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Du Bon Usage
du Laboratoire
Pathologie d’Importation
GARNOTEL Eric
Service de Biologie
HIA Laveran
Marseille
Limites :
pathologies spécifiquement tropicales
infectieuses
diagnostic au laboratoire
Contexte anamnestique :
pays, lieu, durée, dates
contexte épidémiologique
exposition à un risque
Prophylaxie chimioprophylaxie
vaccinations
Clinique
Démarche
Prédéfinir les agents pathogènes potentiels
« On ne trouve que ce que l ’on cherche »
Syndromes :
fièvre
splénomégalie
ADP…..
Diagnostic biologique
Eléments d’orientation : non spécifiques
numération formule
syndrome inflammatoire
Diagnostic de présomption
Diagnostic de certitude :
mise en évidence directe de l’agent infectieux
Valeur d ’orientation de l ’hémogramme
hyperleucocytose à PNN
leucopénie
anémie
amibiase, leptospirose
paludisme, typhoïde, leishmaniose,
viroses (arboviroses)
paludisme, leishmaniose
thrombopénie
hyperéosinophilie
syndrome mononucléosique
paludisme, dengue , leishmaniose
bilharziose, distomatose, trichinose,
toxocarose, phase invasion helminthes
VIH, hépatite virale
Syndrome inflammatoire
VS, CRP, électrophorèse des protéines…..
Leishmaniose viscérale
Trypanosomiase
Fièvre et splénomégalie
Paludisme
Fièvre typhoïde
Brucellose
Borréliose
Leishmaniose viscérale
Trypanosomiase
Diagnostic du Paludisme
Diagnostic du Paludisme
Frottis sanguin : diagnostic d ’espèce
parasitémie
S de 100 HP / µl
Goutte épaisse : temps de réalisation
S de 1 HP / µl
QBC : 5 mn
S de 0,5 HP / µl
HRP2 : diagnostic de P falciparum
faux négatifs
Biologie moléculaire
Valeur des Tests : Se et Sp
Expérience du Biologiste
référence
Tests de diagnostic rapide
Quantified Buffy Coat
PCR
PCR classique
PCR en temps réel
•Se PCR = Se QBC
•Faux + et faux-
•Disponibilité
Fièvre typhoïde et fièvres paratyphoïdes
Taux d’incidence des fièvres typhoïde et paratyphoïdes dans le monde
21M de cas/an Létalité de 1 à 4% 216-600 000 décès
Asie 13M
Fièvre typhoïde et fièvres paratyphoïdes
Ac anti O
Ac anti H
J0 J8 J12
Hémocultures
Coprocultures
Widal et Felix
1/800
1/1600
1/400
Spécificité :
Vaccin TAB
Co aggl T B
faux +
Brucellose
Rose bengale Ig G 80% 90% qualitative
Wright IgM 60% 90% 10 - 12 ième j
négativation rapide
faux-
faux+ (Yersinia, Vibrio)
fixation du Cpt IgG 60% 95% stade tardif
IFI Ig GMA 90% 95-100%précoce et tardif
Hémocultures : bactérie à croissance difficile
phase aiguë
Autres localisations
Action sur l ’immunité spécifique
CPAg CD4
IL 2
IFN
IL 4-5
10-13
CD4 Th1 CD4 Th2
Facteurs : espèce
inoculum
réponse de l ’hôte
inf concomitante
LV
LCD LC
Leishmaniose viscérale ou cutanée
Leishmaniose viscérale ou cutanée
Orientation : anamnèse
VS
pancytopénie
protidogramme
Présomption : sérologie IFI
ELISA, HA,….
Certitude : prélèvements moelle, ADP, foie, peau
examen direct
culture
biologie moléculaire
LV
Peau Moelle
Peau
(ana path)
Diagnostic biologique (3)
Diagnostic indirect :
problème des VAT
IFI ELISA aggl. en µplaque (T.b r)
HAI CATT
Trypanosomiase
Diagnostic direct :
adénopathie sang suc dermique LCR
état frais (mobilité), coloration (MGG)
techniques de concentration :goutte épaisse QBC
diagnostic de phase
Fièvre et adénopathies
Primo infection VIH
Viroses (EBV, CMV….)
