View
141
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
5/10/2018 Metode Eksopolisakarida - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/metode-eksopolisakarida 1/3
METODE-METODE ANALISIS EKSOPOLISAKARIDA
1. Ekstraksi eksopolisakarida (Emtiazi et.al , 2004)
• Media pertumbuhan maksimum untuk produksi polisakarida
Bahan Jumlah(gram/Liter)
Sucrose (Merck 7653)
K 2HPO4 (Merck 5104 )
KH2PO4 (Merck 4873)
MgSO4. 7H2O(Merck 5886)
NaCl (Merck 6404)
FeSO4. 6H2O (Merck 3965)
Na2MoO4 (Merck 6521)
CaCO3 (Merck 2066)
20
3.2
0.8
0.4
0.2
0.02
0.03
0.05
* pH dibuat menjadi 7.2
• Metode ekstraksi
Bakteri EPS ditumbuhkan dalam medium produksi eksopolisakarida, shaker 200
rpm, 25 oC selama 5 x 24 jam. Sel bakteri disentrifuse pada 9000 rpm dengan 1
mM EDTA sebanyak 0.5 ml selama 10 menit. Supernatan dipisahkan dan
ditambahkan aseton (Merck 0014) dingin -4 oC dengan perbandingan 1 : 1,
selanjutnya larutan disentrifuse 20.000 rpm selama 30 menit, untuk mengendapkan
eksopolisakarida hasil presipitasi.
• Pembuatan 1 mM EDTA (Merck 8418) sejumlah 1 liter
Sebanyak 0.37224 gram EDTA di tambahkan ke dalam 800 ml akuades di dalamlabu takar. Tera labu tersebut sampai 1 liter.
2. Ekstraksi eksopolisakarida dengan CTAB (Modifikasi metode Yun & Park,
2003)
• Preparasi : bakteri ditumbuhkan dalam medium produksi
eksopolisakarida, shaker 200 rpm, 25 oC selama 5 x 24 jam. Pisahkan kultur
bakteri dengan sentrifuse 9000 rpm selama 10 menit. Pisahkan pellet, cuci dengan
akuades dan disentrifuse kembali 14.000 rpm, 30 menit.
• Ekstraksi : biopolymer di dalam supernatant dipresipitasi
menggunakan aseton dengan perbandingan 3 : 1, endapkan semalam. Selanjutnya
disentrifuse 20.000 rpm selama 30 menit. Pellet hasil sentrifuse di cuci dengan
etanol 70%, lalu keringkan (Vakum drier ) untuk menghilangkan sisa etanol.
• Purifikasi : biopolymer yang telah kering, kembali dilarutkan ke
dalam 1 ml akuades, dan dipresipitasi menggunakan CTAB 1% dengan
perbandingan 1 : 1 lalu cuci dengan akuades, diikuti dengan presipitasi etanol di
dalam larutan NaCl 10%. Cuci kembali dengan etanol. Kembali keringkan (Vakum
drier )
• Pembuatan 1% CTAB/cethyl trimethyl ammonium bromide
(Merck 2342)
5/10/2018 Metode Eksopolisakarida - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/metode-eksopolisakarida 2/3
Sejumlah 1 gram CTAB ditambahkan ke 50 ml akuades di dalam labu takar 100
ml. Tera dengan akuades sampai tepat 100 ml.
• Pembuatan etanol 70%. Pipet 70.14 ml etanol absolute (99.8%) ke dalam
labu takar 100 ml. Tera dengan akuades sehingga tepat 100 ml.
• Pembuatan larutan NaCl 10% (Merck 6404). Sejumlah 10 gram NaCldimasukan ke 50 ml akuades di dalam labu takar 100 ml. Tera dengan akuades
sampai tepat 100 ml.
3. Preparasi eksopolisakarida untuk HPLC (Ghaly et.al , 2007)
• Eksopolisakarida hasil presipitasi dengan metode Emtiazi yang
telah dikeringkan, dilarutkan ke dalam 3 ml akuades, lalu dihidrolisis dengan
menambahkan asam sulfat 2 N (sehingga pH menjadi 2) lalu dididihkan (100 oC,
selama 2 jam). Setelah sampel di dinginkan analisis dengan HPLC.
•
Pembuatan asam sulfat (Merck 0732) 2 NPipet 5.56 ml asam sulfat 98% (36 N, BJ asam sulfat 1,8 gram/ml) ke dalam labu
takar yang telah berisi 80 ml akuades. Homogenkan larutkan kemudian tera
sehingga tepat 100 ml.
Recommended