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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL
SEMINARIO: “METABOLISMO DE AMINOÁCIDOS”
GRUPO 3QM1
EQUIPO 7:
IntroducciónLos microorganismos, además de requerir una fuente de
carbono, una de energía necesitan una fuente de nitrógeno para construir su propio material celular.La fuente de nitrógeno, la obtienen a partir de aminoácidos o nitrógeno inorgánico en diferentes estados de oxidación incluyendo el nitrógeno molecular.
http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_5.pdf
Orgánico InorgánicoProteínas Nitrógeno molecular
Aminoácidos AmonioBases nitrogenadas Nitritos
¿Qué son los aminoácidos? • Los aminoácidos son las unidades que forman a las proteínas.• Son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino y un
grupo carboxílico.
http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_5.pdf
Metabolismo de aminoácidos
http://iqb.fcien.edu.uy/pdf/aminoacidos%20I%202004.pdf
Aminoácidos
Cetoacido
Arginina, Histidina, Valina,
Glutamato, Aspartato, Glicina, Serina, Cisteína, Alanina, Prolina,
Metionina.
PiruvatoOxalacetato
FumaratoSuccinil CoA
Alfacetoglutarato
IsoleucinaFenilalanina
TirosinaTriptófano
AcetoacetoAcetil CoA
LisinaLeucina
TransaminacionDesaminacion
oxidativaCiclo de la urea
Descarboxilacion• La descarboxilación de aminoácidos se usa para evaluar el
metabolismo de las bacterias en pruebas como el MIO y LIA (Ornitina y Lisina respectivamente) usando un indicador de pH cuando se desamina o descarboxila el medio adquirirá un pH ácido o básico.
http://www3.uah.es/bioquimica/Tejedor/bioquimica_quimica/R-T20-1-Rgenerales.pdf
DesaminaciónPuede adoptar diversas modalidades:Desaminación oxidativa: un aminoácido es transformado en un cetoácido más amoniaco.
Enzima: D-amino oxidasaLa llevan a cabo los microorganismos aerobios y anaerobios facultativos.
MORENO B, “Higiene e inspección de carnes” Días de Santos, España, 2006, p.p. 503-505
Desaminación reductora: un aminoácido es transformado en un ácido orgánico más amoniaco:
Se lleva a cabo por acción enzimática de las bacterias anaerobias estrictas y anaerobias facultativas en condiciones de anaerobiosis.
MORENO B, “Higiene e inspección de carnes” Días de Santos, España, 2006, p.p. 503-505
LAGUNA, “Metabolismo de los aminoácidos y de las proteína”
• Un ejemplo es la desaminación de la glutamina
Objetivos
• Realizar pruebas bioquímicas para poner de manifiesto las actividades que llevan a cabo los microorganismos sobre los aminoácidos.
PROCEDIMIENTO
Diagrama de flujo Producción de acido sulfhídrico e indol.
Sembrar por
picadura
Incubar los tubos a 37°C
durante 24hrs.
Observar el resultado e interpretarl
o .
Medio SIM
Medio SIM (SULFURO-INDOL-MOTILIDAD)
• (S) A partir de tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que reacciona con el hierro presente formándose un compuesto de color negro.
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm
• Producción de Indol (I)El triptófano es un aminoácido constituyente de varias peptonas como la tripteína. Las bacterias que producen la enzima triptofanasa son capaces de hidrolizar y desaminar el triptófano con producción de Indol, acido pirúvico y amoniaco.
• La prueba del indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el Indol reacciona con el grupo aldehído p-dimetilaminobenzaldehido. Este es el principio activo del reactivo de Kovacs
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm
• (M) El agar es el agente solidificante, a esa concentración hace semisólido el medio, condición necesaria para detectar la movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio por crecimiento que difunde mas allá de la línea de siembra.
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm
RESULTADOS – MEDIO SIM
1
2 3
4
Producción de amoniaco e indol.
Inocular con una asada
Colocar una tira de papel tornasol en la boca del tubo
sujetándolo con el tapón de algodón.
Incubar los tubos a 37°C durante
24hrs.
Observar el vire del papel tornasol que indica la liberación
de amoniaco.
Añadir gotas del reactivo de Kovacs
o Ehrlich para detectar la
producción de indol.
