TECNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULAR. ENDONUCLEASAS O ENZIMAS DE RESTRICCIÓN Generan cortes internos en...

TECNICAS DE BIOLOGÍA TECNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULARMOLECULAR

ENDONUCLEASASENDONUCLEASASO ENZIMAS DE RESTRICCIÓNO ENZIMAS DE RESTRICCIÓN

Generan cortes internos en la molécula de Generan cortes internos en la molécula de ADNADN

Pueden generar extremos romos o Pueden generar extremos romos o cohesivoscohesivos

Enzimas de Restricción

Extremos cohesivosExtremos cohesivos

Extremos romosExtremos romos

Clonación y uso de enzimasClonación y uso de enzimas

Separación de fragmentosSeparación de fragmentos

Geles de AgarosaGeles de Agarosa

Geles de Geles de poliacrilamidapoliacrilamida

CLONACIÓNCLONACIÓN

PCR (PCR (reacción en cadena de reacción en cadena de polimerasa) Componentes de la polimerasa) Componentes de la

reacciónreacción PolimerasaPolimerasa PrimersPrimers dNTP’sdNTP’s Cloruro de magnesioCloruro de magnesio AguaAgua Buffer Buffer

SOUTHERN BLOTSOUTHERN BLOT

1) Blood sample. 2) DNA is extracted from blood cells. 3) DNA is cut into fragments by a restriction enzyme. 4) The DNA fragments are separated into bands during electrophoresis in an agarose gel. 5) The DNA band pattern in the gel is transferred to a nylon membrane. 6) Radioactive DNA probe, designed to recognise specific DNA sequences, is prepared. 7) Probe DNA binds to the specific DNA sequences on the membrane. 8) Excess DNA is washed off, but the DNA pattern is invisible at this stage. 9) X-ray film is placed next to the membrane & exposed to the radioactive DNA. 10) The developed X-ray shows the pattern of DNA bands

SECUENCIACIÓNSECUENCIACIÓN

VNTR

DNA fingerprinting in Argentina to establish kinship of the 'disappeared', the children, often born in captivity, of parents kidnapped and assassinated by the former military regime there. Here a geneticist uses a multi-channel pipette to prepare samples for the process. A bank of blood samples, taken from all the potential relatives, provides the DNA for comparison with that from the child in question. Fragments of DNA are seperated into bands by electrophoresis in an agarose gel. Every human being produces a unique pattern of DNA bands, hence its potential as a kind of genetic

CLONACIÓN EN ANIMALESCLONACIÓN EN ANIMALES

COPY-CAT (EE.UU 2002) COPY-CAT (EE.UU 2002)

PAMPA (Argentina 2002)PAMPA (Argentina 2002)

PROMETEA (Italia 2003)PROMETEA (Italia 2003)

Ian Wilmut and Dolly. In 1996, British embryologist Professor Ian Wilmut created, the world's first sheep cloned from an adult sheep cell. The research was conducted at the Roslin Institute in Edinburgh, Scotland.

Marcadores molecularesMarcadores molecularesY sus aplicacionesY sus aplicaciones

Tipos de MarcadoresTipos de Marcadores

Directos o sea dentro del gen Directos o sea dentro del gen (intragénicos)(intragénicos)

Indirectos usando a otro gen o marcador Indirectos usando a otro gen o marcador cercano en el cromosoma para poder cercano en el cromosoma para poder identificar sus diferencias entre individuosidentificar sus diferencias entre individuos

RFLP’sRFLP’s

Pueden hacerse por Southern blotPueden hacerse por Southern blot Pueden hacerse por PCRPueden hacerse por PCR

UtilidadUtilidad

Detección de individuos portadores de un Detección de individuos portadores de un gen recesivo.gen recesivo.

Test de paternidad o trazabilidad.Test de paternidad o trazabilidad. Selección asistida por marcadores, Selección asistida por marcadores, Salud publica, Salud publica, Virología, etcVirología, etc

Por Southern blot

Por PCR y luego restricción

VNTRs o microsatélitesVNTRs o microsatélites

Pueden hacerse por Southern blotPueden hacerse por Southern blot Por PCR y geles de poliacrilamida o Por PCR y geles de poliacrilamida o

agarosaagarosa Por SSCPPor SSCP

Cepas diferentes de Salmonellas