R-Biopharm AG იმუნოაფინური სვეტები

1

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

R-Biopharm AG იმუნოაფინური სვეტები

2011

2

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

იმუნოაფინური სვეტების პრინციპი• , იმუნოაფინური ქრომქტოგრაფია ეს არის ნარევთა

- დაყოფის საშუალება ანტიგენ ანტისხეულის .ურთიერთქმედების საფუძველზე

• იმუნოაფინურ სვეტები გამოიყენება HPLC და LC-MS/MS სისტემებზე სინჯიდან ანტიგენის შერჩევითად

.იზოლაციისთვის ან დაკონცენტრირებისთვის• R-Biopharm გთავაზობთ იმუნოაფინურ სვეტებს

, მიკოტოქსინების ვიტამინებისა და ანტიბიოტიკების .ტესტირებისთვის საკვებ პროდუქტებში

2011

3

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

იმუნოაფინური სვეტების პრინციპი• იმუნოაფინური სვეტები შეიცავენ სპეციფიური

.ანტისხეულების სუსპენზიას გელში• ანტიგენი გამოიყოფა ექსტრაქციით და ზავდება

.იმუნოაფინურ სვეტებზე დასატანად• სინჯში არსებული ანტიგენები ჩაიჭირება

.ანტისხეულების მიერ• რ , ეაქციაში შეუსვლელი ნარჩენები ჩამოირეცხება

ხოლო ანტიგენის ელუცია წარმოებს სპეციფიური.გამხსნელით

• ელუანტი გროვდება HPLC- ზე და LC-MS/MS- ზე.ტესტირებისათვის

2011

4

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

იმუნოაფინური სვეტების პრინციპი

სინჯი ჩარეცხვა ელუცია

სინჯის ექსტრაქტი დაიტანება სვეტზე

ანტისხეული იკავშირებს ანტიგენს

გამხსნელის გაშვება სვეტში იწვევს ანტისხეულის

დენატურაციას და ათავისუფლებს ანტიგენს

ანტიგენი

სხვა ნივთიერება

5

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

იმუნოაფინური სვეტების პრინციპი

იმუნოაფინური სვეტების გამოყენება მკვეთრად აუმჯობესებს და .მგრძნობიარეს ხდის გაწმენდის ხარისხს

იმუნოაფინური სვეტების გარეშე მიღებული ქრომატოგრამა IAC- ზე

იმუნოაფინური სვეტების გამოყენებით მიღებული ქრომატოგრამა IAC- ზე

6

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინები

• 5 მსოფლიო მოსახლეობის დაახლოებით მილიარდამდე ადამიანი მუდმივად იმყოფება აფლატოქსინებით დაავადების რისკის ქვეშ

დაბინძურებული საკვებისა და სამკურნალო მცენარეების მოხმარების.გამო

• .მიკტოქსინების არსებობა საკვებში გარდაუვალია

• მიკოტოქსინები მოქმედებს როგორც ადამიანის ასევე საქონელის, ჯანმრთელობაზე რაც საბოლოო ჯამში აისახება როგორც ფიზიკურ

.ასევე ფინანსურ დანახარჯებში

• 1988 წელს სიმსივნის შემსწავლელი საერთაშორისო ორგანიზაციამ(IARC) აფლატოქსინ B1 შეიტანა ადამიანისთვის კანცეროგენული

.ნივთიერებების ჩამონათვალში

7

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინები

• FAO- ს მონაცემებით მსოფლიო მაშტაბით საკვები პროდუქტების 25%- .მიკოტოქსინებით დაბინძურების მაჩვენებელი ს შეადგენს

• . - მაგ აშშ ში აფლატოქსინებით გამოწვეული მოსავლის დანაკარგები 100 . საშუალოდ მლნ დოლარს შეადგენს ყოველწლიურად მათ შორის

26 .დანაკარგები მხოლოდ არახისზე მლნ დოლარს შეადგენს

8

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინები

• ი , მისათვის რომ მოხდეს მიკოტოქსინებისგან თავისუფალი საკვები პროდუქტების შიდა წარმოება ან იმპორტი, საჭიროა ოფიციალურად