Dengue (arboviroses)
Tuberculose
Primo-infection VIH
Ag p24-25 Ac anti VIH
ARN viral
15 jours
Sérologie : évolution des tests (sous-type O, Ag p24)
2 ELISA confirmés par Western Blot
ELISA Combo : Ac et Ag p24
Primo-infection VIH
Confirmation sur le premier prélèvement
Western blot
GP160
GP120
P24
P18
GP41
P68
Dengue et autres arboviroses
Culture virale :
EDTA
couche leucocytaire
Sérologie : ELISA
Ig M
Ig G
Laboratoires spécialisés +/-
Réactions sérologiques croisées
Fièvre et ictère
Paludisme
Hépatites virales A
B – D
E
C
Leptospirose
0-9 10-19 20-29 30-39 40-49 +50ans
Séroprévalence VHA %
Afrique - Asie
Pourtour méditérranéen
Europe - EU
Pays nordiques
100%
50%
IgM
Ig totaux
Ictère
Transaminases
Diagnostic
Hépatite A
Ag HBs
Ac anti HBs
Ac anti HBc totaux
Ac anti HBc IgM
Ac anti HBe Ag HBe
ADN viral
Phase symptomatique
Cinétique des marqueurs Hépatite B
4-12 sem 1-2 sem 2 sem-3 mois
Ag delta IgM IgG
1 - 4 sem
2 - 5 sem
Cinétique des marqueurs de l ’hépatite D
RT PCR
VHE
Epidémies du passé
1915 : Epidémie de la
« Campagne de Mésopotamie »
Troupes britanniques
Troupes indiennes
Hépatite E
VHE
Aujourd’hui
New Dehli (1955)
•crue de la rivière Yamunâ
•29 300 cas d’hépatites ictériques
Inde : 50% des hépatites aiguës de l’adulte
20 à 30% des hépatites aiguës de l’enfant
Monde : nombreux cas sporadiques
Cycle du VHE
Zoonose Rôle du porc?
•VHE : 71% des porcs au Japon
•Transmission inter-espèce
•Souches humaines ou animales
proches ou identiques
Eau
Aliments
Contact direct (0,7-2,2%)
Autres
Inde
1955 : 29 300
1975 : 2 600
1978 : 274
1990 : 79 000
Népal
1973 : 10 000
1981 : 6 000
1995 : 692
Pakistan
1987 : 133
1993 : 3 800
Birmanie
1976 : 20 000
1982 : 400
Bornéo
1987 : 2 000
Chine
1986 : 119 000
Algérie : 788
RCI : 623
Tchad : 38
Soudan : 2000
Somalie : 2000
Ethiopie : 423
Djibouti : 111
Aspects épidémiologiques du VHE
Epidémies ou VHE>25%
des hépatites non A non B
Souches de VHE isolée
Sources CDC
Okamoto, Virus Research, 127 (2007)
Ig G
Ig M
Ictère
Sang Selles
ARN VHE
15-50j
Grandes épidémies - cas sporadiques
Inde - Asie - Afrique
Mortalité 1 - 2%
Diagnostic de l’infection par le VHE
Hépatite C
Importance épidémiologique
Mode transmission
Variabilité des transaminases
Asymptomatique dans 75% des cas
2 tests ELISA de 3 ième génération
RT PCR qualitative
Génotypage
Leptospirose
Diagnostic direct :
hémoculture (période septicémique, 10-12 j)
LCR
(urine)
Sérologie (15iéme jour) :
dépistage (macroaggl Ag TR, HA …)
confirmation (Martin et Pettit, micro aggl)
>20 sérovars
seuil 1/800 ou 2 dilutions sur 2 sérums
Hépato-néphrite
Fièvre et image hépatique
Amibiase hépatique
Kyste hydatique
Abcès à pyogènes
Amibiase hépatique
Examens morphologiques
Sérologies : diagnostic et suivi du traitement
IFI : très Se et Sp >1/200
titres très élevés
précoce, suivi du TTT
HA : GR sensibilisés >1/128
persistance des Ac
Kyste hydatique
Pas de ponction
Sérologie : foie>poumon
HAI Se 89%
>1/320
IFI Se 96%
>1/100
IEF : spécificité
ELISA
diagnostic et suivi du traitement
Fièvre et hyperéosinophilie
Bilharziose
Distomatose
Trichinose
Anguillulose
Bilharziose
Sérologies:
IF : coupe de foie de souris
Se (seuil 1/10)
précoce (Ig M)
suivi du traitement
HA : seuil 1/64
précoce
immuno-électrophorèse : confirmation
(arc 4 et 8)
Distomatose
Sérologie : + à la phase d ’invasion
IF (sur coupe de F hepatica) :
seuil 1/20, Se 95%
moins Sp (bilharziose, filariose)
HA : 1/320, Se 90%
ELISA : Se et Sp
Immuno-électrophorèse : Sp
(arc 2 spécifique de F hepatica)
Trichinose
CPK
hyperéosinophilie
Mise en évidence du parasite : biopsie musculaire
Sérologie : IF
50% + à 3sem 95% à 8 sem
ELISA
Anguillulose
Infestation massive
Examen parasitologique des selles après 1 semaine:
méthodes de concentration spécifiques
répétition des examens
Diarrhées
Shigelles
Salmonelles
Campylobacter
Aeromonas-Plesiomonas
Yersinia+/-
Amibiase
Virale
Paludisme (enfant)
Examen cyto bactériologique des selles : faible rendement
Pathovar d’Escherichia coli non recherchés
Nécessaire car risque Shigella et résistance aux AB
Réalisé 1 fois, spécifier le pays visité
Examen parasitologique des selles : cas particulier des amibes
1 prélèvement pour les protozoaires
3 prélèvements à quelques jours d’intervalles pour
les métazoaires : élimination intermittante
Méthodes de concentration
Conclusion
Diagnostic des Pathologies d’importation :
parfois spécialisée
Prendre en compte
•les VPP et VPN des examens biologiques
•l’expérience des laboratoires
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