lutea 8.5 8.8 9.2 9.6 Mean No. Implantations 8.1 8.1 8.2 8.6 Mean % Preimplantation Loss 6.9 7.3 11.6 11.0 Litters: Litters Evaluated 15 20 17 16 Live Fetuses 115 152 123 122 Dead Fetuses 0 0 1c 0 Mean No. Resorptions 0.4 0.5 0.9 0.9 Mean % Postimplantation Loss 4.9 6.0 11.1 10.8 Mean Fetal Body Weight (g) 41.77 39.43 40.78 38.20 Covariate Adjusted Mean Fetal Body Weight (g) 41.90 39.50 40.51 38.28 Fetal Sex Ratios (Live No. of M:F) 52:48 49:51 57:43 52:48 Gross External Anomalies No. Litters Evaluated 15 20 17 16 No. Fetuses Evaluated 115 152 124 122 M-Flexed Front Paws No. Fetuses (%) + 0 (0) 0 (0) 0 (0) 2 (1.6) No. Litters (%) + 0 (0) 0 (0) 0 (0) 1 (6.2) Visceral Anomalies - - - - Skeletal Anomalies No. Litters Evaluated 15 20 17 16 No. Fetuses Evaluated 115 152 124 122

48


2.6.7.14.2 ウサギ胚・胎児発生に関する試験（続き） TX-256-2013



V-Unossified Hyoid Body No. Fetuses (%) + 0 0 0 2 (1.6) No. Litters (%) + 0 0 0 1 (6.2)

V-Unossified Hyoid Wing(s)

No. Fetuses (%) + 0 0 0 1 (0.80)

No. Litters (%) + 0 0 0 1 (6.2) V-6th Sternebra Unossified

No. Fetuses (%) 0 10 (6.6)** 4 (3.2)* 2 (1.6) No. Litters (%) 0 5 (25)* 2 (12) 2 (13)

V-13th Full Rib(s) No. Fetuses (%) + 56 (49) 78 (51) 53 (43) 74 (61)* No. Litters (%) 14 (93) 16 (80) 12 (71) 16 (100)

V-26 Presacral Vertebra(e) No. Fetuses (%) + 29 (25) 46 (30) 31 (25) 47 (39)* No. Litters (%) 10 (67) 13 (65) 12 (71) 13 (81)

Total Fetal Skeletal Variations No. Fetuses (%) 95 (83) 131 (86) 104 (84) 109 (89) No. Litters (%) 15 (100) 19 (95) 16 (94) 16 (100)

Total Affected Fetuses (Litters) 96 (15) 131 (19) 105 (17) 109 (16) - = no noteworthy findings; + = positive trend; GD = gestation day; M = malformation; V = variation a: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences or fold change from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. b: Early deaths were attributed to severe weight loss, inappetence, possible dosing errors, or poor pregnancy outcome (early delivery/abortion). c: This fetus had no external, visceral or skeletal anomalies. * = p ≤ 0.05, ** = p ≤ 0.01 (Dunnett’s test)

49


2.6.7.15 生殖発生毒性試験：出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試験

Test Article: Ledipasvir Report Title: An Oral (Gavage) Study of the Effects of GS-5885 on Pre- and Postnatal Development,

Including Maternal Function in Rats Gilead Study No. TX-256-2020 CRO Study No. 604030

Species / Strain: Rat/ Crl:CD®(SD) Duration of Dosing: GD 6 through LD 20 Location in CTD: 4.2.3.5.3.1 Initial Age: Approximately 14 weeks Day of Mating: GD 0 GLP Compliance: Yes Date of First Dose: 25 February 2013 Method of Administration: Oral (gavage) Lot Number:

No-Observed-Adverse-Effect Level

Vehicle: 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in PH adjusted deionized water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid) (v/v/v)

Design Similar to ICH 4.1.2: Yes

F0 Females: 30 mg/kg/day Litters Culled / Not Culled: Culled F1 Neonatal Development: 30 mg/kg/day Special Features: TK F1 Systemic/Reproductive: 100 mg/kg/day F2 Neonatal/Early Postnatal: 100 mg/kg/day


