TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR · tecnicas de biologÍa molecular. endonucleasas o enzimas de...

TECNICAS DE TECNICAS DE BIOLOGBIOLOGÍÍA MOLECULARA MOLECULAR

ENDONUCLEASASENDONUCLEASASO ENZIMAS DE RESTRICCIO ENZIMAS DE RESTRICCIÓÓNN

Generan cortes internos en la molGeneran cortes internos en la moléécula de cula de ADNADN

Pueden generar extremos romos o Pueden generar extremos romos o cohesivoscohesivos

Enzimas de Restriccion

Extremos cohesivosExtremos cohesivos

Extremos romosExtremos romos

ClonaciClonacióón y uso de enzimasn y uso de enzimas

SeparaciSeparacióón de fragmentosn de fragmentos

Geles de AgarosaGeles de Agarosa

Geles de Geles de poliacrilamidapoliacrilamida

CLONACICLONACIÓÓNN

PCR (PCR (reaccireaccióón en cadena de n en cadena de polimerasapolimerasa) Componentes de la ) Componentes de la

reaccireaccióónnPolimerasaPolimerasaPrimersPrimersDNTPDNTP’’ssCloruro de magnesioCloruro de magnesioAguaAguaBuffer Buffer

SOUTHERN BLOTSOUTHERN BLOT

1) Blood sample. 2) DNA is extracted from blood cells. 3) DNA is cut into fragments by a restriction enzyme. 4) The DNA fragments are separated into bands during electrophoresis in an agarose gel. 5) The DNA band pattern in the gel is transferred to a nylon membrane. 6) Radioactive DNA probe, designed to recognise specific DNA sequences, is prepared. 7) Probe DNA binds to the specific DNA sequences on the membrane. 8) Excess DNA is washed off, but the DNA pattern is invisible at this stage. 9) X-ray film is placed next to the membrane & exposed to the radioactive DNA. 10) The developed X-ray shows the pattern of DNA bands

SECUENCIACISECUENCIACIÓÓNN

VNTR

DNA fingerprinting in Argentina to establish kinship of the 'disappeared', the children, often born in captivity, of parents kidnapped and assassinated by the former military regime there. Here a geneticist uses a multi-channel pipette to prepare samples for the process. A bank of blood samples, taken from all the potential relatives, provides the DNA for comparison with that from the child in question. Fragments of DNA are seperatedinto bands by electrophoresis in an agarose gel. Every human being produces a unique pattern of DNA bands, hence its potential as a kind of genetic

CLONACICLONACIÓÓN EN ANIMALESN EN ANIMALES

COPYCOPY--CAT (EE.UU 2002) CAT (EE.UU 2002)

PAMPA (Argentina 2002)PAMPA (Argentina 2002)

PROMETEA (Italia 2003)PROMETEA (Italia 2003)

Ian Wilmut and Dolly. In 1996, British embryologist Professor Ian Wilmut created, the world's first sheep cloned from an adult sheep cell. The research was conducted at the Roslin Institute in Edinburgh, Scotland.

Marcadores molecularesMarcadores molecularesY sus aplicacionesY sus aplicaciones

Tipos de MarcadoresTipos de Marcadores

Directos o sea dentro del gen Directos o sea dentro del gen ((intragintragéénicosnicos))Indirectos usando a otro gen o marcador Indirectos usando a otro gen o marcador cercano en el cromosoma para poder cercano en el cromosoma para poder identificar sus diferencias entre individuosidentificar sus diferencias entre individuos

RFLPRFLP’’ss

Pueden hacerse por Pueden hacerse por SouthernSouthern blotblotPueden hacerse por PCRPueden hacerse por PCR

Por Southernblot

Por PCR y luego restricción

VNTRsVNTRs o microsato microsatééliteslites

Pueden hacerse por Pueden hacerse por SouthernSouthern blotblotPor PCR y geles de poliacrilamida o Por PCR y geles de poliacrilamida o agarosaagarosaPor SSCPPor SSCP

UtilidadUtilidad

DetecciDeteccióón de individuos portadores de un n de individuos portadores de un gen recesivo.gen recesivo.TestTest de paternidad o de paternidad o trazabilidadtrazabilidad..SelecciSeleccióón asistida por n asistida por marcadores,etcmarcadores,etc