.დაშვებული მაჩვენებლების არსებობა

• აღნიშნული მიზნით მსგავსი დასაშვები ზღვრები უკვე დადგენილია , ჯამური აფლატოქსინების აფლატოქსინ B1, აფლატოქსინ M1,

ოხრატოქსინ A, , ზეარალენონის DON, ფუმონიზინისა და პატულინის. შემთხვევებში T-2- ისა და HT-2- თვის EC- ის მიერ დადგენილი

.დასაშვები მაჩვენებლები ჯერ დაზუსტებული არ არის

9

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინები

• იმისათვის რომ გამოირიცხოს მიკოტოქსინების მოხვედრა საკვებ , პროდუქტებში მნიშვნელოვანია არამარტო ნედლეულის არამედ მზა

.პროდუქციის კონტროლიც

• ზუსტი მაჩვენებლების მისაღებად ძალიან მნიშვნელოვანია სინჯების , სწორი შეგროვება ექსტრაქციის ეფექტურად ჩატარება და ბოლოს

მაღალი ხარისხისა და მგრძნობელობის სადიაგნოსტიკო ტესტების ..გამოყენება ანალიზისათვის

10

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინების ანალიზი

11

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინების ანალიზი

აფლატოქსინების ანალიზის მეთოდიკები დამუშავებულია ფართო სპექტრის საკვები ნედლეულისა და

:პროდუქციისათვის

1. მარცვლეული2. თხილი3. სანელებლები4. კაკაო5. ბრინჯი

. .და ა შ

. ოხრატოქსინების კონტროლი აქტუალურია მაგ ღვინოსა და .სხვა პროდუქტებში

12

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინების ანალიზი

• თითოეული ტიპის სვეტისათვის დამუშავებულია შესაბამისი. . მეთოდიკა მაგ აფლატოქსინის ექსტრაქციისათვის მიწის , - თხილიდან ეფექტურია მეთანოლი ხოლო კაკაოდან

.აცეტონიტრილი

• . . 1 3 .განსხვავდება შეფუთვის ფორმებიც მაგ სვეტი და სვეტი

• სვეტებზე დატანილია სპეციფიური მონოკლონური.ანტისხეულები

• , ზოგიერთისთვის აუცილებელია დერივატიზაციის ეტაპი ( . ხოლო ზოგიერთისთვის ამის აუცილებლობა არ არის მაგ, , იოდით ტრიფტორ ძმარ მჟავა Kobra Cell (აპარატი) .და სხვა

13

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინების ანალიზი• აფლატოქსინი B2 და G2: ფლუორესენცია მკვეთრი UV

გამოსხივების ქვეშ უბრალოდ ისაზღვრება HPLC .ფლუორესენციის დეტექტორის საშუალებით

• აფლატოქსინი B1 და G1 თავისთავად ვერ იძლევა ძლიერ , ფლუორესენციურ სიგნალს ამიტომ აუცილებელია მათი

.დერივატიზაცია იოდით ან ბრომით

• დერივატიზაციის დროს აფლატოქსინი B1 და G1 ქიმიური სტრუქტურა იცვლება და გადადის უფრო ძლიერი

, ფლუორესენციური სიგნალის ფორმაში აძლიერებს რა სიგნალს HPLC- .თვის

• დერივატიზაციისას Kobra Cell აპარატის გამოყენების უპირატესობა სხვა მეთოდებთან შედარებით ეფუძნება

, , პროცესის სიმარტივეს ნაკლებ დანახარჯებს ნაკლებ . .დროით დანაკარგებს და ა შ

14

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინების ანალიზი

• თანამედროვე სინამდვილე მოითხოვს მიკოტოქსინების . ნაირსახეობის ერთდროულ და სწრაფ ტესტირებას

• - - მულტი მიკოტოქსინ იმუნოაფინური სვეტები შეიძლება გამოყენებულ იქნას LC-MS/MS სისტემებზე და წარმოადგენს

. პრობლემის გადაჭრის გზას

• ეს მეთოდი წარმოადგენს ყველაზე მოწინავე ტექნოლოგიას . დღევანდელ მსოფლიოში ის წარმოადგენს HPLC- ის

გამყოფი ძალის შერწყმას MS- .ის დეტექციის უნართან

15

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

მიკოტოქსინების ანალიზი

• კომპლექსური სინჯების პირდაპირ გაუწმენდავად შეყვანა , ტესტირებისას იწვევს იონების დათრგუნვას ამიტომ

.გაწმენდა აუცილებელია

•R-Biopharm იმუნოაფინური სვეტების პარალელურად - (გთავაზობთ მყარ ფაზოვან სვეტებსაც Clean-up Column).