F0 Females: No. of Animals for Toxicokinetics 3 9 9 9 Toxicokinetics: AUC0-t (µg·h/mL) GD 6 NA 3.03 8.58 22.2 AUC0-t (µg·h/mL) LD 10 NA 2.62 11.4 37.6 Cmax (µg/mL) GD 6 NA 0.299 0.658 1.53 Cmax (µg/mL) LD 10 NA 0.267 0.846 2.61 F1 Pups (M/F): No. of Animals for Toxicokinetics 3/3 24/23 22/22 24/24 Toxicokinetics: AUC0-t (µg·h/mL) PND 10 NA 0.597 /0.593 2.67 / 2.50 10.1 / 9.42 Cmax (µg/mL) PND 10 NA 0.0342 / 0.0292 0.163 / 0.119 0.483 / 0.514

50


2.6.7.15 出生前及び出生後の発生並びに母体の機能に関する試験（続き） TX-256-2020


F0 Females: No. Pregnant 25 25 24 25 No. Died or Sacrificed Moribund 0 0 0 1 No. Aborted or with Total Resorption of Litter 0 0 1 0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Necropsy Observations No Treatment-Related Findings Body Weight (%)a (GD 6) 294 0.0 -0.7 -1.4 (GD 9) 306 -0.7 -2.6 -5.6** (GD 12) 326 -0.6 -2.8 -5.2* (GD 15) 346 -0.3 -2.3 -5.5** (GD 18) 389 -0.5 -2.3 -6.4** (GD 20) 426 -0.5 -2.6 -6.3** (LD 1) 316 -1.9 -2.8 -9.2** (LD 4) 325 -0.6 0.0 -5.8* (LD 21) 357 1.4 1.1 2.8 Body Weight Gain (g) (LD 1-21) 41 51 54* 79** Gestation Food Consumption (GD 6-20; g/animal/day) 23 22 22 19** Lactation Food Consumption (LD 1-21; g/animal/day) 53 52 53 51 Mean Duration of Gestation (days) 22.0 22.0 21.9 22.0 Abnormal Parturition No Treatment-Related Findings

51




F1 Litters: No. Litters Evaluated 25 25 24 24 (preweaning) Mean No. of Implantations 16.3 16.4 15.9 16.0 Mean No. Pups/Litter 15.2 15.8 14.4 14.8 Mean No. Liveborn Pups/Litter 15.1 15.2 14.1 14.5 Mean No. Stillborn Pups/Litter 0.1 0.6 0.3 0.3 No. of Total Litter Losses 0 0 1 0 Postnatal Survival: Birth to PND 4 (%) 97.5 94.3 95.2 92.9 Postnatal Survival: PND 4 to PND 21 (%) 98.5 98.5 93.8 95.5 Pup Body Weights (%)a (PND 7) Males 16.0 g -4.4 3.1 -10.6* Females 15.2 g -6.6 1.3 -11.8* Pup Body Weights (%)a (PND 10) Males 23.1 g -4.8 3.9 -8.7* Females 22.2 g -7.2 0.9 -10.4* Pup Body Weights (%)a (PND 21) Males 53.5 g -5.4 2.4 -6.4 Females 51.0 g -7.3 2.0 -6.5 Pup Sex Ratios (% males per litter) 48.8 50.7 47.5 48.1 Pup Clinical Signs No Treatment-Related Findings Pup Necropsy Observations No Treatment-Related Findings

52




F1 Males No. Evaluated Postweaning Per Litter 50 50 46 47 (postweaning) No. Died or Sacrificed Moribund 0 0 0 0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Body Weight Change (g)a PND 21-84 (Premating Period) 457 0.7 2.2 -2.4 PND 21-126 (Entire Generation) 571 0.5 1.2 -3.5 Necropsy Observations No Treatment-Related Findings Mean Age of Preputial Separation (days) 43.5 44.2 43.2 43.6 Sensory Function No Treatment-Related Findings Motor Activity No Treatment-Related Findings Learning and Memory No Treatment-Related Findings No. of Males Paired for Breeding 25 25 23 24 Mean No. Days Prior to Mating 3.5 3.2 2.5 3.9 No. of Males that Mated 23 24 22 21 No. of Fertile Males 23 24 19 18 F1 Females No. Evaluated Postweaning 50 50 46 47 (postweaning) No. Died or Sacrificed Moribund 0 0 0 0 Clinical Observations No Treatment-Related Findings Premating Body Weight Change (g)a (PND 21-84) 240 -2.5 -0.4 -4.2 Gestating Body Weight Change (g)a (GD 0-20) 149 -8.7 -2.0 5.4 Lactating Body Weight Change (g)a (LD 1-4) 12 33.3 -25.0 41.7 Necropsy Observations No Treatment-Related Findings Mean Age of Vaginal Patency (days) 32.2 32.0 31.8 32.1