Registrar los resultados en la
tabla.Caldo Triptona
Caldo triptona• Producción de amoniaco e Indol
http://es.slideshare.net/Prymer/medios-bioqumicos
• Reactivo de Kovac´s (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado) Ehrlich (solución alcohólica de p-dimetilamino benzaldehído)
+
CALDO TRIPTONA
Producción de lisina-descarboxilasa.
Inocular por picadura y
estría
Incubar los tubos a 37°C
durante 24hrs.
Interpretar los
resultados
Medio LIA
Medio LIADiferenciar 3 reacciones:• Descarboxilación
• Desaminación
• Producción de ácido sulfhídrico
http://www.britanialab.com/productos/B02106%20REV%2001-LISINA%20HIERRO%20AGAR.pdf
A: Reacción acida. Color amarillo
K: Reacción alcalina. Color violeta
R: Reacción alcalina: color rojo
K/K: Descarboxilacion lisina
K/A: Fermentación glucosa. Descarboxilacion lisina
R/A: Desaminación lisina. Fermentación glucosa
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#LIA_
Medio LIA
RESULTADOS LABORATORIO 3PRUEBA Klebsiella
pneumoniaeEscherichia
coliBacillus subtilis
Salmonella typhi
Shigella flexneri
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Proteus vulgaris
EQUIPO 5 6 1 2 7 8 1 2 5 6 3 4 7 8 3
4
SIM
H2S - - - - - - + + - - - - - - + +
Indol - - + + - - - - - - - + + + - +
Movilidad - - - - - - + + - - - + - - + +
CALDO TRIPTONAAmoniaco - - + + - - - - - - - + - - - +
Indol - - + + - - - - - - - + - - - +
LIA
Descarboxilación + - + + + + + + + + + + + + - +
Desaminación - - - - - - - - - - - - - - + -
H2S - - - - - - + + - - - - - + + -
+ = prueba positiva ; - = prueba negativa
RESULTADOS LABORATORIO 4
+ = prueba positiva ; - = prueba negativa
PRUEBA Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Bacillus subtilis
Salmonella typhi
Shigella flexneri
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Proteus vulgaris
EQUIPO 5 6 1 2 7 8 1 2 5 6 3 4 7 8 3 4
SIM
H2S - - - - - - + + - - - - - - + +
Indol - - + + - - - - - - - - - - - -
Movilidad - - + + + + + + - + + - + + + +
CALDO TRIPTONAAmoniaco - - + + - - - - - - - - - - - -
Indol - - + + - - - - - - - - - - - -
LIA
Descarboxilación + + + + + + + + - + + + + + - -
Desaminación - - - - - - - - - - - - - - + +
H2S - - - - - - + + - - - - - - + +
RESULTADOS TEÓRICOS
+ = prueba positiva ; - = prueba negativa
PRUEBA Klebsiella pneumoniae
Escherichia coli
Bacillus subtilis
Salmonella typhi Shigella flexneri Staphylococcus
aureusPseudomonas
aeruginosaProteus vulgaris
SIM
H2S - - - + - - - +
Indol - + - - + - - +
Movilidad - + + + - - + +
CALDO TRIPTON
A
Amoniaco - + - - + - - +
Indol - + - - + - - +
LIA
Descarboxilación + + + + - + + -
Desaminación - - - - - - - +
H2S - - - + - - - +
KONEMAN W, E. [et al]. Diagnóstico microbiológico. 3ª Edición. Ed. Médica Panamericana. 1992. Pág. 183-195.
Discusión de resultados• Los resultados en ambos laboratorios fueron en algunos casos
diferentes debido a errores en la lectura o en la siembra, pero en la mayoría los resultados fueron los mismos.
• Donde hubo mas errores fue en el caso de Staphylococcus aureus en el laboratorio 3 entre los equipos 3 y 4.
• Los resultados no son confiables debido a que no se incubo según la norma (NOM-210-SSA1-2014) se excedió el tiempo de incubación por 24hrs (48hrs en total de incubación a 37°C), por lo que se pudieron haber obtenido falsos positivos. A pesar de esto, vemos que los resultados son mayormente parecidos.
Conclusión• Después de realizar las pruebas bioquímicas sabemos que los
aminoácidos son moléculas esenciales para los microorganismos que cuentan con enzimas para reducirlos y utilizarlos para obtener energía.
• La pruebas bioquímicas son un parámetro de suma importancia para poder conocer el microorganismo problema, aunque se necesitan mas pruebas para confirmar la identificación bacteriana específica.
• Se deben de respetar las condiciones de incubación para llevar a cabo las pruebas y así obtener resultados confiables.
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