View
279
Download
5
Category
Preview:
Citation preview
Galeria API 20E(Sistemas de identificacin multipruebas)La batera de pruebas API20E es un sistema de identificacin rpida para bacterias de la familiaEnterobacteriaceaey otras bacterias Gram -. Bsicamente consta de 21 tests bioqumicos estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira.
Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes:PruebaReaccin / Enzimas
ONPGBeta-galactosidasa
ADHArginina deshidrolasa
LDCLisina descarboxilasa
ODCOrnitina descarboxilasa
CITUtilizacin del citrato
H2SProduccin de H 2 S
UREUreasa
TDATriptfano desaminasa
INDProduccin de indol
VPProduccin de acetona (Voges-Proskauer)
GELGelatinasa
GLUFermentacin/oxidacin de glucosa
MANFermentacin/oxidacin de manitol
INOFermentacin/oxidacin de inositol
SORFermentacin/oxidacin de sorbitol
RHAFermentacin/oxidacin de ramnosa
SACFermentacin/oxidacin de sacarosa
MELFermentacin/oxidacin de melobiosa
AMYFermentacin/oxidacin de amigdalina
ARAFermentacin/oxidacin de arabinosa
OXCitocromo oxidasa
A patir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensin en 5 mL de solucin salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua estril.
Llenar con la suspensin de bacterias los tubos, no la cpula (cada pocillo tiene un tubo y una cpula, parte aerobia), de todos los pocillos.
Llenar la cpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensin de bacterias.
Cubrir con parafina las cpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.
Poner la tira en su propia cmara hmeda de incubacin. Previamente poner agua en los alvolos de la cmara para proporcionar una atmsfera hmeda durante la incubacin.
Incubar a 37 C durante 18-24 h.
Tras la incubacin se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no requieren ser revelados.Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se tienen que tener en cuenta dos criterios: Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no hay que aadir reactivos. Cuando sto ocurre se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados metabolismos especiales. Si la glucosa es positiva y/o tres o ms tests son positivos se revelan los test que requieren reactivos:TDAAadir una gota de FeCl310 %.VPAadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2H5OH).INDAadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido.OxidasaAadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recin preparado.
InterpretacinLa lectura de los resultados se lleva a cabo por comparacin de los colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el resultado como positivo o negativo (ms adelante se explicar con detalle).PruebaReaccin / EnzimasNegativoPositivo
ONPGBeta-galactosidasasin coloramarillo
ADHArginina deshidrolasaamarillorojo o naranja
LDCLisina descarboxilasaamarillorojo o naranja
ODCOrnitina descarboxilasaamarillorojo o naranja
CITUtilizacin del citratoverdeazul oscuro o turquesa
H2SProduccin de H 2 Ssin precipitado negroprecipitado negro
UREUreasaamarillorojo o naranja
TDATriptfano desaminasaamarillomarrn-rojo
INDProduccin de indolamarillocolor rosa o anillo rosa-rojo
VPProduccin de acetona (Voges-Proskauer)sin colorrosa-rojo
GELGelatinasasin difusindifusin de pigmento
GLUFermentacin/oxidacin de glucosaazul o verdeamarillo
MANFermentacin/oxidacin de manitolazul o verdeamarillo
INOFermentacin/oxidacin de inositolazul o verdeamarillo
SORFermentacin/oxidacin de sorbitolazul o verdeamarillo
RHAFermentacin/oxidacin de ramnosaazul o verdeamarillo
SACFermentacin/oxidacin de sacarosaazul o verdeamarillo
MELFermentacin/oxidacin de melobiosaazul o verdeamarillo
AMYFermentacin/oxidacin de amigdalinaazul o verdeamarillo
ARAFermentacin/oxidacin de arabinosaazul o verdeamarillo
OXCitocromo oxidasa
Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numrico de 7 cifras. Los pocillos estn separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test nmero 21 corresponde al test de la oxidasa).Para obtener el perfil nmerico de 7 cifras, a cada pocillo se le dar el valor 0, 1, 2 4, de acuerdo a los siguientes criterios: Si la reaccin es negativa se pone 0. Si la reaccin es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero. Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se obtiene un cdigo de 7 cifras.
Con este cdigo se busca en la tabla de identificacin la especie de que se trata, para realizar esta operacin hay programas informticos.
Perfiles numricos.0104140Shigella flexneri
0104452Salmonella paratyphi A
0104504Pasteurella multocida
0104521Yersinia enterocolitica
0140004Pasteurella multocida
0144042Shigella boydii
0206042Acinetobacter calcoaceticus
0210004Achromobacter sp.
0210004Alcaligenes faecalis
0210004Alcaligenes sp.
0314000Proteus mirabilis
0504512Salmonella paratyphi A
0676001Proteus vulgaris
0776000Proteus mirabilis
1000004Pasteurella sp.
1014743Klebsiella ozaenae
1104112Shigella sonnei
1214012Yersinia pseudotuberculosis
1214773Klebsiella pneumoniae
2206004Pseudomonas aeruginosa
2504752Salmonella spp.
3005573Enterobacter cloacae
3246527Aeromonas hydrophilia
4004550Salmonella cholerasuis
4004550Salmonella typhi
4104100Salmonella gallinarun
4357106Vibrio parahemolyticus
4404112Salmonella gallinarum
4404510Salmonella cholerasuis
4404540Salmonella tiphy
4504010Salmonella pullorum
4604552Salmonella spp.
4704500Salmonella cholerasuis
5004024Pseudomonas cepacea
5044124Vibrio cholerae
5046753Serratia odorifera
5100100Yersinia ruckeri
5104111Hafnia alvei
5104542Salmonella arizonae
5144572Escherichia coli
5207323Serratia rubidae
5255573Klebsiella oxytoca
5346761Serratia marcescens
5314173Enterobacter gergoviae
5317761Serratia marcescens
5704412Salmonella arizonae
5704552Salmonella arizonae
6004540Salmonella typhi
6144204Plesiomonas shigelloides
6404112Salmonella spp.
6504750Salmonella spp.
6604512Salmonella spp.
6704342Salmonella spp.
6704532Salmonella spp
6704752Salmonella gallinarum
7244126Aeromonas hydrophila
7305773Enterobacter cloacae
7704752Salmonella arizonae
7704752Salmonella spp.
Recommended