• - მყარ ფაზიანი გაწმენდის შემთხვევაში აუცილებელია , სტანდარტები კონკრეტული გასაწმენდი კომპონენტისათვის

ეს აუცილებლობა ნაკლებად დგას იმუნოაფინური სვეტების. გამოყენებისას

16

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

ვიტამინების ანალიზი

• ვიტამინებს ორგანიზმი ვერ გამოიმუშავებს საკმაო .ოდენობით და ამიტომ უნდა მიღებულ იქნას საკვების სახით

• - 13 დღეს დღეისობით უნივერსალურად მიჩნეულია სახის.ვიტამინი

17

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

ვიტამინების ანალიზი

• საკვები პროდუქტები უნდა შემოწმდეს დასაშვები ვიტამინების .სწორ შემცველობაზე

• როგორც წესი მოსალოდნელი დანაკარგების გათვალისწინებით თავიდანვე პროდუქტებში ვიტამინები ჭარბი

რაოდენობითაა გათვალისწინებული

• ხშირად სინჯის სირთულისა და ვიტამინების მცირე კონცენტრაციების გამო პრობლემაა ანალიზის სწორად

.ჩატარება

• ხშირად ფერმენტები გამოიყენება ცილების დასაშლელად და .ვიტამინების გამოსათავისუფლებლად

• იმუნოაფინურ სვეტებს შესწევთ უნარი ნიმუშიდან შერჩევითად .გამოყონ და დააკონცენტრირონ ესა თუ ის ვიტამინი

18

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

2011

ვიტამინების ანალიზი

ეს სვეტები შემუშავებულ იქნა HPLC და LC-MS/MS- ის პრობლემატიკიდან გამომდინარე

19

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

• თითოეული ტიპის სვეტისათვის დამუშავებულია შესაბამისი. . მეთოდიკა მაგ გამოიყენება ფერმენტებად პეპსინი და

- , .ალფა ამილაზა პანკრეატინი და სხვა

• . . 3 განსხვავდება შეფუთვის ფორმებიც მაგ სვეტი და10 .სვეტი

• სვეტებზე დატანილია სპეციფიური მონოკლონური.ანტისხეულები

• . . განსხვავდება ექსტრაქციის ბუფერიც მაგ გამოიყენება .როგორც ნატრიუმის აცეტატური ასევე ფოსფატური ბუფერი

• ელუცია წარმოებს როგორც მეთანოლით ასევე.აცეტონიტრილით

ვიტამინების ანალიზი

20

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

1. 5აწონეთ g 50სინჯი და დაამატეთ ml 50mM აცეტატური (ბუფერი pH4). .აურიეთ მაგნიტურ სარეველაზე

2. 2დაამატეთ g , 0.5პეპსინი g - 2ალფა ამილაზა და ml 1% KCN 10 - .და აუირეთ წთ ის განმავლობაში

3. სინჯი მოათავსეთ წყლის აბაზანაში მუდმივი ნჯღრევის 37პირობებში 0C- 30 - , ზე წთ ის განმავლობაში შემდეგ

100გადაიტანეთ 0C- 30 - . ზე წთ ით შემდეგ გააცივეთ ოთახის.ტემპერატურაზე

4. 100გადაიტანეთ სინჯი ml- 50იან კოლბაში და შეავსეთ mM . აცეტატური ბუფერით სინჯი დააცენტრიფუგირეთ

4000rpm- 15 - .ზე წთ ის განმავლობაში5. 30ml სინჯი დაიტანეთ EASI-EXTRACT Vitamin B12- .ზე6. 20ჩარეცხეთ ml 2% Tween 20- 10ით და შემდეგ ml .წყლით7. 3სვეტის ელუცია აწარმოეთ ml MeOH- 60-ით და გააშრეთ