53




F1 Females Sensory Function No Treatment-Related Findings (postweaning) Motor Activity No Treatment-Related Findings Learning and Memory No Treatment-Related Findings No. of Females Paired for Breeding 25 25 23 24 Mean No. Days Prior to Mating 3.5 3.2 2.5 3.9 No. of Females Sperm Positive 24 25 22 23 No. of Pregnant Females 24 24 19 20 Mean No. Corpora Lutea 17.4 17.2 16.9 17.3 Mean No. Implantations 16.6 15.3 15.9 16.2 Mean No. Preimplantation Loss 0.8 1.9 1.0 1.1 F2 Litters Mean No. Pups/Litter 15.1 14.3 14.7 15.4 Mean No. Liveborn Pups/Litter 14.8 14.0 14.3 14.6 Mean No. Stillborn Pups/Litter 0.3 0.3 0.4 0.8 Postnatal Survival: Birth to PND 4 (%) 93.2 94.4 96.2 92.1 No. of Total Litter Losses 0 0 0 0 Pup Body Weights (g)a (PND 4) Males 9.9 -2.0 2.0 -1.0 Females 9.3 -2.2 4.3 -1.1 Pup Sex Ratios (% males per litter) 52.8 49.7 42.9 47.9 Pup Clinical Signs No Treatment-Related Findings Pup Necropsy Observations No Treatment-Related Findings

GD = gestation day; LD = lactation day; NA = not applicable; PND = postnatal day a: For controls, group means are shown. For treated groups, percent differences or fold change from controls are shown. Statistical significance is based on actual data not on the percent. * = p < 0.05; ** = p < 0.01 (Dunnett’s test)

54


2.6.7.16 新生児を用いた試験


55


2.6.7.17 局所刺激性試験


Type of Study Species/Strain


(Vehicle Formulation)

Duration of Dosing

Dose

Gender and No. per Group Noteworthy Findings

Gilead Study No.

(CROStudy No.)

Location

Bovine Corneal Opacity and Permeability (BCOP)

Bovine Cornea In Vitro (0.9% saline)

Opacity assessment (4

hours) followed by permeability assessment

(90 minutes)

20% w/w

3 Corneas In Vitro Irritancy Score = 7.7 ± 1.1 and is predicted to be a non-corrosive/non-severe eye irritant. Corneas treated with positive control article (imidazole) elicited irritation within the historical range, validating the assay.

TX-256-2029a (EUN0021) /4.2.3.6.1

Dermal Irritation

Rabbit/NZW Dermal (moistened in 0.5

mL RO water)

4 hours 0.5 g/ 25 mm

× 25 mm

3 F No irritation was observed following a 4 hour treatment period (observations at 1, 24, 48 and 72 hours after treatment period). Primary Irritation Index = 0.0; Ledipasvir is classified as nonirritant.

TX-256-2030a (EUN0020) /4.2.3.6.2

F = female a: Indicates GLP compliant.

56


2.6.7.18 その他の毒性試験


Type of Study

Species/ Strain



Duration of

Dosing Dose

(mg/kg/day)


Gilead Study No.

(CRO Study No.)

Location

Antigenicity (LLNA)

Mouse/CBA/Ca

Topical (50% w/v DMF)

3 days 10, 25, 50% w/v

5 F/group Ledipasvir did not demonstrate the potential to cause skin sensitization.

TX-256-2031a (EUN0022) /4.2.3.7.1.1

Impurities Rat/ Crl:CD®

(SD)

Oral Gavage (45% PG, 15%

Kolliphor® HS-15 in pH-adjusted RO water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute hydrochloric acid)

v/v/v)

14 days 0 (vehicle), 30 and 100

(Ledipasvir-B/Lot No.