700C- .ზე8. 300აღადგინეთ სინჯი l 0.025% TFA- 100ით და mcl- ის

ოდენობით მოათავსეთ HPLC- .ზე

ვიტამინების ანალიზი

21

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

1. ზოგიერთ ქვეყნებში ანტიბიოტიკები გამოიყენება ცხოველების ზრდის სტიმულაციისა და

.მკურნალობისათვის

2. დადგენილიას ანტიბიოტიკების დასაშვები ზღვრული .მაჩვენებლები საკვებ პროდუქტებში

3. . მაგ ქლორამფენიკოლი წარმოადგენს ტოქსიურ , ნივთიერებას და მის მიმართ მაღალი მდგრადობის გამო

აღნიშნული ანტიბიოტიკის გამოყენება ცხოველთა სამკურნალოდ აკრძალულია უმეტეს ევროპულ ქვეყნებში

4. ანტიბიოტიკების მცირე კონცენტრაციების გამო მნიშვნელოვანია მაღალი მგრძნობელობისა და

.საანალიზო დიაპაზანის ტესტირების მეთოდიკის შერჩევა

ანტიბიოტიკების ანალიზი

22

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

1. ზოგიერთ სინჯებზე ადგილი აქვს ცრუ დადებით მაჩვენებლებს IFA- .ით ტესტირებისას

2. , რთული სინჯები შესაძლებელია შეიცავდნენ პიგმენტებს რაც დამატებით ართულებს დაბალი კონცენტრაციის

ქლორამფენიკოლის ტესტირებას HPLC და LC-MS/MS- ის.გამოყენებით

3. / ამიტომ ზ ა აღნიშნული ტესტირების წინ იმუნოაფინური სვეტების გამოყენება ხსნის ამ სირთულეებს და

.აუმჯობესებს ტესტირების ხარისხს

ანტიბიოტიკების ანალიზი

23

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

1. 5აწონეთ g .სინჯი ცენტრიფუგის სინჯარაში2. 5დაამატეთ ml McIIvanie- (ის ბუფერი pH 2.5).3. აურიეთ Vortex- 20 - ზე წმ ის განმავლობაში, ან დააყოვნეთ

30წთ - ორბიტალურ Shaker- .ზე4. ორჯერ გაფილტრეთ ექსტრაქტი Whatman No.134- .ზე5. 2ექსტრაქტის ml .დაიტანეთ სვეტზე6. 10ჩარეცხეთ ml .წყლით7. 100% (2სვეტის ელუცია აწარმოეთ ml- თუ ანალიზი

ტარდება HPLC- 1ზე და ml- - ით თუ გამოიყენებაLC-MS/MS) MeOH- .ით

8. HPLC- ის ანალიზისთვის გააშრეთ და აღადგინეთ . მოძრავ ფაზაში

ანტიბიოტიკების ანალიზი

24

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

1. ქლორამფენიკოლი HPLC- ზე ისაზღვრება UV- 280დეტექტორით nm- . ზე რის გამოც შესაძლებელია

.ქრომატოგრამაზე ფონური სურათი მიყვებოდეს

2. HPLC- = 20ით თაფლში ქვედა ზღვარი ng/ml.

3. LC-MS/MS- ის სვეტებთან კომბინაცია იძლევა უფრო დაბალ ქვედა ზღვარს ტესტირებისას ვიდრე

იმუნოაფინური სვეტები HPLC- .თან ერთად

4. LC-MS/MS- = ით თაფლში ქვედა ზღვარი 0.2ng/ml.

ანტიბიოტიკების ანალიზი

25

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 20052011

1. აღნიშნული სვეტები იწარმოება ISO 2001- ის . მოთხოვნების შესაბამისად მათ თან ერთვის ამის

.დამადასტურებელი სერტიფიკატები

2. .სვეტები ინახება ოთახის ტემპერატურაზე

3. შესაძლებელია ტრეინინგები კვალიფიციურსპეციალისტებთან

4. ფირმა ასევე უზრუნველყოფს სრულ დამატებით დამხმარე ინფორმაციას

შედეგები

26

www.r-biopharm.com

RIDA® AllergyScreen

May 2005

გმადლობთ!ყურადღებისთვის

2011