); 100

(Ledipasvir /Lot No.

)

10 M/group toxicology 6 M/group

(3 M controls) TK

Transient, nonadverse reductions in mean body weight gain and mean food consumption were noted in animals administered 100 mg/kg/day Ledipasvir or Ledipasvir-B compared to control animals. Nonadverse clinical pathology findings included higher cholesterol in all animals of all dose levels and higher triglycerides at 100 mg/kg/day Ledipasvir-B. No test article-related mortality, clinical observations, hematology, coagulation, urinalysis, organ weights or macroscopic or microscopic pathology differences were observed. Toxicity profiles and systemic exposures of Ledipasvir or Ledipasvir-B at 100 mg/kg/day were considered similar. NOAEL = 100 mg/kg/day for both lots; corresponding to a mean Day 14 Cmax of 2.61 µg/mL and AUC0-t of 47.70 µg·h/mL for Ledipasvir, and a mean Day 14 Cmax of 2.23 µg/mL and AUC0-t of 39.4 µg·h/mL for Ledipasvir-B.

TX-256-2035a (8286517) /4.2.3.7.6.1

57


2.6.7.18 その他の毒性試験（続き）

Type of Study

Species/ Strain



Duration of

Dosing Dose

(mg/kg/day)


Gilead Study No.

(CRO Study No.)

Location

Phototoxicity Mouse/ Crl:SKH1-

hr

Oral Gavage [0.2% HPMC E4MTM (w/v),

0.2% Tween® 20 (v/v), 0.9% benzyl alcohol (v/v) in RO

water]

Single dose

0, 22.3b, 74.5 b, 224b,

300

6 F/Group (main)

3 F/Group (plasma exposure

confirmation)

No skin reactions indicative of phototoxicity occurred at doses up to 300 mg/kg Ledipasvir followed by a single UVR exposure (30 minutes ±5 minutes) at approximately 4 hours after dosing. Mice administered positive control article (8-MOP) had skin findings consistent with phototoxicity, validating the assay. Mean C4 h = 2.96 µg/mL (300 mg/kg)

TX-256-2015a (20011036) /4.2.3.7.7.1

Other Rat/ Crl:CD®

(SD)

Oral Gavage [Vehicle 1(GS-

5885): 45% PG and 15% Solutol® HS-15 prepared in pH-adjusted with RO

water (pH 2.5 ± 0.1 adjusted with dilute

HCl) (v/v/v) / Vehicle 2 (GS-5885-02): 0.2%

(w/v) HPMC E4MTM, 0.2% (v/v)

Tween® 20, and 0.9% (v/v) benzyl

alcohol in RO water]

14 days 0 (vehicle 1), 0

(vehicle 2) 30 and 100 (GS-5885-02/Lot No.

); 100 (GS-5885/ Lot No.

)

10/sex/group toxicology 9/sex/group (3/sex/group control) TK

Nonadverse transient decreases in mean body weight change and mean food consumption in males given 100 mg/kg/day GS-5885. Minimal changes in clinical pathology parameters in vehicle- and/or test article-treated groups and none were considered adverse. No test article-related mortality, clinical observations, ophthalmic, organ weight or macroscopic or microscopic pathology differences were observed. Toxicity profiles of GS-5885 or GS-5885-02 at 100 mg/kg/day were considered to be generally similar. NOAEL = 100 mg/kg/day for both lots; corresponding to mean Day 14 Cmax = 2.07 µg/mL and AUC0-24 = 34.6 µg·h/mL for GS-5885 (sexes combined), and mean Day 14 Cmax = 0.903 µg/mL and AUC0-24 = 11.0 µg·h/mL for GS-5885-02 (sexes combined).

TX-256-2014a (8238694) /4.2.3.7.7.2

DMF = dimethylformamide; F = female; LLNA = local lymph node assay; M = male a: Indicates GLP compliant. b: Formulations were incorrectly prepared due to use of an incorrect correction factor and intended doses were 30, 100, and 300 mg/kg; phototoxicity assay was repeated at 300 mg/kg using

re-prepared formulations (demonstrated as within 10.0% of theoretical concentration).

58

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